检索结果-南通市图书馆

TGF-βRⅡ/Fc融合蛋白的纯化及其生物学活性鉴定

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

细胞与分子免疫学杂志 2003年第4期19卷 400-402,405页

作者：李圣青李焕章杨乔欣倪殿涛第四军医大学西京医院呼吸内科陕西西安710032 第四军医大学基础部微生物学教研室陕西西安710032

目的 :用重组Bac TRⅡ杆状病毒表达系统大量表达融合蛋白TGF βRⅡ /Fc,并对其进行纯化及鉴定 ;验证该融合蛋白是否能够阻断细胞因子TGF β1的生物学作用。方法 :采用病毒空斑形成试验测定病毒滴度 ,并对其进行扩增。采用Pro teinG柱... 详细信息

目的 :用重组Bac TRⅡ杆状病毒表达系统大量表达融合蛋白TGF βRⅡ /Fc,并对其进行纯化及鉴定 ;验证该融合蛋白是否能够阻断细胞因子TGF β1的生物学作用。方法 :采用病毒空斑形成试验测定病毒滴度 ,并对其进行扩增。采用Pro teinG柱和快速蛋白质液相层析法 (FPLC)纯化目的蛋白。采用SDS PAGE分析纯化后的目的蛋白 ,并将蛋白电泳条带进行灰度扫描 ,计算目的蛋白的含量。采用Westernblot和夹心ELISA法 ,鉴定目的蛋白是否表达。采用MTT比色法 ,验证融合蛋白TGF βRⅡ /Fc能否阻断TGF β1对小鼠肺成纤维细胞 (L92 9)生长的作用。采用Westernblot技术 ,验证融合蛋白能否阻断TGF β1对L92 9细胞纤维黏连蛋白 (FN)生成的促进作用。结果 :本实验室构建并保存的重组Bac TRⅡ杆状病毒原液内病毒的滴度为 2× 10 12 pfu/L。蛋白电泳后灰度扫描结果表明 ,目的蛋白约占总蛋白的 10 %。夹心ELISA法和Westernblot分析证明目的蛋白已表达。融合蛋白TGF βRⅡ /Fc能够阻断TGF β1对L92 9细胞生长的抑制作用 ,以及对该细胞FN生成的促进作用。结论 :本室构建的重组Bac TRⅡ杆状病毒表达系统 ,能够表达融合蛋白TGF βRⅡ /Fc ,表达水平为 9mg/L。纯化得到的目的蛋白具有一定的生物学活性 ,可阻断TGF β1对L92 9细胞生长的?

关键词：转化生长因子—β 肺间质纤维化融合蛋白

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

单纯疱疹病毒糖蛋白模拟位的研究

免疫学杂志 2002年第2期18卷 146-148,152页

作者：杨乔欣马文煜余颖第四军医大学微生物学教研室陕西西安710032

目的为了充分认识单纯疱疹病毒(HSV)糖蛋白的抗原表位，寻找HSV多组分疫苗和新型基因工程疫苗更有效的小片段短肽作为该病毒疫苗的备选免疫原。方法利用有动物保护活性的抗HSV糖蛋白C（gC）单克隆抗体（McAb）1A12淘筛噬菌体随机12肽库... 详细信息

目的为了充分认识单纯疱疹病毒(HSV)糖蛋白的抗原表位，寻找HSV多组分疫苗和新型基因工程疫苗更有效的小片段短肽作为该病毒疫苗的备选免疫原。方法利用有动物保护活性的抗HSV糖蛋白C（gC）单克隆抗体（McAb）1A12淘筛噬菌体随机12肽库，经4轮筛选后进行ELISA检测，随机挑取14个阳性克隆进行序列测定,序列比较后得到保守序列，做ELISA阻断实验进一步鉴定筛选结果并与相关天然蛋白HSV gC进行序列比较。结果获得保守序列-SG(L)RHII-和其侧翼辅助序列-AK-、-VW-，其与天然相关蛋白HSV gC 114～116位氨基酸十分相似。携有此短肽的噬菌体可以与McAb特异结合，并可部分阻断抗体与HSV囊膜抗原的反应。结论所筛选到的保守序列可模拟McAb针对的抗原表位，可能是HSV的替代抗原。这一研究方法有望使短肽替代庞大的糖蛋白全长氨基酸序列，为研制更有效及更广谱的基因工程疫苗提供依据，也使研制基于抗原表位水平的特异诊断试剂成为可能。

