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中国科技期刊数据库科研 2024年第6期 0186-0189页

作者：杨晋娴朱顺星南通大学杏林学院江苏启东226236

当前,药物研发行业发展迅速,对医学实验技术专业学生的要求日益提高。因此,我们在南通大学杏林学院医学实验技术专业人才培养过程中,将生理学课程调整为比较生理学,将动物生理与人体生理融到一起,将两种生理学进行比较学习。将理论与实... 详细信息

当前,药物研发行业发展迅速,对医学实验技术专业学生的要求日益提高。因此,我们在南通大学杏林学院医学实验技术专业人才培养过程中,将生理学课程调整为比较生理学,将动物生理与人体生理融到一起,将两种生理学进行比较学习。将理论与实践进行整合,采用多元化教学理念,提升学生的实践能力,促进学生的空间思维,使学生对动物生理学与人体生理学之间的异同有更深刻的了解,为今后药物研发中的动物实验推演到人体打下坚实的基础。本文从教学内容、授课方式及教学考核等方面论述此次教学改革的方法,并对改革中需要注意的问题进行了分析总结。

关键词：比较生理学医学实验技术动物实验教学改革

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ELN基因对血管疾病影响的研究进展

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南通大学学报（医学版） 2024年第2期44卷 168-171页

作者：王淑娟杨熠陈蔻斓杨晋娴南通大学杏林学院江苏226019 南通大学实验动物中心江苏226019

ELN基因位于7q11,参与全身各处细胞外基质中弹性蛋白的合成。血管壁的弹性和抗张能力主要由90%的弹性蛋白和10%的微纤维共同组成的弹性纤维赋予,ELN基因的缺失或异常改变对血管壁的弹性和抗张能力都有显著影响,进而导致以动脉狭窄为特... 详细信息

ELN基因位于7q11,参与全身各处细胞外基质中弹性蛋白的合成。血管壁的弹性和抗张能力主要由90%的弹性蛋白和10%的微纤维共同组成的弹性纤维赋予,ELN基因的缺失或异常改变对血管壁的弹性和抗张能力都有显著影响,进而导致以动脉狭窄为特征的不同程度心血管疾病的发生。故本文就近年来国内外对主动脉瓣上狭窄、Williams综合征、收缩期高血压、颅内动脉瘤的研究进展进行简要总结,为探明相应疾病的发病机制以及临床诊疗方向提供切入点及参考。

关键词： ELN基因血管疾病颅内动脉瘤收缩期高血压主动脉瓣上狭窄 Williams综合征

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BMSCs移植治疗帕金森病细胞学机制的实验研究

BMSCs移植治疗帕金森病细胞学机制的实验研究

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作者：杨晋娴扬州大学

学位级别：硕士

帕金森病(Parkinsons'disease, PD)是常见于中老年人的一种中枢神经系统退行性疾病,严重影响患者的生活质量。鉴于PD发病的主要病理机制和干细胞研究的深入,细胞移植治疗有望成为治疗该病的理想方法之一,但是细胞移植治疗的机制尚未明... 详细信息

