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湘西蛇足石杉石杉碱含量及石杉碱甲生物合成LDC基因的克隆与功能表征

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湘西蛇足石杉石杉碱含量及石杉碱甲生物合成LDC基因的克隆与功能...

作者：杜次吉首大学

学位级别：硕士

蛇足石杉[Huperzia serrata(Thunb) Trev.]属于石杉科(Huperiaceae)，石杉属(HuperziaBernh)植物，是我国传统中草药，也是目前石杉碱甲的主要药源植物。湘西蛇足石杉资源优质丰富，但缺乏系统性研究。本研究以湘西蛇足石杉为实验材料... 详细信息

蛇足石杉[Huperzia serrata(Thunb) Trev.]属于石杉科(Huperiaceae)，石杉属(HuperziaBernh)植物，是我国传统中草药，也是目前石杉碱甲的主要药源植物。湘西蛇足石杉资源优质丰富，但缺乏系统性研究。本研究以湘西蛇足石杉为实验材料，研究内容如下：（1）采用超声萃取法提取蛇足石杉总生物碱，利用高效液相色谱（HPLC）法同时测定其石杉碱甲、乙和丙含量，并分析其在植株不同部位的分布。湘西3个样地蛇足石杉中石杉碱甲、乙和丙含量基本一致，分别达到0.5‰、0.3‰和0.04‰;但植株不同部位三种石杉碱含量差异显著，其中石杉碱甲和乙的分布均为叶>茎>根，石杉碱丙则是根大于叶和茎。由此可知，湘西蛇足石杉具有资源优势，石杉碱在植株的分布具有明显的部位选择性;采用HPLC可同时检测石杉碱甲、乙和丙，方法简单快速、准确可靠。（2）采用RT-PCR法从蛇足石杉幼嫩叶片中分离赖氨酸脱羧酶基因（LDC），通过TA连接法对该基因进行克隆以及测序和生物信息学分析。获得2个蛇足石杉赖氨酸脱羧酶基因，分别命名为LDC1和LDC2，两基因开放阅读框（ORF）分别为636bp和606bp，GenBank序列注册号为JQ308624.1和JQ308625.1;预测可编码蛋白序列212aa和202aa，同源比对表明均属于赖氨酸脱羧酶家族，蛋白信息学分析发现两基因编码蛋白理化性质和三维结构基本相同。（3）构建重组质粒pET-32a(+)-LDC1和pET-32a(+)-LDC2，选用大肠杆菌BL21作为表达宿主，对LDC1和LDC2进行外源重组表达，采用Ni-NTA柱亲和层析分离纯化目标蛋白，利用薄层层析（TLC）对原核表达产物活性进行分析。成功构建了可溶性表达的重组菌株，获得Trx-LDC1和Trx-LDC2重组蛋白，活性分析表明LDC1和LDC2均可催化赖氨酸脱羧形成尸胺。实验结果表明LDC1和LDC2均具有赖氨酸脱羧酶活性，也证明LDC1和LDC2为蛇足石杉生物合成石杉碱甲中的赖氨酸脱羧酶基因。（4）采用HPLC测定蛇足石杉根、茎、叶中石杉碱甲含量，以肌动蛋白基因为内参物，通过半定量RT-PCR比较LDC在根、茎、叶中的表达量，分析石杉碱甲分布与LDC表达量的关系。结果表明蛇足石杉根、茎和叶中石杉碱甲含量分别为(0.201±0.008)‰、(0.455±0.002)‰和(0.579±0.009)‰，差异显著，LDC在不同部位表达量无明显差异，推测赖氨酸脱羧酶不是石杉碱甲生物合成中的关键酶。

关键词：蛇足石杉石杉碱石杉碱甲赖氨酸脱羧酶重组表达半定量RT-PCR

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竖直埋管换热器传热计算方法研究

竖直埋管换热器传热计算方法研究

作者：杜次元湖南大学

学位级别：硕士

地源热泵作为一种节能、环保和高效的空调系统,在民居建筑和商业建筑中应用越来越广泛。地埋管换热器的传热分析研究是地源热泵技术的核心和应用基础。本文主要对地埋管地源热泵系统的竖直埋管的传热机理进行了研究,确定竖直埋管准确的... 详细信息

