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西瓜枯萎病菌分离、鉴定及室内毒力测定

广东农业科学 2013年第5期40卷 71-72页

作者：杜若琛王金胜山西农业大学生命科学学院山西太谷030800

从西瓜根腐病病株中分离得到镰刀菌10株,经鉴定分别为尖孢镰刀菌(7株)、串珠镰刀菌(2株)、茄病镰刀菌株(1株)。其中尖孢镰刀菌的致病性较强,发病率为88.2%,其他两种菌的发病率较低,分别为28.4%和29.7%。对尖孢镰刀菌进行室内毒力试验,... 详细信息

从西瓜根腐病病株中分离得到镰刀菌10株,经鉴定分别为尖孢镰刀菌(7株)、串珠镰刀菌(2株)、茄病镰刀菌株(1株)。其中尖孢镰刀菌的致病性较强,发病率为88.2%,其他两种菌的发病率较低,分别为28.4%和29.7%。对尖孢镰刀菌进行室内毒力试验,结果表明表明万寿菊杀菌素水乳剂与适乐时具有较好的防治效果。

关键词：西瓜枯萎病尖孢镰刀菌室内毒力

miR-31促进骨髓间充质干细胞的增殖和迁移

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中国组织工程研究 2023年第1期27卷 66-71页

作者：张玉娟原一桐杜若琛田峰付媛王春芳山西医科大学实验动物中心山西省太原市030001 山西医科大学基础医学院药理学教研室山西省晋中市030619

背景:骨髓间充质干细胞已被广泛应用于临床治疗神经退行性相关疾病,但由于细胞在受损伤部位的存活率和迁移率低,从而降低了其疗效。目的:探讨miR-31是否能提高骨髓间充质干细胞的迁移和增殖能力。方法:培养和鉴定C57BL/6小鼠骨髓间充质... 详细信息

背景:骨髓间充质干细胞已被广泛应用于临床治疗神经退行性相关疾病,但由于细胞在受损伤部位的存活率和迁移率低,从而降低了其疗效。目的:探讨miR-31是否能提高骨髓间充质干细胞的迁移和增殖能力。方法:培养和鉴定C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞,将细胞分为对照组、miR-31 agomir组和miR-31 antagomir组。将第3代骨髓间充质干细胞接种于6孔板(1×105/孔),待细胞达到50%-80%融合度,将miR-31 agomir和miR-31 antagomir用不含血清的DMEM/F12培养基稀释后添加到6孔板,转染24 h后,用CCK-8分析细胞的增殖水平以及Transwell实验分析细胞的迁移能力,Western blot检测基质金属蛋白酶2和CXC趋化因子受体4的蛋白表达。结果与结论:①在不加转染试剂的情况下将miR-31成功转染至骨髓间充质干细胞,并发出红色荧光;②转染后,与对照组相比,miR-31 agomir组细胞的增殖能力增强,与时间呈正比(P<0.05);与对照组相比,miR-31 agomir组细胞的迁移能力增强(P<0.05),基质金属蛋白酶2和CXC趋化因子受体4蛋白表达上调(P<0.05);③结果表明,miR-31可以提高骨髓间充质干细胞的增殖能力,并且促进骨髓间充质干细胞的迁移,这为间充质干细胞高效靶向迁移至损伤部位奠定了基础。

关键词：间充质干细胞骨髓间充质干细胞 microRNA miR-31 细胞迁移脊髓损伤 CCXC趋化因子受体4 基质金属蛋白酶2

人脐带间充质干细胞移植对慢性应激模型小鼠抑郁行为的改善作用

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解剖学报 2021年第4期52卷 528-535页

作者：赵碧春李承罡张玉娟杜若琛原一桐张茹鑫王春芳山西医科大学实验动物中心太原030001 山西医科大学第二医院骨科太原030001

目的探讨人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)尾静脉移植对慢性不可预测性温和应激(CUMS)模型小鼠抑郁行为的改善作用。方法获得第3代hUCMSCs;将60只C57BL/6雄性小鼠随机分为正常组、模型组(给予生理盐水)、细胞组(移植hUCMSCs)、氟西汀(flu)... 详细信息

