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沉默轴突导向蛋白4D对胃癌细胞SGC-7901生长、自噬及上皮-间质转化的影响

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解放军医学杂志 2021年第1期46卷 11-17页

作者：陶正贵杜静虎田葵王东华龚伟陈满宇湖北文理学院附属医院/襄阳市中心医院普外科湖北襄阳441000 湖北文理学院附属医院/襄阳市中心医院肿瘤科湖北襄阳441000

目的探讨沉默轴突导向蛋白4D(Sema4D)对胃癌细胞SGC-7901生长、自噬及上皮-间质转化的影响。方法将SGC-7901细胞随机分为对照组、shRNA-NC组、Sema4D-shRNA1组、Sema4D-shRNA2组与Sema4D-shRNA3组,构建shRNA Sema4D载体转染至SGC-7901细胞。采用RT-PCR检测各组Sema4D mRNA表达水平;采用克隆形成实验检测细胞克隆形成率;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;显微镜观察上皮-间质转化形态学变化;Western blotting检测Ki-67、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bax、Bcl-2、caspase-3、cleaved caspase-3、Beclin1、p62、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、E-cadherin、N-cadherin、波形蛋白表达水平。结果 RT-PCR检测结果显示,与对照组比较,Sema4D-shRNA1组、Sema4D-shRNA2组和Sema4D-shRNA3组Sema4D mRNA表达水平均明显降低,且Sema4D-shRNA3组明显低于Sema4D-shRNA1组和Sema4D-shRNA2组(P<0.05),选择Sema4D-shRNA3进行后续试验。克隆形成实验结果显示,与对照组比较,Sema4D-shRNA3组克隆形成率明显降低(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,与对照组比较,Sema4D-shRNA3组细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。Western blotting检测结果显示,与对照组比较,Sema4D-shRNA3组Ki-67、PCNA、p62、N-cadherin、波形蛋白表达水平明显降低,Beclin1、E-cadherin蛋白表达水平明显升高,Bax/Bcl-2、cleaved caspase-3/caspase-3、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值明显升高(P<0.05)。显微镜观察可见Sema4D-shRNA3组细胞上皮-间质转化受到抑制。结论 shRNA Sema4D可抑制SGC-7901细胞的增殖、自噬、上皮-间质转化,促进其凋亡。

关键词：胃癌轴突导向蛋白4D 自噬上皮-间质转化

miR-520f-3p靶向MCL1抑制结肠癌细胞生长及移植瘤发生

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中国老年学杂志 2022年第14期42卷 3526-3532页

作者：陶正贵杜静虎田葵王东华胡凤琪陈满宇湖北文理学院附属医院襄阳市中心医院普外科湖北襄阳441000 湖北文理学院附属医院襄阳市中心医院肾内科湖北襄阳441000

目的探讨miR-520f-3p对结肠癌细胞生长及移植瘤发展的作用及机制。方法实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测结肠癌组织和细胞中miR-520f-3p的mRNA表达。将miR-NC、miR-520f-3p mimic、miR-520f-3p inhibitor质粒分别转染进入HT-29细... 详细信息

