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菠菜离体叶绿体培养研究

安徽农业科学 2007年第15期35卷 4419-4419,4464页

作者：程霞英杨宗岐廊坊师范学院生命科学院河北廊坊065000 浙江理工大学生物工程研究所浙江杭州310018

研究了不同pH值、温度、光照、悬浮介质对菠菜离体叶绿体存活时间的影响,结果表明,在pH为7.6、温度为5℃(低温)的黑暗条件下用悬浮介质Ⅰ培养的菠菜离体叶绿体活性保持时间较长。

关键词：离体叶绿体培养菠菜

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番茄下胚轴和子叶离体诱导成株的激素调控

安徽农业科学 2010年第7期38卷 3341-3342页

作者：曾培洋杨宗岐浙江理工大学生命科学学院生物工程研究所浙江杭州300018

以番茄幼苗的下胚轴和子叶为外植体,研究不同激素培养基对其不定芽诱导、增殖及生根的影响。结果表明,诱导不定芽的最适培养基为MS+6-BA(2.0 mg/L)+IAA(0.3 mg/L),该培养基中下胚轴的不定芽诱导率为73.3%,子叶的不定芽诱导率为53.2%;低... 详细信息

以番茄幼苗的下胚轴和子叶为外植体,研究不同激素培养基对其不定芽诱导、增殖及生根的影响。结果表明,诱导不定芽的最适培养基为MS+6-BA(2.0 mg/L)+IAA(0.3 mg/L),该培养基中下胚轴的不定芽诱导率为73.3%,子叶的不定芽诱导率为53.2%;低浓度IBA和IAA配合使用的生根效果好于单独使用IBA。

关键词：番茄下胚轴子叶激素

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三叶半夏组培快繁与优良单株的选育

中国生物工程杂志 2008年第6期28卷 48-54页

作者：金银兵杨宗岐陈集双浙江理工大学生物工程研究所杭州310018

利用组织培养技术实现了3种不同叶型三叶半夏的快速繁殖,并通过光合生理特征的比较对其优良单株进行了选育。结果表明:半夏能在分化培养基MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.2mg/L+蔗糖3%+琼脂5.0g/L和离体块茎诱导培养基(1/2MS+IBA 0.03mg/L+NAA 0... 详细信息

利用组织培养技术实现了3种不同叶型三叶半夏的快速繁殖,并通过光合生理特征的比较对其优良单株进行了选育。结果表明:半夏能在分化培养基MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.2mg/L+蔗糖3%+琼脂5.0g/L和离体块茎诱导培养基(1/2MS+IBA 0.03mg/L+NAA 0.01mg/L+蔗糖5%+琼脂5.0g/L+AC 0.3g/L)上快速扩繁,继代繁殖系数为1∶6.23,培养3个月后块茎的平均直径达0.88cm。对其光合生理特征的研究结果表明:三叶半夏是一种典型的阴生植物,其光饱和点为700μmol·photons/s·m2;3种叶型的三叶半夏都存在着明显的光抑制现象,其中柳叶型最明显。在所选育的11个单株后代中,以桃叶2号(T2)的净光合速率和产量最高,柳叶2号(L2)对强光的耐受力最强。经过6个月的扩繁,获得优良单株T2和L2离体块茎各1万颗。在温州乐清实验基地中经过1年的大田种植后获得优良单株半夏块茎各100kg。

关键词：三叶半夏优良单株扩繁光合生理产量比较

外源5–氨基乙酰丙酸对紫花苜蓿生理特性的影响

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草业科学 2019年第11期36卷 2847-2853页

作者：李丹丹梁宗锁杨宗岐韩蕊莲西北农林科技大学草业与草原学院

以紫花苜蓿(Medicago sativa)"农牧806"为试验材料,通过叶面喷施不同浓度(0、5、10、15、20、25 mg·L^–1)的5–氨基乙酰丙酸(ALA),探讨外源5–氨基乙酰丙酸对紫花苜蓿抗氧化酶活性和光合色素含量的影响。结果表明,叶面喷施10 mg·L^–... 详细信息

以紫花苜蓿(Medicago sativa)"农牧806"为试验材料,通过叶面喷施不同浓度(0、5、10、15、20、25 mg·L^–1)的5–氨基乙酰丙酸(ALA),探讨外源5–氨基乙酰丙酸对紫花苜蓿抗氧化酶活性和光合色素含量的影响。结果表明,叶面喷施10 mg·L^–1 ALA可显著(P<0.05)提高紫花苜蓿幼苗的光合色素含量,与不喷施对照处理相比,紫花苜蓿"农牧806"幼苗叶片中叶绿素a(Chl a)、叶绿素b(Chl b)、类胡萝卜素(Car)以及叶绿素总量(Chl a+b)分别提高了12.29%、36.21%、18.69%和11.46%。喷施10 mg·L^–1 ALA后,紫花苜蓿幼苗叶片中抗氧化酶(SOD、POD、CAT、APX)活性、可溶性蛋白含量显著升高而丙二醛(MDA)和过氧化系统(–OH、H2O2)的含量则显著降低。说明适宜浓度(5~10 mg·L^–1)的ALA可提高紫花苜蓿叶片中光合色素的积累及抗氧化酶活性。

