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抑制细菌碳酸酐酶作为应对细菌耐药性的新策略

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中国抗生素杂志 2024年第2期49卷 128-140页

作者：杨江流海珍珍贾芳周学章宁夏大学生命科学学院银川750021 西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室银川750021 内蒙古医科大学基础医学院内蒙古自治区分子生物学重点实验室呼和浩特010058

细菌对抗生素的多重耐药和交叉耐药亟需联合其他有效的靶向替代策略进行控制。碳酸酐酶(carbonic anhydrases,CAs)是催化CO_(2)水合生成HCO_(3)-和H+的可逆反应的一组金属酶超家族,其活性影响细菌的增殖、生物合成及其在宿主体内的持续... 详细信息

细菌对抗生素的多重耐药和交叉耐药亟需联合其他有效的靶向替代策略进行控制。碳酸酐酶(carbonic anhydrases,CAs)是催化CO_(2)水合生成HCO_(3)-和H+的可逆反应的一组金属酶超家族,其活性影响细菌的增殖、生物合成及其在宿主体内的持续感染。靶向抑制CAs活性可降低细菌的生存和适应性,并且不会产生与传统抗生素相同的耐药性。细菌CAs有望成为开发尚无临床耐药性的新型抗菌药物靶标。本文对细菌CAs的分类和结构、生理功能以及细菌现有的CA抑制剂(CA inhibitors,CAIs)的研究进展进行了综述,可为新型抗菌药物研发、解决临床耐药问题提供参考。

关键词：细菌碳酸酐酶抑制剂细菌耐药性控制

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宁夏地区牛乳肠球菌耐药性分析

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2024年第8期52卷 1-10页

作者：乔亚蕊杨江流高登军付娜娜周学章宁夏大学生命科学学院宁夏银川750021 西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室宁夏银川750021 内蒙古自治区动物疫病预防控制中心内蒙古呼和浩特750300

【目的】了解宁夏地区奶牛正常乳汁和患乳腺炎乳汁中肠球菌的分布规律及其耐药特征,为宁夏地区奶牛乳腺炎疾病的抗菌药物合理使用提供参考。【方法】对宁夏地区16个规模化奶牛养殖场近3年来1154份乳汁样品(正常乳汁383份,患乳腺炎乳汁77... 详细信息

【目的】了解宁夏地区奶牛正常乳汁和患乳腺炎乳汁中肠球菌的分布规律及其耐药特征,为宁夏地区奶牛乳腺炎疾病的抗菌药物合理使用提供参考。【方法】对宁夏地区16个规模化奶牛养殖场近3年来1154份乳汁样品(正常乳汁383份,患乳腺炎乳汁771份)进行肠球菌分离,采用形态学观察和生化试验对分离所获的496株肠球菌进行鉴定,通过K-B药敏纸片扩散法测定分离肠球菌菌株对青霉素(PG)、头孢唑林(CFZ)、庆大霉素(GEN)、四环素(TET)、红霉素(EM)、林可霉素(LCM)、链霉素(SM)和万古霉素(VCA)等8种药物的敏感性,并使用PCR方法对分离肠球菌菌株进行四环素类药物耐药基因(tetA、tetB、tetC、tetM)、大环内酯类药物耐药基因(mecA、ermA、ermB、ermC)以及林可胺类药物耐药基因(lsaA、lsaE、lnuG、lnuA)检测。【结果】从1154份乳样中共分离得到496株肠球菌,经鉴定分属6种肠球菌,分别是屎肠球菌、海氏肠球菌、粪肠球菌、蒙氏肠球菌、耐久肠球菌和鹑鸡肠球菌。其中屎肠球菌305株,占分离菌株总数的61.5%;海氏肠球菌124株,占分离菌株总数的25.0%;粪肠球菌27株,占分离菌株总数的5.4%;蒙氏肠球菌21株,占分离菌株总数的4.2%;耐久肠球菌15株,占分离菌株总数的3.0%;鹑鸡肠球菌4株,占分离菌株总数的0.8%。临床分离菌株对林可霉素、四环素、红霉素的耐药率分别达到95.8%,82.7%和80.2%,尤以耐7种药物的菌株为主,达230株(占耐药菌株的46.4%),最常见的耐药谱为PG+CFZ+GEN+TET+EM+LCM+SM。正常乳汁中分离的菌株主要为海氏肠球菌(检出率为73.8%),对林可霉素的耐药率最高(94.5%);患乳腺炎乳汁中分离的菌株主要为屎肠球菌(检出率为89.5%),对四环素的耐药率最高(97.0%)。496株临床肠球菌中有488株检测出携带耐药基因,检出率为98.4%;检测出乳源肠球菌不携带tetA、tetB、tetC、mecA、lnuG和lnuA耐药基因;携带ermA、ermB、ermC、tetM、lsaA和lsaE耐药基因,其携带率分别为51.0%,80.3%,33.2%,88.1%,41.6%和74.4%;最常见耐药基因谱为ermA+ermB+tetM+lsaE+lsaA。【结论】宁夏地区奶牛乳汁中肠球菌耐药性严重,且具有多重耐药性特征,给公共卫生带来潜在危害,应引起高度重视。

