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基于齐氏姬鼠外寄生革螨线粒体基因组探究革螨股的进化关系

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基于齐氏姬鼠外寄生革螨线粒体基因组探究革螨股的进化关系

作者：杨慧娟大理大学

学位级别：硕士

目的:部分寄生于小型哺乳动物体表的革螨股物种可直接或间接传播多种人兽共患疾病。序列数据的稀缺极大地阻碍了革螨股物种系统发育的研究,导致当前革螨股不同阶元的分类地位仍存在争议。为丰富革螨股线粒体基因组数据库,因此,本研究首... 详细信息

目的:部分寄生于小型哺乳动物体表的革螨股物种可直接或间接传播多种人兽共患疾病。序列数据的稀缺极大地阻碍了革螨股物种系统发育的研究,导致当前革螨股不同阶元的分类地位仍存在争议。为丰富革螨股线粒体基因组数据库,因此,本研究首次测定并分析了齐氏姬鼠外寄生2科2属3种革螨(粪堆寄螨Parasitus fimetorum、互助真厉螨Eulaelaps huzhuensis和森林真厉螨Eulaelaps silvestris)的线粒体基因组,并结合革螨股已测序物种的线粒体基因组数据信息,探究革螨股不同分类阶元之间的进化关系。方法:本研究使用PCR扩增方法及高通量测序技术测定3种革螨的线粒体基因组序列,运用Geneious Prime 2021.1.1和Mito Z 2.3对所测序的数据进行组装及拼接,基于NCBI、MITOS、t RNAscan-SE和ARWEN查找并注释基因。使用多种软件系统地分析其碱基组成、蛋白编码基因、相对同义密码子使用度、碱基替换饱和性、进化速率和基因重排。同时,基于两种数据集(PCGs+r RNAs和PCGs)分别构建最大似然树和贝叶斯树来探讨革螨股的系统发育关系。结果:(1)三种革螨线粒体基因组均呈一个典型的闭合环状双链DNA分子,长度分别为14,619 bp(粪堆寄螨)、14,872 bp(互助真厉螨)和14,882 bp(森林真厉螨),均编码37个基因,碱基组成均呈明显的AT偏好性。以A/U结尾的密码子大多是偏好密码子,而以G/C结尾的密码子偏好性较弱。(2)粪堆寄螨有1个控制区。相邻基因之间共有12个基因间隔区和9个基因重叠区。J-链编码22个基因,N-链编码15个基因。11个蛋白编码基因以ATN为起始密码子,其余2个蛋白编码基因以GTG为起始密码子,4个蛋白编码基因以碱基T结尾。22个t RNA基因共出现25处错配,除trn S外,其它的t RNA基因均能折叠成典型的三叶草式结构。使用最频繁的密码子是UUA(Leu)。(3)互助真厉螨有2个控制区。相邻基因之间共有10个基因间隔区和12个基因重叠区。J-链编码23个基因,N-链编码14个基因。12个蛋白编码基因以ATN为起始密码子,只有atp8以GTG为起始密码子,3个蛋白编码基因以碱基T结尾。22个t RNA基因共出现30处错配,只有3个t RNA基因(trn S、trn S、trn D)不能形成三叶草式结构。使用最频繁的密码子是UUA(Leu)。(4)森林真厉螨有2个控制区。相邻基因之间共有10个基因间隔区和12个基因重叠区。J-链编码23个基因,N-链编码14个基因。13个蛋白编码基因均以ATN为起始密码子,2个蛋白编码基因以碱基T结尾。22个t RNA基因共出现37处错配,20个t RNA基因具有典型的三叶草式结构,只有trn S和trn S缺失D臂。使用最频繁的密码子是UUA(Leu)。(5)三种革螨蛋白编码基因进化速率最快和最慢的基因分别是atp6基因和cox1基因。有8个蛋白质编码基因经历了负选择作用。密码子分析显示自然选择压力是三种革螨密码子偏好性的主要因素。(6)革螨股只有寄螨科和双雌螨科物种的线粒体基因组未发生重排,其余9科20个物种均发生了不同程度的重排。除血革螨科真厉螨属的2个物种具有相同的重排类型,其余8科18个物种的重排模式均不相同。部分同科或同属的物种间共享相同的衍生基因簇。革螨股物种的重排大多在t RNA基因和控制区附近。瓦螨科物种的重排只与t RNA基因有关;而其余7科物种的重排还与部分蛋白编码基因有关。(7)基于两种数据集(PCGs+r RNAs和PCGs)构建的系统发育树均显示革螨股为单系群,且科内物种总是以较高的置信度优先聚在一起。基于PCGs+r RNAs构建的最大似然树和贝叶斯树以及PCGs构建的贝叶斯树显示血革螨科与皮刺螨科的亲缘关系最密切。然而,基于PCGs构建的最大似然树却显示血革螨科是一个单系群。构建的系统发育树为血革螨科不属于厉螨科的一个亚科提供了有力的佐证。分歧时间显示革螨股起源于石炭纪时期(约344.15 Mya),大部分物种出现在侏罗纪时期和白垩纪时期。结论:系统发育分析支持革螨股为单系群,血革螨科不属于厉螨科的亚科。分歧时间表明革螨股起源于石炭纪时期(约344.15 Mya)。在革螨股中,寄螨科和双雌螨科线粒体基因组结构稳定,表明寄螨科和双雌螨科线粒体基因组结构具有强保守性。其它9科15属20个物种线粒体基因组发生了不同程度的重排,表明革螨股线粒体基因组的排列模式在较低的分类阶元变异较大。研究结果对深入了解革螨股的进化关系以及推动我国线粒体基因组学和媒介螨虫相关领域的研究具有重要的理论意义。