关键词：外源5–氨基乙酰丙酸紫花苜蓿生理特性

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高等植物叶绿体表达重组蛋白研究进展

生物工程学报 2018年第5期34卷 631-643页

作者：林优红程霞英杨东风梁宗锁杨宗岐浙江理工大学生命科学学院浙江杭州310018

近年来,基因工程技术发展迅速,许多重组蛋白得以表达。其中利用植物生物反应器表达特异药物蛋白为人类一些重要疾病的预防和治疗提供了新途径。植物叶绿体遗传转化和表达系统成为目前植物生物反应器的研究热点。因结构和遗传上的特殊性... 详细信息

近年来,基因工程技术发展迅速,许多重组蛋白得以表达。其中利用植物生物反应器表达特异药物蛋白为人类一些重要疾病的预防和治疗提供了新途径。植物叶绿体遗传转化和表达系统成为目前植物生物反应器的研究热点。因结构和遗传上的特殊性,高等植物叶绿体在重组蛋白表达方面具有独特优势,外源基因表达量高、定点整合,而且叶绿体母系遗传特性保证了生物安全性。很多重要药用蛋白质在植物叶绿体中表达成功。烟草作为高等植物叶绿体转化模式植物,在疫苗抗原、抗体等药物蛋白和其他重要重组蛋白表达方面取得显著进展。高等植物叶绿体遗传转化也为叶绿体基因的表达和调控机制的研究提供新的技术和方法。文中从叶绿体遗传转化原理、载体构建、重组蛋白和重要药物蛋白在叶绿体中的表达以及重组蛋白表达对植物代谢和性状影响等多个角度,对高等植物叶绿体遗传转化体系研究的新进展进行了综述,以期为叶绿体表达平台的开发和重要药用蛋白质的表达提供新思路。

关键词：高等植物叶绿体表达生物反应器重组蛋白

来源于Pyrococcus furiosus的耐高温α-淀粉酶基因在衣藻叶绿体中的表达

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生物工程学报 2006年第4期22卷 545-549页

作者：杨宗岐李轶女张志芳王勇沈桂芳南开大学生命科学学院中国农业科学院生物技术研究所北京100081 中国农业科学院生物技术研究所

来源于Pyrococcusfuriosus的耐高温α-淀粉酶是一种重要的酒精工业用酶,在植物中表达耐高温α-淀粉酶可以大大降低用植物秸秆生产酒精的成本。选择衣藻叶绿体基因组同源片段clpP-trnL-petB-chlL-rpl23-rpl2和壮观霉素抗性基因,构建了来... 详细信息

来源于Pyrococcusfuriosus的耐高温α-淀粉酶是一种重要的酒精工业用酶,在植物中表达耐高温α-淀粉酶可以大大降低用植物秸秆生产酒精的成本。选择衣藻叶绿体基因组同源片段clpP-trnL-petB-chlL-rpl23-rpl2和壮观霉素抗性基因,构建了来源于Pyrococcusfuriosus的耐高温α-淀粉酶基因的衣藻叶绿体表达载体p64A。通过基因枪将其导入衣藻叶绿体中,经壮观霉素抗性(100mg/L)筛选,获得了9个抗性衣藻转化子。转化子经过抗性继代筛选后,经PCR、Southernblot检测分析及暗培养,证实耐高温α-淀粉酶基因已整合到衣藻叶绿体基因组中并得到表达。酶活性检测表明,转基因衣藻表达产物具有耐高温α-淀粉酶活性,每克鲜重衣藻最高达77.5u。实验结果证明在植物叶绿体中表达工业酶制剂是可行的。

关键词： Pyrococcus furiosus 耐高温α-淀粉酶叶绿体表达衣藻

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叶绿体遗传转化研究中的选择标记

中国生物工程杂志 2007年第4期27卷 132-138页

作者：李轶女杨宗岐张志芳沈桂芳中国农业科学院生物技术研究所北京100081 河北省廊坊师范学院生命科学学院廊坊065000

与核遗传转化相同,叶绿体遗传转化研究需要有合适的选择标记作为辅助手段。多种选择标记已经在叶绿体转化中得到应用,但由于叶绿体自身的结构与遗传特点,选择标记的选择与使用与核遗传转化明显不同,所以正确的选择合适的选择标记对于成... 详细信息

