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血流感染肺炎克雷伯菌的耐药及毒力研究

血流感染肺炎克雷伯菌的耐药及毒力研究

作者：杜芳玲南昌大学

学位级别：硕士

目的:1.研究血流感染中耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的临床感染流行特征、危险因素、耐药性及毒力特征。2.研究血流感染中共携带KPC-2质粒和pLVPK样毒力质粒耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的临床感染流行特征、耐药性、毒力特征和分子流行病学。3... 详细信息

目的:1.研究血流感染中耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的临床感染流行特征、危险因素、耐药性及毒力特征。2.研究血流感染中共携带KPC-2质粒和pLVPK样毒力质粒耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的临床感染流行特征、耐药性、毒力特征和分子流行病学。3.研究高毒力肺炎克雷伯菌毒力质粒与高毒力表型之间的关系及其转移性。方法:1.收集2016年6月-2019年6月南昌大学第一附属医院血流感染患者中的肺炎克雷伯菌248株,采用Vitek2-Compact全自动细菌鉴定仪进行生化鉴定和药敏实验。在医院的病例系统查询临床资料,采用PCR和测序方法检测菌株的耐药基因、荚膜血清型基因和毒力基因。通过药敏资料将菌株分为碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)和碳青霉烯类敏感肺炎克雷伯菌(CSKP)。通过SPSS21分析CRKP组和CSKP组的临床资料、药敏资料、耐药基因、荚膜血清型基因和毒力基因,得出血流感染中CRKP的临床感染特征、危险因素、耐药特征及毒力特征。2.从第一部分的菌株中,通过KPC-2基因及pLVPK样毒力质粒相关基因初步筛选,再通过S1-PFGE和southern blot实验筛选出24株共携带KPC-2质粒和pLVPK样毒力质粒的CRKP。在医院的病历系统查询临床资料;采用PCR和测序检测菌株的耐药基因、荚膜血清型基因和毒力基因;通过S1-PFGE和southern blot实验对KPC-2质粒和pLVPK样毒力质粒进行定位;MLST分型、WZI分型和PFGE分析菌株的亲源性;蜡螟幼虫感染模型分析菌株的毒力。3.对第一部分菌株回顾性基因组研究筛选出高毒力肺炎克雷伯菌AP8555,并对其进行全基因组测序,分析染色体和毒力质粒基因组学,并与已经完成测序的菌株基因组进行比较,接合实验分析毒力质粒的转移性,并通过结晶紫法测定其生物膜形成能力,血清抗性试验、蜡螟幼虫感染模型以及体外感染小鼠致死实验的结果来反映其毒力。结果:1、多因素logistic回归分析显示入住ICU、肾脏疾病、烧伤、机械通气、留置导尿管、留置引流管、碳青霉烯类抗生素使用和替加环素使用是碳青霉烯类抗生素耐药的独立危险因素(P0.05),但有9株菌株毒力比高毒力标准菌株NTUH-K2044低(P<0.05)。3.对第一部分菌株回顾性基因组研究筛选出高毒力肺炎克雷伯菌***8555菌株是携带一种新型毒力质粒的ST23型hvKP菌株,该菌株在危重病人中引起了转移性感染和致命的败血性休克。蜡螟幼虫感染显示接种1×10 cfu菌株在36小时内杀死100%的蜡螟幼虫。小鼠致死实验显示小鼠LD50为2.5×10cfu,表现出高毒力表型。结合实验表明该毒力质粒能以约3.2×10的频率转移到受体菌大肠杆菌J53。全基因组测序结果表明,AP8555由一条5.46Mb染色体和一个大毒力质粒组成。毒力质粒pAP8555的大小为357.8kb,除了编码IV型分泌系统(T4SS)成分和毒素抗毒素(TA)系统同源物的额外130kb区域外,与先前报道的各种已知的pLVPK样质粒在结构上几乎相似。结论:1.本院血流感染中CR-KP菌以KPC为主,但也存在NDM的流行

关键词：肺炎克雷伯菌血流感染碳青霉烯酶危险因素质粒毒力分子流行病学

高毒力肺炎克雷伯菌中CRISPR-Cas系统的分布及其与毒力和耐药的关系

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中国感染与化疗杂志 2020年第2期20卷 163-168页

