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丙型肝炎病毒基因分型的研究进展

中华检验医学杂志 2006年第5期29卷 469-471页

作者：张瑞杜绍财北京大学人民医院北京大学肝病研究所 100044

丙型肝炎病毒(HCV)属于黄病毒科(Flaviviridae),其基因组为单股正链RNA,易变异,目前可分为6个基因型及不同亚型,根据2005年新达成的HCV基因型命名规则共识[1],以阿拉伯数字表示HCV基因型,以小写的英文字母表示基因的亚型(如1a、2b、3c... 详细信息

丙型肝炎病毒(HCV)属于黄病毒科(Flaviviridae),其基因组为单股正链RNA,易变异,目前可分为6个基因型及不同亚型,根据2005年新达成的HCV基因型命名规则共识[1],以阿拉伯数字表示HCV基因型,以小写的英文字母表示基因的亚型(如1a、2b、3c等).由于1型和4型对于聚乙二醇干扰素联合利巴韦林标准化治疗较2型和3型更为耐药,因此HCV基因型检测在临床上具有重要意义.2004年中国[2]指出,HCV RNA基因分型有助于判定治疗的难易程度及制定抗病毒治疗的个体化方案。

关键词：丙型肝炎病毒(HCV) 病毒基因分型单股正链RNA HCV基因型聚乙二醇干扰素标准化治疗不同亚型基因型检测个体化方案抗病毒治疗

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HGV RT PCR在血制品检验中的应用

中国输血杂志 1997年第3期10卷 149-150页

作者：杜绍财朱凌北京医科大学第二临床学院肝病研究所

ＨＧＶＲＴＰＣＲ在血制品检验中的应用１０００４４北京医科大学第二临床学院肝病研究所杜绍财朱凌自从ＧＢＶ－Ｃ和ＨＧＶ被命名庚型肝炎病毒以来［１，２］，国外已有庚型肝炎病毒在多次输血的病人及静脉吸毒者和血友病患者中感染率... 详细信息

ＨＧＶＲＴＰＣＲ在血制品检验中的应用１０００４４北京医科大学第二临床学院肝病研究所杜绍财朱凌自从ＧＢＶ－Ｃ和ＨＧＶ被命名庚型肝炎病毒以来［１，２］，国外已有庚型肝炎病毒在多次输血的病人及静脉吸毒者和血友病患者中感染率较高的报道。值得注意的是在慢性ＨＣ...

关键词：血液制品检验应用 HGV 庚型肝炎病毒

尿苷酶在丙型肝炎病毒逆转录-抗污染-联体聚合酶链反应中的应用

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北京大学学报（医学版） 2007年第4期39卷 426-428页

作者：杜绍财张瑞李俊强魏来北京大学人民医院北京大学肝病研究所北京100044 卫生部临床检验中心

目的:建立丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)逆转录-抗污染-联体聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR),并优化尿苷酶(Uracil-DNA glycosylase,UDG)的抗污染剂量和抗污染时间。方法:逆转录-抗污染-联体PCR技术的第1次PCR实行逆转录-抗污染-PCR同步化;第2次PCR经分层蜡处理进行全程抗污染,并应用该技术扩增HCV cDNA,制备全含脱氧尿嘧啶核苷酸(dUTP)的DNA(dU-DNA)为模板,作为UDG实验室抗污染质控对照并验证该联体PCR检测HCV RNA灵敏度,用DNA-酶免疫测定技术检测HCV cDNA。结果:抗污染实验结果证实,0.2u的UDG在37℃和42℃40min均可达到抗污染的效果。对高浓度全dU-DNA模板也有良好的抗污染效果。灵敏度检验结果表明,用HCV RNA浓度为2.110×105copies/mL的血清,稀释到10-4倍后仍可检测出HCV RNA。结论:应用该逆转录-抗污染-联体PCR技术进行全程抗污染,减少了因程序中多次加样造成的污染,为HCV逆转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)检测RNA提供良好的防污染和抗污染操作技术。

