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经大鼠脾动脉行肝细胞移植建立动物模型

复旦学报（医学版） 2012年第6期39卷 653-657,667页

作者：冯渊李德卫杨均均四川省南充市中心医院肝胆外科南充637000 重庆医科大学附属第一医院肝胆外科重庆400016

目的建立经SD大鼠颈动脉途径脾动脉插管行肝细胞移植的动物模型,并探讨其临床意义。方法采用D-氨基半乳糖(D-galactosamine,D-gal)诱导大鼠急性肝损伤(acute liver injury,ALI),24h后40只SD大鼠分为两组:A组(n=20)经左侧颈动脉插管,进... 详细信息

目的建立经SD大鼠颈动脉途径脾动脉插管行肝细胞移植的动物模型,并探讨其临床意义。方法采用D-氨基半乳糖(D-galactosamine,D-gal)诱导大鼠急性肝损伤(acute liver injury,ALI),24h后40只SD大鼠分为两组:A组(n=20)经左侧颈动脉插管,进入腹腔干,通过脾动脉移植1×107个肝细胞;B组(n=20)通过同样的方法经脾动脉注射0.5mL Hank′s液作为对照,观察不同时间点(1、3、6、10、15天)大鼠肝功能的变化情况以及脾内白蛋白合成作用,HE染色观察脾内肝细胞分布情况。结果经颈动脉途径脾动脉插管成功率约90%,荧光示踪剂CFDA SE标记的肝细胞脾内移植1天后,受体大鼠脾脏可以看到散在绿色荧光分布。A组移植10天后,HE染色可以看到肝细胞在脾脏散在分布;A组移植15天后,共聚焦白蛋白免疫荧光结果表明,脾内有白蛋白绿色荧光信号。结论经大鼠颈动脉途径脾动脉插管移植的肝细胞能在脾内存活,证实该途径是肝细胞有效移植途径之一。

关键词：急性肝损伤(ALI) 颈动脉脾动脉肝细胞移植大鼠

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肝细胞移植治疗肝硬化的疗效

中国生物制品学杂志 2012年第12期25卷 1653-1657页

作者：杨均均黄文祥史芳静冯渊南充市中心医院感染科四川南充637000 重庆医科大学附属第一医院感染科重庆市传染病寄生虫病重点实验室重庆400016

目的建立SD大鼠药物性肝硬化模型,探讨原代肝细胞移植治疗大鼠肝硬化的疗效。方法经四氯化碳(Carbon tetrachloride,CCL4)诱导大鼠肝硬化模型,将40只模型大鼠分为2组,每组20只,Ⅰ组经脾尾注射约2×107个肝细胞,Ⅱ组经脾尾注射0.4 ml Han... 详细信息

目的建立SD大鼠药物性肝硬化模型,探讨原代肝细胞移植治疗大鼠肝硬化的疗效。方法经四氯化碳(Carbon tetrachloride,CCL4)诱导大鼠肝硬化模型,将40只模型大鼠分为2组,每组20只,Ⅰ组经脾尾注射约2×107个肝细胞,Ⅱ组经脾尾注射0.4 ml Hank’s液。观察每组大鼠的存活情况及肝功能变化;HE染色观察脾脏病理变化;免疫荧光观察植入的肝细胞在大鼠脾内合成白蛋白(Serum albumin level,ALB)的功能。结果经CCL4诱导10周后,大鼠肝脏经HE染色发现假小叶形成,表明成功建立了肝硬化模型;移植术后8周,Ⅰ组大鼠存活率(75%)显著高于Ⅱ组(35%),差异有统计学意义(P<0.01);Ⅰ组大鼠的血清ALB水平较Ⅱ组明显升高(P<0.05),血氨(Serum ammonia level,AMM)水平较Ⅱ组明显降低(P<0.05);Ⅰ组大鼠移植术后1、8周,大量肝细胞在脾脏红髓中定植下来;Ⅰ组大鼠移植术后5周,植入的肝细胞在大鼠脾内具有合成白蛋白的功能。结论 CCL4能稳定诱导肝硬化动物模型;同种异体肝细胞移植能提高肝硬化大鼠的生存率,并改善肝性脑病和低蛋白血症。

