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CA16疫苗候选株减毒特性及生产工艺的初步研究

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CA16疫苗候选株减毒特性及生产工艺的初步研究

作者：杨水芝北京协和医学院

学位级别：硕士

手足口病(hand, foot and mouth disease, HFMD)是一种在全球范围内流行的急性传染病,近几年来,其在亚太地区的爆发尤为严重。在我国,手足口病已成为危害婴幼儿健康的重要公共卫生问题。柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CA16)和... 详细信息

手足口病(hand, foot and mouth disease, HFMD)是一种在全球范围内流行的急性传染病,近几年来,其在亚太地区的爆发尤为严重。在我国,手足口病已成为危害婴幼儿健康的重要公共卫生问题。柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CA16)和肠道病毒71型(Enterovirus71,EV71)是引起手足口病的主要病原体。一直以来,研究人员把工作重点放在了致病率和致死率更高的EV71上,而目前越来越多的研究表明CA16的感染也是导致重症及死亡病例的重要因素之一。但是目前还没有针对CA16引起的手足口病的特效治疗方案和预防手段。疫苗是控制手足口病的关键,本研究对CA16候选株减毒特性和生产工艺进行初步的研究,旨在为其减毒疫苗的开发奠定基础。实验将两株CA16高免疫原性的毒株经过连续低温传代减毒后,进行减毒特性的评价,结果发现33℃连续低温传代后毒株表现出以下特性(1)减毒候选株保持稳定的生长特性,低温传至第11代次后KM154株的感染性滴度波动范围小于0.5LgCCID50/ml;(2)减毒候选株具有良好的免疫原性,以病毒收获液0.5ml/只的剂量腹腔注射免疫成鼠后以抗体效价大于1：4为阳性,其抗体阳转率达100%,从抗体几何平均滴度(Genometric Mean Titer, GMT)来看,最高可达1：30;(3)减毒候选株的致病性研究中发现随着代次的升高减毒株对乳鼠的致病力减弱,KM154毒株的第12代次(KP12)后感染的乳鼠未见发病及死亡情况,组织中能检测到CA16病毒,但无明显的病理改变;(4)减毒候选株基因序列检测结果发现,与初始代次相比,毒株基本保持了遗传的稳定性;(5)交叉保护研究结果显示,候选株免疫兔后制成的兔抗-CA16血清对所选的14株CA16毒株具有100%的保护作用,而15株EV71株只有一株受保护;(6)在感染了两个减毒候选株的ICR成鼠(腹腔注射)及乳鼠(颅内注射)的脑、脾、肾、肺、肝、心、肌肉、脊髓组织中检测到CA16病毒,表明病毒能在乳鼠及成鼠组织内复制并传播。本研究还对生产工艺进行了初步的探讨。(1)在毒株稳定性影响因素的研究中我们发现,10次以内的冻融次数对CA16毒株的感染性滴度无影响;毒株在-70℃与液氮中储存8个月后,两个条件下的毒株感染性滴度相同,均为6.58LgCCID50/ml,与原始相比,基本没有下降;(2)加入MgCl2和我所甲肝无明胶的冻干保护剂后毒株的感染性滴度下降速率明显减缓,加入0.5 M MgCl1组至第7天只下降了1.4LgCCID50/ml。(3)不同纯化工艺的探讨中我们发现氯仿抽提对病毒的感染性滴度及抗原含量回收率都较好,且刺激小鼠产生有效的抗体水平,是较理想的病毒纯化方法;实验还发现蛋白质含量及减毒株感染性滴度对毒株的免疫原性都有影响,蛋白质含量及感染性滴度高的毒株免疫原性好。本研究获得了具有稳定生长特性、良好免疫原性和遗传稳定性,且拥有对CA16广谱保护作用的CA16减毒候选株,并对毒株热稳定性、纯化方法等生产工艺进行了初步摸索,为CA16减毒活疫苗的研发及生产奠定了良好的实验基础。

关键词：柯萨奇病毒A组16型减毒株减毒特性生产工艺

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泸溪无核椪柑类型选育及配套栽培技术研究

泸溪无核椪柑类型选育及配套栽培技术研究

作者：杨水芝湖南农业大学

学位级别：硕士

椪柑是我国特色柑橘果实,位居我国宽皮柑橘类产量的第二位,近十年来因柑橘黄龙病危害,湖南发展椪柑优势更为明显,湖南省四大优势柑橘(椪柑)产业带椪柑主产县泸溪已发展椪柑二十多年,至2010年,泸溪县碰柑开发面积达到30万亩,年总产量达1... 详细信息

