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犬四种B细胞表面标志分子单克隆抗体的制备与鉴定

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犬四种B细胞表面标志分子单克隆抗体的制备与鉴定

作者：杜萌萌河南农业大学

学位级别：硕士

单个B细胞抗体制备技术是基于单个细胞分离技术和单细胞RT-PCR技术建立起来的一种快速制备单克隆抗体(Monoclonal antibody,m Ab)的方法,可快速获得难以制备的病原m Ab和突发传染性病病原的中和活性m Ab,单个B细胞制备抗体的核心技术之... 详细信息

单个B细胞抗体制备技术是基于单个细胞分离技术和单细胞RT-PCR技术建立起来的一种快速制备单克隆抗体(Monoclonal antibody,m Ab)的方法,可快速获得难以制备的病原m Ab和突发传染性病病原的中和活性m Ab,单个B细胞制备抗体的核心技术之一在于单个B细胞的分离,该方法的关键是需要系统的B细胞表面标志分子m Ab。人和小鼠的B细胞表面分子m Ab研究均已十分完善,单个B细胞抗体技术应用也已非常成熟,利用人CD19(Cluster of differentiation 19,CD19)、CD27(Cluster of differentiation 27,CD27)、CD38(Cluster of differentiation 38,CD38)的单克隆抗体可有效分离到单个记忆B细胞或浆细胞,但犬的免疫系统反应机制和相关免疫细胞的分类研究相对较少,更缺乏一系列犬B细胞表面标志分子的m Ab。研究发现,犬免疫系统和人免疫系统机制与特征十分相似,其CD分子与人CD分子的功能作用十分相似,因此本研究选择犬B细胞表面标志分子CD19、CD27、CD38、CD138制备其m Ab,并鉴定m Ab的生物学功能,期望为犬单个B细胞抗体制备平台实现单个B细胞的分离奠定基础。本研究主要包含以下几个方面:1、犬CD19、CD27、CD38、CD138蛋白的表达及纯化构建犬CD19、CD27、CD38、CD138重组表达质粒,分别转染Expi CHO-S细胞和Expi293细胞进行重组蛋白表达,利用Western-blot和SDS-PAGE进行重组蛋白的鉴定,通过His亲和层析柱纯化成功获得了犬CD19、CD27、CD38和CD138重组蛋白。2、犬CD19、CD27、CD38、CD138 m Ab的制备以Expi CHO-S细胞表达的各重组蛋白作为小鼠免疫抗原,以Expi293细胞表达的各重组蛋白作为筛选抗原,最终针对犬CD19、CD27、CD38、CD138分子分别筛选到10、3、12、2株杂交瘤细胞,各杂交瘤细胞所分泌腹水m Ab ELISA效价均不低于1:64 000。3、犬CD19、CD27、CD38、CD138 m Ab的鉴定通过细胞传代检测杂交瘤细胞稳定性,通过IFA和Western-blot鉴定m Ab特异性,通过免疫组化和流式细胞术验证各m Ab生物学功能。稳定性检测显示各杂交瘤细胞传代培养30代均可稳定分泌相应m Ab;IFA和Western-blot显示各m Ab均可特异性识别相应CD蛋白;免疫组化分析显示犬CD19和CD27分子各获一株m Ab可应用于免疫组化鉴别犬淋巴组织中表达CD19或CD27的细胞;流式细胞术检测结果显示犬CD19、CD27、CD38、CD138分子各获两株m Ab可应用于流式细胞术检测犬PBMCs中表达相关CD分子的细胞群。综上所述,本研究利用真核表达细胞成功表达并纯化了犬CD19、CD27、CD38、CD138蛋白,成功制备了四种CD分子的m Ab并对其进行系统性鉴定,为犬B细胞免疫特性研究提供了有效的抗体工具,为犬单个B细胞抗体技术平台实现单个B细胞的分离奠定了基础。

关键词：犬 CD19 CD27 CD38 CD138 单个B细胞抗体技术单克隆抗体

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外卖骑手致交通事故的法律责任问题研究

外卖骑手致交通事故的法律责任问题研究

作者：杜萌萌扬州大学

学位级别：硕士

近年以来,我国外卖产业持续快速增长,即便受新冠疫情的影响,截止2020年上半年,网上外卖用户规模也达到4亿多。得益于外卖产业的飞速发展,相关产业的发展也被带动,最主要在于餐饮行业的活力提升,实现了收入增长。另外,外卖产业的发展也... 详细信息