关键词：革螨股线粒体基因组比较分析系统进化

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原油田财务生态运行机制建设与启示

财务与会计 2024年第10期 79-80页

作者：杨慧娟中国石化中原油田分公司

中国石化中原油田分公司(以下简称中原油田)作为老油田,已进入开发后期,面临资源接替不足、稳产上产难度大、安全环保压力大、成本优化空间受限等问题,迫切需要财务发挥价值引领作用,优化预算投向、资产结构、资源统筹,实现资金、资产... 详细信息

中国石化中原油田分公司(以下简称中原油田)作为老油田,已进入开发后期,面临资源接替不足、稳产上产难度大、安全环保压力大、成本优化空间受限等问题,迫切需要财务发挥价值引领作用,优化预算投向、资产结构、资源统筹,实现资金、资产、资源“三资”配置。为此,中原油田构建了财务生态运行机制。

关键词：资源统筹价值引领资产结构资源接替成本优化三资中原油田环保压力

小学劳动课中如何培养学生的创新精神和实践能力

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小学劳动课中如何培养学生的创新精神和实践能力

教学质量管理研究网络论坛——创新思维研究分论坛

作者：杨慧娟菏泽市牡丹区第八小学

培养学生创新精神和实践能力是小学劳动课中重要的教学任务。为充分发挥素质教育作用,小学劳动课教师需重视劳动实践平台的有效构建,引领学生全体参与到劳动活动当中,亲自动手进行劳动实践,从而真正使得劳动实践成为培养学生动手能力的... 详细信息

培养学生创新精神和实践能力是小学劳动课中重要的教学任务。为充分发挥素质教育作用,小学劳动课教师需重视劳动实践平台的有效构建,引领学生全体参与到劳动活动当中,亲自动手进行劳动实践,从而真正使得劳动实践成为培养学生动手能力的课堂,让学生能够从实践之中获得真知,拥有创新意识、精神和能力。本文以笔者教学经验为例谈谈如何在小学劳动课中培养学生实践能力与创新精神,以供参考。

关键词：实践能力劳动课创新精神

来源： cnki会议评论

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微更新视角下上海老旧社区公共空间激活策略

上海工艺美术 2024年第1期 110-112页

作者：杨慧娟不详

在我国城市发展模式从增量扩张向存量更新,提升空间品质转型的背景下,老旧社区作为居民生活基本空间,存在人口结构复杂、功能单一、设施老化、空间失活等诸多问题且数量较为庞大,成为城市更新的重要切入点。文章梳理了上海老旧社区存在... 详细信息