椪柑是我国特色柑橘果实,位居我国宽皮柑橘类产量的第二位,近十年来因柑橘黄龙病危害,湖南发展椪柑优势更为明显,湖南省四大优势柑橘(椪柑)产业带椪柑主产县泸溪已发展椪柑二十多年,至2010年,泸溪县碰柑开发面积达到30万亩,年总产量达18万吨,总产值1.8亿元。椪柑产业已成为该县支撑县域经济、促进农民增收的主导产业。泸溪县目前主栽椪柑品种为辛女椪柑(8306),虽然性状优良,但因其籽多(8-10粒/果),给鲜食带来不便和加工上带来不利,影响了泸溪碰柑的商品性和市场销售等竞争力。因此,选育无核性状稳定、品质优良、丰产的椪柑新椪柑品种是泸溪椪柑育种的重要目标。为此笔者自2000年以来参与了泸溪无核椪柑选育,其研究结果如下： 1、通过早熟无核芽变单株筛选,成功选育出早熟无核椪柑新品种—“早蜜”椪柑。该品种综合性状表现优异,遗传性状稳定,比其它品种提早约20-30d成熟,少籽或无籽,外观内质均佳,丰产性强,是椪柑中难得的少籽或无籽、早熟、高糖新株系。 2、初选出一无核椪柑新株系09-1无核椪柑。该株系无核遗传性状稳定,即使与有核椪柑混栽也表现无核,且其他多方面性状都优于泸溪辛女椪柑及其他无核椪柑,是湘西椪柑品种改良的一个优选。 3、无核椪柑优质配套栽培技术研究。此项研究是以辛女椪柑栽培技术为基础,针对无核椪柑的特性,对原有栽培技术加以改良、调整,克服无核椪柑生产中存在的一些问题,引入当前国内外柑橘一些优良先进栽培技术,形成一套比较完善的无核椪柑优质高效栽培技术。 (1)开展“早蜜”无核早熟椪柑设施栽培技术研究。通过覆膜等设施栽培试验,提早了.“早蜜”无核椪柑成熟10-15d,同时提高其品质。 (2)泸溪椪柑园土壤肥力状况及配方施肥技术研究。调查泸溪椪柑园土壤肥力存在的问题,通过配方施肥技术研究,得出了肥料N、P、K利用率(%)、相对产量和相对吸收量、最高产量施肥量和最佳经济施肥量。 (3)制定无核椪柑优质高效栽培技术规程。通过对无核椪柑生长及结果等特性观察调查和系统研究,提出标准化建园、适时采收和贮藏保鲜、商品化处理等多项无核椪柑早结丰产优质栽培技术措施。

关键词：无核椪柑育种栽培技术研究

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提高^(60)CO辐照装置的经济效益探讨

核农学报 2006年第1期20卷 57-59页

作者：杨水芝戚焕江谢彤宁波云环电子集团/宁波超能科技股份有限公司浙江宁波315470 南京大学科技处江苏南京210008

本文用经济效益系数(Ε)评价60CO辐照装置的经济效益,影响因子有射线能量利用率(E)、辐照装置活度(CI)、时间利用率(T)、空间利用率(P)、最低有效吸收剂量(DMIN)、吸收剂量不均匀度(U)、单价(S)、运转成本(C)和收入I。分析结果为最重要... 详细信息

本文用经济效益系数(Ε)评价60CO辐照装置的经济效益,影响因子有射线能量利用率(E)、辐照装置活度(CI)、时间利用率(T)、空间利用率(P)、最低有效吸收剂量(DMIN)、吸收剂量不均匀度(U)、单价(S)、运转成本(C)和收入I。分析结果为最重要的因素是收入,并举例说明了如何通过不断地开拓应用领域,创新辐照工艺提高收入。

关键词：辐照装置经济效益

晚熟椪柑“岩溪晚芦”在湘西南的适应性调查初报

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中国南方果树 2013年第1期42卷 57-58页

作者：杨水芝曾斌罗赛男杨光河湖南省园艺研究所长沙410125 湖南省通道侗族自治县农业局

为了探明晚熟椪柑在湘西南的适应性,对比调查了通道县坪阳乡和江永县桃川洞(盆地)自然条件以及两地"岩溪晚芦"晚熟椪柑的栽培表现。结果发现,通道县坪阳乡的岩溪晚芦比江永桃川洞的品质好,成熟期晚20～30天,冬季落果少;普通椪柑"辛女"... 详细信息