近年以来,我国外卖产业持续快速增长,即便受新冠疫情的影响,截止2020年上半年,网上外卖用户规模也达到4亿多。得益于外卖产业的飞速发展,相关产业的发展也被带动,最主要在于餐饮行业的活力提升,实现了收入增长。另外,外卖产业的发展也创造了大量外卖配送的就业岗位。伴随着外卖产业带来的机遇和发展,挑战也接踵而至。因外卖产业属较为新兴领域,还没有足够完善的法律规范,因此出现法律空白的状况。外卖骑手导致的道路交通事故,常常会引发相关诉讼。可没有出台相应的法律法规,致使出现相关法律缺位的状况,常常使得在司法实践中,法官无从依照具体法律法规进行责任的分配。此外,外卖骑手与平台间法律关系的不确定是司法实践中法官无法对纠纷进行统一处理的最重要原因。以上情形导致了法院在处理外卖骑手致交通事故纠纷中责任分配的不统一,最终造成相似案件出现不同判决的结果。这不仅难让进入诉讼的当事人信服,也会对我国司法的确定性和权威性产生损害。亟需对外卖骑手致交通事故纠纷中法律责任问题进行专门探讨。出于对上述现状和所出现问题的考量,本文首先界定了不同的外卖骑手分类,并简要分析不同类型的外卖骑手与平台之间的法律关系。其次,由外卖骑手致交通事故纠纷相关案例引入,借由案例中争议焦点的确定,分析外卖骑手致交通事故纠纷中的处理结果,由此找出我国目前在处理外卖骑手致交通事故责任纠纷中的问题和痛点。接着,分别对英美法系和大陆法系中几个主要国家在劳动关系认定标准相关司法现状经验进行学习,找寻我国可以借鉴的相关经验,为我国在处理外卖骑手致交通事故纠纷责任承担问题的处理寻求更多的解决方式。最后,本文从厘清外卖骑手与平台之间法律关系、完善外卖骑手致交通事故责任纠纷相关法律制度和保险制度三个方面为我国解决外卖骑手致交通事故纠纷责任承担争议问题提供建议,以期能实现同案同判、案结事了的目标。

关键词：外卖骑手外卖平台关系认定责任承担

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GPS信号抗干扰算法的研究与实现

GPS信号抗干扰算法的研究与实现

作者：杜萌萌河北科技大学

学位级别：硕士

GPS（全球导航卫星系统）在人们日常生活中的作用越来越重要，它能为我们提供的精确的定位。但是在现实条件下GPS信号十分微弱，很容易被外界有意和无意的干扰，进而不能很好的实现定位功能。因此，需要在接收端研究一些抗干扰算法，来... 详细信息

GPS（全球导航卫星系统）在人们日常生活中的作用越来越重要，它能为我们提供的精确的定位。但是在现实条件下GPS信号十分微弱，很容易被外界有意和无意的干扰，进而不能很好的实现定位功能。因此，需要在接收端研究一些抗干扰算法，来应对不同的干扰，使GPS信号能无失真的被我们所用。现实中存在的干扰类型很多，有潜在干扰，有人为干扰，目前针对一些干扰研究出了一些抗干扰的算法。抗干扰算法有很多种，本文主要从空域抗干扰算法和空时域抗干扰算法研究。由于空域抗干扰算法实现起来较为简单，能够很好地抑制窄带干扰;同时，空时域抗干扰算法在此基础上对宽带干扰也有很好的抑制效果。因此我们从空域及空时域这两个方面考虑选择功率倒置算法、单星单约束算法和单星多约束算法三种算法进行研究。在充分介绍各种算法后，以Matlab软件为平台，设置了与实际环境相似的仿真环境，对三种算法进行了仿真和分析，最后得出在强干扰存在情况下，功率倒置算法抗干扰性能最差，而单星单约束算法和单星多约束算法相比，多约束算法的非线性使得有用信号更容易失真，因此单星单约束算法更具优势。最后根据实际需要构建了基于DSP和FPGA的硬件平台，将算法移植到硬件平台进行测试，进一步了解各种算法的性能。

关键词：全球导航卫星系统干扰抗干扰空时域抗干扰算法 Matlab仿真硬件平台

Between the Devil and the Deep Blue Sea（引言及第六章）英译汉翻译实践报告

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Between the Devil and the Deep Blue Sea（引言及第六章）英译...