关键词：肠球菌奶牛乳汁耐药性分析耐药基因宁夏地区

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寡孢节丛孢Slt2信号通路相关蛋白Wsc1， RlmA和Cdk1的功能研究

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作者：杨江流云南大学

学位级别：硕士

寡孢节丛孢(Arthrobotrys oligospora)是一种常见的捕食线虫真菌,可以产生粘性菌网(捕食器官)捕捉线虫。细胞壁完整性途径(CWI途径)是真菌中保守的MAPK信号通路,能感受细胞壁胁迫信号并及时作出应答。同时,CWI途径也与病原真菌的致病性... 详细信息

寡孢节丛孢(Arthrobotrys oligospora)是一种常见的捕食线虫真菌,可以产生粘性菌网(捕食器官)捕捉线虫。细胞壁完整性途径(CWI途径)是真菌中保守的MAPK信号通路,能感受细胞壁胁迫信号并及时作出应答。同时,CWI途径也与病原真菌的致病性密切相关。本论文以寡孢节丛孢中三个CWI途径相关蛋白(Wsc1、Rlm A和Cdk1)为研究对象,通过同源重组技术获得基因突变菌株。通过表型比较、转录组和代谢组数据分析,对它们的功能进行了研究。1.Ao Wsc1、Ao Rlm A和Ao Cdk1的序列性质Ao Wsc1是一种细胞膜表面传感器蛋白,它的等电点(p I)、氨基酸(aa)数目和分子量(Mw)分别为8.39、261 aa和27.61 KDa。转录因子Ao Rlm A的p I、aa数目和Mw分别为6.48、566 aa和61.19 KDa。Ao Cdk1是一种细胞周期蛋白依赖性激酶,它的p I、aa数目和Mw分别为8.77、530 aa和59.32 KDa。保守功能结构域分析表明,Ao Rlm A具有MADS-box、MADS MEF2-like、转录因子,MADS-box超家族、细胞质结构域、非细胞质结构域。Ao Wsc1具有信号肽结构域。Ao Cdk1具有多个保守结构域和结合位点,包括蛋白激酶样结构域超家族和ATP结合位点等同源性分析表明,三个蛋白与其它捕食线虫真菌来源的同源蛋白具有较高的序列相似性。通过同源重组技术获得ΔAo Wsc1、ΔAo Rlm A和ΔAo Cdk1突变菌株。2.ΔAo Rlm A、ΔAo Wsc1和ΔAo Cdk1表型分析(1)Ao Rlm A、Ao Wsc1和Ao Cdk1参与菌丝形态发生。与野生型(WT)菌株相比,ΔAo Rlm A突变菌株的生长速度明显减慢,而ΔAo Wsc1和ΔAo Cdk1则未发生变化,同时,ΔAo Rlm A突变菌株幼嫩菌丝膨大变形,单个菌丝细胞内的细胞核数目变少;ΔAo Cdk1突变菌株的菌丝细胞变短,单个菌丝细胞内细胞核数目变少。ΔAo Rlm A和ΔAo Cdk1突变菌株产孢量显著减少、孢子萌发率显著降低,且ΔAo Rlm A突变株产孢相关的基因的转录水平也与WT菌株存在差异。(2)Ao Rlm A、Ao Wsc1和Ao Cdk1参与捕器形成和捕食过程。与WT菌株相比,ΔAo Rlm A突变菌株不仅捕器数目和杀线虫能力降低,而且突变株的捕器多以不成环的形式存在。而Ao Wsc1和Ao Cdk1敲除后不仅捕器数目减少,ΔAo Cdk1突变株的捕器多以不成环的形式存在,虽然ΔAo Wsc1突变株在线虫诱导下出现了较多菌丝圈,但两者的捕食能力却未发生明显变化。