为了探明晚熟椪柑在湘西南的适应性,对比调查了通道县坪阳乡和江永县桃川洞(盆地)自然条件以及两地"岩溪晚芦"晚熟椪柑的栽培表现。结果发现,通道县坪阳乡的岩溪晚芦比江永桃川洞的品质好,成熟期晚20～30天,冬季落果少;普通椪柑"辛女"在坪阳乡与岩溪晚芦同一地块栽植,冬季落果严重,越冬果实枯水严重;与江永县桃川洞相比,通道县坪阳乡气候特点为≥10℃年有效积温稍低,冬季气温较高,春季气温较低。类似通道县坪阳乡岩溪晚芦种植区域的气候条件,即年平均气温≥18.7℃,≥10℃年有效积温5 120.0℃左右,冬季最低温不低于-1.2℃,1—4月气温凉爽、升温慢,适宜发展晚熟椪柑。

关键词：湖西南晚熟椪柑岩溪晚芦适应性

三种果园中实蝇粘虫板对橘小实蝇及天敌的诱杀作用

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植物保护学报 2021年第4期48卷 839-847页

作者：龚碧涯刘慧向敏杨水芝肖伏莲刘娟李先信湖南省农业科学院园艺研究所农业农村部华中地区果树科学观测实验站长沙410125

为减少实蝇粘虫板对天敌的诱杀作用,完善实蝇粘虫板在果园的使用方法,于2018年和2019年分别在湖南省农业科学院园艺研究所橘园、桃园、梨园悬挂实蝇粘虫板,调查其诱杀的橘小实蝇、其他害虫和天敌数量。结果表明,橘园、梨园和桃园共诱杀... 详细信息

为减少实蝇粘虫板对天敌的诱杀作用,完善实蝇粘虫板在果园的使用方法,于2018年和2019年分别在湖南省农业科学院园艺研究所橘园、桃园、梨园悬挂实蝇粘虫板,调查其诱杀的橘小实蝇、其他害虫和天敌数量。结果表明,橘园、梨园和桃园共诱杀到15个种、4个科和9个类群,包括靶标害虫橘小实蝇、其他害虫和天敌。3种果园中粘虫板诱杀的昆虫种、科或类群数量有差异,其中梨园中诱杀的昆虫总数最多,为13 653头,其次是桃园,橘园中诱杀的昆虫总数最少。在橘园、梨园和桃园中,橘小实蝇的相对丰富度分别为5.90%、23.45%和21.73%,最早出现时间均为6月;在橘园中橘小实蝇诱杀量高峰期在8月下旬至10月上旬,下半年天敌诱杀量高峰期略滞后于橘小实蝇的诱杀量高峰期,在梨园和桃园中橘小实蝇诱杀量高峰期主要集中在7月中下旬至10月中旬,橘小实蝇诱杀量高峰期与天敌诱杀量高峰期无明显相关性;3种果园中粘虫板诱杀的主要天敌有瓢虫、食蚜蝇、草蛉、寄生蜂,桃园和梨园中诱杀的草蛉较多,橘园中诱杀的瓢虫和寄生蜂较多。应用实蝇粘虫板防控橘小实蝇时,梨园和桃园应从6月上旬开始悬挂,橘园应从8月上旬开始悬挂,先少量悬挂,根据诱杀橘小实蝇数量,再逐渐增加粘虫板。

关键词：粘虫板橘小实蝇果园天敌

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泸溪县椪柑低产园综合改造技术研究

湖南农业科学 2006年第3期 32-34页

作者：杨水芝泸溪县农业局湖南泸溪416100

从整形修剪、改良土壤、科学施肥、均衡供水、疏花疏果、防治病虫等方面阐述了对湘西泸溪县柑低产园的改造技术要点,对柑的高效生产有一定的指导作用。

关键词：檀柑低产园改造

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柑橘等时鲜水果果园的抗涝管理

湖南农业 2022年第7期 10-11页

作者：卜范文杨水芝湖南省园艺研究所 410125

一、柑橘园管理1.及时开沟排水雨水过后及时开沟排水晒田,力保果园大雨后树盘不积水。已经积水的果园应抓紧开展排水工作,水淹较轻的果园,雨后要及时疏通渠道,排出积水;水淹严重的果园,在果树行间挖排水沟,降低地下水位,最大程度保持土... 详细信息