作者：杜萌萌宁波大学

学位级别：硕士

本文是一篇翻译报告,翻译材料选自美国历史学家马库斯·雷迪克(Marcus Rediker,1951—)的Between the Devil and the Deep Blue Sea——Merchant Seamen,Pirates and the Anglo-American Maritime World,1700-1750。该书是一部优秀的海上劳工史,本报告选取其中的引言和第六章进行翻译实践。本翻译实践报告由四个章节构成:第一章为翻译项目描述,包括项目背景、项目目的和项目意义;第二章为文本分析,在文本类型和语言特点分析的基础上,指出翻译中的四个难点和挑战:文化负载词、航海术语、长难句和修辞的翻译;第三章是案例分析,亦是报告的主体,分析了一些典型的例子,说明了在翻译文化负载词、航海用语、长句与复杂句以及修辞格时使用的翻译方法和技巧;最后一章是对本次翻译报告的总结。通过本次翻译实践,笔者对语义翻译和交际翻译理论的应用有了更深的认识。如语义翻译策略注重对原文本的忠实,而交际翻译策略则更注重使译著读者和原文读者的阅读感受相同。与此同时,笔者意识到,二者之间的区别只是相对而言,在具体的翻译实践中,通常会交替选择使用这两种方法。

关键词：交际翻译语义翻译语言特点实践报告翻译技巧

DT公司环境会计信息披露质量及影响因素研究

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DT公司环境会计信息披露质量及影响因素研究

作者：杜萌萌南京航空航天大学

学位级别：硕士

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姓名的商标注册与保护研究

姓名的商标注册与保护研究

作者：杜萌萌华东政法大学

学位级别：硕士

将姓名注册为商标的行为往往会侵犯他人的合法权利，无论这种注册行为是未经授权的还是仅仅对自己名字的“合理”使用。目前我国司法实践中，出现了大量的姓名商标侵权纠纷案件，而且侵权的方式层出不穷。从恶意的使用他人姓名为商标，... 详细信息

将姓名注册为商标的行为往往会侵犯他人的合法权利，无论这种注册行为是未经授权的还是仅仅对自己名字的“合理”使用。目前我国司法实践中，出现了大量的姓名商标侵权纠纷案件，而且侵权的方式层出不穷。从恶意的使用他人姓名为商标，如“张学友”、“楚瑜酒”商标案等，到偶然的姓名雷同“刘翔牌”商标案等，都凸显出现行商标法对姓名商标规制的不足。本文从司法实践中遇到的典型案例入手，结合商标的基本识别功能，借鉴国内外立法，进而提出姓名作为商标进行注册与保护的标准。本文分为四章具体研究：第一章结合司法实践中的典型案例，分析将姓名注册为商标这一行为属于何种法律行为。本章主要对未经允许注册他人姓名为商标的行为与侵犯姓名权的行为进行分析比对，从而认定姓名的商标注册行为的法律性质。同时，本章亦会点出姓名作为商标的商业价值。第二章结合商标的基本功能识别功能，分析姓名作为商标注册应当达到的显著性标准。以普通姓名与名人姓名为视角，分析两者显著性的强弱，推出各自需要达到何种标准方能满足作为一个商标拥有基本功能的要求。本章梳理了近10年来我国发生的姓名商标侵权的典型纠纷案件，分别分析了法院在判决时所引用的法条。在此基础上提出现有法律之不足，与应当达到的标准。第三章分析了未经授权但已经获准注册的姓名商标的保护问题。这一章主要涉及的是未经授权将名人姓名注册为商标的问题。本章从成名前的名人姓名商标注册与成名后的名人姓名商标注册两个角度出发，分析商标权人在主观上是否恶意带来的不同姓名商标保护方式。第四章提出了完善我国姓名商标注册与保护的建议。在分析和评价我国现行立法的基础上，结合司法实践出现的纠纷类型与国外立法经验，提出了我国姓名商标注册与保护的立法建议。本文创新之处体现在以下三点：第一，全面概括、分析了各家学者提出的用姓名权规制姓名注册商标行为的难点。第二、国内外目前关于姓名注册的研究主要观点是姓名需具备第二含义，本文在承认这一点的基础上，结合国外理论与司法实践，提出了普通姓名哪怕不具备第二含义依旧可以注册的例外情况;此外，本文将普通姓名与名人姓名区别开来，提出在特定领域内名人姓名在不具备传统意义下的第二含义时依旧可以注册的标准。第三、本文结合国内外理论与实践，提出了已获得注册的姓名商标在使用过程中姓名权人与商标权人各自对该姓名的使用权限。