关键词：单纯疱疹病毒糖蛋白噬菌体随机肽库模拟位抗原表位 ELISA 疫苗

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

单纯疱疹病毒囊膜糖蛋白模拟短肽的筛选

细胞与分子免疫学杂志 2000年第6期16卷 464-466页

作者：杨乔欣马文煜等第四军医大学微生物学教研室，陕西西安710032

目的获得可替代单纯疱疹病毒（HSV）囊膜糖蛋白行为该病毒亚单位疫苗免疫原的小片段短肽。方法将1株具有强动物保护活性的抗HSV糖蛋白C型共同性单克隆抗体（mAb)1A12生物素化后，淘筛噬菌体随机12肽库，经4轮筛选后进行ELISA检测。... 详细信息

目的获得可替代单纯疱疹病毒（HSV）囊膜糖蛋白行为该病毒亚单位疫苗免疫原的小片段短肽。方法将1株具有强动物保护活性的抗HSV糖蛋白C型共同性单克隆抗体（mAb)1A12生物素化后，淘筛噬菌体随机12肽库，经4轮筛选后进行ELISA检测。随机挑取14个克隆DNA测序，得到保守序列（Motif)为－SG（L）RHII－,并进行了ELISA阻断实验。结果携有此短肽的噬菌体可与mAb1A12特异结合，并可部分阻断抗体与HSV囊膜抗原的反应。结论所筛选到的保守序列可模拟mAb1A12针对的抗原表位，可能是HSV的替代抗原。这一研究方法有望使短肽替代庞大的糖蛋白长氨基酸序列，为研制更有效及更广谱的基因工程疫苗提供依据，也使研制基于抗原表位水平的特异诊断试剂成为可能。

关键词：单纯疱疹病毒糖蛋白噬菌体展示随机肽库

HSV-1 SM44株糖蛋白D基因真核表达载体的构建及其免疫效果观察

维普期刊数据库评论

在线全文

维普期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

细胞与分子免疫学杂志 2000年第4期16卷 308-310页

作者：余颖马文煜杨乔欣第四军医大学基础部微生物学教研室陕西西安710032

目的构建HSV 1型SM44株糖蛋白D(gD)基因的真核表达载体 ,并用此重组质粒直接免疫小鼠 ,探讨HSV 1gD基因作为基因疫苗的可能性。方法从HSV 1基因组中扩增 gD的全编码基因 ,克隆入载体 pUC19中 ,测序鉴定后转入真核表达载体 pcDNA3.1( +)... 详细信息

目的构建HSV 1型SM44株糖蛋白D(gD)基因的真核表达载体 ,并用此重组质粒直接免疫小鼠 ,探讨HSV 1gD基因作为基因疫苗的可能性。方法从HSV 1基因组中扩增 gD的全编码基因 ,克隆入载体 pUC19中 ,测序鉴定后转入真核表达载体 pcDNA3.1( +)。所得重组质粒pcDNA gD以电穿孔法转染CHO细胞 ,并以荧光染色法鉴定表达效果。用 pcDNA gD免疫小鼠 ,ELISA法检测基因免疫的应答效果。结果成功地构建了可在真核细胞中有效表达的HSV 1gD真核表达载体 ,用其直接免疫小鼠可引起较高水平的特异性抗体应答。结论 gD的真核表达载体有可能作为HSV 1的基因疫苗 ,为进一步研究基于 gD的表位生物学和表位疫苗奠定了基础。

关键词： HSV-1 糖蛋白D 真核表达基因免疫载体构建

利用噬菌体肽库筛选汉滩病毒受体结合表位的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

细胞与分子免疫学杂志 2002年第1期18卷 73-75页

作者：吕欣薛小平杨乔欣马文煜尹文第四军医大学微生物学教研室陕西西安710032

目的确定汉滩病毒（ＨＴＮＶ）上可与宿主细胞受体结合的一段配基表位。方法型特异性ｍＡｂ３Ｇ１，与ＨＴＮＶ糖蛋白ＧＺ及核蛋白（ＮＰ）具有双结合活性，且中和效价很高。以纯化的ｍＡｂ３Ｇ１作为配基，淘筛噬菌体随机１２... 详细信息