目的探讨miR-520f-3p对结肠癌细胞生长及移植瘤发展的作用及机制。方法实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测结肠癌组织和细胞中miR-520f-3p的mRNA表达。将miR-NC、miR-520f-3p mimic、miR-520f-3p inhibitor质粒分别转染进入HT-29细胞,克隆形成实验检测细胞增殖能力,流式检测细胞凋亡率,Western印迹检测Ki67、增殖细胞核抗原(PCNA)、cleaved caspase-3、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平。将裸鼠分为Control组、miR-NC组、miR-520f-3p mimic组、miR-520f-3p inhibitor组,在每只裸鼠左腋下皮下注射各转染的结肠癌HT-29细胞,30 d后处死。观察移植瘤体积并测定其重量,TUNEL检测细胞凋亡率,免疫组化检测Ki67阳性表达水平,Western印迹检测Ki67、PCNA、caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白表达水平。双荧光素酶报告检测靶向关系,Western印迹检测髓样细胞白血病蛋白(MCL)1蛋白表达水平。将miR-520f-3p mimic与pc-NC或pc-MCL1质粒联合转染进入HT-29细胞,克隆形成实验检测细胞生长能力,流式检测细胞凋亡率,Western印迹检测Ki67、PCNA、cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达水平。结果与正常结肠组织和细胞相比,结肠癌组织和细胞中miR-520f-3p mRNA表达显著下调(P<0.01),选取HT-29细胞做后续实验。与Control组相比,miR-520f-3p mimic组HT-29克隆细胞数目显著减少,细胞凋亡率显著增加,Ki67和PCNA蛋白表达水平显著下调,cleaved caspase-3和Bax/Bcl-2蛋白表达水平显著上调(均P<0.01);miR-520f-3p inhibitor组HT-29克隆细胞数目显著增加,细胞凋亡率显著减少,Ki67和PCNA蛋白表达水平显著上调,cleaved caspase-3和Bax/Bcl-2蛋白表达水平显著下调(均P<0.01)。与Control组相比,miR-520f-3p mimic组HT-29移植瘤重量和体积显著减少,细胞凋亡率显著增加,Ki67和PCNA蛋白表达水平显著下调,cleaved caspase-3和Bax/Bcl-2蛋白表达水平显著上调(均P<0.01);miR-520f-3p inhibitor组HT-29移植瘤重量、体积及Ki67阳性细胞百分率显著增加,细胞凋亡率显著减少,Ki67和PCNA蛋白表达水平显著上调,cleaved caspase-3和Bax/Bcl-2蛋白表达水平显著下调(均P<0.01)。miR-520f-3p靶向下调MCL1。过表达MCL1逆转miR-520f-3p过表达对HT-29细胞增殖和凋亡的作用(均P<0.01)。结论miR-520f-3p通过靶向下调MCL1来抑制结肠癌细胞生长及移植瘤的发展。

关键词： miR-520f-3p 髓样细胞白血病蛋白(MCL)1 结肠癌移植瘤增殖凋亡

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TST与PPH治疗痔病的临床疗效比较

中国肛肠病杂志 2014年第5期34卷 28-30页

作者：杜静虎程卫东大连大学附属新华医院辽宁大连116021

为比较选择性痔上黏膜切除术（TST）与吻合器痔上黏膜环切术（PPH）治疗痔病的临床效果，将240例痔病患者随机分为实验组和对照组，每组120例，实验组采用TST治疗，对照组采用PPH治疗。对比观察两组患者痔脱垂、出血总疗效，手术时间、... 详细信息

为比较选择性痔上黏膜切除术（TST）与吻合器痔上黏膜环切术（PPH）治疗痔病的临床效果，将240例痔病患者随机分为实验组和对照组，每组120例，实验组采用TST治疗，对照组采用PPH治疗。对比观察两组患者痔脱垂、出血总疗效，手术时间、住院时间及术后并发症等情况。结果显示，两组在痔脱垂、出血总疗效方面疗效相当，但在平均手术时间、平均住院时间及术后肛门疼痛、肛门水肿等方面实验组优于对照组（P〈0．05）。结果表明，TST治疗Ⅲ、Ⅳ期痔病的疗效与PPH相当，但TST术后并发症少，创伤小，手术安全、有效、微创，是符合肛门直肠生理特点的治疗痔病的新技术。

关键词：痔选择性痔上黏膜切除术吻合器痔上黏膜环切术

LC+LCBDE与ERCP/EST+LC治疗胆囊结石合并胆总管结石的临床效果比较

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肝胆胰外科杂志 2018年第5期30卷 403-406页

作者：陈钰杜静虎王东华陶正贵湖北文理学院附属襄阳市中心医院普外科湖北襄阳441021

目的评估腹腔镜胆囊切除术(LC)联合腹腔镜胆总管探查术(LCBDE)、经内镜逆行性胰胆管造影术(ERCP)/经十二指肠镜Oddi括约肌切开术(EST)联合LC治疗胆囊结石合并胆总管结石的临床疗效及其对机体免疫功能的影响。方法回顾性分析2016年1月至2... 详细信息