关键词：姓名商标注册保护显著性

叉头状转录因子O1对糖尿病肾病小鼠足细胞上皮间质转分化的影响及机制研究

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叉头状转录因子O1对糖尿病肾病小鼠足细胞上皮间质转分化的影响及...

作者：杜萌萌郑州大学

学位级别：硕士

背景糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是常见的糖尿病微血管并发症之一,其常见的临床特征为进行性蛋白尿,肾脏足细胞损伤是引起蛋白尿的关键靶点。足细胞位于肾小球毛细血管外的基底膜外层。以往研究表明,足突分离和足细胞凋亡导致... 详细信息

背景糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是常见的糖尿病微血管并发症之一,其常见的临床特征为进行性蛋白尿,肾脏足细胞损伤是引起蛋白尿的关键靶点。足细胞位于肾小球毛细血管外的基底膜外层。以往研究表明,足突分离和足细胞凋亡导致蛋白尿,但是,近期有研究发现,蛋白尿发生明显早于足细胞脱落凋亡。Liu等提出,在损伤早期,足细胞可经历上皮间质转分化(epithelia mesenchymal transition,EMT),使足细胞具有运动性,而从基底膜脱落,使滤过屏障受到破坏。Sam认为,足细胞经历EMT为一动态过程,从中阻断其介导通路可逆转足细胞EMT,及时终止足细胞损伤,从而为早期防治蛋白尿的发生,缓解糖尿病肾病进程提供新的方向。叉头状转录因子O1(Forkhead transcription factor O1,FoxO1)在转录翻译、抗氧化应激、糖脂代谢等方面发挥重要作用。本课题组前期研究发现,上调DN大鼠肾皮质FoxO1,可缓解肾小球病变,包括系膜细胞和足细胞损伤。高糖环境下,TGF-β/Smad信号通路激活,介导足细胞发生EMT,表现为上皮细胞标志性蛋白nephrin表达降低,而间质细胞标志蛋白desmin表达升高,肾小球滤过屏障完整性受到破坏,进而出现蛋白尿,促进糖尿病肾病的发展。有研究发现,在肾小管上皮细胞中,TGF-β/Smad/ILK激活促进小管上皮细胞发生EMT。本课题组研究发现,肾小球系膜细胞中上调FoxO1,可抑制TGF-β通路,减少高糖状态下系膜细胞过度合成细胞外基质。然而,在不同细胞中,FoxO1对TGF-β通路的影响因细胞种类而异。因此,本研究推测,在小鼠足细胞中,FoxO1可能通过抑制TGF-β/Smad/ILK信号通路过度激活,减轻高糖诱导的足细胞EMT,从而缓解糖尿病肾病肾脏足细胞损伤。目的研究FoxO1对糖尿病肾病小鼠和高糖下足细胞上皮间质转分化及TGF-β/Smad/ILK传导通路的影响,并对其机制进行探讨。方法使用慢病毒转染的方法,将组成性激活突变型(Constitutively active,CA)FoxO1慢病毒载体(LV-CA-FoxO1)、FoxO1短发夹样RNA慢病毒载体(LV-FoxO1-sh RNA)及空慢病毒载体(LV-NC)转染入足细胞,并使用药物干预TGF-β通路。细胞实验分组为正常糖浓度组(NG组)和单纯高糖(25mmol/L)组(HG组),将转染LV-CA-FoxO1和LV-NC的足细胞培养于高糖(25mmol/L)环境下分为LV-CA-FoxO1组(CA组)和空病毒载体组(NC组),将转染LV-FoxO1-sh RNA的足细胞分为LV-FoxO1-sh RNA组(sh RNA组)和分别使用药物SIS3及QLT0267处理后分为SIS3组和QLT组。各组分别高糖处理72h、药物处理12h后,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测各组FoxO1、TGF-β1、Smad3、ILK、nephrin、desmin m RNA的表达水平;Western blotting法检测FoxO1、磷酸化FoxO1(p-FoxO1)、TGF-β1、Smad3、磷酸化Smad3(p-Smad3)、ILK、nephrin、desmin的蛋白水平;细胞免疫荧光化学法检测FoxO1的表达及分布,酶联免疫法(Elisa法)检测上清中TGF-β1的分泌量。动物实验部分:通过STZ诱导建立糖尿病小鼠动物模型,使用靶向注射的方法将LV-CA-FoxO1及LV-NC注射入小鼠右侧肾皮质。糖尿病小鼠随机分为3组:糖尿病未治疗组(DM组),LV-CA-FoxO1治疗组(CA组)及LV-NC组(NC组),以正常小鼠作为正常对照组(NG组)。8周末取材,抽取小鼠内眦静脉检测血清肌酐、尿素氮;收集随机尿检测尿微量白蛋白和24小时尿检测24小时尿总蛋白,实时荧光定量PCR检测肾皮质FoxO1、TGF-β1、Smad3、ILK、nephrin、desmin m RNA的表达水平;Western blotting法检测FoxO1、磷酸化FoxO1(p-FoxO1)、TGF-β1、Smad3、磷酸化Smad3(p-Smad3)、ILK、nephrin、desmin的蛋白水平;免疫组化检测肾小球nephrin和desmin表达水平;HE染色及扫描、透射电镜观察肾脏病理学变化情况。结果1.各组FoxO1表达及活性改变:在各组足细胞中,与NG组相比,HG组、NC组FoxO1 m RNA及蛋白表达无明显变化(P>0.05),CA组较HG组FoxO1m RNA及蛋白表达升高(P<0.05)。HG组较NG组p-FoxO1/FoxO1水平升高(P<0.05),转录活性下降;CA组p-FoxO1/FoxO1