在我国城市发展模式从增量扩张向存量更新,提升空间品质转型的背景下,老旧社区作为居民生活基本空间,存在人口结构复杂、功能单一、设施老化、空间失活等诸多问题且数量较为庞大,成为城市更新的重要切入点。文章梳理了上海老旧社区存在的现状问题,结合具体案例总结分析了上海老旧社区公共空间的激活策略。

关键词：老旧社区社区公共空间空间品质城市更新城市发展模式存量更新新视角下设施老化

TsadSPI对脓毒症诱导的小鼠急性肾损伤的保护作用及其干预机制

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TsadSPI对脓毒症诱导的小鼠急性肾损伤的保护作用及其干预机制

作者：杨慧娟蚌埠医学院

学位级别：硕士

研究背景:急性肾损伤（Acute Kidney Injury,AKI）和脓毒症（Sepsis）是具有相似危险诱发因素的复杂性疾病。在AKI的触发因素中,脓毒症最为常见,约50%的AKI患者伴有脓毒症,脓毒症相关性急性肾损伤（Sepsis Associated Acute Kidney Inju... 详细信息

研究背景:急性肾损伤（Acute Kidney Injury,AKI）和脓毒症（Sepsis）是具有相似危险诱发因素的复杂性疾病。在AKI的触发因素中,脓毒症最为常见,约50%的AKI患者伴有脓毒症,脓毒症相关性急性肾损伤（Sepsis Associated Acute Kidney Injury,SA-AKI）的死亡率达到70%。鉴于如此高的死亡率,脓毒症的治疗应该优先考虑到SA-AKI的靶向治疗。然而,目前临床上仍未有较好的治疗手段用于SA-AKI,因此,研究脓毒症时肾脏的损害机制和寻找SA-AKI的新兴治疗策略尤为重要。大量的流行病学数据和实验研究证实,“蠕虫疗法”（Helminth therapy）即蠕虫及其虫体衍生物可以用于代谢性疾病和炎症性疾病的治疗。TsadSPI（recombinant adult serine protease inhibitor from Trichinella spiralis）是源于旋毛虫的重组丝氨酸蛋白酶抑制剂,已有研究证实此蛋白体外可以调节免疫反应,体内可以通过调节Th1/Th2平衡、诱导Treg细胞扩增来治疗炎症性疾病。但是TsadSPI在SA-AKI患者中对肾脏免疫调节作用的机制尚未有报道,故本课题通过盲肠结扎穿孔术（cecal ligation and puncture,CLP）诱发BALB/c小鼠SA-AKI模型,观察脓毒症对肾脏的影响,然后用TsadSPI进行干预,探究此蛋白对肾脏是否具有保护作用及其具体机制,为TsadSPI成为治疗SA-AKI的新型免疫抑制药物提供理论依据和实验支持。目的:本研究的主要目的是探讨旋毛虫重组成虫丝氨酸蛋白酶抑制剂（TsadSPI）对SA-AKI的保护作用。通过对脓毒症小鼠的精神状态,肝肾功能,肝脏、肾脏病理表现来研究脓毒症时肾脏的损伤机制,结合促炎因子和免疫调节性因子的变化,以及肾脏Myd88（髓样分化因子88）/NF-κB（核因子-κB p65）表达水平,完善“蠕虫疗法”发挥免疫调节作用的分子机制。