帕金森病(Parkinsons'disease, PD)是常见于中老年人的一种中枢神经系统退行性疾病,严重影响患者的生活质量。鉴于PD发病的主要病理机制和干细胞研究的深入,细胞移植治疗有望成为治疗该病的理想方法之一,但是细胞移植治疗的机制尚未明确。本实验以转绿色荧光蛋白(GFP)基因大鼠的骨髓间充质干细胞(BMSCs)作为示踪细胞,探讨外源细胞在治疗模型大鼠时,在脑内的存活、迁移及分化情况,并结合大鼠脑内星形胶质纤维蛋白(GFAP)的表达变化,探究星形胶质细胞(AST)在治疗PD的作用,为研究临床PD的细胞移植治疗机理提供实验依据。实验一转GFP基因大鼠BMSCs作为示踪细胞在移植治疗帕金森病研究中的应用采用立体定位法单侧纹状体内单点注射6-羟多巴胺(6-OHDA)制备PD大鼠模型,术后以经典的阿扑吗啡(APO)诱导大鼠的转圈数为指标进行行为学检测,筛选成功PD大鼠模型。取转GFP基因大鼠的BMSCs,将纯化的BMSCs定位移植到PD模型大鼠损毁侧纹状体内,移植后2周起用APO诱导大鼠转圈行为,检测细胞移植对PD模型大鼠的行为改善情况;在荧光显微镜下观察实验大鼠的脑组织切片,追踪外源GFP大鼠BMSCs在受体脑内的存活、迁移情况;并以免疫组化技术检测多巴胺能神经细胞的特异性蛋白——酪氨酸羟化酶(TH)的表达,研究分化规律。成功PD大鼠的转圈数为10.89±1.08 r/min,转GFP基因大鼠的BMSCs移植脑内损毁部位后,从第2周开始,旋转圈数逐渐减少,到第8周降至5.86±1.15 r/min。细胞移植后,可在纹状体内见到GFP标记的外源细胞,其至少可存活6周;移植后部分细胞向周围迁移并有一定的走向,可迁移到大鼠脑内广泛区域;移植的BMSCs形态上多数呈现分化形态,在移植后6周,荧光免疫组化检测除见到GFP细胞的TH阳性表达,在移植针道周围还见到大量的内源性神经细胞出现TH阳性表达,即BMSCs在纹状体内能定向分化为神经元样细胞,并能够使残存的多巴胺(DA)能神经元功能恢复。研究结果显示BMSCs移植技术,对改善PD模型大鼠的行为有明显效果,提示可能机制是外源BMSCs在脑内经诱导分化为多巴胺能神经元,部分替代了损毁的多巴胺能神经元的功能;移植的外源BMSCs通过产生某些营养因子,有效地恢复模型动物中DA神经元的功能或使内源性更多的神经元样细胞特异化为合成多巴胺的细胞,从而改善PD模型的症状。GFP转基因大鼠的BMSCs由于自发荧光,移植后方便观察外源细胞在受体脑内的存活、迁移和分化规律,是细胞移植研究中具有广泛运用前景的示踪细胞。实验二移植BMSCs对帕金森病模型大鼠脑内星形胶质细胞GFAP表达的影响本研究通过检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,探究脑内星形胶质细胞(AST)在BMSCs移植治疗PD中的功能。实验分别提取正常大鼠、PD模型大鼠和BMSCs移植治疗4周及8周大鼠脑的总RNA和蛋白,再以荧光定量PCR和western blot方法测定脑内GFAP的mRNA及蛋白的含量,对比分析模型及治疗前后mRNA表达水平的变化与蛋白表达水平变化的联系,同时结合酪氨酸羟化酶(TH)的蛋白表达水平及荧光免疫组化检测大鼠脑组织内TH的表达变化,从而直观地了解大鼠脑内多巴胺能神经元的变化与AST的关系。结果显示,模型大鼠损毁侧脑纹状体内GFAP mRNA的表达水平是正常大鼠的1.33倍,GFAP蛋白表达也高于正常鼠,但是TH蛋白含量明显减少;BMSCs移植治疗后,脑内GFAP mRNA的表达逐渐减少,术后4周的大鼠原损毁侧脑的表达量是对照模型鼠的0.63倍,GFAP蛋白却增加,TH蛋白表达也增加;术后8周大鼠原损毁侧脑GFAP mRNA的表达是对照模型鼠的0.30倍,GFAP蛋白亦减少,TH蛋白表达增加,最后均接近于正常大鼠脑内蛋白的表达。荧光免疫组化法,可见外源细胞周围TH含量明显增多,代替多巴胺能神经元的神经元样细胞也较模型大鼠增多。BMSCs移植治疗PD大鼠模型的过程中,正常动物脑内GFAP免疫组化表达阴性,但在制备PD模型的过程中,星形胶质细胞活化,并出现GFAP的增强表达,成为反应性星形胶质细胞,而损伤修复后GFAP的表达又呈阴性。GFAP是星形胶质细胞活化的独有标志,因此,研究星形胶质细胞在治疗帕金森大鼠模型研究中的变化对探究帕金森治疗机制有重要意义。作为支撑性细胞,能准确引导神经元迁移到脑内损伤部位,并且分泌出大量的营养因子,促进DA神经元的生成而修复黑质-纹状体DA神经通路,其中最为重要的营养因子GFAP,对脊椎动物有强烈的保护作用,并且在中枢神经系统(CNS)中行使重要功能。因此AST为外源细胞在脑内的迁移作出巨大的贡献,为研究BMSCs移植治疗PD的机理研究提供新的思路。