关键词：肝细胞移植肝硬化四氯化碳

脾内两种途径肝细胞移植治疗急性肝衰竭大鼠的效果评价

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中国组织工程研究 2019年第9期23卷 1422-1427页

作者：冯渊李德卫杨均均川北医学院第二临床学院南充市中心医院四川省南充市637000 重庆医科大学附属第一医院肝胆外科重庆市400016

背景:肝细胞移植在治疗代谢性疾病和急性肝衰竭的动物实验中取得了一定成功,然而肝细胞移植的临床疗效却并没有动物实验理想。造成实验模型与临床疗效的差异可能与肝细胞移植途径有一定关系。目的:探讨经颈动脉途径脾动脉插管注射与脾... 详细信息

背景:肝细胞移植在治疗代谢性疾病和急性肝衰竭的动物实验中取得了一定成功,然而肝细胞移植的临床疗效却并没有动物实验理想。造成实验模型与临床疗效的差异可能与肝细胞移植途径有一定关系。目的:探讨经颈动脉途径脾动脉插管注射与脾脏直接注射两种方法行肝细胞移植治疗急性肝衰竭大鼠的疗效,得出更加优化的移植方法。方法:在Seglen改良两步法的基础上稍加改进分离培养肝细胞。采用D-氨基半乳糖诱导大鼠(重庆医科大学实验动物中心提供)急性肝衰竭24h后,65只大鼠经颈动脉途径脾动脉插管,60只插管成功后随机分为3组:脾脏直接注射组(n=20)大鼠经脾脏直接注射约2×10~7个肝细胞、脾动脉注射0.4m LHank’s液;脾动脉注射组(n=20)大鼠经脾脏直接注射0.4 mL Hank’s液、脾动脉注射2×10~7个肝细胞;模型对照组(n=20)经脾脏直接注射0.4 mL Hank’s液、脾动脉注射0.4 mL Hank’s液。移植后14 d内观察各组大鼠的生存率及肝功能变化;移植后7d,荧光显微镜观察经脾动脉移植肝细胞的体内分布情况,苏木精-伊红染色观察移植肝细胞在脾内的分布和增殖情况;移植后14 d,免疫荧光染色观察白蛋白合成情况。结果与结论:(1)大鼠肝细胞分离存活率达80%-90%;(2)3组大鼠生存率的比较差异有显著性意义,脾脏直接注射组14 d存活率显著高于脾动脉注射组,脾动脉注射组14 d存活率高于模型对照组;(3)脾脏直接注射组、脾动脉注射组大鼠肝功能均明显改善,尤其以脾脏直接注射组最为显著;(4)CFDA-SE荧光标记的肝细胞经脾动脉移植7 d后,受体大鼠脾脏和肝脏可以看到散在绿色荧光分布;(5)移植14 d后,脾脏直接注射组、脾动脉注射组脾脏内有肝细胞白蛋白绿色荧光信号;(6)移植7d后,脾脏直接注射组、脾动脉注射组肝细胞在脾脏红髓中簇集在一起并定植下来;(7)结果表明,经大鼠颈动脉途径脾动脉插管移植肝细胞能提高急性肝衰竭大鼠的存活率和改善其肝功能;脾脏直接注射法优于脾动脉途径注射法。

关键词：急性肝衰竭肝细胞移植脾动脉插管脾动脉注射脾内直接注射肝功能衰竭,急性肝细胞脾脾动脉组织工程

肌成纤维细胞在小鼠肝内胆管发育过程中的作用

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中国组织工程研究 2019年第23期23卷 3705-3709页

作者：杨均均李德卫王伟冯渊川北医学院第二临床学院·南充市中心医院感染科四川省南充市637000 重庆医科大学附属第一医院肝胆外科重庆市400016 重庆医科大学

背景:研究表明肌成纤维细胞具有促进肝祖细胞分化为胆管细胞作用,但对于肌成纤维细胞在体内胆管发育中作用仍不清楚。目的:观察小鼠肝内胆管发育的特点,以及肌成纤维细胞在胆管发育过程中的作用。方法:SPF级C57小鼠购自重庆医科大学实... 详细信息