方法:1.TsadSPI的筛选、表达及浓度测定:根据Gen Bank中TsadSPI蛋白基因序列号（EU263307.1）,通过PAS（PCR-based Accurate Synthesis）的方法合成对应基因,Nde I和Xba I双酶切后连接至表达载体p Czn1,将构建成功的p Czn1-TsadSPI转入表达菌Arctic Express,IPTG诱导表达目的蛋白,并进行纯化,12%SDS-PAGE分析,去除纯化蛋白内毒素,测定蛋白浓度后于-80℃保存。2.建立SA-AKI小鼠模型:本实验选用BALB/c雄性小鼠,CLP方法建立SA-AKI模型。将18只BALB/c小鼠随机分为假手术组（Sham+PBS组）、模型组（CLP+PBS组）、TsadSPI治疗组（CLP+TsadSPI组）,每组6只。Sham组只进行开腹探查盲肠,不进行结扎穿孔操作。术后30min,Sham组和模型组小鼠腹腔注射PBS（100μl）,治疗组腹腔注射含有2μg TsadSPI蛋白PBS（100μl）,12h后处死观察。3.TsadSPI对SA-AKI的保护作用及其免疫机制研究:12h后通过对小鼠一般状态的观察;肝脏、肾脏病理结构和功能的损伤情况;血清中促炎因子（TNF-α、IL-6）及免疫调节性因子（IL-10、TGF-β）的水平变化;肾脏组织Myd88/NF-κB的表达水平来评估TsadSPI对SA-AKI的治疗作用及免疫机制。结果:1.一般情况:Sham+PBS组术后12h,小鼠活动自如,精神状态无明显改变;CLP+PBS术后小鼠体态慵懒,活动减少,反应迟钝,身体不自如抖动并抱团取暖,眼角周围可见淡黄色分泌物,睁眼困难,无法进食饮水;经过TsadSPI治疗后,小鼠精神状态较CLP模型组好转,稍许活动,眼角淡黄色分泌物减少,但仍无法正常进食饮水。2.小鼠肝肾功能变化:与Sham组相比,CLP术后,小鼠血清肝功能ALT、AST,肾功能Cr、BUN水平明显升高（P＜0.001）,经过TsadSPI干预后,上述各指标明显降低（P＜0.001）。3.小鼠肝脏、肾脏切片HE结果:CLP术后12h,肝脏、肾脏组织结构发生明显损伤。与Sham组相比,肝脏组织中肝索失去正常排列顺序,肝血窦淤血,肝细胞水肿明显,胞质疏松,大量炎性细胞浸润;肾脏组织肾小球缺血皱缩,失去正常形态,球-囊间隙扩大,炎性细胞渗出增多,肾小管上皮细胞肿胀。TsadSPI治疗后,肝脏、肾脏损伤程度较CLP组明显好转。肝小叶结构轻微损伤,细胞水肿减轻;肾脏肾小球皱缩好转,球-囊间隙无明显扩大。4.小鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-10及TGF-β水平变化:CLP术后,促炎因子TNF-α、IL-6水平较Sham组升高（P＜0.001）,经TsadSPI治疗后,小鼠TNF-α、IL-6均明显下降（P

