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不妨换条赛道闯一闯

致富天地 2024年第6期 4-4页

作者：杨建乐不详

最近,返乡创业的小覃“发”了。他致富的秘诀,就是在老家小镇开了一家木炭店。原来,小覃的老家这几年成了远近闻名的水果之乡。看着不少亲戚朋友种砂糖橘赚了钱,在外务工的小覃也打算返乡种果。不过,当了解到近年来地租不断上涨,砂糖橘... 详细信息

最近,返乡创业的小覃“发”了。他致富的秘诀,就是在老家小镇开了一家木炭店。原来,小覃的老家这几年成了远近闻名的水果之乡。看着不少亲戚朋友种砂糖橘赚了钱,在外务工的小覃也打算返乡种果。不过,当了解到近年来地租不断上涨,砂糖橘市场行情不稳定,加之自己缺乏种植技术,他觉得心里没底。一天晚上,和朋友在一家夜宵店吃烧烤时,老板无意中的一句抱怨“炭太贵,还难买到”,让小覃灵机一动。家乡夜宵店多,对木炭需求量大,而且每逢冬季,家家户户都会购买木炭烤火,这不就是商机吗?想到这,小覃当即决定放弃跟风种果,转为做木炭生意。

关键词：返乡创业地租市场行情亲戚朋友砂糖橘木炭跟风

微小RNA-377-3p调控自噬改善脂多糖/D-半乳糖胺诱导的急性肝衰竭的机制研究

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中华危重症医学杂志（电子版） 2023年第2期16卷 89-97页

作者：陈玲李楠杨建乐浙江医院感染疾病科杭州310013 浙江医院消化内科杭州310013

目的本研究旨在研究微小RNA-377-3p(miR-377-3p)通过成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)对急性肝衰竭(ALF)自噬和凋亡的影响。方法分别通过D-半乳糖胺(D-GalN)/脂多糖(LPS)和D-GalN/肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导ALF动物模型和细胞凋亡模型。... 详细信息

目的本研究旨在研究微小RNA-377-3p(miR-377-3p)通过成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)对急性肝衰竭(ALF)自噬和凋亡的影响。方法分别通过D-半乳糖胺(D-GalN)/脂多糖(LPS)和D-GalN/肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导ALF动物模型和细胞凋亡模型。将12只C57BL/6J小鼠分为对照组和模型组,每组6只。将细胞分为对照组、模型组(经D-GalN、TNF-α诱导)、NC mimic组(D-GalN、TNF-α诱导并转染无意义miRNA对照序列)、miR-377-3p mimic组(D-GalN、TNF-α诱导并转染miR-377-3p模拟物)和miR-377-3p mimic+3-MA组(D-GalN、TNF-α诱导并转染miR-377-3p模拟物的同时应用自噬抑制剂3-MA干预)。检测小鼠肝脏组织病理情况、血清中生化参数水平、凋亡相关蛋白、自噬相关蛋白以及各组细胞中miR-377-3p RNA、自噬相关蛋白、FGFR1蛋白表达水平。通过双荧光素酶报告基因实验检测miR-377-3p和FGFR1靶向结合关系,并采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果苏木素-伊红(HE)染色结果显示,对照组小鼠中央静脉周围肝细胞呈放射状排列,无炎症细胞浸润;模型组小鼠中肝小叶结构破坏,大量肝细胞坏死,周围炎症细胞浸润。5组细胞的凋亡率和自噬蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、p62的表达比较,差异均有统计学意义(F=88.520、42.760、95.870、62.930,P均<0.001),且miR-377-3p mimic组细胞凋亡率和p62蛋白水平均较模型组显著降低,Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ水平则均显著升高(P均<0.05)。对照组、模型组、NC mimic组、miR-377-3p mimic组FGFR1蛋白表达水平比较,差异具有统计学意义(F=84.670,P<0.001),且miR-377-3p mimic组FGFR1表达水平较模型组显著降低(P<0.05)。对照组、模型组、miR-377-3p mimic组、miR-377-3p mimic+NC组(D-GalN、TNF-α诱导并转染miR-377-3p模拟物和空白载体)和miR-377-3p mimic+FGFR1组(D-GalN、TNF-α诱导并转染miR-377-3p模拟物和FGFR1目的序列载体)自噬相关蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ和p62的表达水平比较,差异均有统计学意义(F=63.840、61.590、127.800,P均<0.001),且miR-377-3p mimic+FGFR1组较miR-377-3p mimic组LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1水平均降低,p62蛋白水平升高(P均<0.05)。结论miR-377-3p靶向负调控FGFR1的表达,增强L02细胞自噬水平减轻D-GalN/TNF-α诱导的细胞凋亡,发挥ALF的保护作用。