关键词：叉头状转录因子O1 糖尿病肾病足细胞上皮间质转分化转化生长因子β1 Smad3蛋白家族整合素激酶

风险评估方法在石化企业过程安全管理（PSM）中的应用技术研究

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风险评估方法在石化企业过程安全管理（PSM）中的应用技术研究

作者：杜萌萌中国石油大学(华东)

学位级别：硕士

石油化工行业具有易燃易爆、高温高压、有毒有害等特点,发生事故的概率高,且后果严重。化工过程安全管理（PSM）是石化企业日常管理的一个重要组成部分,是在企业的生产过程中以安全为目的进行有关决策、计划、组织和控制等方面的活动,... 详细信息

石油化工行业具有易燃易爆、高温高压、有毒有害等特点,发生事故的概率高,且后果严重。化工过程安全管理（PSM）是石化企业日常管理的一个重要组成部分,是在企业的生产过程中以安全为目的进行有关决策、计划、组织和控制等方面的活动,目的是减少和控制生产过程中的危险有害因素,防止发生火灾、爆炸和有毒化学品泄露等重大事故,避免事故造成的生命和财产损失以及环境污染等,确保企业的安全生产。PSM在中国起步较晚,本文首先对PSM进行简单的介绍,对PSM在国内外的实施情况进行分析总结,通过调查石化企业风险评估方法在PSM管理中的应用,分析风险评估方法的使用及适用性。本文研究的主要内容是基于风险的过程安全管理,对PSM管理要素进行风险评估需求分析,分析PSM各要素哪些需要进行工艺危害分析（PHA）,各要素中需要进行风险分析及评估的管理方面,在此基础上收集并选择合适的风险分析及评估方法,分析其适用条件,进行方法的对比及改进技术措施,将风险评估方法有效地运用到石化企业过程安全管理（PSM）中来。最后对石化企业PSM管理中所研究的进行PHA的评估对象,对需要进行风险评估的地方选择合适的方法进行风险辨识及评估,根据其危险性、可动用资源、使用对象、时间限制、可操作性方面进行风险评估方法的对比,选取较为合适的评估方法,制定评估方法的优选准则,并对某些评估方法进行改进或提供改进建议,使其更加适合石化企业的安全管理,从而为企业的安全生产提供合理化建议,运用风险评估的方法减少石化生产过程中事故的发生。