目的评估腹腔镜胆囊切除术(LC)联合腹腔镜胆总管探查术(LCBDE)、经内镜逆行性胰胆管造影术(ERCP)/经十二指肠镜Oddi括约肌切开术(EST)联合LC治疗胆囊结石合并胆总管结石的临床疗效及其对机体免疫功能的影响。方法回顾性分析2016年1月至2017年6月湖北文理学院附属襄阳市中心医院收治的胆囊结石合并胆总管结石患者87例的临床资料。根据治疗方式分为LC+LCBDE组(44例)与ERCP/EST+LC组(43例),对两组患者术中及术后各项临床指标、机体免疫功能指标、术后并发症发生情况及胆总管结石残留情况进行比较。结果 LC+LCBDE组在手术时间[(76.55±13.92)min vs(115.29±16.68)min]、术中出血量[(32.81±5.93)m L vs(44.76±7.01)m L]、肛门排气时间[(18.37±4.69)h vs(21.29±5.83)h]、住院时间[(5.19±2.63)d vs(7.53±2.81)d]、住院费用[(1.59±0.26)万元vs(1.81±0.33)万元]及镇静剂使用率[6.82%(3/44)vs 11.63%(5/43)]方面,均低于ERCP/EST+LC组,差异具有统计学意义(P0.05)。LC+LCBDE组术后并发症发生率[11.36%(5/44)]、胆总管结石残留率[2.27%(1/44)]均明显低于ERCP/EST+LC组(P<0.05)。结论 LC+LCBDE治疗胆囊结石合并胆总管结石的术中及术后各项临床指标均明显优于ERCP/EST+LC;两种术式对患者机体免疫功能影响均较轻,但采用LC+LCBDE术式术后并发症发生率更低,胆总管结石残留更少,值得推广应用。

关键词： LC+LCBDE ERCP/EST+LC 胆囊结石合并胆总管结石

ZNF521促进结肠癌的进展且受miR-211-5p靶向调控

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临床与病理杂志 2021年第6期41卷 1237-1247页

作者：杜静虎陈满宇王东华陈钰襄阳市中心医院普外三科湖北襄阳441021

目的:探索锌指蛋白521(ZNF521)在结肠癌中的表达、功能和临床意义,并研究其机制。方法:采用免疫组织化学、蛋白质印迹法和q RT-PCR检测结肠癌组织或细胞系中ZNF521或mi R-211-5p的表达;采用小干扰RNA(small interfering,si RNA)和mi RN... 详细信息

目的:探索锌指蛋白521(ZNF521)在结肠癌中的表达、功能和临床意义,并研究其机制。方法:采用免疫组织化学、蛋白质印迹法和q RT-PCR检测结肠癌组织或细胞系中ZNF521或mi R-211-5p的表达;采用小干扰RNA(small interfering,si RNA)和mi RNA模拟物分别构建ZNF521低表达和mi R-211-5p高表达细胞模型;采用CCK-8实验和Transwell实验分别检测细胞的增殖、迁移和侵袭;采用蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达;通过Circ Interactome生物信息学网站预测、双荧光素报告基因实验验证mi R-211-5p与ZNF521的靶向关系。结果:与正常结肠组织相比,结肠癌患者标本中ZNF521表达显著增加,其高表达与患者TNM分期增加、分化程度低及局部淋巴结转移显著相关;体外实验证实,敲低ZNF521或过表达mi R-211-5p抑制了结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭,并促进了结肠癌细胞凋亡;相关的机制研究证实,mi R-211-5p可以靶向ZNF521并负调节后者的表达。结论:ZNF521可作为致癌基因调节结肠癌细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡并受到mi R-211-5p的靶向调控。

关键词： ZNF521 结肠癌增殖迁移侵袭凋亡 miR-211-5p

67例老年顽固性慢传输型便秘行全结肠旷置术后的疗效观察

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结直肠肛门外科 2019年第2期25卷 221-225页