关键词：微小RNA-377-3p 成纤维细胞生长因子受体自噬急性肝衰竭

我院2019年发热门诊流感病毒抗原检测病例结果分析

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中国乡村医药 2022年第12期29卷 79-80页

作者：杨建乐浙江大学医学院附属浙江医院感染性疾病科杭州310030

目的分析该院2019年度发热门诊患者流感病毒抗原检验结果,指导临床流行性感冒(简称流感)病例的诊治。方法选择2019年1—12月在该院发热门诊进行流感病毒抗原检测的病例,统计其中流感病毒抗原阳性病例的比例和发病月份。结果该院发热门... 详细信息

目的分析该院2019年度发热门诊患者流感病毒抗原检验结果,指导临床流行性感冒(简称流感)病例的诊治。方法选择2019年1—12月在该院发热门诊进行流感病毒抗原检测的病例,统计其中流感病毒抗原阳性病例的比例和发病月份。结果该院发热门诊共检测流感病毒抗原19597例次,检测阳性2904例(14.8%),其中甲型流感2046例(70.5%),乙型流感858例(29.5%),在1—4月及12月流感病毒抗原检出阳性率分别为22.9%、27.0%、20.9%、25.4%、26.4%。结论2019年杭州1—4月及12月为流感流行季节,流感病毒抗原检出阳性率均大于20.0%;发热门诊对发热患者进行广泛的流感病毒抗原检测,对于早期发现流感病例是非常必要的,有利于及时防控及治疗。

关键词：发热门诊流行性感冒流感病毒抗原检测甲型流感乙型流感

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环状RNA circLRP6介导的miR-5590-5p改善肝衰竭机制研究

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医学研究杂志 2023年第6期52卷 54-59页

作者：陈玲李楠杨建乐浙江医院感染疾病科杭州310013 浙江医院消化内科杭州310013

目的探究环状RNA circLRP6、miR-5590-5p和C5aR1在肝衰竭中的保护作用及调控机制。方法通过D-半乳糖胺和脂多糖(D-galactosamine and LPS,D-GalN/LPS)诱导来构建体外肝衰竭细胞模型,流式细胞术检测L02细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(real-t... 详细信息

目的探究环状RNA circLRP6、miR-5590-5p和C5aR1在肝衰竭中的保护作用及调控机制。方法通过D-半乳糖胺和脂多糖(D-galactosamine and LPS,D-GalN/LPS)诱导来构建体外肝衰竭细胞模型,流式细胞术检测L02细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测circLRP6和miR-5590-5p的表达,Western blot法检测C5aR1蛋白的表达,RNA免疫共沉淀和双荧光素酶报告基因实验检测circLRP6和miR-5590-5p之间的结合作用,同时利用双荧光素酶报告基因实验检测C5aR1和miR-5590-5p的结合作用。结果与对照组比较,D-GalN/LPS诱导L02细胞凋亡率上升(P<0.05),circLRP6和C5aR1表达上调,miR-5590-5p表达下调(P<0.05)。同时,与D-GalN/LPS+miRNA-NC组比较,D-GalN/LPS+miR-5590-5p模拟物组的L02细胞凋亡率显著下降(P<0.05)。另外,双荧光素酶报告基因实验显示,circLRP6能够直接与miR-5590-5p结合,并且miR-5590-5p直接调控C5aR1。检测结果还发现,与D-GalN/LPS+shRNA组比较,D-GalN/LPS+sh-circLRP6组circLRP6基因和C5aR1蛋白表达下调。然而,与D-GalN/LPS+shRNA组比较,D-GalN/LPS+sh-circLRP6组L02细胞凋亡率显著下降。结论环状RNA circLRP6介导的miR-5590-5p具有改善肝衰竭的作用,其作用机制可能是通过靶向C5aR1来实现的。