背景:研究表明肌成纤维细胞具有促进肝祖细胞分化为胆管细胞作用,但对于肌成纤维细胞在体内胆管发育中作用仍不清楚。目的:观察小鼠肝内胆管发育的特点,以及肌成纤维细胞在胆管发育过程中的作用。方法:SPF级C57小鼠购自重庆医科大学实验动物中心,实验方案经重庆医科大学动物实验伦理委员会批准,批准号为2017-182。采用14.5d、16.5d孕鼠及刚出生(0d)和出生后10d的小鼠,麻醉后取其胎鼠肝脏(E14.5、E16.5)和出生后小鼠肝脏(P0、P10),采用免疫组织化学技术观察α平滑肌肌动蛋白、Sox9及细胞角蛋白19在E14.5、E16.5小鼠胎肝和P0、P10小鼠肝脏中的表达。结果与结论:①E14.5小鼠胎肝中,α平滑肌肌动蛋白阳性肌成纤维细胞环绕门静脉周围,Sox9阳性胆管细胞紧靠α平滑肌肌动蛋白阳性肌成纤维细胞,并形成单层细胞排列的胆管板;②E16.5小鼠胎肝中,紧靠α平滑肌肌动蛋白阳性肌成纤维细胞的细胞角蛋白19阳性胆管细胞形成双层胆管细胞结构;③P0小鼠肝脏中,细胞角蛋白19阳性胆管细胞发育形成具有管腔的胆管结构,并且α平滑肌肌动蛋白阳性肌成纤维细胞开始包绕胆管;④P10小鼠肝脏中,胆管进一步发育扩张,门静脉周围未形成胆管的胆管细胞开始消失。并且α平滑肌肌动蛋白阳性肌成纤维细胞环绕胆管,胆管旁发育形成肝动脉;⑤结果表明了小鼠肝内胆管发育的特点,发现α平滑肌肌动蛋白阳性肌成纤维细胞与肝内胆管发育的关系密切,且在肝内胆管发育中发挥了重要作用。

关键词：肌成纤维细胞胆管发育肝脏小鼠细胞角蛋白19 国家自然科学基金

耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌流行克隆株生物被膜形成能力分析

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中国感染与化疗杂志 2018年第2期18卷 184-189页

作者：尹珍黄文祥杨均均李佳俊刘成伟重庆医科大学附属第一医院感染科重庆400016

目的分析耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(CRAB)A、B、C 3个流行克隆(多携带bla OXA-23、bla OXA-51基因)同源性,测定其生物被膜形成能力,探讨该特性与碳青霉烯类耐药的相关性,了解3个克隆医院内流行原因。方法选取重庆医科大学附属第一医院CR... 详细信息

目的分析耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(CRAB)A、B、C 3个流行克隆(多携带bla OXA-23、bla OXA-51基因)同源性,测定其生物被膜形成能力,探讨该特性与碳青霉烯类耐药的相关性,了解3个克隆医院内流行原因。方法选取重庆医科大学附属第一医院CRAB A、B、C 3个流行克隆和碳青霉烯类敏感鲍曼不动杆菌(CSAB)临床分离株共87株,多位点序列分型(MLST)分析其同源性,结晶紫染色法定量分析其生物被膜形成能力。结果 A克隆为ST238相似型,B、C克隆均为ST238型;A、B、C流行克隆及CSAB组D值分别为0.325±0.145、0.811±0.295、0.306±0.133、0.913±0.626,该院CRAB流行克隆总体上生物被膜形成能力较CSAB组下降(0.470±0.301对0.913±0.626,P均弱于B型克隆(P均均>0.05)。结论该院CRAB A、B、C流行克隆具有相同的起源,首次报道ST238及其相似型的医院内广泛流行;流行克隆生物被膜形成能力与碳青霉烯类耐药性的获得呈负相关性,提示克隆流行主要与耐药性获得及抗菌药物的压力选择相关;生物被膜形成能力在各克隆间存在差异,需警惕B型克隆的广泛传播。