作者：廖文建祝兰兰杜芳玲龙丹张伟刘洋南昌大学第一附属医院呼吸科南昌330006

目的了解高毒力肺炎克雷伯菌中CRISPR-Cas系统的分布特征,并探究其与毒力和耐药的关系。方法收集非重复高毒力肺炎克雷伯菌61株,使用VITEK 2-Compact全自动微生物分析系统进行菌株鉴定及药物敏感性分析,PCR检测CRISPR-Cas系统4个相关基... 详细信息

目的了解高毒力肺炎克雷伯菌中CRISPR-Cas系统的分布特征,并探究其与毒力和耐药的关系。方法收集非重复高毒力肺炎克雷伯菌61株,使用VITEK 2-Compact全自动微生物分析系统进行菌株鉴定及药物敏感性分析,PCR检测CRISPR-Cas系统4个相关基因(Cas1、Cas3、CRISPR1和CRISPR2)、筛查荚膜血清分型基因K1/K2、14种毒力基因及14种耐药基因,用χ2检验比较CRISPR-Cas系统阳性菌株与阴性菌株毒力基因及耐药差异。大蜡螟毒力实验分析比较两组细菌的毒力差异,并且采用多位点序列分型(MLST)分析所有高毒力肺炎克雷伯菌分子分型与CRISPR-Cas系统的关系。结果CRISPR-Cas系统阳性检出率为34.4%(21/61),所有CRISPR-Cas系统阳性的菌株均为ST23型K1菌株,除毒力基因kpn、repA外,CRISPR-Cas系统阳性的高毒力肺炎克雷伯菌携带毒力基因阳性率均大于对应的阴性菌,其中5种毒力基因差异具有显著统计学意义。除耐药基因blaNDM-1、qnrB外,CRISPR-Cas系统阳性高毒力肺炎克雷伯菌的8种耐药基因阳性率均小于对应的阴性菌株,差异具有显著统计学意义。CRISPR-Cas系统阳性高毒力肺炎克雷伯菌感染大蜡螟平均半数生存时间少于对应的阴性菌感染,差异具有统计学意义。MLST结果表明高毒力肺炎克雷伯菌CRISPR-Cas系统分布与分型密切相关。结论CRISPR-Cas系统阳性高毒力肺炎克雷伯菌主要为ST23型K1菌株,CRISPR-Cas系统阳性肺炎克雷伯菌相对于阴性菌株的毒力强,毒力基因阳性率高,耐药率低,耐药基因的阳性率低。临床上应警惕CRISPR-Cas系统阴性ST11型“碳青霉烯类耐药高毒力肺炎克雷伯菌”的暴发,此类细菌进化获得毒力质粒pLVPK毒力强、高度耐药、传播性强,可能成为危害公共健康并难以控制的超级细菌。

关键词：高毒力肺炎克雷伯菌 CRISPR-Cas 细菌毒力细菌耐药性

侵蚀艾肯菌引起肝脓肿及邻近皮下组织脓肿1例

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中国感染与化疗杂志 2019年第1期19卷 90-91页

作者：魏丹丹刘洋杜芳玲万腊根南昌大学第一附属医院检验科南昌330006

侵蚀艾肯菌(Eikenella corrodens)是人类黏膜表面的常居菌之一,当机体免疫力低下、黏膜表面外伤导致防御能力破坏,可入侵周围组织而发生感染,引起心内膜炎、脑膜炎、骨髓炎、化脓性关节炎、肺炎及手术后软组织脓肿等[1]。我们自1例肝脓... 详细信息

侵蚀艾肯菌(Eikenella corrodens)是人类黏膜表面的常居菌之一,当机体免疫力低下、黏膜表面外伤导致防御能力破坏,可入侵周围组织而发生感染,引起心内膜炎、脑膜炎、骨髓炎、化脓性关节炎、肺炎及手术后软组织脓肿等[1]。我们自1例肝脓肿及邻近皮下组织脓肿患者的穿刺液中分离出侵蚀艾肯菌,现报道如下。

