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PLCε通过PKCα/β/TBX3/E-cadherin信号通路调节膀胱癌细胞的侵袭和迁移

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PLCε通过PKCα/β/TBX3/E-cadherin信号通路调节膀胱癌细胞的侵...

作者：杜红飞重庆医科大学

学位级别：硕士

第一部分PLCε shRNA通过PKCα/β/TBX3/E-cadherin信号通路抑制膀胱癌细胞的侵袭和迁移目的：体外实验研究PLC调节膀胱癌细胞侵袭和迁移的分子机制。方法：各处理因素作用于膀胱癌细胞株T24、BIU-87细胞后，采用划痕，transwell迁移、... 详细信息

第一部分PLCε shRNA通过PKCα/β/TBX3/E-cadherin信号通路抑制膀胱癌细胞的侵袭和迁移目的：体外实验研究PLC调节膀胱癌细胞侵袭和迁移的分子机制。方法：各处理因素作用于膀胱癌细胞株T24、BIU-87细胞后，采用划痕，transwell迁移、侵袭实验检测细胞的迁移、侵袭能力;QRT-PCR检测TBX3，E-cadherin的mRNA表达水平;Western blot检测PLC，PKC，PKCβ，p-PKC，p-PKCβ, TBX3和E-cadherin的蛋白表达水平;IHC检测膀胱癌组织中PLC，PKC，PKCβ的蛋白表达水平。结果：划痕，transwell迁移、侵袭实验显示：Ad-shPLC能够抑制膀胱癌细胞的迁移、侵袭能力。Western blot结果显示Ad-shPLC使PKC、PKCβ在细胞膜的分布减少，降低PKC、PKCβ的磷酸化水平。Western blot和IHC结果显示：PLC高表达膀胱癌组织与PLC低表达的膀胱癌组织相比较，PKC、PKCβ的磷酸化水平及在细胞膜的表达升高。Western blot和QRT-PCR结果显示：Ad-shPLC能够抑制TBX3的mRNA、蛋白表达，促进E-cadherin的mRNA、蛋白的表达。Ad-shPLC联合运用pGenesil-shTBX3处理细胞后，能够进一步增加E-cadherin的表达，抑制细胞的迁移;Ad-shPLC联合PKC、PKCβ的特异性抑制剂GO6976处理细胞后,较Ad-shPLC处理组，TBX3表达降低，E-cadherin表达增高，细胞的迁移、侵袭能力受到明显的抑制;Ad-shPLC联合PKC激活剂PMA处理细胞后，能够减少Ad-shPLC对细胞的迁移、侵袭能力得抑制作用，并能部分增加TBX3的蛋白表达及部分降低E-cadherin的蛋白表达水平。结论：PLC shRNA能够通过PKC/β/TBX3/E-cadherin通路抑制膀胱癌细胞的迁移、侵袭能力。第二部分PLCε shRNA对膀胱癌裸鼠移植瘤生长的影响及抑制膀胱癌侵袭和迁移机制的验证目的：体内实验研究PLC shRNA对膀胱癌裸鼠移植瘤生长的影响及验证PLC shRNA抑制膀胱癌侵袭和迁移的机制方法：将感染Ad-shPLC，Ad-HK及空白膀胱癌T24细胞分别种植于随机分的三组裸鼠皮下(每组3只)，形成膀胱癌皮下移植瘤，并定期监测裸鼠体重及瘤体体积，四周后处死裸鼠，切取瘤体，切片行H&E染色及免疫组化检测PLC，ki67, p-PKC，p-PKCβ, TBX3和E-cadherin的蛋白表达情况。结果：以3×106T24细胞种植于裸鼠皮下成功成瘤，感染Ad-shPLC T24细胞处理组肿瘤重量明显小于空白组及Ad-HK组，差异有统计学意义（p<0.05）;免疫组化结果显示，Ad-shPLC处理组与空白组、Ad-HK处理组比较, E-cadherin表达升高，PLC,ki67, p-PKC，p-PKCβ, TBX3表达降低。结论：PLC shRNA能够抑制裸鼠皮下瘤的生长，并上调E-cadherin及下调ki67, p-PKC，p-PKCβ, TBX3的表达。

关键词： PLC PKC /β TBX3 E-cadherin 膀胱细胞癌裸鼠 PLC ki67 p- PKC PKCβ

构建MicroRNA-29a和microRNA-29c腺病毒并探讨其对膀胱癌细胞增殖能力的影响

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中国细胞生物学学报 2014年第2期36卷 184-189页

作者：范砚茹杜红飞宋学东罗春丽重庆医科大学检验医学院重庆400016

构建miRNA-29a/c的重组腺病毒并观察其对膀胱癌T24细胞增殖能力的调控。以人全基因组DNA为模板,PCR扩增miR-29a、miR-29c,克隆至腺病毒穿梭载体pAdtrace-TO4-CMV。重组穿梭载体经pme I线性化后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化感受态大... 详细信息