关键词：肝衰竭 circLRP6 miR-5590-5p C5aR1 细胞凋亡

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加强和改进民族地区审计工作的设想

审计研究 1992年第6期 32-35页

作者：杨建乐彭政四川省审计科研所

随着社会经济的向前发展,特别是在当前进一步深化改革扩大开放的形势下,审计工作将面临新的机遇与挑战。少数民族地区审计工作如何在新形势下求得新发展,是审计工作中需要解决的一个大问题。为此。

关键词：审计工作审计职能少数民族地区审计机关社会审计组织审计体系《宪法》社会经济发展加强国家审计

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重庆市两江新区创新服务擦亮党建“红色名片”

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云岭先锋 2022年第8期 49-50页

作者：杨建乐刘海燕不详

社区:“服务三次方”助力基层治理。7月初,刚放暑假不久,两江新区人和街道龙寿路社区的微型少年宫变得热闹起来。在“幼苗堂”课堂上,一群孩子在老师的指引下,正学习安全用电知识。为帮助社区孩子安全度过假期,龙寿路社区特地举办“奇... 详细信息

社区:“服务三次方”助力基层治理。7月初,刚放暑假不久,两江新区人和街道龙寿路社区的微型少年宫变得热闹起来。在“幼苗堂”课堂上,一群孩子在老师的指引下,正学习安全用电知识。为帮助社区孩子安全度过假期,龙寿路社区特地举办“奇妙夏日,缤纷童乐”暑假夏令营活动,期间开展了“安全宅家,放心一夏”居家安全教育。

关键词：两江新区安全用电知识夏令营活动居家安全创新服务基层治理少年宫三次方

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论合同的生效

论合同的生效

作者：杨建乐厦门大学

学位级别：硕士

合同生效问题是合同法学基本问题之一,也是民法学重要问题之一。长期以来,我国法学界对于合同效力、合同有效和合同生效这几个紧密关联问题的研究一直都没有停止过,并取得了很多成果,为推动我国的立法、司法事业和学术进步做出了应有的... 详细信息

合同生效问题是合同法学基本问题之一,也是民法学重要问题之一。长期以来,我国法学界对于合同效力、合同有效和合同生效这几个紧密关联问题的研究一直都没有停止过,并取得了很多成果,为推动我国的立法、司法事业和学术进步做出了应有的贡献;然而,在这个领域里仍有许多的问题不断引起人们研究的兴趣,引发热烈的讨论。本文试图通过对合同的效力、合同生效的意义、合同生效的标志等问题的分析以及合同生效与合同有效、条件与期限、生效期限与履行期限等概念的比较,说明在当事人之间设立债的关系是合同的效力之一,合同的生效意味着合同在当事人之间产生了合同之债的关系,合同之债的产生是合同生效的标志,并尝试对《合同法》规定的特殊合同的生效规则做出一些解释。希望对《合同法》的解释和完善以及对合同法学相关问题的研究有所裨益。第一章通过对合同效力概念的分析,提出在当事人之间设立债的关系是合同的效力之一的观点;第二章对合同的有效和合同的生效进行比较,认为合同的有效是一个价值判断问题,而合同生效是一个事实判断问题,说明合同的有效和合同的生效是两个不同的概念;第三章讨论合同生效的标志问题,合同具有在当事人之间设立债的关系的效力,合同生效意味着在当事人之间产生了债的关系,反过来合同之债的产生也标志着合同的生效;第四章尝试对《合同法》规定的特殊合同的生效规则进行解释。