关键词：鲍曼不动杆菌碳青霉烯类耐药流行克隆多位点序列分型生物被膜

广泛耐药鲍曼不动杆菌ST238克隆株毒力及适应性特征

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中国感染与化疗杂志 2016年第6期16卷 779-784页

作者：何小庆尹珍杨均均李佳俊陈力黄文祥重庆医科大学附属第一医院感染科重庆400016

目的通过检测广泛耐药鲍曼不动杆菌流行克隆ST238的毒カ和环境适应性,探讨该克隆株在当地持续流行的机制。方法比较ST238克隆株与鲍曼不动杆菌ATCC 19606的体外生长曲线及竞争指数(competition index.Cl),试管法测定菌株内明胶酶活性;... 详细信息

目的通过检测广泛耐药鲍曼不动杆菌流行克隆ST238的毒カ和环境适应性,探讨该克隆株在当地持续流行的机制。方法比较ST238克隆株与鲍曼不动杆菌ATCC 19606的体外生长曲线及竞争指数(competition index.Cl),试管法测定菌株内明胶酶活性;微量法进行D-甘露糖抵抗红细胞凝集试验;运动平板法测定蹭行运动能力;结晶紫染色法定量分析生物膜形成能力。小鼠动物模型检测体内致病力。结果ST238克隆株与标准株间体外生长能力差异无统计学意义(P>0.05)。培养24h时ST238克隆株与鲍曼不动杆菌ATCC 19606在体外竞争能力无明显差异(CI=0.29,P>0.05)0明胶酶活性在ST238克隆株与敏感株间分布无差异(P>0.05)。血凝结果与菌株来源之间差异无统计学意义(P>0.05)。敏感株的运动能力及生物膜形成能力均强于ST238克隆株(P均死亡时间差异无统计学意义(P>0.05)。结论ST238克隆株获得广泛耐药性后,其环境适应性无明显下降,同时该克隆株的毒力也无明显改变。这种生物学特性可能是该克隆株在当地长期流行的原因之一。

关键词：广泛耐药鲍曼不动杆菌 ST238克隆株适应性毒力

2006～2010年革兰阴性菌对碳青霉烯类抗生素耐药性分析

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世界科技研究与发展 2012年第4期34卷 668-670页

作者：史芳静黄文祥杨均均重庆医科大学附属第一医院感染科重庆市传染病寄生虫病学重点实验室重庆400016

目的调查分析我院2006～2010年临床分离的革兰阴性菌对碳青霉烯类抗生素的耐药性。方法采用纸片扩散法进行抗菌药物敏感实验,采用WHONET5.4软件及SPSS13.0软件进行数据分析。结果大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率... 详细信息

目的调查分析我院2006～2010年临床分离的革兰阴性菌对碳青霉烯类抗生素的耐药性。方法采用纸片扩散法进行抗菌药物敏感实验,采用WHONET5.4软件及SPSS13.0软件进行数据分析。结果大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率呈上升趋势,但最高不超过4.5%。铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药率2006年和2007年监测显示为21.3%和41%,2008年达到44.8%,在2009年下降为12.4%,但2010年又迅速增加到30.1%。鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药率的逐年上升更为显著,从2006年9.1%上升到2010年的68%,差异具有统计学意义(P<0.01)。嗜麦芽窄食单胞茵对碳青霉烯类抗生素天然耐药,2006年对亚胺培南耐药率为30%,但自2007年起就增加到80.8%,最高达100%。结论肠杆菌科细菌对碳青霉烯类敏感性高,近年耐药率有上升趋势。铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类耐药率高,尤其是鲍曼不动杆菌的分离率逐年增加,耐药形势严峻。临床应合理使用抗生素,减少多重耐药株的产生。