(3)Ao Rlm A参与细胞壁完整性调控过程。通过WGA-FITC对细胞壁N-乙酰葡糖胺进行标记观察和透射电镜观察发现,ΔAo Rlm A突变菌株菌丝细胞壁出现破损;将突变株和WT菌株接种在含细胞壁合成干扰剂CR和SDS的培养基中,突变株的生长抑制率高于WT菌株;同时,突变株中与细胞壁合成相关基因的转录水平较WT菌株显著下调。(4)Ao Rlm A参与自噬和内吞过程。通过MDC染色和透射电镜观察,发现ΔAo Rlm A突变菌株的自噬小体数目变少;通过FM-4-64染色和透射电镜观察发现Ao Rlm A突变菌株的内吞能力较WT菌株减弱。(5)Ao Wsc1和Ao Cdk1参与自噬和脂肪酸利用过程。使用MDC染料对自噬小体进行染色和TEM观察,发现两个突变株菌丝细胞中的自噬小体的数目较WT菌株增多,但体积变小。同时,两个突变株中脂滴数目较WT菌株显著增多,体积也有所增大。(6)Ao Rlm A和Ao Wsc1参与胁迫应激过程。将突变菌株和WT菌株培养在含渗透压、氧化胁迫和细胞壁合成胁迫试剂的培养基中,ΔAo Rlm A和ΔAo Wsc1突变菌株的受到生长抑制远高于WT菌株。3.WT和ΔAo Rlm A突变菌株的转录组数据分析收集培养5 d后加入线虫提取液诱导0 h和48 h后获得的WT和ΔAo Rlm A突变菌株菌丝样品进行转录组测序和分析。对诱导0 h的WT和ΔAo Rlm A突变菌株的转录组数据进行分析获得了2229个差异表达基因(DEGs),上调DEGs为1491,下调DEGs为738。诱导48 h后获得2474个DEGs,上调DEGs为1611,下调DEGs为863。进一步分析发现在菌丝营养生长过程中,Ao Rlm A基因的缺失导致核糖体形成、膜的成分和MAPK信号通路等上调,而铁离子运输、氧化还原和碳代谢过程等下调。在线虫提取液诱导48 h后,Ao Rlm A基因的缺失导致氧化还原、跨膜转运等功能上调,而环状化合物的代谢、DNA损伤修复和转录翻译等过程下调。4.WT和ΔAo Rlm A突变菌株的代谢组数据分析收集WT和ΔAo Rlm A突变菌株发酵液,经萃取浓缩,经LC-MS分析后,使用Co

关键词：寡孢节丛孢 AoWsc1 AoRlmA AoCdk1 捕器分生孢子细胞壁完整性途径转录组代谢组

重金属介导的抗生素抗性基因接合转移研究进展

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环境科学与技术 2023年第10期46卷 61-69页

作者：杨江流乔亚蕊周学章高登军贾芳宁夏大学生命科学学院宁夏银川750021 西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室宁夏银川750021 内蒙古自治区动物疫病预防控制中心内蒙古呼和浩特010051 内蒙古医科大学基础医学院内蒙古自治区分子生物学重点实验室内蒙古呼和浩特010051

抗生素抗性基因(ARGs)在人类-动物-环境之间的跨界面传播和聚集已成为公共卫生和环境生态系统的主要问题,ARGs和携带这些基因的可移动遗传元件(MGEs)已被视为新出现的环境污染物。环境重金属介导的ARGs水平转移增加了ARGs在本土微生物... 详细信息