目的探讨人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)尾静脉移植对慢性不可预测性温和应激(CUMS)模型小鼠抑郁行为的改善作用。方法获得第3代hUCMSCs;将60只C57BL/6雄性小鼠随机分为正常组、模型组(给予生理盐水)、细胞组(移植hUCMSCs)、氟西汀(flu)给药组(给予flu),每组15只。构建6周CUMS小鼠抑郁模型;从第3周开始将hUCMSCs、生理盐水以尾静脉注射的方式移植给小鼠;从第5周开始每天给予小鼠flu灌胃;记录各组小鼠每周的体重变化;通过蔗糖偏好实验、悬尾实验、强迫游泳实验及旷场实验评估小鼠抑郁模型及治疗效果;HE染色观察海马CA1及CA3区细胞变化;透射电子显微镜检测海马CA3区突触的超微结构变化;Real-time PCR检测海马突触可塑性关键蛋白突触素(SYP)和突触后致密物95(PSD-95)的mRNA表达情况。结果hUCMSCs可以改善因CUMS导致的小鼠体重下降;行为学实验观察到,模型组小鼠出现抑郁行为,细胞组和给药组小鼠抑郁行为得到改善;HE染色观察到,与模型组相比,细胞组和给药组小鼠海马CA1及CA3区细胞排列整齐,数量增多;透射电子显微镜观察到,与模型组相比,细胞组和给药组海马CA3区亚细胞结构突触数量更多,突触间隙更窄,突触棘密度更大;Real-time PCR检测到,细胞组和给药组比模型组SYP和PSD-95的mRNA表达更多。结论hUCMSCs移植具有抗抑郁作用,这种作用与改善海马的突触可塑性有关。

关键词：人脐带间充质干细胞抑郁突触可塑性慢性不可预测性温和应激实时定量聚合酶链反应透射电子显微术小鼠

人脐带间充质干细胞治疗脊髓损伤有效性与安全性的Meta分析

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中国组织工程研究 2022年第25期26卷 4093-4100页

作者：石尧韩树峰原一桐杜若琛景志杰赵碧春张茹鑫张玉娟王春芳山西医科大学山西省太原市030001 山西医科大学第一医院山西省太原市030001 山西医科大学实验动物中心山西省太原市030001

目的:目前脊髓损伤仍缺乏十分有效的治疗手段,细胞治疗可能是一种很有前景的治疗手段,其中人脐带间充质干细胞由于其具有易获取、低成本、伦理争议少和免疫原性低等优点受到广泛关注。但目前临床上并没有大范围使用人脐带间充质干细胞,... 详细信息