关键词：合同效力合同生效合同有效

影响乙肝慢加急性肝衰竭短期预后相关因素研究

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影响乙肝慢加急性肝衰竭短期预后相关因素研究

作者：杨建乐浙江大学

学位级别：硕士

背景与目的：慢加急性肝衰竭（Acute-on-Chronic Liver Failure,ACLF）起病急,病情严重且病死率高,严重危害人民健康。在我国乙肝感染是引起慢加急性肝衰竭的主要病因。对乙肝ACLF严重程度的准确评判及疾病进展趋势的及时评估,有助于确... 详细信息

背景与目的：慢加急性肝衰竭（Acute-on-Chronic Liver Failure,ACLF）起病急,病情严重且病死率高,严重危害人民健康。在我国乙肝感染是引起慢加急性肝衰竭的主要病因。对乙肝ACLF严重程度的准确评判及疾病进展趋势的及时评估,有助于确定正确的治疗决策,降低病死率。本研究旨在研究基线时乙型肝炎ACLF患者一般状况、生化指标、MELD评分、MELD-Na评分及CTP评分等因素对乙型肝炎慢加急性肝衰竭短期预后的预测价值。方法：选取浙江大学医学附属第一医院感染病科2014年6月至2015年12月首次确诊并住院治疗的乙肝慢加急性肝衰竭患者,根据90天时生存或死亡分为好生存组和死亡组,将两组患者的临床资料进行组间比较,将有意义的单一因素进一涉行Logistic回归分析,探索影响乙型肝炎慢加急性肝衰竭短期预后相关因素。结果：生存组组与死亡组相关因素相比,在患者年龄、总胆红素、血清肌酐、国际标准化比值（International Normalized Ratio,INR）、凝血酶原时间、白细胞计数、血小板计数、血清谷丙转氨酶（Ala-nine transmigrate,ALT）、血清谷草转氨酶（Aspartame aminotransferase,AST）、甲胎蛋白（Alpha Fetoprotein,AFP）肝性脑病、合并感染、持续性低钠血症等指标在两组之间差异有统计学意义（P均＜0.05）,其余指标差异无统计学意义。Logistic回归分析结果表明,合并细菌感染、肝性脑病、持续性低钠血症、INR、ALT、AST、血小板计数、白细胞计数等是影响乙肝慢加急性肝衰竭的独立危险因素（P均＜0.05）。死亡组MELD评分、MELD-Na评分、CTP评分明显高于好转治愈组组（P＜0.05）。其AUC分别为0.759与0.746,0.609。结论：合并细菌感染、肝性脑病、持续性低钠血症、INR、ALT、AST、血小板计数、白细胞计数是影响乙肝慢加急性肝衰竭的独立危险因素,相比CTP评分,MELD、MELD-Na评分在预测乙型肝炎慢加急性肝衰竭短期预后上略占优势。

关键词：慢加急性肝衰竭乙型肝炎预后 Logistic模型

牛副流感病毒3型间接ELISA检测方法的建立与初步应用

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牛副流感病毒3型间接ELISA检测方法的建立与初步应用

作者：杨建乐东北农业大学

学位级别：硕士

牛副流感病毒3型（Bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3）为单股负链有囊膜的RNA病毒,是引起牛呼吸道综合征（Bovine respiratory disease complex,BRDC）的重要病原之一,主要引起牛的上呼吸道感染,称为牛副流行性感冒（Parainflue... 详细信息