抗生素抗性基因(ARGs)在人类-动物-环境之间的跨界面传播和聚集已成为公共卫生和环境生态系统的主要问题,ARGs和携带这些基因的可移动遗传元件(MGEs)已被视为新出现的环境污染物。环境重金属介导的ARGs水平转移增加了ARGs在本土微生物中富集的潜在风险。目前,研究重金属及其它新污染物诱导的ARGs水平转移已成为环境及其相关学科领域的研究热点。该文综述了重金属作为共选择剂对环境中ARGs接合转移的影响,重点从分子生物学角度分析了重金属引起ARGs接合转移增加的相关机制。重金属介导的ARGs接合转移是ARGs丰度增加的主要原因,重金属引起的接合频率的变化主要与其浓度相关,与毒物兴奋效应一致。相关调控机制包括调节活性氧(ROS)的产生、启动SOS反应、增强细胞膜通透性以及影响接合转移相关基因的表达和ATP合成。阐明在污染环境中(复合)重金属以及重金属与抗生素协同,在不同环境条件下增强ARGs水平转移的机制是今后研究的关键方向,可为重金属介导的ARGs环境行为研究提供一定的参考。

关键词：接合转移抗生素抗性基因重金属活性氧 SOS反应细胞膜通透性

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防御素的结构与功能及其抗菌机制

动物医学进展 2022年第9期43卷 114-118页

作者：杨江流宋青山乔军伟贾芳河套学院医学系内蒙古巴彦淖尔015000 宁夏大学生命科学学院西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室宁夏银川750021

防御素作为广泛分布于动植物和微生物体内的一类抗菌肽,在抵抗感染性病原体的先天免疫防御中发挥着重要作用。许多防御素能够形成保守的由3条β-链组成的反平行β-折叠片核心结构。分子内二硫键维持该三级结构的稳定性和活性。植物、真... 详细信息

防御素作为广泛分布于动植物和微生物体内的一类抗菌肽,在抵抗感染性病原体的先天免疫防御中发挥着重要作用。许多防御素能够形成保守的由3条β-链组成的反平行β-折叠片核心结构。分子内二硫键维持该三级结构的稳定性和活性。植物、真菌和无脊椎动物防御素形成相同的CSαβ模体结构。防御素能够通过膜透化破坏膜屏障、直接靶向脂质Ⅱ抑制细胞壁生物合成、中和分泌的毒素来减少细菌感染以及在细菌周围形成“纳米网”捕获细菌等多种抗菌机制杀死或抑制细菌生长。防御素在先天免疫中的生物学功能、结构和活性的关系、作用机制和治疗潜力仍然是目前研究的热点。论文对几种不同来源防御素的结构,防御素结构与功能的关系以及防御素抗菌机制的研究进展进行了综述,以期为解决临床耐药问题提供参考。

关键词：防御素结构与功能抗菌机制

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耐药性大肠杆菌整合子整合酶的克隆与表达

黑龙江畜牧兽医（下半月） 2016年第7期 122-124页

作者：贾芳杨江流宋青山河套学院内蒙古巴彦淖尔015000

为获得纯化的大肠杆菌Ⅰ类整合子整合酶,采用PCR技术扩增目的基因,将目的基因克隆到pEASY-T1载体上测序,测序结果与NCBI上公布的耐药性大肠杆菌Ⅰ类整合子整合酶基因完全一致后,再将目的基因克隆到表达载体pEASY-E1 Expression上,将表... 详细信息

为获得纯化的大肠杆菌Ⅰ类整合子整合酶,采用PCR技术扩增目的基因,将目的基因克隆到pEASY-T1载体上测序,测序结果与NCBI上公布的耐药性大肠杆菌Ⅰ类整合子整合酶基因完全一致后,再将目的基因克隆到表达载体pEASY-E1 Expression上,将表达质粒载体转化于rosetta感受态细胞中诱导表达,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western-blot)检测分析。结果表明:表达产物分子量为33 ku,与耐药性大肠杆菌Ⅰ类整合子整合酶分子量一致,为进一步测定酶的活性提供物质基础。

关键词：大肠杆菌整合子整合酶克隆与表达 PCR

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海藻糖对人脑型肌酸激酶热变性的保护作用

中国畜牧兽医 2016年第1期43卷 157-163页

作者：宋青山杨江流贾芳河套学院医学系巴彦淖尔015000

肌酸激酶(creatine kinase,CK)是研究蛋白质折叠和稳定性的一个理想的模型蛋白。热失活研究结果显示海藻糖能有效防止人脑型肌酸激酶(human brain-type creatine kinase,hBBCK)的热失活和热变性。1.0mol/L海藻糖使hBBCK热失活的半失活温... 详细信息