地源热泵作为一种节能、环保和高效的空调系统,在民居建筑和商业建筑中应用越来越广泛。地埋管换热器的传热分析研究是地源热泵技术的核心和应用基础。本文主要对地埋管地源热泵系统的竖直埋管的传热机理进行了研究,确定竖直埋管准确的传热模型,并在此基础上建立竖直埋管换热器设计和模拟计算方法。在分析现有传热模型的基础上,本文由钻孔壁将竖直埋管换热器传热模型分为两部分：钻孔外的传热模型和钻孔内的传热模型,并求得传热过程的解析解。主要结论有：1.得出有限长线热源模型瞬态温度响应的新解析解,并得到钻孔壁代表温度平均温度的一维积分解析式。该解析式可以直接应用于工程设计中,从而避免了采用中点温度为钻孔壁代表温度所造成的地埋管换热器长度设计偏大的问题。2.提出不同的流体平均温度分析钻孔内热阻。在钻孔内准三维传热模型基础上,对单U型埋管,采用对数流体平均温度计算钻孔内热阻;对并联布置双U型埋管,采用几何流体平均温度计算钻孔内热阻。这种计算方法可以避免由算术平均温度计算钻孔内热阻造成的误差。3.在上述理论研究成果的基础上,建立准确的地埋管换热器的设计和模拟计算方法。通过叠加脉冲热流温度响应得到流体温度响应新方程,并在此基础上确立快速的逐时计算方法——部分负荷计算方法。应用该方法对竖直埋管换热器进行逐时模拟计算,并与全负荷计算方法进行比较。结果表明,针对三种不同结构钻孔的1年和20年逐时模拟,最大误差分别为1.8℃和2.4℃,该精度水平完全满足地埋管换热器的逐时模拟要求,表明部分负荷计算方法是合适的快速逐时计算方法。本文研究工作发展了基于解析解和叠加原理的地埋管换热器传热分析方法,建立了地埋管换热器的快速设计计算方法。这些研究成果可以直接应用于地埋管换热器的设计和模拟计算,具有较大的理论意义与应用价值。

关键词：传热地源热泵竖直埋管换热器 g-函数流体平均温度部分负荷计算方法

湘西蛇足石杉不同部位石杉碱甲分布及与LDC表达的关系

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中药材 2013年第3期36卷 361-364页

作者：杜次李菁田向荣朱越彭清忠吉首大学生物资源与环境科学学院/植物资源保护与利用湖南省高校重点实验室湖南吉首416000

目的:测定湘西蛇足石杉不同部位石杉碱甲含量,分析石杉碱甲分布与赖氨酸脱羧酶基因(LDC)表达的关系。方法:采用HPLC测定蛇足石杉根、茎、叶中石杉碱甲含量,HPLC条件:Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.08 mol/L... 详细信息

目的:测定湘西蛇足石杉不同部位石杉碱甲含量,分析石杉碱甲分布与赖氨酸脱羧酶基因(LDC)表达的关系。方法:采用HPLC测定蛇足石杉根、茎、叶中石杉碱甲含量,HPLC条件:Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.08 mol/L醋酸铵(32∶68,V/V),流速为1.0 mL/min,柱温为25℃,检测波长为308nm。以肌动蛋白基因为内参物,通过半定量RT-PCR比较LDC在根、茎、叶中的表达量。结果:石杉碱甲在0.5～10.0μg/mL线性关系良好,平均加样回收率为102%,RSD为0.32%;湘西蛇足石杉根、茎、叶中石杉碱甲含量分别为(118.35±0.77)μg/g、(411.09±2.47)μg/g、(562.15±2.86)μg/g;半定量RT-PCR分析表明LDC在根、茎、叶中表达量无明显差异。结论:湘西蛇足石杉不同部位石杉碱甲含量差异显著;推测赖氨酸脱羧酶不是石杉碱甲生物合成中的关键酶。