牛副流感病毒3型（Bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3）为单股负链有囊膜的RNA病毒,是引起牛呼吸道综合征（Bovine respiratory disease complex,BRDC）的重要病原之一,主要引起牛的上呼吸道感染,称为牛副流行性感冒（Parainfluenza bovum）,以支气管炎、肺炎等呼吸道症状为主要特征,严重者甚至能引起流产,给养牛业带来了巨大的损失。目前国内针对BPIV3的研究尚处于起步阶段,还没有特别有效的BPIV3商品化检测试剂盒,鉴于BPIV3强大的传播能力和巨大的危害性,建立一种方便准确的BPIV3检测方法迫在眉睫。研究发现,BPIV3的NP蛋白是BPIV3中含量最高的蛋白之一,高度保守,其上存在3个主要抗原表位,有2个分布在C端。HN蛋白是表面抗原,在进化过程中高度保守。HN和NP蛋白,都具有很好的作为检测抗原的能力。将NP蛋白和HN蛋白抗原表位基因串联表达,作为检测抗原,在原理上可以放大检测效果。本实验根据BPIV3 SD2014株NP蛋白和HN蛋白的氨基酸序列,应用Lasergene软件分别对这两个蛋白的序列进行分析,同时查阅文献报道,最终确定NP蛋白的C端388aa15aa,HN蛋白的C端355aa72aa为优势抗原区。将选定的NP和HN蛋白抗原表位通过重叠延伸PCR方法串联（命名为NP-HN）,构建pET28a（+）-NP-HN原核表达载体,转入大肠杆菌BL21（DE3）诱导表达该串联蛋白,将表达出的蛋白命名为NP-HN融合蛋白。以融合的NP-HN蛋白作为包被抗原,建立了BPIV3间接ELISA诊断方法。本实验具体研究内容及结果如下:1.通过重叠延伸PCR扩增技术,成功获得NP-HN截短串联基因,并将其连接至pET28a（+）载体,成功构建了原核重组表达载体pET-28a（+）-NP-HN。将该质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）形成阳性转化子,经IPTG诱导,成功表达了大小为44kDa的NP-HN融合蛋白。2.利用Ni-NTA亲和层析方法纯化NP-HN融合蛋白,纯化后的融合蛋白经SDS-PAGE验证其有较高纯度。纯化后的蛋白经Western-blot检测,结果证明NP-HN融合蛋白能识别BPIV3阳性血清。利用Pierce BCA蛋白定量分析试剂盒对纯化的NP-HN蛋白进行浓度测定,其蛋白浓度为900μg/ml。3.将纯化的NP-HN蛋白免疫3只新西兰白兔,制备了血清效价为1:32000的多克隆抗体。利用此多克隆抗体,分别对BPIV3、BVDV和IBRV全病毒进行ELISA检测,结果显示此多克隆抗体能与BPIV3发生反应,与BVDV和IBRV不发生反应,表明纯化的NP-HN蛋白具有良好的免疫反应性和免疫特异性。制备的多克隆抗体经western blot检测,结果显示全病毒的NP和HN蛋白能与多克隆抗体结合,这也间接说明融合蛋白NP-HN可以作为间接ELISA方法的检测抗原。4.BPIV3间接ELISA诊断方法的建立利用纯化后的NP-HN融合蛋白作为包被抗原,建立BPIV3间接ELISA检测方法。利用标准的阳性血清和阴性血清优化反应条件,确立最适反应条件:抗原包被浓度4μg/ml,37℃包被1h后4℃包被过夜;封闭液为20%马血清,37℃封闭1.5h;血清稀释度为1:50,37℃孵育1h;兔抗牛HRP稀释度为1:4000,37℃孵育1h;TMB显色液作用时间10min,1M H2SO4终止,用酶标仪测定OD450nm。确定该ELISA检测方法的判定标准为:将待测样品OD450nm≥0.30定为阳性,OD450nm<0.30定为阴性。包被的重组融合蛋白NP-HN与牛病毒性腹泻粘膜病病毒和牛传染性鼻气管炎病毒无交叉反应,批间和批内重复性试验的变异系数小于8%。用所建立间接ELISA诊断方法与血清中和试验比较,总体总符合率为96.67%;与美国爱德士BPIV3间接ELISA试剂盒比较,总体符合率为95.56%。5.临本样本的检测利用所建立的BPIV3间接ELISA诊断方法对采自山东、辽宁和天津的3个奶牛场的270份临床血清样本进行检测,总的阳性率为82.59%,表明上述牛场存在BPIV3的感染与流行。

关键词：牛副流感病毒3型 NP-HN基因原核表达多克隆抗体 ELISA检测方法