目的:目前脊髓损伤仍缺乏十分有效的治疗手段,细胞治疗可能是一种很有前景的治疗手段,其中人脐带间充质干细胞由于其具有易获取、低成本、伦理争议少和免疫原性低等优点受到广泛关注。但目前临床上并没有大范围使用人脐带间充质干细胞,对其有效性和安全性还有争议。文章使用Meta分析来评价人脐带间充质干细胞治疗脊髓损伤的有效性和安全性。方法:应用计算机检索英文数据库(PubMed、Web of Science、Cochrane、EMbase)和中文数据库(中国知网、万方医学网和维普数据库),搜集人脐带间充质干细胞治疗脊髓损伤的临床研究文献,检索时间为各数据库建库至2021年4月。由2位研究人员独立阅读纳入文献、提取资料和评价质量,随机对照试验使用改良Jadad评分量表对纳入文献进行评分,并使用Cochrane风险偏倚评估工具进行偏倚风险评估,队列研究采用NOS量表进行评价,使用RevMan 5.3软件进行Meta分析。结果:共纳入10篇文献,370例患者,包括6篇随机对照试验,4篇队列研究,文献总体质量较高。Meta分析结果显示:①人脐带间充质干细胞移植组的ASIA感觉功能评分(MD=5.20,95%CI:3.50-6.90,P<0.00001)、AIS分级改善率(RR=2.26,95%CI:1.40-3.65,P=0.0008)、日常生活能力评分(Barthel指数)(MD=5.12,95%CI:1.04-9.20,P=0.01)均高于对照组;②人脐带间充质干细胞移植组在ASIA运动功能评分(MD=3.48,95%CI:-0.14-7.10,P=0.06)、ASIA感觉功能评分中细化的针刺觉(MD=7.58,95%CI:-0.44-15.59,P=0.06)、轻触觉(MD=7.67,95%CI:-0.42-15.77,P=0.06)评分方面,与对照组相比差异无显著性意义;③敏感性分析结果显示,在人脐带间充质干细胞移植组ASIA运动功能评分高于对照组(MD=6.14,95%CI:4.46-7.81,P<0.00001),在日常生活能力评分方面,结论与之前保持一致。纳入的10篇文献中,均报道未有严重不良反应发生,但是个别病例存在轻微的不良反应,经对症治疗后均消失。结论:现有的临床证据表明,人脐带间充质干细胞治疗脊髓损伤安全有效,患者的感觉和运动功能以及日常生活能力可得到显著改善。

关键词：脊髓损伤干细胞治疗间充质干细胞人脐带间充质干细胞 ASIA评分 AIS分级日常生活能力评分 Meta分析

神经干细胞联合骨髓间充质干细胞移植对小鼠脊髓损伤的修复作用

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神经解剖学杂志 2021年第2期37卷 168-174页

作者：赵碧春原一桐杜若琛石尧李宵张茹鑫王春芳山西医科大学实验动物中心太原030000 山西医科大学第一临床医学院太原030000

目的:研究神经干细胞(NSCs)联合骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对小鼠脊髓损伤(SCI)的作用。方法:分别培养与鉴定绿色荧光蛋白(e GFP)转基因小鼠的NSCs与td Tomato红色荧光蛋白转基因小鼠的BMSCs;将两种细胞进行Transwell共培养,并用免疫... 详细信息

目的:研究神经干细胞(NSCs)联合骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对小鼠脊髓损伤(SCI)的作用。方法:分别培养与鉴定绿色荧光蛋白(e GFP)转基因小鼠的NSCs与td Tomato红色荧光蛋白转基因小鼠的BMSCs;将两种细胞进行Transwell共培养,并用免疫荧光染色观察巢蛋白(nestin)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达,鉴定BMSCs的分化情况;将24只3月龄雌性小鼠随机分为3组:对照组(control)、移植组(BMSCs)和共培养BMSCs移植组(BMSCs+NSCs),利用撞击法制备小鼠SCI模型,并在损伤局部移植细胞和培养基,利用BMS评分在不同时间点评估小鼠脊髓功能恢复情况;Western Blot检测脊髓损伤部位的神经生长因子(NGF)和脑源性神经营养因子(BDNF)的蛋白表达水平。结果:荧光倒置显微镜下可见分离培养的NSCs呈现绿色荧光,BMSCs呈现红色荧光,经细胞免疫荧光检测可见共培养后的BMSCs阳性表达神经干细胞和神经元特异性标记物,BMS评分结果显示细胞移植5 d后,移植组和共培养BMSCs移植组小鼠有差异,第7 d差异最明显,Western Blot结果显示共培养BMSCs移植组NGF和BDNF蛋白表达水平高于移植组和对照组。结论:小鼠NSCs与BMSCs在Transwell小室中共培养后,有利于BMSCs向神经方向分化,并有利于SCI小鼠运动功能的恢复。

关键词：脊髓损伤 Transwell共培养神经干细胞骨髓间充质干细胞小鼠

小鼠海马结构与脊髓损伤后抑郁症高发病率的关系研究

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中国病理生理杂志 2020年第3期36卷 461-467页

