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人工智能识别骨髓细胞可应用于诊断急性白血病微小残留病

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中华检验医学杂志 2023年第3期46卷 280-285页

作者：刘思恒李佳杨武晨赵锣彭贤贵陆军军医大学附属新桥医院血液病医学中心重庆400037 杭州智微信息科技有限公司杭州311202

目的探索人工智能(AI)骨髓细胞识别技术在白血病微小残留病(MRD)检测上的诊断价值及问题。方法收集陆军军医大学附属新桥医院血液病医学中心2020年11月1日至12月31日间经流式细胞术检查确认的白血病MRD患者65例,调取其骨髓瑞氏染色涂片... 详细信息

目的探索人工智能(AI)骨髓细胞识别技术在白血病微小残留病(MRD)检测上的诊断价值及问题。方法收集陆军军医大学附属新桥医院血液病医学中心2020年11月1日至12月31日间经流式细胞术检查确认的白血病MRD患者65例,调取其骨髓瑞氏染色涂片,通过基于AI平台的分析系统对所有骨髓涂片进行无人工干预的全自动扫描及细胞分类。将AI细胞分类中原始细胞比例>3%者诊断为AI-MRD。按AI自动识别细胞数量,将病例分为识别细胞数少于500组(L500组)18例、识别细胞数500~1900组(B1900组)35例、识别细胞数大于1900组(M1900组)12例,组间病例无重合、遗漏。以多参数流式细胞仪(MFC)-MRD结果为标准绘制每组患者人工智能检测结果的受试者工作特征(ROC)曲线并计算各组曲线下面积(AUC)值和AI结果的敏感度、特异度、准确度。结果按AI自动识别细胞数量分组后,L500组检测结果MFC-MRD+/AI-MRD+7例、MFC-MRD+/AI-MFC-2例、MFC-MRD-/AI-MRD+6例、MFC-MRD-/AI-MRD-3例;B1900组检测结果MFC-MRD+/AI-MRD+13例、MFC-MRD+/AI-MFC-6例、MFC-MRD-/AI-MRD+6例、MFC-MRD-/AI-MRD-10例;M1900组检测结果MFC-MRD+/AI-MRD+5例、MFC-MRD+/AI-MFC-0例、MFC-MRD-/AI-MRD+1例、MFC-MRD-/AI-MRD-6例。以MFC-MRD为确定标准,L500组、B1900组、M1900组AI-MRD检测的敏感度分别为53.8%、68.4%、83.3%,特异度分别为60.0%、62.5%、100%,准确度分别为55.6%、65.7%、91.7%,AUC值分别为0.568(P=0.654)、0.678(P=0.069)、1.000(P3%设为AI-MRD阳性阈值时,随着AI识别细胞数量的增多,AI与MFC-MRD检测的一致性随之增高。

关键词：白血病微小残留病骨髓细胞人工智能

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幽门螺杆菌尿素酶B亚单位的疫苗研究进展

中国人兽共患病学报 2011年第12期27卷 1139-1141页

作者：杨武晨郭红第三军医大学新桥医院消化内科重庆400037

幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,H.pylori）是一种定植在人胃和十二指肠的微需氧、革兰氏阴性、螺旋弯曲菌。H.pylori是上消化道的主要致病菌,与胃炎、消化性溃疡、胃粘膜相关淋巴组织淋巴瘤（MALT）和胃癌等疾病的发生密切相关。

关键词：幽门螺杆菌尿素酶B亚单位胃粘膜相关淋巴组织淋巴瘤 H.pylori 疫苗革兰氏阴性消化性溃疡十二指肠上消化道

幽门螺杆菌尿素酶B亚单位HLA限制性CD4+T细胞表位的筛选与鉴定

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幽门螺杆菌尿素酶B亚单位HLA限制性CD4+T细胞表位的筛选与鉴定