关键词：侵蚀艾肯菌肝脓肿皮下组织脓肿

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2015年

作者：吴韦余辉

来源：南通市图书馆图书评论

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语文课堂朗读教学的有效性策略

汉字文化 2020年第12期 98-99页

作者：杜芳玲甘肃省临洮县第二实验小学 730500

语文学科的教学中,朗读是一种比较常见的方式。学生在课前预习阶段大声的朗读课文是获取知识最直接的方式。实施朗读教学的过程中,教师应该注重学生朗读的方式,从而表现出朗读文章的意境和内涵。朗读能够帮助学生更好的理解语文知识,达... 详细信息

语文学科的教学中,朗读是一种比较常见的方式。学生在课前预习阶段大声的朗读课文是获取知识最直接的方式。实施朗读教学的过程中,教师应该注重学生朗读的方式,从而表现出朗读文章的意境和内涵。朗读能够帮助学生更好的理解语文知识,达到良好的应用效果,提升课堂教学效率。本篇文章探究了小学语文课堂中实现朗读教学的有效性策略,以下观点仅供参考和借鉴。

关键词：语文课堂朗读教学有效策略

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当今世界赛艇项目竞技实力研究

运动 2018年第24期 47-49页

作者：杜芳玲陕西省水上运动管理中心

本文运用文献资料法、数量统计法等对里约奥运会和2017年、2018年世界赛艇锦标赛各国奖牌获得情况进行统计,并结合五大洲国家赛艇发展历史与比赛成绩来描绘出里约奥运会后世界各国赛艇的竞争实力与发展趋势,以期为我国赛艇项目在今后的... 详细信息

本文运用文献资料法、数量统计法等对里约奥运会和2017年、2018年世界赛艇锦标赛各国奖牌获得情况进行统计,并结合五大洲国家赛艇发展历史与比赛成绩来描绘出里约奥运会后世界各国赛艇的竞争实力与发展趋势,以期为我国赛艇项目在今后的世界大赛和东京奥运会中取得优异成绩提高理论参考。

关键词：奥运会赛艇世锦赛实力欧洲中国

重症医学科血流感染耐碳青霉烯类高黏液型肺炎克雷伯菌的临床及分子特征

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中国感染与化疗杂志 2020年第2期20卷 181-186页

作者：杜芳玲魏丹丹梅艳芳龙丹万腊根刘洋南昌大学第一附属医院检验科南昌330006

目的分析医院重症医学科(ICU)血流感染患者检出的耐碳青霉烯类高黏液型肺炎克雷伯菌(CR-HMKP)的临床及分子特征。方法2016年1月-2018年12月从ICU血流感染患者中分离40株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CR-KP),通过拉丝试验分为14株CR-HMKP菌... 详细信息

目的分析医院重症医学科(ICU)血流感染患者检出的耐碳青霉烯类高黏液型肺炎克雷伯菌(CR-HMKP)的临床及分子特征。方法2016年1月-2018年12月从ICU血流感染患者中分离40株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CR-KP),通过拉丝试验分为14株CR-HMKP菌和26株CR-非HMKP菌,分析菌株的临床和药敏资料,采用PCR检测菌株的耐药基因、毒力基因及血清荚膜分型,多位点序列分型(MLST)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法分析细菌的分子流行病学特征。结果CR-HMKP在CR-KP中的检出率为35.0%。CR-KP感染患者均接受两种或两种以上侵袭性操作和联合使用多种抗生素。CR-HMKP菌株感染患者60岁以上的占比、糖尿病患病率、死亡率比CR-非HMKP菌株感染患者高,且差异有统计学意义(P<0.05)。CR-KP菌株均为多重耐药(MDR)菌,CR-HMKP菌株对庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星的耐药率比CR-非HMKP菌株低,且差异有统计学意义(P<0.05)。碳青霉烯酶基因以KPC为主(95.0%),rmtB基因在CR-HMKP菌株的检出率小于CR-非HMKP菌株,且差异有统计学意义(P<0.01)。CR-HMKP菌株中仅检出1株K2型菌株,rmpA、iutA、rmpA2三种毒力基因在CR-HMKP菌株的检出率均大于CR-非HMKP菌株,且差异有统计学意义(P<0.01)。PFGE和MLST显示CR-HMKP分为A、B型,A型(n=13,92.9%)均为ST11型,B型(n=1,7.1%)为ST65型。结论ICU血流感染患者分离的CR-HMKP菌株以ST11型为主,均为MDR菌,携带多种耐药基因与毒力基因,且患者死亡率高,应加强防控。CRHMKP与CR-非HMKP对氨基糖苷类抗生素的耐药情况有差别,临床在治疗过程中应区别对待。