关键词：尿苷肝炎病毒逆转录聚合酶链反应

PCR法检测血清HBV-S、HBV-C基因

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生物工程进展 1991年第2期11卷 32-37页

作者：陈苹杜绍财陶其敏北京医科大学肝病研究所

聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,简称PCR),最早由美国Cetus公司Mullis等人发明的一项体外大量扩增目的基因的新方法,该法非常灵敏能使基因放大200多万倍。几年来,此技术已被广泛地应用于分子生物学、传染病和遗传性疾病的早... 详细信息

聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,简称PCR),最早由美国Cetus公司Mullis等人发明的一项体外大量扩增目的基因的新方法,该法非常灵敏能使基因放大200多万倍。几年来,此技术已被广泛地应用于分子生物学、传染病和遗传性疾病的早期诊断。 1989年Sumazaki等报导应用PCR技术扩增了乙型肝炎病毒C基因(HBV-C)

关键词： PCR 乙型肝炎病毒基因

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丙型肝炎病毒基因自然重组的研究现状

中华肝脏病杂志 2010年第11期18卷 878-880页

作者：张文杰李朝霞杜绍财甘肃省第二人民医院感染科兰州730000 北京大学人民医院肝病研究所

丙型肝炎病毒（HCV）于20世纪60年代后期首次被发现,曾被称为输血后非甲非乙型肝炎因子.1989年,Choc等应用分子克隆技术获得本病毒基因克隆,并命名为HCV.近年来,有多个国家先后出现关于HCV基因重组的报道,现作一综述.

关键词：肝炎丙型基因重组

乙型肝炎病毒表面抗原终止密码子的偏嗜性选择

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北京大学学报（医学版） 2008年第3期40卷 270-272页

作者：李俊强田敬华刘峰杜绍财北京大学人民医院北京大学肝病研究所北京100044 北京地坛医院

目的:探究乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)终止密码子的存在状况及偏嗜性。方法:从GenBank中选取各基因型的参考序列共174例;使用生物软件BioEdit进行序列比对,应用RNAdraw构建并分析其RNA二级结构。结果:(1)在174例参考序列中,HBsAg的终... 详细信息

目的:探究乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)终止密码子的存在状况及偏嗜性。方法:从GenBank中选取各基因型的参考序列共174例;使用生物软件BioEdit进行序列比对,应用RNAdraw构建并分析其RNA二级结构。结果:(1)在174例参考序列中,HBsAg的终止密码子共有TAA和TGA两种形式。其中TAA形式的有124例,占71.26%;TGA形式的有50例,占28.74%。(2)终止密码子的使用存在偏嗜性,并影响RNA的二级结构和蛋白质的编码氨基酸序列。结论:HBsAg终止密码子的使用偏嗜性客观存在,可能与进化过程中RNA结构和蛋白质功能的保守性相关。

关键词：肝炎病毒乙型密码子终止序列分析

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丙型肝炎病毒6a型感染的状态与分析

北京大学学报（医学版） 2006年第6期38卷 614-617页

作者：张瑞李俊强刘丽君杜绍财魏来北京大学人民医院北京大学肝病研究所北京100044

目的:初步探讨丙型肝炎病毒6 a型感染的状态。方法:对经HCV 5′非编码区(5′NCR)复合酶切分型结果为6 a的3例样本(95,126,150)进行5′NCR和NS5B区的扩增、测序,然后将5′NCR和NS5B区序列与24个HCV全基因参考序列(均来自GenBank)比对并... 详细信息