构建miRNA-29a/c的重组腺病毒并观察其对膀胱癌T24细胞增殖能力的调控。以人全基因组DNA为模板,PCR扩增miR-29a、miR-29c,克隆至腺病毒穿梭载体pAdtrace-TO4-CMV。重组穿梭载体经pme I线性化后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化感受态大肠杆菌BJ5183,通过同源重组获得重组腺病毒质粒pAdEasy-1-miR-29a、pAdEasy-1-miR-29c,pac I线性化后转染HEK-293细胞,进行包装和扩增。实时荧光定量PCR检测感染腺病毒的膀胱癌T24细胞中miR-29a、miR-29c的表达水平,并利用CCK-8实验检测细胞增殖能力。经DNA测序和限制性内切酶分析显示,重组腺病毒质粒pAdEasy-1-miR-29a、pAdEasy-1-miR-29c构建成功;感染腺病毒Ad-miR-29a和Ad-miR-29c后,经实时荧光定量PCR检测,膀胱癌细胞中miR-29a、miR-29c表达显著增高(P<0.01);过表达miR-29a/c后的CCK-8实验显示,细胞增殖能力明显低于对照组(P<0.05)。以上说明已成功构建miR-29a、miR-29c腺病毒,过表达miR-29a/c可抑制膀胱癌细胞的增殖。

关键词： microRNA 29a microRNA 29c 腺病毒膀胱癌细胞增殖

老年性白内障患者血浆LncRNA生物标志物的筛选及鉴定

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眼科新进展 2019年第12期39卷 1171-1173页

作者：白婷婷杜红飞许颖成都医学院第一附属医院检验科

目的分析老年性白内障患者血浆中差异表达的LncRNA。方法收集来我院就诊的老年性白内障患者15例为病例组,性别、年龄相匹配的健康老年人15例为对照组。采用LncRNA芯片检测5例病例组与5例对照组患者混合血浆中的LncRNA差异表达谱。另外... 详细信息

目的分析老年性白内障患者血浆中差异表达的LncRNA。方法收集来我院就诊的老年性白内障患者15例为病例组,性别、年龄相匹配的健康老年人15例为对照组。采用LncRNA芯片检测5例病例组与5例对照组患者混合血浆中的LncRNA差异表达谱。另外再选取病例组与对照组各10例患者对初筛的LncRNA进行实时荧光定量PCR的验证。数据处理采用SPSS 16.0软件,数据间的差异性分析采用两独立样本t检验进行。结果病例组与对照组间存在差异的LncRNA共有91个,其中30个上调,61个下调。选取T350772、ENST00000532365和NR110154等3个候选差异LncRNA进行实时荧光定量PCR验证,病例组与对照组之间差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论 LncRNA可能不是一种潜在的老年性白内障筛选生物学标志物。

关键词：长链非编码RNA 白内障生物学标志物

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中医药治疗糖尿病胃轻瘫的近况

蛇志 2009年第1期21卷 24-29页

作者：杜红飞河池市人民医院广西河池547000

糖尿病性胃轻瘫(diabeticgastroparesis,DGP)是糖尿病慢性合并症之一,属于继发性胃轻瘫之一。临床上20%－509/6的糖尿病患者,以饱胀、嗳气、恶心、呕吐、上腹不适、烧心、大便异常等为临床表现。病情较轻者生活质量降低,血糖也难于控制... 详细信息

糖尿病性胃轻瘫(diabeticgastroparesis,DGP)是糖尿病慢性合并症之一,属于继发性胃轻瘫之一。临床上20%－509/6的糖尿病患者,以饱胀、嗳气、恶心、呕吐、上腹不适、烧心、大便异常等为临床表现。病情较轻者生活质量降低,血糖也难于控制;重者生命受到威胁。西医治疗多用促进胃动力药,如胃复安、吗丁啉、西沙必利等,效果缓慢,且不良反应多。祖国医学无胃轻瘫这一病名,多归属于“胃胀”、“痞满”、“呕吐”、“反胃”、“翻胃”、“胃缓”等范畴。近年来,对本病的研究越来越多,显示出了中医治疗上的优势,取得了一定进展,现综述如下。[第一段]

关键词：糖尿病胃轻瘫中医药治疗

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用数据浅析事中事后监管工作成效及问题

工商行政管理 2017年第5期 45-46页

作者：杜红飞云南省腾冲市市场监督管理局

2016年以来，腾冲市市场监督管理局围绕商事制度改革加强事中事后监管的要求，不断探索构建以企业信用信息公示系统为依托、以信息公示为基础、以信用监管为核心、以随机抽查和重点检查为主要手段的新型市场监管模式。

关键词：监管工作市场监管模式信用信息事后监管制度改革市场监督信用监管重点检查

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化饮平眩汤治疗痰湿型眩晕56例

广西中医药 2008年第5期31卷 18-19页

作者：杜红飞河池市人民医院广西河池市新建路91号547000

目的:观察化饮平眩汤治疗痰湿型眩晕的临床疗效。方法:把痰湿型眩晕患者110例随机分2组,治疗组56例应用化饮平眩汤治疗,并设对照组54例口服西比灵和眩晕停,治疗15天,2组治疗前后均应用德国EME公司生产的先锋TC2020超声经颅多普勒诊断仪(... 详细信息