作者：杨武晨第三军医大学

学位级别：硕士

[背景和目的] 全球50%以上的人群存在着幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，H.pylori)的感染，其感染与胃炎、消化性溃疡、胃粘膜相关淋巴组织淋巴瘤(MALT)和胃癌等疾病的发生密切相关。面对H.pylori的高感染率和严重的致病性，国内外已... 详细信息

[背景和目的] 全球50%以上的人群存在着幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，H.pylori)的感染，其感染与胃炎、消化性溃疡、胃粘膜相关淋巴组织淋巴瘤(MALT)和胃癌等疾病的发生密切相关。面对H.pylori的高感染率和严重的致病性，国内外已广泛开展H.pylori疫苗研究。然而，现有疫苗的免疫保护效果都十分有限全菌疫苗的抗原组成复杂，诱发的免疫应答混乱，甚至包含有害的反应;一些亚单位疫苗在动物模型上取得了很好的实验结果，却因人与实验动物MHC分子差异，导致临床实验的失败表位疫苗是基于诱发免疫应答最基本的功能单位——表位来设计的疫苗。通过控制表位的组成能够精确控制疫苗所诱发的免疫应答类型。与传统疫苗相比，其更加高效，针对性更强。目前，已广泛应用于感染性疾病、恶性肿瘤及自身免疫性疾病的疫苗设计研发之中。表位的筛选和鉴定是表位疫苗研制的关键。研究表明在抗H. pylori感染的保护性免疫应答中，CD4T淋巴细胞发挥着重要作用。同时，相对于亚优势表位和隐性表位，只有免疫优势表位才能够诱发最为强烈的免疫应答。因此，免疫优势CD4T细胞表位是H. pylori表位疫苗所必须的。尿素酶B亚单位(Urease subunit beta，UreB)作为H.pylori重要的定植因子和毒力因子，具有较高的保守性和较强的免疫原性，小鼠实验证实其具有很好的免疫保护效果，被认为是最佳的疫苗候选抗原之一。本课题组前期已经鉴定出3个UreB来源的小鼠H-2d限制性CD4T细胞表位，用这些表位组成的表位疫苗能够显著降低幽门螺杆菌在胃内的定植数量。然而，由于人与小鼠MHC分子的差异，这些表位很难在人体中诱发免疫优势CD4T细胞应答。因此，本研究拟对UreB来源的HLA限制性CD4T细胞免疫优势表位进行筛选鉴定，为H.pylori表位疫苗的设计提供候选表位。 [方法] 通过C尿素呼气实验和血清学ELISA实验筛选H.pylori感染阳性患者，收集患者外周血单个核细胞，利用重组的UreB蛋白对H.pylori感染者外周血中UreB特异性CD4T淋巴细胞进行体外扩增;再通过步移重叠合成肽法对这些特异性CD4T细胞所识别的免疫优势表位进行系统的筛选和鉴定。通过HLA-II类分子抗体阻断法对表位的限制性主型进行分析，再利用带有不同HLA-II类分子亚型的BLCL表位递呈实验对表位的限制性亚型进行鉴定。最后，通过树突细胞负载重组UreB蛋白或H.pylori全菌抗原对表位的自然递呈特性进行鉴定。 [结果] 1、通过C尿素呼气实验和血清学ELISA实验筛选出两个H.pylori感染阳性患者，样本编号分别为4529和4493。 2、通过重组UreB抗原体外刺激扩增后，4529和4493个体来源的PBMC中UreB特异性CD4T细胞频率分别为2.34%和1.64%。 3、步移重叠18mer肽筛选显示4529和4493个体来源的UreB特异性CD4T细胞识别的优势表位分别位于UreB和UreB区域。 4、步移重叠13mer肽和截短肽段筛选显示免疫优势表位的核心序列在4529和4493个体中分别为UreB和UreB。 5、通过抗体阻断分析显示这两个免疫优势表位均属于HLA-DR限制性。 6、不同HLA亚型BCL表位递呈实验分析显示表位UreB限制性亚型为DRB1*1404，表位UreB的限制性亚型为DRB1*0803。 7、体外自然递呈实验证实，两个新的免疫优势表位的特异性T细胞均能识别负载重组UreB抗原或幽门螺杆菌全菌细胞裂解物的自体DC细胞。 [结论] 本研究从幽门螺杆菌UreB抗原中筛选鉴定到两个新的HLA限制性免疫优势CD4T细胞表位：DRB1*1404限制性的UreB和DRB1*0803限制性的UreB。这两个表位均能被抗原递呈细胞自然加工递呈，这将为H.pylori表位疫苗的设计提供候选表位。