作者：陈钰杜静虎田葵陶正贵襄阳市中心医院普外科湖北襄阳441021

目的分析67例行全结肠旷置术治疗的老年顽固性慢传输型便秘患者的临床资料,探讨该术式的临床疗效。方法收集2010年6月至2017年7月襄阳市中心医院收治的67例行全结肠旷置术治疗的老年顽固性慢传输型便秘患者的临床资料,分析患者手术相关... 详细信息

目的分析67例行全结肠旷置术治疗的老年顽固性慢传输型便秘患者的临床资料,探讨该术式的临床疗效。方法收集2010年6月至2017年7月襄阳市中心医院收治的67例行全结肠旷置术治疗的老年顽固性慢传输型便秘患者的临床资料,分析患者手术相关指标、术后并发症发生情况及手术前后排便情况;对比患者术前、术后6个月、12个月Wexner便秘评分及胃肠生活质量指数评分。结果所有患者均顺利完成手术,术后均通过电话及门诊随访,随访时间为12 (6,29)个月,无一例出现术后严重并发症及死亡。手术时间为43～63 min,平均手术时间为54 (52,58) min;术中出血量为22～31 mL,平均术中出血量为29 (28,30) mL;术后第一次排便时间为3～9 d,平均术后第一次排便时间为6 (5,7) d;住院时间为9～16 d,平均住院时间为12 (11,14) d。67例患者中,2例术后出现切口感染;14例出现结肠旷置综合征,其中12例行灌肠、口服肠道益生菌及肠道动力药物后明显好转,仅2例严重病例因反复恶心、腹胀、腹痛等,行回肠末端造口术。患者术前大便干结,排便费力,3～7d排便1次;患者术后均排便良好,术后1个月排便次数为(4.00±1.00)次/天,术后6个月排便次数为(2.50±0.50)次/天,术后12个月排便次数为(1.20±0.40)次/天。随着随访时间延长,患者排便次数缓慢恢复至1次/天左右。术后6个月及术后12个月Wexner便秘评分均低于术前(均P <0.05);术前胃肠生活质量指数评分低于术后6个月、术后12个月(均P <0.05)。结论全结肠旷置术是治疗老年顽固性慢传输型便秘的一种有效术式,但远期易发生结肠旷置综合征等,需临床随访观察。

关键词：老年慢传输型便秘全结肠旷置术结肠旷置综合征 Wexner便秘评分胃肠生活质量指数

干扰长链非编码 RNA NEAT1 上调 miR-126 抑制胃癌细胞的生长、间质转换及裸鼠肿瘤形成

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实验动物科学 2021年第2期38卷 8-16页

作者：陶正贵杜静虎田葵王东华胡凤琪陈钰湖北文理学院附属医院襄阳市中心医院普外科襄阳441000 襄阳市中心医院肾内科襄阳441000

目的研究干扰长链非编码RNA核富集的转录物1(NEAT1)上调miR-126抑制胃癌细胞的生长,间质转换及裸鼠肿瘤形成的影响。方法通过RT-PCR分析NEAT1在胃癌MGC-803、SGC-7901细胞和正常胃上皮GES-1细胞中的表达,并检测sh-NEAT1的沉默效率。NEAT... 详细信息

