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LMP-3基因转移对骨髓间充质干细胞的调节作用及其用于治疗骨缺损的研究

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LMP-3基因转移对骨髓间充质干细胞的调节作用及其用于治疗骨缺损...

作者：杨渝勇重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:创伤、疾病所造成的骨缺损是骨科治疗的难题之一,随着DNA重组技术及基因转移技术、组织工程技术的进展,骨缺损的治疗得到了迅速发展。LMP是最近发现的一个骨生成诱导蛋白,其中LMP-1和LMP-3具有成骨作用,是成骨细胞分化的正调节因子... 详细信息

目的:创伤、疾病所造成的骨缺损是骨科治疗的难题之一,随着DNA重组技术及基因转移技术、组织工程技术的进展,骨缺损的治疗得到了迅速发展。LMP是最近发现的一个骨生成诱导蛋白,其中LMP-1和LMP-3具有成骨作用,是成骨细胞分化的正调节因子,可以促进多种骨诱导因子的分泌,促进骨钙素的分泌和骨结节的形成,主要在骨的矿化过程中发挥重要作用。本研究借助组织工程技术,构建LMP-3真核表达质粒,研究其对骨髓间充质干细胞表型变化的影响,以明胶海绵为支架,体内研究其成骨作用,探讨其对骨缺损的修复作用。方法:应用PCR技术扩增LMP-3的功能区序列,亚克隆至真核表达质粒pEGFP-N1,最终构建重组表达质粒pEGFP-N1- LMP-3,同时进行酶切签定和测序;培养骨髓间充质干细胞,观察LMP-3对骨髓间充质干细胞表型变化的影响,以脂质体转染pEGFP-N1- LMP-3,应用RT-PCR检测骨生长标志基因LMP-3、OCN、Type Collagen I、ALP、Bsp的表达,生化检测碱性磷酸酶的活性,放免法检测骨钙素的表达,以茜素红染色法观察矿化结节的形成情况,应用免疫组化的方法检测Type Collagen I的表达;制做兔桡骨缺损的动物模型,以明胶海绵为支架,复合转染pEGFP-N1- LMP-3的骨髓间充质干细胞,移植至骨缺损部位,以X线观察骨缺损的愈合情况,以HE染色观察组织的生长状态、成骨细胞和成纤维细胞的分布。结果:1、PCR扩增LMP-3基因序列正确,构建的重组表达质粒pEGFP-N1- LMP-3经EcoR1和Hind3双酶切测序鉴定正确。2、兔骨髓间充质干细胞可以成功培养,经pEGFP-N1- LMP-3转染后,骨髓间充质干细胞可以表达成骨生长标志基因OCN、Type Collagen I、ALP、Bsp,生化检测到ALP的表达,矿化结节染色阳性,放免法检测到了OCN的表达,免疫组化发现Type Collagen I的表达明显增强;而对照组除Type Collagen I有轻度表达外,其余皆为阴性结果。3、成功建立了免桡骨缺损的动物模型,实验组X线和组织学观察皆证实了骨缺损的修复,实现了骨性连接,但明胶海绵移植组和单纯细胞移植组没有见骨缺损的愈合,骨断端间为纤维组织连接。结论:成功获得真核表达重组质粒pEGFP-N1- LMP-3,为进一步研究其成骨功能奠定了基础;转染pEGFP-N1- LMP-3后,骨髓间充质干细胞可以分泌成骨生长标志基因,LMP-3功能区可以促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞的表型转换,LMP-3功能区同其全长cDNA一样具有成骨作用;以明胶海绵为支架,骨髓间充质干细胞为种子细胞,转染LMP-3可以有效的促进骨缺损的修复,为骨缺损的治疗提供了一种新的方法。

关键词： LIM矿化蛋白骨髓间充质干细胞成骨胶原海绵骨缺损组织工程基因治疗

协和钢板和JR型椎间融合器治疗腰椎滑脱早期疗效观察

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第三军医大学学报 2003年第8期25卷 720-720,723页

作者：刘筑熊成安杨渝勇武警重庆总队医院外三科重庆400061

1999年5月至2001年10月，我院采用协和钢板（DRFS）系统和JR型椎间融合器治疗腰椎滑脱症（均伴维弓根峡部崩裂）18例，早期疗效满意。

关键词：协和钢板 JR型椎间融合器治疗腰椎滑脱早期疗效观察

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重庆市武警官兵军事训练伤的流行病学调查

第三军医大学学报 2013年第22期35卷 2473-2476页

作者：彭亦良杨渝勇刘筑郭华曹国永谭可周雄武警重庆总队医院骨科重庆400061

目的调查重庆武警官兵训练伤的特点和规律，以更科学地制定防范措施。方法采用流行病学研究方法，对每个驻渝武警支队按照一定比例随机抽取150~180名官兵，共计1 218名官兵，调查其2011年1月至2012年12月期间的训练伤情况。结果重庆武... 详细信息