目的:初步探讨丙型肝炎病毒6 a型感染的状态。方法:对经HCV 5′非编码区(5′NCR)复合酶切分型结果为6 a的3例样本(95,126,150)进行5′NCR和NS5B区的扩增、测序,然后将5′NCR和NS5B区序列与24个HCV全基因参考序列(均来自GenBank)比对并构建遗传进化树。结果:对3例分型结果为6 a型的样品进行5′NCR序列分析发现,这3例样品都具有6 a型特征性的第-145位的CA碱基插入,且与6 a型参考序列Y12083的同源性最高,分别为0.993,0.987,0.993;进化树分析表明,3例样本都属于6 a型。然而NS5B区的序列分析结果表明,95,126,150在NS5B区与1b型参考序列HC-J4的同源性最高,分别为0.934,0.930,0.926;进化树分析结果也显示它们都属于1b型,两个区的分型结果完全不同。为排除引物扩增效率的问题,使用6 a型特异的引物对3例样品进行NS5B区扩增,3例样本扩增结果均为阴性。结论:我们发现的HCV 6 a型的感染中,存在3例样品5′NCR和NS5B区的分型结果不一致,尚无直接证据证明其是否发生了基因重组。但是,我们的结果提示,在两个或两个以上区域进行HCV分型是非常重要的,且HCV基因型之间的重组必须纳入到HCV分型的考虑中来。

关键词：肝炎病毒肝炎,丙型基因型重组,遗传

PCR实验加样器污染的解除方法及污染对微孔板杂交的影响

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中华检验医学杂志 2006年第7期29卷 662-663页

作者：杜绍财张瑞李俊强魏来北京大学人民医院北京大学肝病研究所100044

经多年来的分子生物学实验证实尿苷酶（UDG）是当前抗污染非常有效的试剂，在国家批准的体外诊断试剂中应用UDG抗污染已程序化。随着分子生物学学科发展。聚合酶链反应已在多学科的多项研究中推广和应用。而其预防污染和抗污染研究工作... 详细信息

经多年来的分子生物学实验证实尿苷酶（UDG）是当前抗污染非常有效的试剂，在国家批准的体外诊断试剂中应用UDG抗污染已程序化。随着分子生物学学科发展。聚合酶链反应已在多学科的多项研究中推广和应用。而其预防污染和抗污染研究工作依然极其重要。2000年我所曾对聚合酶链反应污染环节进行详细的分析和研究。

关键词：防污染微孔板杂交解除方法加样器 PCR 体外诊断试剂聚合酶链反应分子生物学实验污染环节

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中国丙型肝炎病毒基因型的进化树分析

临床检验杂志 2005年第3期23卷 165-167页

作者：邱国华张瑞杜绍财刘峰田园魏来北京大学人民医院肝病研究所北京100044

目的了解丙型肝炎病毒的基因型在中国的分布,对各基因型做遗传进化树分析。方法分型方法按5′端非编码区(5′NCR)ABC程序酶切分型技术进行。应用BsrBⅠ、HaeⅡ、HinfⅠ、BstUⅠ、HaeⅢ等5种限制性内切酶,对HCV阳性血清进行分型研究。对1... 详细信息

目的了解丙型肝炎病毒的基因型在中国的分布,对各基因型做遗传进化树分析。方法分型方法按5′端非编码区(5′NCR)ABC程序酶切分型技术进行。应用BsrBⅠ、HaeⅡ、HinfⅠ、BstUⅠ、HaeⅢ等5种限制性内切酶,对HCV阳性血清进行分型研究。对1a、3b基因型进行HCVNS5bPCR,测序。对5′NCR和NS5b进行遗传进化树分析。结果测序结果证实中国存在HCV3b和1a型;进化树分析结果表明第86、98、123株样品与3bD49374相关,获美国NCBI的GenBank认证;第61株与HC J1D107491a型相关;5′NCR测序结果证实第16、62株与HC J82b型相关。结果表明中国存在着HCV1a、2b、3b型的感染。结论经过遗传进化树分析证实了ABC程序酶切分型技术可准确地检测1a～6aHCV基因型。

关键词：丙型肝炎病毒中国病毒基因型进化树分析遗传因素实验室检查