目的研究干扰长链非编码RNA核富集的转录物1(NEAT1)上调miR-126抑制胃癌细胞的生长,间质转换及裸鼠肿瘤形成的影响。方法通过RT-PCR分析NEAT1在胃癌MGC-803、SGC-7901细胞和正常胃上皮GES-1细胞中的表达,并检测sh-NEAT1的沉默效率。NEAT1沉默后,EDU染色分析肿瘤细胞的增殖能力;流式细胞术分析细胞凋亡;Transwell小室和划痕实验分析肿瘤细胞的侵袭、迁移能力;Western blot分析肿瘤细胞Ki67、Caspase-3、N-cadherin和E-cadherin的表达。荧光素酶报告实验验证NEAT1与miR-126的靶向关系,分析NEAT1/miR-126对胃癌SGC-7901细胞生长和运动的调节影响;通过构建转染sh-NEAT1的SGC-7901细胞的移植瘤模型裸鼠,检测30 d内肿瘤体积及质量变化;免疫组化检测Ki67和Caspase-3的表达,RT-PCR检测NEAT1和miR-126的表达;Western blot检测N-钙黏蛋白(N-cadherin)及E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达。结果NEAT1在肿瘤细胞中的表达水平显著高于正常细胞(P<0.05),sh-NEAT1沉默后,肿瘤细胞NEAT1的表达量显著降低,增殖能力明显受到抑制,凋亡细胞比例显著增高,肿瘤细胞的侵袭、迁移能力明显减弱,肿瘤细胞中Ki67和N-cadherin表达量明显降低,Caspase-3和E-cadherin的表达水平显著升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。荧光素酶报告实验表明NEAT1与miR-126存在靶向关系,sh-NEAT1能显著促进miR-126的表达(P<0.05),miR-126 inhibitor能显著促进sh-NEAT1对SGC-7901细胞增殖、侵袭、迁移,并抑制细胞凋亡。移植瘤模型裸鼠表明sh-NEAT1能够抑制肿瘤体积增大,下调肿瘤组织中NEAT1、Ki67及N-cadherin的表达水平,上调miR-126、Caspase-3和E-cadherin的表达量,肿瘤的质量与对照组相比显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论干扰长链非编码RNANEAT1能够上调miR-126表达,从而抑制胃癌细胞的增殖,并通过阻断EMT机制降低肿瘤细胞的侵袭、转移能力,抑制裸鼠肿瘤的形成。

关键词：长链非编码RNA 核富集的转录物1 miR-126 胃癌荷瘤鼠

冷丙酮固定剂在骨髓活组织塑料冷包埋切片免疫组化染色中的应用研究

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陕西医学杂志 2011年第10期40卷 1327-1329页

作者：田亚宁李宏王越月何春玲周智辉杜静刘芳董昌虎陕西中医学院第二附属医院咸阳712000

目的:探讨骨髓活组织塑料冷包埋切片免疫组化染色技术在血液系统疾病诊断和治疗中的应用。方法:在不脱钙的骨髓活组织塑料冷包埋切片上,采用经典免疫组化技术SP染色法。结果:冷丙酮固定剂在骨髓活组织塑料冷包埋免疫组化染色中,效果优于... 详细信息

目的:探讨骨髓活组织塑料冷包埋切片免疫组化染色技术在血液系统疾病诊断和治疗中的应用。方法:在不脱钙的骨髓活组织塑料冷包埋切片上,采用经典免疫组化技术SP染色法。结果:冷丙酮固定剂在骨髓活组织塑料冷包埋免疫组化染色中,效果优于Bouin固定液(P<0.05),-20℃操作条件下免疫组化结果优于4℃(P<0.05)。结论:冷丙酮固定骨髓活组织塑料冷包埋免疫组化染色技术,结果稳定,特异性高,敏感性强。

关键词：骨髓检查塑料包埋免疫组织化学

加强专门协商机构建设推动政协事业创新发展——陕西省政协十二届四次会议在西安举行

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陕西画报 2021年第2期 16-21页

作者：母家亮杜静波不详

凝心聚力启新程,砥砺奋进续华章。1月25-28日政协陕西省第十二届委员会第四次会议在陕西宾馆举行。在圆满完成各项议程后,1月28日下午,省政协十二届四次会议在西安闭幕。闭幕会上,省政协主席韩勇,省政协副主席陈强、祝列克、李晓东、李... 详细信息

凝心聚力启新程,砥砺奋进续华章。1月25-28日政协陕西省第十二届委员会第四次会议在陕西宾馆举行。在圆满完成各项议程后,1月28日下午,省政协十二届四次会议在西安闭幕。闭幕会上,省政协主席韩勇,省政协副主席陈强、祝列克、李晓东、李冬玉、魏增军、杨冠军、王卫华、刘宽忍、王二虎和秘书长闫超英在主席台前排就座。大会由韩勇主持。

关键词：政协副主席凝心聚力陕西省政协专门协商机构王卫华祝列克第十二届