关键词：幽门螺杆菌尿素酶B亚单位人类白细胞抗原 CD4+T细胞表位

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髓系肿瘤克隆演变的研究进展

重庆医学 2015年第31期44卷 4443-4445,4451页

作者：苟阳杨武晨杨程彭贤贵第三军医大学新桥医院血液科重庆400037

血液系统肿瘤包括髓系和淋系两大类,最常见的髓系肿瘤有骨髓增殖性肿瘤（myeloproliferative neoplasm,MPN）,骨髓增生异常综合征（myelodysplastic syndrome,MDS）和急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）等。环境、年龄、机... 详细信息

血液系统肿瘤包括髓系和淋系两大类,最常见的髓系肿瘤有骨髓增殖性肿瘤（myeloproliferative neoplasm,MPN）,骨髓增生异常综合征（myelodysplastic syndrome,MDS）和急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）等。环境、年龄、机体本身等因素作用使得细胞的分化阻滞、异常增殖发生在机体造血的不同阶段,引起不同血液系统肿瘤亚型的产生。

关键词：髓系肿瘤克隆演变综述

30例成熟NK细胞淋巴瘤骨髓侵犯患者的临床特点及实验室检查特征

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重庆医学 2022年第23期51卷 4008-4013页

作者：陶廷露邓小娟张云杨武晨张曦彭显贵陆军军医大学第二附属医院血液病医学中心重庆400037

目的通过分析成熟自然杀伤细胞(NK细胞)淋巴瘤骨髓侵犯的临床特点及实验室检查特征,探讨成熟NK淋巴瘤骨髓侵犯的临床诊断依据。方法回顾性分析2015年1月至2021年1月该中心收治的30例成熟NK淋巴瘤骨髓侵犯[包括侵袭性NK细胞白血病(ANKL)8... 详细信息

目的通过分析成熟自然杀伤细胞(NK细胞)淋巴瘤骨髓侵犯的临床特点及实验室检查特征,探讨成熟NK淋巴瘤骨髓侵犯的临床诊断依据。方法回顾性分析2015年1月至2021年1月该中心收治的30例成熟NK淋巴瘤骨髓侵犯[包括侵袭性NK细胞白血病(ANKL)8例,结外NK/T细胞淋巴瘤和鼻型NK/T淋巴瘤(ENKTL-NT)16例,慢性NK细胞淋巴组织增生性疾病(cLPD-NK)6例]患者的临床特点、血象、骨髓细胞形态学及流式免疫表型。外周血标本通过血细胞分析仪进行血象检查。骨髓涂片经瑞氏-吉姆萨染色分类计数,并根据瘤细胞形态特征及分化程度进行归类。采用多参数流式细胞仪对收集病例的淋巴瘤细胞比例及免疫表型进行分析。结果大多数ANKL、ENKTL-NT患者临床表现及血象相似,难以鉴别。而cLPD-NK患者多为惰性临床过程,且白细胞(WBC)水平常增高。ANKL患者瘤细胞多以原幼细胞型为主,ENKTL-NT患者瘤细胞以单核细胞型为主,原幼细胞型也可见;cLPD-NK患者以成熟小细胞型为主。ANKL患者CD57、CD7表达较低,ENKTL-NT、cLPD-NK患者高表达,差异均有统计学意义(P<0.05)。诊断成熟NK淋巴瘤骨髓侵犯时流式细胞术的阳性率高于骨髓细胞形态学,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成熟NK淋巴瘤骨髓侵犯患者早期临床表现不明显。WBC增高可作为诊断cLPD-NK患者的参考,NK细胞淋巴瘤不同亚型的形态学改变明显。多技术联合诊断能有效提高NK细胞淋巴瘤诊断率和不同类型的鉴别能力,为NK细胞淋巴瘤的临床诊治提供科学的参考依据。