与核遗传转化相同,叶绿体遗传转化研究需要有合适的选择标记作为辅助手段。多种选择标记已经在叶绿体转化中得到应用,但由于叶绿体自身的结构与遗传特点,选择标记的选择与使用与核遗传转化明显不同,所以正确的选择合适的选择标记对于成功的叶绿体遗传转化是非常重要的。目前叶绿体转化中常用的选择标记大多为抗生素选择标记,对人类存在潜在的威胁,如何摆脱对抗生素选择标记的依赖是当前研究的热点。综述了国内外叶绿体转化研究中主要使用的选择标记,并着重介绍了非抗生素选择标记——甜菜碱醛脱氢酶和选择标记的删除体系。

关键词：叶绿体遗传转化选择标记甜菜碱醛脱氢酶位点特异性重组

外源-5氨基乙酰丙酸对干旱胁迫下紫花苜蓿生理特性及次生代谢物含量的影响

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西北植物学报 2019年第10期39卷 1827-1834页

作者：李丹丹梁宗锁杨宗岐徐学选韩蕊莲西北农林科技大学草业与草原学院陕西杨陵712100 浙江理工大学生命科学与医药学院杭州310018 浙江理工大学建筑工程学院杭州310018

为验证喷施不同浓度5-氨基乙酰丙酸(ALA)对紫花苜蓿的响应,该研究以紫花苜蓿品种‘农牧806’为实验材料,用不同浓度(0、5、10、15、20、25 mg·L^-1)的ALA喷施处理15%聚乙二醇(PEG-6000)模拟干旱胁迫下的紫花苜蓿幼苗,并测定其相关的生... 详细信息

为验证喷施不同浓度5-氨基乙酰丙酸(ALA)对紫花苜蓿的响应,该研究以紫花苜蓿品种‘农牧806’为实验材料,用不同浓度(0、5、10、15、20、25 mg·L^-1)的ALA喷施处理15%聚乙二醇(PEG-6000)模拟干旱胁迫下的紫花苜蓿幼苗,并测定其相关的生理生化指标以及次生代谢物质积累量。结果表明:(1)与对照相比,15%PEG干旱胁迫使得紫花苜蓿叶片中光合色素含量降低,渗透调节物质含量以及抗氧化酶活性增高。(2)与15%PEG处理相比,ALA+15%PEG复配处理下紫花苜蓿幼苗叶片叶绿素a、b和类胡萝卜素以及叶绿素总量分别增加,抗氧化酶(CAT, POD, SOD)活性升高,可溶性蛋白和脯氨酸以及黄酮和皂苷含量上升,丙二醛、H2O2和·OH的含量降低,各浓度ALA对15%PEG不同时长胁迫的恢复效果不同。研究发现,叶面喷施适量浓度ALA能够有效提高干旱胁迫下紫花苜蓿叶片抗氧化酶活性以及渗透调节物质、次生代谢物(黄酮、皂苷)含量和光合色素含量,从而增强紫花苜蓿对干旱胁迫的耐受性,并以10 mg·L^-1ALA的缓解效果较显著。

关键词：外源5-氨基乙酰丙酸(ALA) 紫花苜蓿干旱胁迫抗氧化酶渗透调节物质次生代谢物质

猪瘟病毒E2基因在百脉根叶绿体基因组中定点整合载体的构建

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中国农业科学 2007年第11期40卷 2648-2654页

作者：杨宗岐李轶女张志芳王勇沈桂芳南开大学生命科学学院中国农业科学院生物技术研究所

【目的】构建猪瘟病毒主要抗原E2基因在百脉根叶绿体基因组中定点转化载体,为百脉根叶绿体的转化及用叶绿体生产动物可直接食用疫苗奠定基础。【方法】通过用BLAST、DNAMAN等分子生物学分析软件对百脉根叶绿体基因组序列进行分析选定同... 详细信息

【目的】构建猪瘟病毒主要抗原E2基因在百脉根叶绿体基因组中定点转化载体,为百脉根叶绿体的转化及用叶绿体生产动物可直接食用疫苗奠定基础。【方法】通过用BLAST、DNAMAN等分子生物学分析软件对百脉根叶绿体基因组序列进行分析选定同源重组片段,采用PCR、分子克隆技术进行载体构建和鉴定。【结果】在百脉根叶绿体基因组中选择合适的外源基因整合位点,设计引物用PCR扩增叶绿体同源片段,将同源片段克隆后,构建百脉根特异的叶绿体转化载体;构建的百脉根叶绿体定点转化载体pAKE2以扩增的1.35kbpsbA和1.5kbtrnK两段相邻叶绿体DNA为定点整合外源基因的同源重组片段,包含以叶绿体基因特异强启动子Prrn和终止子TpsbA为调控序列的E2基因表达盒和aadA壮观霉素抗性基因表达盒。【结论】经PCR和酶切验证,所构建的转化载体符合预期设计。叶绿体转化及后续工作目前正在进行之中。

关键词：猪瘟病毒E2基因叶绿体转化同源重组定点整合百脉根