关键词：脓毒症急性肾损伤 TsadSPI Myd88 NF-κB 促炎因子免疫调节性因子

五味子木脂素对药物性肝损伤的保护作用及机制研究

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五味子木脂素对药物性肝损伤的保护作用及机制研究

作者：杨慧娟天津中医药大学

学位级别：硕士

目的对乙酰氨基酚（Acetaminophen,APAP）是一种广泛应用的镇痛解热药物,其使用过量是导致药物性肝损伤的主要原因,在推荐剂量下相对安全,但急性或累积过量使用往往会导致肝损伤,因此,进一步阐明药物防治APAP引起肝损伤的细胞和分子机制... 详细信息

目的对乙酰氨基酚（Acetaminophen,APAP）是一种广泛应用的镇痛解热药物,其使用过量是导致药物性肝损伤的主要原因,在推荐剂量下相对安全,但急性或累积过量使用往往会导致肝损伤,因此,进一步阐明药物防治APAP引起肝损伤的细胞和分子机制,有助于尽早识别发生急性肝衰竭和不良预后的危险因素,从而有针对性的开发阻断肝损伤进程的治疗靶点;药物性肝损伤（drug-induced liver injury,DILI）亦称药物性肝病,是药物在应用治疗剂量时,肝脏受到药物或药物所产生的代谢产物所导致的毒性损伤或发生过敏反应所导致的肝脏疾病。五味子为传统保肝中药,文献表明,五味子醇提物及多糖均有保肝的作用,五味子在肝病的治疗中应用广泛,但关于五味子木脂素防治APAP致DILI研究较少,且五味子木脂素类成分保肝作用的研究机制尚不清楚,基于课题组前期研究结果,五味子醇提物可有效防治小鼠APAP致DILI,但其药效物质基础有待进一步研究。目前,临床应用的很多药物会引起药物性肝损伤,药物性肝损伤是药品不良反应的主要类型之一,因此,使得临床上用药致肝脏损害的预防和治疗显得尤为重要。方法1.采用大孔吸附树脂AB-8对五味子总木脂素进行纯化分离,UV检测总木脂素类成分的含量,以乙腈-水为流动相,在波长217nm下,梯度洗脱的方法,HPLC法对比纯化前后五味子总木脂素类成分进行检测。2.以200 mg/kg APAP剂量对ICR小鼠DILI造模,通过测定血清中AST和ALT指标,确定APAP造模剂量。3.将ICR小鼠分为空白组、模型组、阳性对照组、五味子总木脂素低、中、高组,按照分组给予不同相应的药物防治,对小鼠给药进行肝脏预保护,并采用APAP建立小鼠DILI模型,赖氏检测法测定小鼠血清中AST和ALT传统生化指标,TNF-α、IL-1β和IL-6炎症水平,并测定小鼠肝组织匀浆中MDA和SOD指标水平。4.结合前期研究的基础,以五味子醇提物PCR结果筛选出的15个关键基因为研究对象,进行Real-time PCR验证,验证五味子总木脂素防治APAP致DILI的作用通路及其机制。5.结合药效和PCR验证的结果,对ERBB信号通路上的关键蛋白进行Western blot验证,分别对空白组、模型组、阳性药组和五味子木脂素组EGFR、LPCAT1和MDM2蛋白的表达进行检测,验证五味子防治APAP致DILI的作用通路及机制。6.基于分子对接技术,以12个相关蛋白为基础对Schisandrol B（Sol B）、Schisantherin A（Stn A）、Schisandrin A（Sch A）、Schisandrin phenol、Schisandrin C（Sch C）、Schisandrol A（Sol A）和Schisandrin B（Sch B）进行成分筛选,筛选五味子木脂素防治DILI的重要活性成分。7.以200mg/kg APAP剂量对ICR小鼠造模,复制模型,将ICR小鼠分为空白组、模型组、阳性对照组、Sch C组、Sol A组和Stn A组,按照分组给予不同相应的药物防治,对小鼠给药进行肝脏预保护,并采用APAP建立小鼠DILI模型,赖氏检测法测定小鼠血清中AST和ALT传统生化指标,TNF-α、IL-1β和IL-6炎症水平,并测定小鼠肝组织匀浆中MDA和SOD指标水平。结果1.本研究以AB-8型大孔吸附树脂,上样药液浓度1.5mg/m L,流速2BV/h,径高比1:7以上,95%乙醇洗脱,洗脱流速2BV/h的纯化工艺对五味子木脂素进行纯化分离,在纯化工艺优化的基础上,对五味子木脂素类成分进行大量富集,以Sol A作为大孔树脂纯化五味子总木脂素的关键指标,同时,以HPLC法测定五味子中7种木脂素,比较五味子醇提物中木脂素与纯化后木脂素类成分的变化,结果表明,AB-8大孔吸附树脂有效纯化了五味子木脂素类成分,为五味子木脂素成分的富集奠定了基础。2.以200mg/kg APAP剂量造模,给予五味子总木脂素防治,与模型组相比,五味子总木脂素对APAP致DILI具有明显的防治作用,五味子总木脂素给药预保护组能显著降低AST、ALT、MDA水平,能升高SOD水平,改善APAP诱导的DILI,主要通过降低血清中的肝酶指标,对抗氧化应激以及减轻炎症反应来发挥防治APAP致DILI的作用。3.结合前期研究的基础,共确定MDM2、SRC、PLA2和EGFR在内的15个作用靶点,并最终确定15个靶点基因进行PCR验证,结果表明木脂素防治APAP致DILI在ERBB信号通路上发挥作用;接着选择ERBB信号通路上关键蛋白EGFR、LPCAT1和MDM2进行Western blot验证,结果表明,五味子总木脂素可通过调控EGFR和LPCAT1蛋白的表达来发挥防治APAP致DILI的作用。4.基于分子对接技术,对7个木脂素类成分进行筛选,结果表明五味子中联苯环辛