作者：王雅丽杜若琛高渊涛李宵李承罡原一桐王菲田峰李鹏飞王春芳山西医科大学实验动物中心山西太原030001 南昌大学江西南昌330000 山西医科大学第二医院骨科山西太原030013

目的:探究脊髓损伤引发的抑郁高风险率是否与海马生理结构的改变有关。方法:制作小鼠脊髓损伤模型,分别在损伤后不同时期采用Basso Mouse Scale(BMS)评分对小鼠术后运动功能进行评估;并通过糖水偏好实验和悬尾实验评估小鼠的抑郁情况;H... 详细信息

目的:探究脊髓损伤引发的抑郁高风险率是否与海马生理结构的改变有关。方法:制作小鼠脊髓损伤模型,分别在损伤后不同时期采用Basso Mouse Scale(BMS)评分对小鼠术后运动功能进行评估;并通过糖水偏好实验和悬尾实验评估小鼠的抑郁情况;HE染色观察海马组织内部细胞的变化;电镜观察海马亚细胞结构突触的结构变化;RT-qPCR检测突触蛋白标志物突触小泡蛋白(SYP)和突触后致密蛋白95(PSD-95)在mRNA水平上的变化。结果:行为学实验显示模型组小鼠有显著的抑郁行为,且在第7天抑郁程度最显著(P<0.01);HE染色显示,与对照组相比,模型组海马细胞排列紊乱,数量减少,形态欠规则;电镜结果显示,与对照组相比,模型组海马超微结构突触数量减少,突触活动区长度变短,突触后致密物厚度变薄,突触间隙宽度增加,突触界面曲率减小(P<0.05);RT-qPCR结果显示模型组SYP和PSD-95 mRNA表达水平较对照组降低(P<0.05)。结论:海马生理结构的改变是脊髓损伤后抑郁症高风险的原因之一。

关键词：脊髓损伤抑郁症海马突触

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miR-31改善2型糖尿病小鼠的肝损伤

中国生物化学与分子生物学报 2022年第9期38卷 1226-1233页

作者：付媛王宇斐何金凤杜若琛原一桐张玉娟王春芳张轩萍山西医科大学基础医学院药理学教研室山西晋中030619 山西医科大学实验动物中心太原030001

2型糖尿病(type 2 diabetes,T2DM)是一种代谢性疾病,在世界范围内发病率逐年增高,会导致肝等多种组织器官损伤。miR-31在不同物种间是保守的,与代谢性疾病密切相关,但在2型糖尿病肝损伤中的作用尚未阐明。本研究的目的为探究miR-31对2... 详细信息

2型糖尿病(type 2 diabetes,T2DM)是一种代谢性疾病,在世界范围内发病率逐年增高,会导致肝等多种组织器官损伤。miR-31在不同物种间是保守的,与代谢性疾病密切相关,但在2型糖尿病肝损伤中的作用尚未阐明。本研究的目的为探究miR-31对2型糖尿病肝损伤的影响及其潜在的作用机制。取4~6周龄雄性FVB小鼠与筛选为阳性的过表达miR-31转基因小鼠,随机分为FVB小鼠对照组(C)、FVB小鼠诱导糖尿病组(DM)和过表达miR-31转基因小鼠诱导糖尿病组(31DM)。适应性喂养1周,采用高脂喂养联合腹腔注射链脲佐霉素(STZ)诱导T2DM小鼠模型,继续喂养6周。小鼠的一般情况及相关代谢指标显示,miR-31改善了T2DM小鼠的摄食饮水量升高,体重减轻及糖脂代谢紊乱。HE染色及肝组织学活动指数(histological activity index,HAI)评分结果显示,miR-31改善了T2DM小鼠肝组织中的炎症状况,降低了HAI评分。RT-qPCR结果显示,T2DM小鼠肝中miR-31高表达伴随转录激活因子6(activating transcription factor 6,ATF6)mRNA的表达降低。进一步Western印迹结果表明,miR-31抑制了T2DM小鼠肝中内质网应激相关蛋白质,例如ATF6、葡萄糖调节蛋白78(glucoregulatory protein 78,GRP78)和C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)的表达。综上所述,miR-31可能通过调节糖脂代谢紊乱和胰岛素抵抗,抑制ATF6、GRP78和CHOP等内质网应激因子,从而改善T2DM小鼠的肝损伤。