目的确定汉滩病毒（ＨＴＮＶ）上可与宿主细胞受体结合的一段配基表位。方法型特异性ｍＡｂ３Ｇ１，与ＨＴＮＶ糖蛋白ＧＺ及核蛋白（ＮＰ）具有双结合活性，且中和效价很高。以纯化的ｍＡｂ３Ｇ１作为配基，淘筛噬菌体随机１２肽库，经ＥＬＩＳＡ法鉴定后，对阳性克隆进行测序并与天然病毒蛋白Ｇ２及ＮＰ的序列进行同源性比较分析。结果经３轮筛选，噬菌体显示有良好的富集效果。从第３轮筛选产物中，随机挑取２１个克隆进行ＥＬＩＳＡ结合实验。结果显示，９个克隆与ｍＡｂ３Ｇ１有较强的特异结合活性；ＤＮＡ测序结果表明，具有保守性序列模式ＰＸ＿（１－２）ＨＸ＿（０－２）。该基序分别与Ｇ２～（９６）ＹＰＷＨＴＫＣＨＹ～（１０５）及ＮＰ～（８１）ＰＹＧＶＥＰＧＤＨＬＫＥＲＳ～（９４）相似。结论从噬菌体随机肽库中，筛选到能与ｍＡｂ３Ｇ１特异性结合的一段短肽基序ＰＸ＿（１－２）ＨＸ（０－２），其与ＨＴＮＶＧ２部分氨基酸的同源性较高，可能是与宿主细胞受体结合的表位，为进一步证实和研究ＨＴＮＶ的受体奠定了基础。

关键词：噬菌体表面呈现筛选汉坦病毒 mAb 表位

抗单纯疱疹病毒单克隆抗体CHA9靶基因的定位

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

细胞与分子免疫学杂志 2003年第3期19卷 272-274页

作者：黎志东杨乔欣任君萍马文煜吕欣陈峥第四军医大学微生物学教研室陕西西安710032

目的 :获得单纯疱疹病毒 (HSV)新糖蛋白 g30K的部分特征氨基酸信息 ,以期对该蛋白基因的准确定位有所帮助。方法 :将针对HSV新糖蛋白 g30K的单克隆抗体 (mAb)CHA9生物素化后 ,淘筛噬菌体随机 12肽库 ,经 3轮筛选后进行ELISA检测。随机挑... 详细信息

目的 :获得单纯疱疹病毒 (HSV)新糖蛋白 g30K的部分特征氨基酸信息 ,以期对该蛋白基因的准确定位有所帮助。方法 :将针对HSV新糖蛋白 g30K的单克隆抗体 (mAb)CHA9生物素化后 ,淘筛噬菌体随机 12肽库 ,经 3轮筛选后进行ELISA检测。随机挑取 10个阳性克隆进行DNA测序 ,并进行序列比较以得到保守序列 ,然后对其疏水性进行预测。结果 :得到的保守氨基酸序列 (motif)为 PH/KHXHXGS 。携有此短肽的噬菌体可与CHA9特异结合而不与其它IgG出现交叉反应。疏水性分析证明其可能构成一个表位。结论 :筛选到一段具有含mAbCHA9靶抗原 HSV新糖蛋白 g30K部分氨基酸特征的短肽 ,为新基因的预测提供了参考依据。

关键词：单纯疱疹病毒糖蛋白随机肽库基因定位

抗单纯疱疹病毒CHA9-3D8单链抗体三维结构的计算机模建和分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

细胞与分子免疫学杂志 1997年第1期13卷 28-33页

作者：杨乔欣马文煜孙苗陈常庆第四军医大学微生物学教研室中国科学院上海生物工程研究中心

将１株分别来自单纯疱疹病毒ＭｃＡｂ（重链）和出血热病毒ＭｃＡｂ（轻链）的杂化单链抗体基因序列，在ＳＧＩ图形工作站上，利用同源蛋白结构预测的方法，建立起了其三维结构模型，以寻找轻、重链空间结构的相互关系，观察抗体的结构... 详细信息

