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缺血性脑卒中血浆细胞外囊泡小RNA生物标记物的筛选与验证

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缺血性脑卒中血浆细胞外囊泡小RNA生物标记物的筛选与验证

作者：杨尚栋郑州大学

学位级别：硕士

背景和目的缺血性脑卒中(ischemic stroke,IS)是由于脑血管严重狭窄或阻塞引起脑血流灌注下降,进而缺血、缺氧以致供血区脑组织死亡的一种急性脑血管病。据世界卫生组织统计,脑卒中是世界范围内导致死亡的第二大疾病,具有发病率高、致... 详细信息

背景和目的缺血性脑卒中(ischemic stroke,IS)是由于脑血管严重狭窄或阻塞引起脑血流灌注下降,进而缺血、缺氧以致供血区脑组织死亡的一种急性脑血管病。据世界卫生组织统计,脑卒中是世界范围内导致死亡的第二大疾病,具有发病率高、致死率高、致残率高等特点且近年来发病呈年轻化趋势。在我国每10万人中就有142人因脑卒中死亡,致死率居我国第一,给我国医疗卫生事业带来极大负担。IS现行治疗策略以溶栓疗法及血管内介入治疗为主,但治疗窗狭窄,溶栓率低。目前IS的诊断主要依赖CT及MRI等影像学检查;实验室检查则以快速血糖、血常规、血电解质及凝血功能等检查为主。简便快速、灵敏度高、特异性好且兼具成本效益的血浆诊断标记物有待开发。根据《“健康中国2030”规划纲要》中防治重大疾病的综合防控战略,推动脑卒中的机会性筛查,将早诊早治的适宜技术纳入诊疗常规成为一种亟需。近年来,随着精准医疗及分子诊断理念不断发展,基于细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)的液体活检能更好反映疾病动态变化并具有广泛的应用前景。细胞外囊泡是由细胞自然释放、脂质双分子层界定的囊泡结构,广泛存在于血液、尿液、脑脊液等体液中,内含核酸、蛋白质、脂质及代谢物等功能性“货物”,是介导细胞间通讯的重要载体。IS发生后,脑组织内的细胞相互作用以维持大脑内环境稳态,释放细胞外囊泡并可透过血脑屏障进入血液,通过检测外周血中EVs及内容物的改变,可提示大脑的病理状态。研究表明,EVs内含的多种非编码小RNA在缺血性脑卒中的诊断、治疗及预后评估中具有重要的临床意义并通过多种调控机制参与IS疾病进展。本研究中,我们应用二代测序技术筛选潜在的缺血性脑卒中血浆细胞外囊泡小RNA(EV-sRNA)分子诊断标记物;在血管内皮细胞及神经细胞上进行囊泡摄取、对细胞活力影响等探究以及人群水平对所筛位点的验证;通过对多个指标的联合诊断模型拟合,寻找一组对IS具有高诊断效能的血浆EV-sRNA分子组合,为IS早期诊断提供理论依据。方法(1)细胞外囊泡提取及表征鉴定提取健康对照者及IS患者血浆EVs并通过透射电子显微镜、纳米颗粒跟踪分析和Western Blot分别从形态学特征、粒径大小和浓度以及检测标志蛋白三个层面证实提取得到EVs。(2)细胞外囊泡小RNA文库构建、测序及生物信息学分析收集三例IS患者及三例健康对照者的血浆,提取EV-RNA并进行小RNA文库构建。使用Fragment Analyzer、Qubit 4荧光计及qPCR法进行文库质控。采用Illumina Nova Seq 6000平台测序。下机数据通过Fast QC进行质控,去除接头及过滤低质量读段后,进行参考序列比对。DESeq2进行归一化分析,pheatmap包绘制热图,ggplot2包绘制火山图。(3)细胞外囊泡细胞水平探究及EV-sRNA差异表达验证构建HUVEC及SH-SY5Y细胞氧糖剥夺/复氧(oxygen glucose deprivation/re-oxygenation,OGD/R)模型,使用荧光染料PKH67标记HUVEC细胞来源的EVs,探究HUVEC-EVs与SH-SY5Y细胞摄取关系,并进一步阐明缺氧预处理HUVEC-EVs对SH-SY5Y细胞的影响。随后对HUVEC及SHSY5Y细胞在正常及OGD/R条件下进行EV-sRNA表达水平的验证。(4)筛选位点的人群水平验证及IS血浆EV-sRNA分子诊断标记物组合筛选收集IS患者(n=32)及健康对照(n=32)血浆样品,检测血浆EV-sRNA在两组间表达水平的差异,利用ROC分析进行单个血浆EV-sRNA诊断效能评估。构建多个血浆EV-sRNA联合诊断模型,通过ROC分析评估其诊断效能,寻找一组对IS有高诊断效能的血浆EV-sRNA诊断标记物。预测差异表达EVmiRNA靶基因并进行GO富集分析及miRNA-m RNA调控网络绘制。结果(1)血浆EVs表征鉴定结果显示,透射电镜下可观察到典型的EVs呈杯状结构,纳米颗粒跟踪分析显示提取得到EVs悬液粒径在100 nm左右,Western Blot显示EVs标记蛋白CD9、CD63、CD81及Alix条带清晰可见,阴性对照蛋白TOMM20、Histone H3条带未见,Albumin条带微弱检出。(2)小RNA文库片段大小140-170bp,Qubit 4及qPCR文库定量浓度均满足测序仪上机要求。测序数据Fast QC质控显示测序数据质量良好。根据|Fold Change|≥1.5以及校正后p值<0.05,我们初步筛选一批血浆EV-sRNA作为后续验证及探究的位点。(3)HUVEC及SH-SY5Y细胞OGD/R模型构建成功。囊泡摄取实验表明,OGD处理SH-SY5Y可增加对缺氧预处理HU