肌酸激酶(creatine kinase,CK)是研究蛋白质折叠和稳定性的一个理想的模型蛋白。热失活研究结果显示海藻糖能有效防止人脑型肌酸激酶(human brain-type creatine kinase,hBBCK)的热失活和热变性。1.0mol/L海藻糖使hBBCK热失活的半失活温度(Tm)升高4.6℃,活化能由原来的29.7kJ/mol升高到41.1kJ/mol。内源荧光光谱研究结果显示在海藻糖浓度分别为0、0.6、0.8和1.2mol/L时,hBBCK热变性的表观转变温度(T1/2)相应的从43.0℃上升到46.5、47.7和49.9℃。内源荧光和ANS外源荧光光谱研究结果表明海藻糖的疏水作用可能对hBBCK的热稳定性起了重要作用。hBBCK复性动力学试验结果表明海藻糖能有效抑制hBBCK复性过程中聚集体的形成。

关键词：人脑型肌酸激酶海藻糖热变性

广西工业现代化现状与加入WTO后的发展对策

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广西工业现代化现状与加入WTO后的发展对策

谷氨酰胺对阉割后断奶仔猪生长性能、血液参数及免疫应答的影响

第三届中国杰出管理者年会

作者：杨江流

为了民族的独立和国家的富强,我国从1953年起开始进行有计划的大规模的经济建设,实施了第一个五年计划 (1953～1957),接着持续实行了多个五年计划。因此,用了将近半个世纪的时间,不仅改变了旧中国"一穷二白"的落后面貌,并且为我国建成...

为了民族的独立和国家的富强,我国从1953年起开始进行有计划的大规模的经济建设,实施了第一个五年计划 (1953～1957),接着持续实行了多个五年计划。因此,用了将近半个世纪的时间,不仅改变了旧中国"一穷二白"的落后面貌,并且为我国建成了一个独立的、门类较齐全、现代化的国民经济体系,包括工业经济体系,从而发展和提高了我国的社会生产力,增强了我国的综合社会经济实力,提高了全国人民的物质和文化生活水平,为我国实行建设有中国特色的社会主义事业提供了坚实的社会物质技术基础。广西近50多年以来,国内生产总值(GDP)从1978年的75.85亿元、占全国第20位,提高到2000年的2050.15亿元、占全国第16位。

关键词：

来源： cnki会议评论

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中国饲料 2020年第10期 37-40页

作者：邢立群杨江流苏志芳河套学院内蒙古巴彦淖尔015000

本研究通过两个试验探讨了日粮添加谷氨酰胺对断奶仔猪去势后生长性能、血浆参数及脂多糖诱导的免疫应答的影响。在试验1中,48只断奶仔猪分别饲喂添加基础日粮和含有2%谷氨酰胺的日粮,共进行25d饲养试验。在试验2中,16只断奶仔猪在断奶... 详细信息

本研究通过两个试验探讨了日粮添加谷氨酰胺对断奶仔猪去势后生长性能、血浆参数及脂多糖诱导的免疫应答的影响。在试验1中,48只断奶仔猪分别饲喂添加基础日粮和含有2%谷氨酰胺的日粮,共进行25d饲养试验。在试验2中,16只断奶仔猪在断奶后第14天注射了大肠杆菌K88+脂多糖。结果表明,在断奶后第25天,谷氨酰胺组体重显著高于对照组(P <0.05),同时谷氨酰胺组较对照组显著提高了15~25d和1~25d断奶仔猪的饲料效率(P <0.05)。与对照组相比,谷氨酰胺组显著提高了空肠和回肠肌层厚度(P <0.05)。在断奶后25d,谷氨酰胺组血浆碱性磷酸酶活性显著高于对照组(P <0.05)。在LPS刺激前的断奶后第14天,谷氨酰胺组较对照组显著降低了血浆促肾上腺皮质激素和皮质醇浓度(P <0.05)。当猪接受LPS刺激时,血浆促肾上腺皮质激素和皮质醇水平显著升高(P <0.05)。LPS刺激后,对照组直肠温度显著高于处理组(P <0.05)。断奶后第14天,LPS刺激前或后谷氨酰胺组血浆IgG浓度均显著高于对照组(P <0.05)。结论 :日粮中添加2%谷氨酰胺能缓解断奶仔猪去势相关的应激状态和炎症反应,提高仔猪免疫和生长、发育。

关键词：谷氨酰胺断奶仔猪生长性能免疫应答