关键词：肺炎克雷伯菌高黏性毒力基因碳青霉烯类,耐药重症医学科

高毒力肺炎克雷伯菌诱导人外周血中性粒细胞凋亡延迟及其影响核因子-κB的潜在机制

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中国感染与化疗杂志 2018年第4期18卷 389-393页

作者：杜芳玲王莲慧魏丹丹万腊根张伟刘洋南昌大学第一附属医院检验科南昌330006

目的了解高毒力肺炎克雷伯菌(hv KP)和普通肺炎克雷伯菌(non-hv KP)对人外周血中性粒细胞凋亡及呼吸爆发功能的影响与差异,探讨hv KP影响核因子-κB(NF-κB)诱导中性粒细胞凋亡的潜在作用机制。方法离体检测hv KP和non-hv KP感染患者外... 详细信息

目的了解高毒力肺炎克雷伯菌(hv KP)和普通肺炎克雷伯菌(non-hv KP)对人外周血中性粒细胞凋亡及呼吸爆发功能的影响与差异,探讨hv KP影响核因子-κB(NF-κB)诱导中性粒细胞凋亡的潜在作用机制。方法离体检测hv KP和non-hv KP感染患者外周血中性粒细胞的凋亡情况。取健康成人外周血分离中性粒细胞,设0.9%Na Cl溶液对照组、hv KP组和non-hv KP组,各组分别刺激中性粒细胞0、3、6、9 h后,采用FITC-Annexin V/PI荧光标记流式细胞术检测细胞凋亡情况,采用流式细胞术检测细胞的呼吸爆发功能,采用Western blot检测感染后中性粒细胞NF-κB的表达水平。结果 hv KP组各个时间点的中性粒细胞凋亡率显著低于non-hv KP组(P<0.01)。体外研究显示,non-hv KP组各个时间点的中性粒细胞凋亡率显著高于hv KP组和对照组(P<0.01);hv KP组中性粒细胞的呼吸爆发率显著低于non-hv KP组(P<0.01)。Western blot检测发现随着感染时间的增加,hv KP感染人中性粒细胞的p65蛋白表达量显著高于non-hv KP(P<0.01)。结论hv KP可通过上调p65蛋白表达从而抑制NF-κB信号途径,导致中性粒细胞凋亡延迟,但却可降低中性粒细胞的呼吸爆发能力,其或可在hv KP感染致病中发挥重要作用。

关键词：肺炎克雷伯菌,高毒力凋亡延迟呼吸爆发

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我国赛艇专业运动队管理的问题及对策

当代体育科技 2020年第3期10卷 221-221,223页

作者：杜芳玲高国荣陕西省水上运动管理中心陕西咸阳712100 榆林体育运动学校陕西榆林719000

在我国,竞技体育非常特殊,最早实行了世界上独有的举国体制,在这样的背景下管理因素显得尤其重要,认为"三分训练,七分管理"。随着社会发展,现行体制、机制出现了一定的问题,但更重要的是有着独特优势,并为中国竞技体育在2008年奥运会取... 详细信息

在我国,竞技体育非常特殊,最早实行了世界上独有的举国体制,在这样的背景下管理因素显得尤其重要,认为"三分训练,七分管理"。随着社会发展,现行体制、机制出现了一定的问题,但更重要的是有着独特优势,并为中国竞技体育在2008年奥运会取得金牌总数世界第一发挥了极其重要的作用,世界诸多国家已开始学习我国的举国体制。

关键词：赛艇专业运动队运动队管理