关键词：缺血性脑卒中细胞外囊泡非编码小分子RNA 诊断标记物二代测序

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冰基复合材料单轴压缩性能实验与数值分析

冰基复合材料单轴压缩性能实验与数值分析

作者：杨尚栋哈尔滨工程大学

学位级别：硕士

近年来随着世界各国对极地地区勘探的加深,极地地区的丰富资源使得各个国家间展开了激烈竞争,各个国家对极地机场的需求也与日俱增。极地区域传统飞机跑道的修建,严重受限于地基特性、材料性能、材料运输、建设周期和建设成本等,因此开... 详细信息

近年来随着世界各国对极地地区勘探的加深,极地地区的丰富资源使得各个国家间展开了激烈竞争,各个国家对极地机场的需求也与日俱增。极地区域传统飞机跑道的修建,严重受限于地基特性、材料性能、材料运输、建设周期和建设成本等,因此开发一种新型极地机场跑道的建设方法尤为重要。本文所涉及的一种极地新型冰基纤维增强跑道为压实雪层跑道的应用场景,主要针对该机场跑道的材料纤维增强冰基复合材料的最大抗压强度展开,通过试验和有限元的方法去研究冰基复合材料的抗压强度与材料相关参数之间的关系,以期提高冰基复合材料的抗压强度,为冰基纤维增强跑道的最大承载提供参考。具体研究内容如下:以短纤维增强冰基复合材料的抗压强度为研究对象,选取了不同纤维体积分数、不同温度、不同长径比以及不同纤维增强下的四种工况条件,制备了相应试件,通过力学试验测试了不同试验条件下的冰基复合材料抗压强度,得到了不同纤维体积分数、不同温度、不同长径比以及不同纤维增强与冰基复合材料抗压强度之间的定性关系,结果表明纤维体积分数的增加,温度的降低以及纤维长径比的提升都会在一定程度上提升冰基复合材料抗压强度,本文所用的短纤维中,碳纤维增强下的冰基复合材料表现出更高的抗压强度,玄武岩纤维与玻璃纤维增强下的冰基复合材料则表现出相近的抗压性能。通过试验结果拟合给出了纤维体积分数、温度与冰基复合材料抗压强度的定量数学关系式。为研究纤维分布对冰基复合材料抗压性能的影响,使用随机序列吸附法建立了短纤维增强冰基复合材料的RVE模型,通过将有限元仿真结果与试验结果相比较验证了所选模型结构与材料参数的合理性,通过改变纤维在空间中的两个偏向角来改变纤维在RVE模型中的分布情况,对不同分布情况进行了有限元仿真,结果表明纤维在结构内部起主要的承载作用,纤维的两个偏向角都会影响冰基复合材料的抗压强度,其中纤维轴向与加载方向的夹角,是影响随机分布纤维结构整体抗压性能的关键因素。