目的调查重庆武警官兵训练伤的特点和规律，以更科学地制定防范措施。方法采用流行病学研究方法，对每个驻渝武警支队按照一定比例随机抽取150~180名官兵，共计1 218名官兵，调查其2011年1月至2012年12月期间的训练伤情况。结果重庆武警官兵训练伤的发生率为21.3%，其中入伍不到半年的新兵占所有训练伤的74.9%，急性踝关节扭伤是最常见的训练伤类型，其次为四肢累积性损伤，第三为皮肤擦伤和裂伤，引起训练伤的原因各种各样，带伤训练的现象相当普遍。结论加强宣传教育，重视防护监督，做好训练前热身，避免过度疲劳和疏忽大意，以有效减少训练伤的发生。

关键词：军事训练伤流行病学调查

UPASS-Ⅱ经皮椎弓根螺钉内固定治疗胸腰椎骨折

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重庆医学 2013年第30期42卷 3638-3640页

作者：王剑岚杨渝勇彭亦良武警重庆总队医院骨科 400061

目的观察UPASS-Ⅱ脊柱微创系统经皮椎弓根螺钉内固定治疗胸腰椎骨折的临床疗效。方法 2011年5月至2012年12月,应用UPASS-Ⅱ脊柱微创系统经皮椎弓根螺钉内固定治疗26例没有神经损害的胸腰椎骨折患者(观察组),并与同期收治的另外26例采用... 详细信息

目的观察UPASS-Ⅱ脊柱微创系统经皮椎弓根螺钉内固定治疗胸腰椎骨折的临床疗效。方法 2011年5月至2012年12月,应用UPASS-Ⅱ脊柱微创系统经皮椎弓根螺钉内固定治疗26例没有神经损害的胸腰椎骨折患者(观察组),并与同期收治的另外26例采用传统开放切口椎弓根螺钉内固定治疗的胸腰椎骨折患者(对照组)进行比较。结果所有患者均随访半年以上,平均9.2个月。虽然两组患者的Cobb′s角、椎体前缘高度、视觉模拟疼痛评分(VAS)、日本骨科学会下腰痛评分(JOA)和Oswestry功能障碍指数(ODI)等术后均有显著改善(P<0.01),但是观察组的手术时间、住院时间显著短于对照组(P<0.05),而且观察组的手术出血量和术后伤口引流量也明显少于对照组(P<0.01)。结论本研究显示UPASS-Ⅱ脊柱微创系统经皮椎弓根螺钉内固定术治疗胸腰椎骨折,能够快速缓解疼痛,早期稳定受伤脊柱,却不牺牲任何脊柱的运动节段。

关键词：麻醉药,局部骨折固定术,内椎弓根螺钉胸腰椎骨折经皮

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外科治疗C3型Pilon骨折的临床分析

中国矫形外科杂志 2005年第22期13卷 1759-1760页

作者：杨渝勇刘筑米忠友武警重庆市总队医院骨科 400061

[目的]探讨Pilon骨折的临床特点,总结处理经验和教训。[方法]分析1999～2004年之间的37例手术治疗的C3型Pilon骨折临床资料,应用AO原则,根据伤情特点灵活把握手术时机行切开复位钢板内固定,术后早期进行不负重功能锻炼。[结果]37例中,... 详细信息

[目的]探讨Pilon骨折的临床特点,总结处理经验和教训。[方法]分析1999～2004年之间的37例手术治疗的C3型Pilon骨折临床资料,应用AO原则,根据伤情特点灵活把握手术时机行切开复位钢板内固定,术后早期进行不负重功能锻炼。[结果]37例中,平均随访1.8年,疗效优18例,良9例,可7例,差3例,优良率73%。其早期并发症以切口皮肤软组织坏死感染为主,晚期并发症主要是创伤性关节炎,踝关节功能障碍。[结论]C3型Pilon骨折的治疗非常具有挑战性,其并发症发生率较高。但是,如果合理应用手术原则,正确把握手术时机,将有助降低其病残率。