关键词： GFP大鼠帕金森病骨髓间充质干细胞移植星形胶质细胞

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帕金森病脑内TH表达变化的实验研究

帕金森病脑内TH表达变化的实验研究

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全国动物生理生化第七届全国代表大会暨第十三次学术交流会

作者：臧矫薛莹杨晋娴何珊邢华扬州大学兽医学院

为了深入研究帕金森病发病的分子机理,本研究通过检测帕金森病模型大鼠脑内多巴胺合成限速酶一酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)的表达变化规律,为基因治疗该病提供参考。实验分别提取帕金森病模型大鼠损毁侧脑(右脑)和对照侧脑(...

为了深入研究帕金森病发病的分子机理,本研究通过检测帕金森病模型大鼠脑内多巴胺合成限速酶一酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)的表达变化规律,为基因治疗该病提供参考。实验分别提取帕金森病模型大鼠损毁侧脑(右脑)和对照侧脑(左脑)的总RNA,将提取的RNA反转录成模板cDNA,继而通过荧光定量PCR检测模型大鼠损毁侧和对照侧脑内TH mRNA表达水平

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帕金森病大鼠模型构建方法的优化

帕金森病大鼠模型构建方法的优化

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全国动物生理生化第七届全国代表大会暨第十三次学术交流会

作者：臧矫薛莹杨晋娴何珊邢华扬州大学兽医学院

为了提高帕金森(Pakinson disease,PD)大鼠模型的成功率和稳定性,本实验选用不同品系、不同体重的大鼠作为实验对象,以脑立体定位技术,单侧纹状体内单点或双点注射6-羟多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)的方法制备PD大鼠模型。术后2周...

为了提高帕金森(Pakinson disease,PD)大鼠模型的成功率和稳定性,本实验选用不同品系、不同体重的大鼠作为实验对象,以脑立体定位技术,单侧纹状体内单点或双点注射6-羟多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)的方法制备PD大鼠模型。术后2周起颈部皮下注射阿扑吗啡(Apomorphine,APO)诱导大鼠转圈,大鼠出现明显的首尾相连的转圈行为,平均旋转圈数≥7 r/

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大鼠骨髓间充质干细胞表达神经节苷脂GD2的研究

大鼠骨髓间充质干细胞表达神经节苷脂GD2的研究

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全国动物生理生化第七届全国代表大会暨第十三次学术交流会

作者：杨晋娴臧矫薛莹陈德洋邢华扬州大学兽医学院

为了获得可用于移植治疗帕金森病的骨髓间充质干细胞(BMSCs),本实验利用全骨髓贴壁培养法培养大鼠BMSCs,并检测体外培养的BMSCs神经节苷脂GD2合成酶mRNA的表达与细胞表面分子GD2的表达情况,为其特异性分离和鉴定提供依据。从100 g左右S...

为了获得可用于移植治疗帕金森病的骨髓间充质干细胞(BMSCs),本实验利用全骨髓贴壁培养法培养大鼠BMSCs,并检测体外培养的BMSCs神经节苷脂GD2合成酶mRNA的表达与细胞表面分子GD2的表达情况,为其特异性分离和鉴定提供依据。从100 g左右SD大鼠股骨的骨髓中采用全骨髓贴壁法分离、培养BMSCs,接种于含10%胎牛血清(FBS)的DMEM-LG培养基,在37℃、

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应用神经节苷脂GD2分离和鉴定大鼠骨髓间充质干细胞

应用神经节苷脂GD2分离和鉴定大鼠骨髓间充质干细胞

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全国动物生理生化第七届全国代表大会暨第十三次学术交流会

作者：杨晋娴臧矫薛莹陈德洋邢华扬州大学兽医学院

骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)是存在于骨髓中的一种具有多种分化潜能的多能干细胞,已被用于治疗细胞退行性疾病的研究。但由于没有找到理想的用于鉴定BMSCs的特异性标志,通常采用多种表面分子联合鉴定体外培养...

骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)是存在于骨髓中的一种具有多种分化潜能的多能干细胞,已被用于治疗细胞退行性疾病的研究。但由于没有找到理想的用于鉴定BMSCs的特异性标志,通常采用多种表面分子联合鉴定体外培养的BMSCs。最近一种新发现的表面分子神经节苷脂GD2,被用来鉴定人骨髓间充质干细胞和脐带间充质干细胞(UC-MSCs)等间充

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体细胞核移植研究中卵母细胞去核方法的比较

体细胞核移植研究中卵母细胞去核方法的比较

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全国动物生理生化第七届全国代表大会暨第十三次学术交流会

作者：薛莹杨晋娴臧矫许贻索邢华扬州大学兽医学院

在哺乳动物细胞核移植中,为了保证体细胞核移植重构胚的正常发育,卵母细胞去核是最关键的步骤之一。根据对卵核位置的判断方法不同,本实验采用盲吸去核法、蔗糖辅助去核法和Hoechest 333425染色去核法对小鼠卵母细胞进行去核,比较不同...

在哺乳动物细胞核移植中,为了保证体细胞核移植重构胚的正常发育,卵母细胞去核是最关键的步骤之一。根据对卵核位置的判断方法不同,本实验采用盲吸去核法、蔗糖辅助去核法和Hoechest 333425染色去核法对小鼠卵母细胞进行去核,比较不同去核方法的去核效率,建立本实验室卵母细胞去核的技术平台。盲吸去核法是将注射hCG后12.5 h采集的卵母细胞置于10μg/ml细

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帕金森病细胞模型的构建

帕金森病细胞模型的构建

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全国动物生理生化第七届全国代表大会暨第十三次学术交流会

作者：薛莹杨晋娴臧矫李丽华邢华扬州大学兽医学院

采用动物模型研究帕金森病的实验较难深入掌握其发病的细胞学、分子学机制,在一定程度上制约了药物治疗等控制措施的研究进展,而成功的构建帕金森病细胞模型可以作为帕金森病治疗药物筛选的重要工具。本实验以PC12细胞为对象,首先建立P...

采用动物模型研究帕金森病的实验较难深入掌握其发病的细胞学、分子学机制,在一定程度上制约了药物治疗等控制措施的研究进展,而成功的构建帕金森病细胞模型可以作为帕金森病治疗药物筛选的重要工具。本实验以PC12细胞为对象,首先建立PC12细胞的稳定培养体系。实验首先将PC12细胞接种于含有10%胎牛血清的RMPI 1640培养基,绘制生长曲线;以不同浓度的1-甲

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大鼠BMSCs的体外培养及向神经细胞的定向诱导

大鼠BMSCs的体外培养及向神经细胞的定向诱导

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全国动物生理生化第十二次学术交流会

作者：李丽华陈德洋何珊许贻索杨晋娴邢华扬州大学兽医学院

为了获得可用于移植治疗帕金森病(SD)的骨髓间充质干细胞(BMSCs),本实验以流式细胞技术对体外分离培养的大鼠BMSCs的纯度进行了鉴定,并对BMSCs定向分化为神经样细胞的可行性进行了研究。从100g左右SD大鼠股骨的骨髓中采用全骨髓贴壁法...

为了获得可用于移植治疗帕金森病(SD)的骨髓间充质干细胞(BMSCs),本实验以流式细胞技术对体外分离培养的大鼠BMSCs的纯度进行了鉴定,并对BMSCs定向分化为神经样细胞的可行性进行了研究。从100g左右SD大鼠股骨的骨髓中采用全骨髓贴壁法分离培养BMSCs,接

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