一、柑橘园管理1.及时开沟排水雨水过后及时开沟排水晒田,力保果园大雨后树盘不积水。已经积水的果园应抓紧开展排水工作,水淹较轻的果园,雨后要及时疏通渠道,排出积水;水淹严重的果园,在果树行间挖排水沟,降低地下水位,最大程度保持土壤透气状态。

关键词：开沟排水柑橘园树盘排水工作排水沟疏通渠道降低地下水位果园

悬挂方式对实蝇粘虫板诱杀桔小实蝇和天敌效果的影响

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中国南方果树 2019年第4期48卷 17-20页

作者：龚碧涯刘慧向敏刘娟肖伏莲杨水芝戴长庚李先信湖南省园艺研究所/农业部华中地区果树科学观测实验站长沙410125 贵州省植物保护研究所贵阳550006

为指导桔农合理悬挂实蝇粘虫板,提高诱杀桔小实蝇的效果,减少对天敌的诱杀,2015年9月中旬在"宫川"温州蜜柑成年园中采用目前果农最常用的4种方式(悬挂于树冠中部胶面与地面垂直、悬挂于树冠中下部胶面朝下、悬挂于树冠中下部胶面朝上、... 详细信息

为指导桔农合理悬挂实蝇粘虫板,提高诱杀桔小实蝇的效果,减少对天敌的诱杀,2015年9月中旬在"宫川"温州蜜柑成年园中采用目前果农最常用的4种方式(悬挂于树冠中部胶面与地面垂直、悬挂于树冠中下部胶面朝下、悬挂于树冠中下部胶面朝上、悬挂于树冠上部胶面朝上)悬挂实蝇粘虫板,14 d后对不同悬挂方式诱杀的桔小实蝇数量及其他桔园害虫、天敌和非桔园害虫种类和数量进行调查。结果表明,4种悬挂方式的实蝇粘虫板共诱杀到20个昆虫种(或类群),其中,悬挂于树冠中部胶面与地面垂直的实蝇粘虫板诱杀昆虫的种类和多样性指数最高,悬挂于树冠中下部胶面朝上的实蝇粘虫板的益害比最高。悬挂于树冠中部胶面与地面垂直和悬挂于树冠中下部胶面朝下诱杀桔小实蝇的数量,显著高于其他2种悬挂方式。悬挂于树冠中下部胶面朝上和悬挂于树冠上部胶面朝上均对食蚜蝇(天敌)具有较强的诱杀作用。田间应用实蝇粘虫板诱杀桔小实蝇可采用树冠中部胶面与地面垂直或树冠中下部胶面朝下的悬挂方式,而树冠中下部胶面朝下的悬挂方式更有利于天敌的保护。

关键词：实蝇粘虫板悬挂方式桔小实蝇诱杀效果

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湖南柑桔大实蝇成虫生物学研究

中国南方果树 2013年第5期42卷 65-67页

作者：肖伏莲杨水芝林文力龙建国陈海玲黄泽培湖南省园艺研究所/农业部华中地区果树科学观测实验站长沙410125 湖南省麻阳县农业局

2010-2011年在湖南省麻阳县、吉首市和长沙市等3个试验点，对柑桔大实蝇Bactrocera minax成虫羽化期、田间消长规律及活动习性进行了研究。结果表明，成虫羽化历期16～19天，羽化始见日至羽化盛期开始需历时5～8天，不同地区不同年份间... 详细信息

2010-2011年在湖南省麻阳县、吉首市和长沙市等3个试验点，对柑桔大实蝇Bactrocera minax成虫羽化期、田间消长规律及活动习性进行了研究。结果表明，成虫羽化历期16～19天，羽化始见日至羽化盛期开始需历时5～8天，不同地区不同年份间成虫始见日和羽化盛期有差异。田间成虫始见日在5月下旬，盛期在6月中下旬至7月上中旬，末见期为8月上旬至中旬初，不同年份和地区田间成虫始见日至成虫基本死亡历期都为84天。成虫在交配产卵前很少飞到柑桔树上，而在桔团及周围杂草或灌木丛中觅食、栖息。当气温超过30℃，成虫飞往桔园周边高大乔木或草丛中避暑，16：00以后再飞往柑桔树上产卵。

关键词：柑桔大实蝇成虫羽化期田间消长生活习性湖南