关键词：五味子木脂素对乙酰氨基酚药物性肝损伤 ERBB信号通路

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幼儿科学活动中信息技术实施策略

文理导航 2023年第33期 91-93页

作者：杨慧娟甘肃省嘉峪关市峪泉镇中心幼儿园甘肃嘉峪关735100

伴随“互联网+”技术的深度融入,信息技术已经成为新型教学辅助手段,融合于幼儿园科学活动组织的方方面面。教师在幼儿园科学活动教学实践过程中,要发挥信息技术助学优势,创设优质活动情景,丰富科学探索内容,提高科学教学活动的灵活性,... 详细信息

伴随“互联网+”技术的深度融入,信息技术已经成为新型教学辅助手段,融合于幼儿园科学活动组织的方方面面。教师在幼儿园科学活动教学实践过程中,要发挥信息技术助学优势,创设优质活动情景,丰富科学探索内容,提高科学教学活动的灵活性,点燃幼儿科学探索的热情。引导幼儿在一日生活中发现科学现象,体验科学神奇,运用科学原理解决具体问题,提高幼儿园科学育人活动综合成效。

关键词：幼儿园科学活动信息技术策略

早期护理干预的实施对胃癌根治术患者胃功能的改善价值研究

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中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 2023年第11期 0094-0097页

作者：杨慧娟南京市江宁医院江苏南京211100

探究早期护理干预的实施对胃癌根治术患者胃功能的改善价值。方法选取我院2021年5月~2023年5月收治的72例胃癌根治术患者,按照Excel软件随机分组方法分为EKX组(36例)与FVK组(36例),EKX组-常规护理,FVK组-早期护理。比较胃功能指标、胃... 详细信息

探究早期护理干预的实施对胃癌根治术患者胃功能的改善价值。方法选取我院2021年5月~2023年5月收治的72例胃癌根治术患者,按照Excel软件随机分组方法分为EKX组(36例)与FVK组(36例),EKX组-常规护理,FVK组-早期护理。比较胃功能指标、胃乏力及胃肠道反应发生率、护理满意度。结果 FVK组患者各项时间指标均短于EKX组(28.42±1.87)(h)EKX组,(=7.432,P=0.006<0.05)。结论在胃癌根治术患者护理中实施早期护理干预效果显著,值得推广。

关键词：早期护理胃癌根治术胃功能价值

“互联网+”背景下信息化教学手段在幼儿园科学活动中的实践和创新研究

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考试周刊 2023年第46期 159-162页

作者：杨慧娟甘肃省嘉峪关市峪泉镇中心幼儿园

《教育信息化2.0行动计划》的发布与实施，全面开启了教育现代化新篇章。幼儿园科学活动推进要重视信息化教学手段的应用，探索适宜幼儿学习参与的活动方针，调动幼儿参与活动的积极性，扩展幼儿科学接受的范围。充分发挥信息化手段趣... 详细信息

《教育信息化2.0行动计划》的发布与实施，全面开启了教育现代化新篇章。幼儿园科学活动推进要重视信息化教学手段的应用，探索适宜幼儿学习参与的活动方针，调动幼儿参与活动的积极性，扩展幼儿科学接受的范围。充分发挥信息化手段趣味、互动、直观的优势，推进“互联网+”背景下信息化手段与幼儿园科学育人活动深度融合，结合科学研究过程重视材料搜集，推进活动落实，提升幼儿科学素养。

关键词： “互联网+” 信息化幼儿园科学活动实践创新