关键词：革兰氏阴性菌碳青霉烯耐药率

耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌流行特征及耐药基因分析

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中国抗生素杂志 2012年第5期37卷 343-347,391页

作者：杨均均黄文祥史芳静刘成伟李崇智重庆医科大学附属第一医院感染科重庆市传染病寄生虫病重点实验室重庆400016

目的调查分析我院2009年医院内获得性鲍曼不动杆菌对各种抗菌药物的耐药性,研究耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌感染的克隆流行情况以及碳青霉烯酶基因型。方法用琼脂稀释法进行药敏试验,按CLSI(2009)标准判断细菌耐药性,并用PFGE法对2009年的10... 详细信息

目的调查分析我院2009年医院内获得性鲍曼不动杆菌对各种抗菌药物的耐药性,研究耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌感染的克隆流行情况以及碳青霉烯酶基因型。方法用琼脂稀释法进行药敏试验,按CLSI(2009)标准判断细菌耐药性,并用PFGE法对2009年的102株对碳青霉烯耐药菌进行同源性分析,多重PCR扩增碳青霉烯酶基因bla_(OXA-51like),bla_(OXA-24like),bla_(OXA-58like)。结果药敏试验结果显示鲍曼不动杆菌对米诺环素、替加环素、多粘菌素B耐药率较低,对碳青霉烯耐药高。PFGE结果显示我院存在A/B/C克隆株流行,主要分布于呼吸科以及ICU等病房,时间上呈散发流行。102株耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌产OXA-23型碳青霉烯酶率为71.6%,产OXA-51型碳青霉烯酶率为84.3%,另外仅2株检出OXA-24型碳青霉烯酶,3株检出()XA-58型碳青霉烯酶。结论我院在呼吸科以及ICU等病房存在A/B/C克隆株流行,碳青霉烯酶基因型以OXA-23、OXA-51型为主,由于对多种抗菌药物尤其是碳青霉烯类抗生素耐药性的增强和克隆株的流行,应积极采取有效措施预防和控制鲍曼不动杆菌感染。

关键词：鲍曼不动杆菌耐药性克隆流行碳青霉烯酶医院感染

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泛耐药鲍曼不动杆菌医院感染流行病学研究

第三军医大学学报 2011年第21期33卷 2244-2248页

作者：王振黄文祥辛小娟杨均均史方静刘成伟李崇智重庆医科大学附属第一医院感染科重庆市传染病寄生虫病重点实验室重庆400016

目的调查分析我院院内获得性鲍曼不动杆菌感染的流行特征及耐药性变迁,分析泛耐药鲍曼不动杆菌感染爆发流行的原因和规律。方法对我院2006-2009年4年间591例医院内获得性鲍曼不动杆菌感染的分布及耐药谱变迁进行系统性研究。用脉冲物凝... 详细信息

目的调查分析我院院内获得性鲍曼不动杆菌感染的流行特征及耐药性变迁,分析泛耐药鲍曼不动杆菌感染爆发流行的原因和规律。方法对我院2006-2009年4年间591例医院内获得性鲍曼不动杆菌感染的分布及耐药谱变迁进行系统性研究。用脉冲物凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)法对2009年包括对碳青霉烯耐药的102株泛耐药菌进行同源性分析,并用琼脂稀释法进行药敏试验,按CLSI(2009)标准判断细菌耐药性。结果我院鲍曼不动杆菌医院感染主要集中于呼吸科、ICU、神经内科、胸心外科、神经外科。药敏试验结果显示鲍曼不动杆菌对常用抗生素耐药率逐年增加,其中对米诺环素、多西环素、多粘菌素耐药率较低,分别为43.7%、32.9%、2.5%。对碳青霉烯耐药上升较快,同时伴随该类药物用量明显上升。PFGE结果显示在ICU和呼吸科等病房存在A和B克隆株流行。结论碳青霉烯类不合理应用和克隆株流行,导致院内泛耐药鲍曼不动杆菌感染率逐年增加;其应对措施应加强医院感染控制,合理使用抗生素。

关键词：鲍曼不动杆菌抗生素耐药性医院感染