关键词： Pilon骨折 AO 内固定术并发症

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骨科医疗纠纷的表现特点与应对策略

医学与哲学（B） 2012年第5期33卷 65-67页

作者：彭亦良杨渝勇武警重庆总队医院骨科重庆400061

骨科是医疗纠纷的高发科室,其原因可能在于大多数人都不了解骨科手术的复杂性和风险性。本文阐述了骨科医疗纠纷的原因、后果及其应对策略,尤其是关于骨科手术方面需要注意的某些细节。

关键词：骨科,医疗纠纷,应对策略

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中西医骨科临床决策的分析和比较

中华中医药杂志 2016年第11期31卷 4392-4394页

作者：彭亦良杨渝勇曹兴王剑岚武警重庆总队医院骨科重庆400061

中医骨伤科的临床决策有其自身的优势与短板,在诊断思路上与西医骨科区别不大,所不同者在于中医骨伤科的诊断比较直观、粗放,而西医骨科可利用的检查手段众多,可帮助医生作出更加精确的诊断。中医骨伤科虽然治疗手段较多,但保守治疗为... 详细信息

中医骨伤科的临床决策有其自身的优势与短板,在诊断思路上与西医骨科区别不大,所不同者在于中医骨伤科的诊断比较直观、粗放,而西医骨科可利用的检查手段众多,可帮助医生作出更加精确的诊断。中医骨伤科虽然治疗手段较多,但保守治疗为其主要特色,除了在劳损性或退行性伤病方面治疗效果超过西医骨科外,其他方面取得的成就却远不及西医骨科手术。中医骨伤科临床决策的未来发展方向应当是扬长避短、博采众长、借鉴西医骨科循证决策的方法,走出一条富有特色的创新之路。

关键词：骨科临床决策分析比较

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LMP-3功能区真核表达质粒的构建

重庆医科大学学报 2008年第5期33卷 596-599页

作者：杨渝勇倪卫东重庆医科大学附属第一医院骨科重庆400016

目的:构建LMP-3功能区真核表达重组质粒。方法:设计合成LMP-3活性区引物,应用PCR方法,扩增其基因片段,亚克隆至真核表达质粒pEGFP-N1,最终构建重组表达质粒pEGFP-N1-LMP-3,同时进行酶切鉴定和测序。结果:PCR扩增LMP-3基因序列正确,构建... 详细信息

目的:构建LMP-3功能区真核表达重组质粒。方法:设计合成LMP-3活性区引物,应用PCR方法,扩增其基因片段,亚克隆至真核表达质粒pEGFP-N1,最终构建重组表达质粒pEGFP-N1-LMP-3,同时进行酶切鉴定和测序。结果:PCR扩增LMP-3基因序列正确,构建的重组表达质粒pEGFP-N1-LMP-3经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切及测序鉴定正确。结论:成功获得真核表达重组质粒pEGFP-N1-LMP-3,为进一步研究其成骨功能奠定基础。

关键词： LIM矿化蛋白质粒构建表达

经皮椎体成形术治疗老年骨质疏松性胸腰椎压缩骨折52例分析

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重庆医学 2011年第29期40卷 2944-2946页

作者：彭亦良杨渝勇王剑岚申文瀚任林海武警重庆总队医院骨科 400061

目的观察经皮椎体成形术（PVP）治疗老年骨质疏松性胸腰椎压缩性骨折的临床疗效。方法 2008年3月至2010年12月,应用PVP治疗52例67个（胸椎36,腰椎31）骨质疏松性胸腰椎压缩骨折患者。在C臂X线导向下,经椎弓根向椎体内注入聚甲基丙烯酸... 详细信息

目的观察经皮椎体成形术（PVP）治疗老年骨质疏松性胸腰椎压缩性骨折的临床疗效。方法 2008年3月至2010年12月,应用PVP治疗52例67个（胸椎36,腰椎31）骨质疏松性胸腰椎压缩骨折患者。在C臂X线导向下,经椎弓根向椎体内注入聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA）,单个椎体骨水泥注入量为1.6~7.5 mL,平均4.9 mL。结果术后49例患者疼痛明显缓解,腰背部疼痛在术后4~48 h消失或明显减轻,VAS评分从术前平均（7.93±1.48）分降至术后平均（2.49±1.16）分,差异有统计学意义（P〈0.01）。随访期间没有椎体进一步压缩或变形,无严重并发症发生,所有患者疼痛无反复。结论经皮椎体成形术是治疗老年骨质疏松脊椎压缩性骨折的一种简单、有效、安全的方法。

关键词：椎体成形术骨质疏松骨折,压缩性