将１株分别来自单纯疱疹病毒ＭｃＡｂ（重链）和出血热病毒ＭｃＡｂ（轻链）的杂化单链抗体基因序列，在ＳＧＩ图形工作站上，利用同源蛋白结构预测的方法，建立起了其三维结构模型，以寻找轻、重链空间结构的相互关系，观察抗体的结构及表面静电性和疏水性的变化。结果表明，杂化链抗体的轻、重链位置得当，轻链参与组成了“疏水口袋”的形成，并有约五分之二的“袋口”部分由其围成，Ｌｉｎｋｅｒ链位置贴切，游离于轻、重链之外。轻、重链的３个超变区围绕于疏水口袋附近。这一研究为进一步分析轻、重链在抗体功能中的作用，以及改造抗体并提高抗体活性等方面提供了一种途径。

关键词：单纯疱疹病毒单链抗体空间结构计算机

TGF-βRⅡ/Fc融合蛋白在杆状病毒系统中的表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

第四军医大学学报 2003年第4期24卷 323-326页

作者：李圣青李焕章杨乔欣倪殿涛柏常青第四军医大学西京医院呼吸内科陕西西安710033 第四军医大学基础部微生物学教研室陕西西安710033

目的 :构建TGF βRⅡ /Fc融合蛋白的杆状病毒表达系统 ,并使之成功表达 .为将来TGF βRⅡ /Fc融合蛋白在肺间质纤维化基因治疗中的应用奠定基础 .方法 :采用分子克隆技术构建Bac TRⅡ杆状病毒表达系统 ;采用DNA脂质体转染技术和昆虫细... 详细信息

目的 :构建TGF βRⅡ /Fc融合蛋白的杆状病毒表达系统 ,并使之成功表达 .为将来TGF βRⅡ /Fc融合蛋白在肺间质纤维化基因治疗中的应用奠定基础 .方法 :采用分子克隆技术构建Bac TRⅡ杆状病毒表达系统 ;采用DNA脂质体转染技术和昆虫细胞培养技术培养和扩增Bac TRⅡ重组病毒颗粒 ;采用免疫荧光技术和免疫印迹法检测目的蛋白的表达 .结果 :在重组的Bac TRⅡ杆状病毒感染的sf9细胞中可以检测到目的蛋白的表达 .结论 :重组的Bac TRⅡ杆状病毒表达系统可以用于正确表达TGF βRⅡ /Fc融合蛋白 .由于杆状病毒表达系统效率较高 ,因此 ,今后可利用该系统进行目的蛋白的纯化及进一步的实验研究 .

关键词：转化生长因子β 肺纤维化肺疾病杆状病毒嵌合体蛋白质类

应用噬菌体肽库研究银屑病相关的角蛋白K14,K17模拟表位(英文)

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

第四军医大学学报 2001年第24期22卷 2244-2249页

作者：张亮刘玉峰杨乔欣任君萍黎志东第四军医大学西京医院全军皮肤性病中心陕西西安710033 第四军医大学基础部微生物学教研室陕西西安710033

目的　获得与银屑病相关的角蛋白 K1 4和 K1 7同源序列的模拟表位 ,评估含有此基序的短肽与银屑病发病的关系 .方法　将 1株抗角蛋白 K1 4和 K1 7同源序列的单克隆抗体 (m Ab) 5 G5经亲和层析纯化后进行生物素标记 ,对噬菌体递呈的随机 ... 详细信息

目的　获得与银屑病相关的角蛋白 K1 4和 K1 7同源序列的模拟表位 ,评估含有此基序的短肽与银屑病发病的关系 .方法　将 1株抗角蛋白 K1 4和 K1 7同源序列的单克隆抗体 (m Ab) 5 G5经亲和层析纯化后进行生物素标记 ,对噬菌体递呈的随机 6肽库进行 3轮淘洗并进行 EL ISA检测 .挑取1 0个阳性克隆进行 DNA测序 ,分析所获数据 ,并进行竞争阻断实验 .结果　氨基酸序列分析表明模拟短肽的基序为 VL(x) AG,角蛋白 K1 4、K1 7的同源序列及链球菌 M蛋白均含有此基序 .携有这些短肽的噬菌体可与 m Ab5 G5特异结合 ,并可阻断单抗与角蛋白反应 .结论　含有此基序的短肽可以模拟 m Ab5 G5识别的与银屑病相关的角蛋白 K1 4和 K1 7同源序列的抗原表位 ,为银屑病特异性短肽的研究提供了一个新途径。

关键词：角蛋白银屑病肽库募肽类噬菌体抗体单克隆