关键词：冰基复合材料单轴压缩试验纤维含量温度破坏模式

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电子招投标在交通建设领域的应用

中国科技期刊数据库工业A 2022年第1期 292-295页

作者：杨松涛杨尚栋浙江省工程咨询有限公司浙江杭州310012

电子招投标系统的出现为建筑行业的发展提供了有力支持,能够转变过去纸质文字记录、人工筛选等环节的特性,增加了自动化的特征,使得其以电文和数据的模式发挥出应用的效用,由此提升了监督和交易的安全程度以及可信度。但我国开展构建电... 详细信息

电子招投标系统的出现为建筑行业的发展提供了有力支持,能够转变过去纸质文字记录、人工筛选等环节的特性,增加了自动化的特征,使得其以电文和数据的模式发挥出应用的效用,由此提升了监督和交易的安全程度以及可信度。但我国开展构建电子招投标系统的时间较短,仍旧有可提升的空间,需要立足于目前的具体应用看到其发展的趋势和可完善的空间。

关键词：电子招投标交通建设应用

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细胞外囊泡在心血管疾病中的研究新进展

中华检验医学杂志 2020年第11期43卷 1139-1144页

作者：杨尚栋贾竟乔素冬贺颖郑红郑州大学基础医学院医学遗传与细胞生物学系郑州450001 联勤保障部队第九八八医院检验输血科郑州450042

细胞外囊泡(EVs)在心血管疾病的发生发展中起重要的作用。EVs存在于各种体液中,其多种内容物(核酸、蛋白质等)参与心血管疾病的各个过程,因此对疾病标志物的筛选具有重要的诊断价值。除微小RNA以外,非编码RNA如长链非编码RNA,环状RNA也... 详细信息

细胞外囊泡(EVs)在心血管疾病的发生发展中起重要的作用。EVs存在于各种体液中,其多种内容物(核酸、蛋白质等)参与心血管疾病的各个过程,因此对疾病标志物的筛选具有重要的诊断价值。除微小RNA以外,非编码RNA如长链非编码RNA,环状RNA也作为心血管疾病新的标志物而被发现。此外,随着研究技术的不断进步,微流控芯片、数字聚合酶链反应也全面应用到心血管疾病相关EVs的研究中。本文综述了EVs的生物学特性及其在心血管疾病的发病机制及诊断所发挥的作用,以期为心血管疾病诊治提供新思路。

关键词：细胞外囊泡心血管疾病生物学标记诊断

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探究公路工程招投标影响因素和优化策略

中文科技期刊数据库（引文版）工程技术 2021年第11期 308-310页

作者：杨尚栋杨松涛浙江省工程咨询有限公司浙江杭州310012

公路工程的建设是一项长期的工作,其涉及范围较广,施工环节也较多,所以施工难度非常高。为了能够提升施工的质量,在招投标工作进行时就需要选择合理的企业,选择经验丰富、相关资质水平较高的企业,从而降低在施工中出现问题的概率,而这... 详细信息