关键词：自然杀伤细胞淋巴瘤骨髓侵犯流式细胞术骨髓细胞形态学

MICM综合分析在骨髓增生异常综合征诊断中的应用效果

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国际检验医学杂志 2022年第16期43卷 2008-2011页

作者：陈思宇彭贤贵杨武晨邓小娟张曦王平陆军军医大学第二附属医院血液病医学中心重庆400037

目的探讨细胞形态学、免疫学、细胞遗传学、分子生物学(简称MICM)综合分析在骨髓增生异常综合征(MDS)诊断中的应用效果,以及存在的问题。方法选取2021年1月至2021年12月就诊于该院血液病医学中心的60例外周血细胞减少(至少1系血细胞减少... 详细信息

目的探讨细胞形态学、免疫学、细胞遗传学、分子生物学(简称MICM)综合分析在骨髓增生异常综合征(MDS)诊断中的应用效果,以及存在的问题。方法选取2021年1月至2021年12月就诊于该院血液病医学中心的60例外周血细胞减少(至少1系血细胞减少)且形态学疑诊为MDS的患者作为研究对象,均不同程度完善MICM等检测。采用Kappa检验分析不同技术诊断MDS的一致性,并以患者临床诊断结果为判断标准,计算各技术的灵敏度、特异度和准确度。结果Kappa检验分析结果显示,60例患者骨髓涂片(BMS)、骨髓活检(BMB)、流式细胞免疫学(FCM)、细胞遗传学(CGM)诊断MDS的一致性较差(Kappa<0.750),与BMS比较,诊断MDS一致性从高到低依次为FCM、CGM、BMB(Kappa=0.344、0.099、0.075)。BMS、BMB、FCM、CGM和MICM综合分析诊断灵敏度分别为85.11%、84.62%、90.48%、75.86%、95.35%,特异度分别为71.43%、28.57%、66.67%、20.00%、90.91%,MDS诊断率分别为74.07%、40.74%、70.37%、40.74%、75.93%,准确度分别为95.24%、52.38%、90.48%、52.38%、97.62%。结论应用MICM综合分析可弥补各方法学技术上的不足,有效提高MDS诊断率及准确度,为MDS的精准分型及预后判断提供帮助。

关键词：骨髓增生异常综合征 MICM综合分析骨髓涂片骨髓活检流式细胞术

幽门螺杆菌尿素酶B亚单位优势Th表位的系统筛选与鉴定

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第三军医大学学报 2013年第3期35卷 212-215页

作者：李滨陈立杨武晨李海波胡健何亚非章金勇赵卓吴超第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室国家免疫生物制品工程技术研究中心重庆400038 第三军医大学新桥医院消化内科重庆400037

目的筛选幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)尿素酶B亚单位(UreB)中CD4+细胞优势应答表位,并确定其MHC限制性。方法以重组UreB蛋白(rUreB)与弗氏佐剂联合皮下多点注射免疫BALB/c小鼠,从小鼠脾脏中体外扩增UreB特异性T淋巴细胞,采用步... 详细信息

目的筛选幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)尿素酶B亚单位(UreB)中CD4+细胞优势应答表位,并确定其MHC限制性。方法以重组UreB蛋白(rUreB)与弗氏佐剂联合皮下多点注射免疫BALB/c小鼠,从小鼠脾脏中体外扩增UreB特异性T淋巴细胞,采用步移重叠合成肽法筛选CD4+T细胞优势应答表位,分析其MHC分子限制性。结果 18mer短肽筛选发现UreB403-420和UreB409-426可显著刺激UreB特异性CD4+T细胞产生IFN-γ。13mer短肽鉴定实验结果显示,UreB409-421可刺激产生与18mer短肽UreB403-420和UreB409-426等同的应答强度。同时抗体阻断实验表明,抗H-2d(I-A)单克隆抗体能有效阻断该表位的应答。结论 UreB403-420和UreB409-426为UreB抗原中的优势Th表位,其刺激免疫反应的核心位置为UreB409-421,且存在H-2d(I-A)限制性。