目的:观察化饮平眩汤治疗痰湿型眩晕的临床疗效。方法:把痰湿型眩晕患者110例随机分2组,治疗组56例应用化饮平眩汤治疗,并设对照组54例口服西比灵和眩晕停,治疗15天,2组治疗前后均应用德国EME公司生产的先锋TC2020超声经颅多普勒诊断仪(TCD)检测,测定椎基底动脉血流速度。结果:治疗组治愈19例,有效32例,无效5例,总有效率91.07%;对照组治愈16例,有效26例,无效12例,总有效率77.78%。治疗组疗效优于对照组(P<0.05);经TCD检测,治疗组和对照组治疗前后椎—基底动脉平均血流速度均有所改善,差异有显著意义,但治疗组治疗后的改善程度比对照组更优(P<0.01)。结论:化饮平眩汤治疗痰湿型眩晕有较好疗效。

关键词：眩晕化饮平眩汤中医药疗法

天麻钩藤饮合四虫汤治疗肝阳上亢型偏头痛52例

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蛇志 2008年第3期20卷 197-199页

作者：杜红飞广西河池市人民医院广西河池547000

目的观察天麻钩藤饮合四虫汤对肝阳上亢型偏头痛的治疗效果。方法选择102例患者,随机分为两组,治疗组52例用天麻钩藤饮合四虫汤治疗,对照组50例用西比灵和尼莫地平治疗。两组患者治疗前后均经TC2020超声经颅多普勒诊断仪测定颅内主要动... 详细信息

目的观察天麻钩藤饮合四虫汤对肝阳上亢型偏头痛的治疗效果。方法选择102例患者,随机分为两组,治疗组52例用天麻钩藤饮合四虫汤治疗,对照组50例用西比灵和尼莫地平治疗。两组患者治疗前后均经TC2020超声经颅多普勒诊断仪测定颅内主要动脉血流速度。结果治疗组治愈17例,有效31例,无效4例,总有效率92.3%;对照组治愈12例,有效23例,无效15例,总有效率70.0%。两组疗效经Ridit检验,u=2.0015,P<0.05,有显著性差异。治疗组治疗前后颅内动脉平均血流速度比较,差异有显著性意义(P<0.01),两组治疗后比较各项指标也均有显著性差异(P<0.01)。结论天麻钩藤饮合四虫汤是治疗肝阳上亢型偏头痛的有效方剂。

关键词：偏头痛天麻钩藤饮合四虫汤中医药疗法

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疏肝健脾止泻汤治疗肠易激综合征93例

山西中医 2008年第2期24卷 20-21页

作者：杜红飞广西壮族自治区河池市人民医院

目的:观察疏肝健脾止泻汤治疗肠易激综合征的临床疗效。方法:选符合纳入标准的该病患者153例,随机分为治疗组93例,对照组60例。治疗组给予疏肝健脾止泻汤,对照组予硝苯地平等西药。治疗6周,观察6个月后统计疗效。结果:治疗组痊愈32例,有... 详细信息

目的:观察疏肝健脾止泻汤治疗肠易激综合征的临床疗效。方法:选符合纳入标准的该病患者153例,随机分为治疗组93例,对照组60例。治疗组给予疏肝健脾止泻汤,对照组予硝苯地平等西药。治疗6周,观察6个月后统计疗效。结果:治疗组痊愈32例,有效54例,无效7例,总有效率为92.47%(95%CI=88.31%～96.63%);对照组痊愈10例,有效33例,无效17例,总有效率为71.67%(95%CI=60.27%～83.07%);两组综合疗效比较,有显著性差异(u=3.1422,P=0.0029);且两组总有效率的95%CI不重叠。结论:疏肝健脾止泻汤治疗肠易激综合征疗效优于硝苯地平等。其收益为OR=0.21(95%CI=0.08～0.53),NNT=5(95%CI=3.1～11.1)。

关键词：肠易激综肠合征疏肝健脾止泻汤中医药疗法

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逍遥散加减治疗功能性消化不良53例

山西中医 2008年第6期24卷 15-16页

作者：杜红飞广西壮族自治区河池市人民医院

目的:观察逍遥散加减治疗功能性消化不良的临床疗效。方法:104例功能性消化不良患者随机分为治疗组53例和对照组51例,治疗组给予逍遥散加减治疗;对照组给予吗丁啉口服治疗,疗程4周。结果:治疗组临床治愈15例,显效20例,有效13例,无效5例... 详细信息

目的:观察逍遥散加减治疗功能性消化不良的临床疗效。方法:104例功能性消化不良患者随机分为治疗组53例和对照组51例,治疗组给予逍遥散加减治疗;对照组给予吗丁啉口服治疗,疗程4周。结果:治疗组临床治愈15例,显效20例,有效13例,无效5例,总有效率90.57%;对照组临床治愈9例,显效13例,有效15例,无效14例,总有效率72.55%。治疗组优于对照组(u=3.3032,P<0.01)。结论:逍遥散加减治疗功能性消化不良疗效较好。

关键词：功能性消化不良逍遥散中医药疗法