关键词： PSM 风险评估评价方法事故

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论法官职业道德的提升

论法官职业道德的提升

作者：杜萌萌河北经贸大学

学位级别：硕士

作为我国的司法机关,法院在国家的政治和社会生活中发挥着十分重要的作用。作为独立行使国家司法管辖权的特殊司法工作者,法官职业道德水平与审判执行的质量和效率息息相关,与社会公平正义有关,从而影响到构建社会主义和谐社会。法官对... 详细信息

作为我国的司法机关,法院在国家的政治和社会生活中发挥着十分重要的作用。作为独立行使国家司法管辖权的特殊司法工作者,法官职业道德水平与审判执行的质量和效率息息相关,与社会公平正义有关,从而影响到构建社会主义和谐社会。法官对于国家的法治建设发挥着不可替代的作用。他们使法律不仅停留在文字表面,还作用在社会生活中,用专业的法治思维和法律知识维持事物之间的公平正义。正因法官有如此重要的作用,其是否具备高尚的职业道德比他们是否精通专业知识更严重。评价一个法官是不是优秀的法官,不能单一而论,具备高水平专业知识、能够有效适用法律的人不一定是一名好法官,只有专业知识和职业道德都称得上优秀的人才是好法官的人选。因此,高尚的职业道德是成为一名优秀法官的基础。法官职业道德是法官道德修养的核心内容,其具体内涵是道德修复过程和法官在职业活动中达到的境界,这个过程包括自我教育和自我修养等相关内容。法官担任着适用法律和维护公平正义的重要使命,加强法官职业道德是中共十八届三中全会“全面推进依法治国战略”的内在要求。但随着社会经济的发展、舆论传播力量的发展、工作量增加等因素,法官职业道德的发展受到了一定的影响,法官的自我修养水平与职业道德存在明显差异。对法官职业道德的研究具有高度的跨学科和政治性,为了解决法官职业道德问题,我们应该在多个角度和领域分配和拓展思想。在中国法律体系中有专门的法律法规来规范法官的职业道德,但是这些内容还有待完善。除此之外,我国法官的管理制度也存在缺陷:首先,法院和法官作为国家司法机关和国家司法工作者,其独立地位没有得到体现。尽管在中华人民共和国成立时,我们赋予了司法独立的地位,但受古代“司法行政一家”思想的影响,法院和法官的独立性受到了许多行政机关的影响。其次,国家对法院和法官的管理偏行政化。特别是基层法官,他们的独立司法权受多种因素制约,因此在法院体系里,许多权力都被集中在上层领导的手中。但法官们的地位本应该是平等的,因为法官都拥有对案件的管辖权。再次,对法官权力的监督和对其权益的保障还需进一步提高。不被监督的权力容易被滥用,没有得到各方面保障的法官容易腐败,为了预防法官滥用职权、贪污腐败,必须加强保障措施和监督措施。以上所述内容均表示我国的法官职业道德提升问题没有得到一个良好的外部环境。而反观内部建设,法官职业道德的教育制度和培训机制也没有做到完善,故而导致法官无法接受良好的职业道德教育,因此在他们自我管理的意识中并没有把法官职业道德建设放在重中之重的地位。考虑到我国现阶段的实际情况并借鉴国外的优良做法,本文对如何提升我国法官职业道德提出了相关对策:一是加强法官自身职业道德观念,为提升法官职业道德制造良好的文化氛围;二是完善各项管理机制,通过内外兼修的方式使法官深刻理解拥有高尚职业道德的重要性,意识到自己的职业具有相当大的神圣性,明白作为一个好法官的基础就是严格遵守职业道德,从而提升他们的道德修养。先了解法官职业道德的内涵,对其重要意义进行阐述,再分析现状,总结成绩指出劣势、分析原因、提出对策是本文的写作思路。

关键词：法官职业道德体制缺失现象提升