公路工程的建设是一项长期的工作,其涉及范围较广,施工环节也较多,所以施工难度非常高。为了能够提升施工的质量,在招投标工作进行时就需要选择合理的企业,选择经验丰富、相关资质水平较高的企业,从而降低在施工中出现问题的概率,而这就突出了招投标工作的重要性。本文就公路工程招标投标工作中存在的问题进行研究分析。

关键词：公路工程招投标优化

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强夯置换法在素填土软弱地基施工中的应用

江西建材 2024年第2期 280-282页

作者：杨尚武江金发刘伟元钟枫紫金矿业集团股份有限公司紫金山金铜矿福建上杭364200

文中以福建省龙岩市某矿山浮选尾矿脱水工程3栋单层丙类厂房为例,对强夯置换法在素填土软弱地基施工中的应用进行分析。结果表明,按照试夯后的强夯方案参数对施工场地进行三遍点夯和满夯,经处理后的地基均满足承载力fak≥250 kPa且压缩... 详细信息

文中以福建省龙岩市某矿山浮选尾矿脱水工程3栋单层丙类厂房为例,对强夯置换法在素填土软弱地基施工中的应用进行分析。结果表明,按照试夯后的强夯方案参数对施工场地进行三遍点夯和满夯,经处理后的地基均满足承载力fak≥250 kPa且压缩模量Es≥25 MPa的要求。

关键词：强夯置换法地基处理素填土压缩模量

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大型相控阵天线局部热试验验证技术

航天器工程 2023年第6期32卷 79-83页

作者：腊栋陈辉陈彬彬杨尚宁包泽彬晁京伟上海卫星工程研究所上海201109

针对大型相控阵天线试验验证需求,提出一种局部热试验验证方法,选取代表大型相控阵天线阵热分布特征的局部构件开展模块级热试验,针对主导误差源开展局部热试验获取其影响,将局部热试验与仿真分析相结合,实现大型相控阵天线热试验验证... 详细信息

针对大型相控阵天线试验验证需求,提出一种局部热试验验证方法,选取代表大型相控阵天线阵热分布特征的局部构件开展模块级热试验,针对主导误差源开展局部热试验获取其影响,将局部热试验与仿真分析相结合,实现大型相控阵天线热试验验证。结果表明:基于局部试验的热分析结果与整星热试验结果具有较好的一致性,可为大型相控阵天线的热试验验证提供技术支撑。

关键词：有源相控阵大型天线阵局部热试验

临床生化检验质量控制虚拟仿真系统在教学中的作用

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检验医学与临床 2022年第7期19卷 992-995页

作者：雷燕杨尚瑜何仁栋邢艳郭晓兰郭斌川北医学院医学检验系四川南充637000 川北医学院附属医院检验科四川南充637000

目的探讨临床生化检验质量控制虚拟仿真系统的教学效果。方法选择该校2018级医学检验技术专业学生120人为研究对象,按照随机数字表法分为对照组和研究组,每组60人。对照组采用传统教学模式,研究组采用临床生化检验质量控制虚拟仿真系统... 详细信息

目的探讨临床生化检验质量控制虚拟仿真系统的教学效果。方法选择该校2018级医学检验技术专业学生120人为研究对象,按照随机数字表法分为对照组和研究组,每组60人。对照组采用传统教学模式,研究组采用临床生化检验质量控制虚拟仿真系统教学,通过对学生进行统一的考试和满意度问卷调查,对两组进行教学效果评价。结果研究组学生单选题、多选题、问答题得分及总成绩均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组学生在学习兴趣、内容理解,分析解决问题的能力、独立思考能力、教学5个方面的满意度均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论临床生化检验质量控制虚拟仿真系统可以有效地弥补传统教学的不足,让学生掌握基本理论知识和技能的同时,为培养学生质量控制知识的综合应用、实践能力的训练提供了重要途径。

关键词：虚拟仿真临床生化检验质量控制教学研究

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材料物理学

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