关键词：幽门螺杆菌尿素酶B亚单位 Th表位

幽门螺杆菌黏附素A抗原H-2d（I-A）限制性免疫优势Th表位的筛选与鉴定

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免疫学杂志 2012年第11期28卷 976-980页

作者：杨武晨郭红陈立李滨李宁一章金勇何亚非胡健吴超第三军医大学新桥医院消化内科重庆400037 第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室重庆400038

目的鉴定幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)黏附素A抗原(HpaA)H-2d限制性免疫优势Th表位,为H.pylori表位疫苗的研究提供候选表位。方法采用体外扩增的HpaA抗原特异性T细胞和步移重叠合成肽筛选鉴定HpaA抗原的免疫优势Th表位,再... 详细信息

目的鉴定幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)黏附素A抗原(HpaA)H-2d限制性免疫优势Th表位,为H.pylori表位疫苗的研究提供候选表位。方法采用体外扩增的HpaA抗原特异性T细胞和步移重叠合成肽筛选鉴定HpaA抗原的免疫优势Th表位,再利用抗体阻断实验对其H-2d限制性进行分析。结果 18mer氨基酸肽段筛选发现肽段H154-171、H184-201、H190-207、H202-219和H220-237能够激发HpaA特异性CD4+T细胞产生γ-干扰素。其中H154-171激发的应答最强。13mer氨基酸短肽鉴定结果显示:仅H158-170能刺激产生强于18mer氨基酸短肽H154-171的应答反应。同时,抗体阻断试验结果表明:抗H-2d(I-A)抗体能有效阻断该表位激发的应答。结论 H154-171、H184-201、H190-207、H202-219和H220-237是HpaA的小鼠H-2d限制性Th表位,其中H154-171为免疫优势表位肽,该表位的核心氨基酸序列为H158-170,并存在H-2d(I-A)限制性。该研究将为H.pylori表位疫苗研究提供了可能的候选分子。

关键词：幽门螺杆菌黏附素A抗原 CD4+T细胞免疫优势表位

重庆地区汉族人群HLA-DRB1等位基因多态性研究

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免疫学杂志 2012年第4期28卷 344-348页

作者：李宁一陈立李滨杨武晨章金勇毛旭虎吴超邹全明第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室重庆400038

目的了解中国重庆地区汉族人群人类白细胞抗原HLA-DRB1基因多态性及其分布特点。方法应用自行建立的聚合酶链式反应-测序为基础的分型方法(PCR-SBT)对190例重庆地区汉族人群进行HLA-DRB1基因分型和多态性分析。结果共检测出13种HLA-DRB... 详细信息

目的了解中国重庆地区汉族人群人类白细胞抗原HLA-DRB1基因多态性及其分布特点。方法应用自行建立的聚合酶链式反应-测序为基础的分型方法(PCR-SBT)对190例重庆地区汉族人群进行HLA-DRB1基因分型和多态性分析。结果共检测出13种HLA-DRB1等位基因,20种等位基因型。其中,HLA-DRB1*09:01(29.1%)等位基因频率最高,其次为HLA-DRB1*04:05(12.2%)、HLA-DRB1*08:03(9.3%),基因频率最低的是HLA-DRB1*12:01、HLA-DRB1*12:02、HLA-DRB1*14:05和HLA-DRB1*15:02,各占1.26%。此外,检出的20种HLA-DRB1等位基因型在男女性别间无显著差异。结论成功建立并优化了HLA-DRB1的PCR-SBT基因分型方法;重庆地区汉族人群HLA-DRB1等位基因呈现多态性,为群体遗传和疾病关联的研究提供了可靠的遗传学数据。

关键词： HLA-DRB1 PCR-SBT 基因多态性重庆汉族