关键词： 2型糖尿病微RNA miR-31 内质网应激肝损伤

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长时程抑郁小鼠模型建立及行为与神经病理特征观察

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中国实验动物学报 2020年第3期28卷 358-363页

作者：田野栗鋆原一桐杜若琛李宵王菲王雅丽邵宏元王春芳山西医科大学太原030001 山西省人民医院太原030001

目的构建新型长时程抑郁模型(long-term depression model,LTD)小鼠,并对比此种小鼠与常见抑郁小鼠模型的优劣。方法通过早期母婴分离,以及断乳后持续慢性应激来构建LTD小鼠,对比其与慢性不可预知温和刺激模型(chronic unpredictable wi... 详细信息

目的构建新型长时程抑郁模型(long-term depression model,LTD)小鼠,并对比此种小鼠与常见抑郁小鼠模型的优劣。方法通过早期母婴分离,以及断乳后持续慢性应激来构建LTD小鼠,对比其与慢性不可预知温和刺激模型(chronic unpredictable wild stress,CUMS)、早期应激模型(early life stress model,ELS)小鼠长期抑郁样行为改变,并对比e GFP转基因的LTD小鼠与对照小鼠海马神经元变化。结果与CUMS、ELS小鼠相比,LTD小鼠在行为学上能更长期的表现出稳定的抑郁状态,组织切片显示LTD小鼠海马CA1区和CA3区呈退行性变性。结论成功的构建了LTD小鼠,此模型小鼠能导致更长久抑郁样行为,表现出长期的心理应激状态,是一种适合用于长期模拟抑郁状态的模式小鼠。

关键词：抑郁症工具鼠行为学应激

人脐带间充质干细胞对自然衰老大鼠海马自噬水平的影响

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中国实验动物学报 2020年第6期28卷 796-804页

作者：张茹鑫李承罡杜若琛原一桐李宵赵碧春张玉娟王春芳山西医科大学实验动物中心太原030001 山西医科大学第二医院太原030001

目的本研究探究移植人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,h UCMSCs)是否能通过调节自然衰老大鼠自噬水平来改善学习记忆及认知衰退。方法 SD大鼠屏障环境饲养至衰老年龄(24月龄),行为学挑选出认知衰退明显... 详细信息

目的本研究探究移植人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,h UCMSCs)是否能通过调节自然衰老大鼠自噬水平来改善学习记忆及认知衰退。方法 SD大鼠屏障环境饲养至衰老年龄(24月龄),行为学挑选出认知衰退明显的老年鼠,分为细胞移植组(H组)和生理盐水组(C组),3月龄SD大鼠为正常组(N组)。H组:尾静脉注射hUCMSCs细胞混悬液500μL,剂量为每只2×106个,C组和N组分别尾静脉注射无菌生理盐水。时间均为每周1次,连续4周。通过Morris水迷宫,Y迷宫及新物体识别实验观察其学习记忆能力变化;通过HE染色观察大鼠海马神经元形态改变;通过Western Blot检测海马LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1、P62的相对表达量。结果 (1)行为学结果显示H组和N组学习记忆能力显著高于C组。(2) HE染色中H组和N组海马CA1区和DG区神经细胞排列较规整,细胞结构完整,细胞核饱满,C组CA1区神经元数量减少,细胞排列疏松,细胞核固缩,呈退行性病变。(3) H组和N组中P62蛋白含量显著低于C组,Beclin1和LC3Ⅱ/Ⅰ显著高于C组。结论静脉注射人脐带间充质干细胞改善自然衰老大鼠的学习记忆及认知衰退,可能与干预后自噬水平的恢复有关。

关键词：衰老自噬人脐带间充质干细胞认知衰退大鼠