关键词：蛇足石杉石杉碱甲赖氨酸脱羧酶基因(LDC) 高效液相色谱法半定量RT-PCR

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一种模拟竖直地埋管换热器的热响应因子

湖南大学学报（自然科学版） 2018年第9期45卷 138-144页

作者：陈友明潘冰冰张训水杜次元湖南大学土木工程学院湖南长沙410082

为了快速并准确地计算钻孔群地下土壤和钻孔内流体的温度,在现有的模拟竖直埋管长期换热的模型基础上,提出了一种新的计算竖直地埋管钻孔域温度响应的响应因子——单位矩形脉冲热负荷作用下热响应函数(δ-函数).通过将δ-函数与快速傅... 详细信息

为了快速并准确地计算钻孔群地下土壤和钻孔内流体的温度,在现有的模拟竖直埋管长期换热的模型基础上,提出了一种新的计算竖直地埋管钻孔域温度响应的响应因子——单位矩形脉冲热负荷作用下热响应函数(δ-函数).通过将δ-函数与快速傅里叶变换相结合来提高δ-函数的模拟速度,将该响应因子及算法与g-函数进行了精度和计算速度的对比.结果表明:该响应因子及算法不仅与g-函数有相同的计算精度,而且计算速度有显著的提高,当模拟5×8的钻孔群30a的温度响应时计算时间不到90s.

关键词：竖直埋管换热器单位矩形热脉冲 δ-函数快速傅里叶变换逐时模拟

蛇足石杉赖氨酸脱羧酶基因的克隆、原核表达及其功能分析

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生物工程学报 2014年第8期30卷 1299-1307页

作者：杜次李菁唐云涛彭清忠吉首大学生物资源与环境科学学院湖南吉首416000 植物资源保护与利用湖南省高校重点实验室湖南吉首416000

赖氨酸脱羧酶(Lysine decarboxylase,LDC)是抗老年痴呆药——石杉碱甲生物合成的第一个酶。为了研究蛇足石杉中LDC的特性和功能,以其总RNA为模板,通过RT-PCR扩增得到2个赖氨酸脱羧酶基因LDC1和LDC2,克隆至pMD?19-T中测序发现,两基因同... 详细信息

赖氨酸脱羧酶(Lysine decarboxylase,LDC)是抗老年痴呆药——石杉碱甲生物合成的第一个酶。为了研究蛇足石杉中LDC的特性和功能,以其总RNA为模板,通过RT-PCR扩增得到2个赖氨酸脱羧酶基因LDC1和LDC2,克隆至pMD?19-T中测序发现,两基因同源性为95.3%,分别编码212和202个氨基酸。将两基因引入pET-32a(+)构建重组表达质粒pET-32a(+)/LDC1和pET-32a(+)/LDC2,分别转入BL21(ED3)中进行诱导表达,在30℃条件下获得可溶性表达产物Trx-LDC1和Trx-LDC2;采用Ni-NTA亲和层析法纯化目的蛋白,建立酶促反应体系分析其脱羧酶活性,薄层层析(TLC)检测表明重组融合蛋白Trx-LDC1和Trx-LDC2均能催化赖氨酸脱羧生成尸胺。利用生物信息学软件分析发现LDC1和LDC2理化性质存在差异,但预测的二级结构和三维结构基本一致。

关键词：蛇足石杉赖氨酸脱羧酶基因克隆原核表达酶活性结构预测

强磁场对四苯基卟啉及其Co(Ⅱ)/Zn(Ⅱ)配合物的影响

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无机化学学报 2020年第7期36卷 1291-1297页

作者：杜次楚增勇胡天娇吴文健李效东国防科技大学化学与生物系长沙410073

为研究强磁场对卟啉类化合物的影响,以四苯基卟啉(TPP)为研究对象,比较分析了无外加磁场和强磁场条件下TPP的结晶,及Co^2+、Zn^2+与TPP的配位反应。采用X射线粉末衍射测试不同磁场强度下获得的TPP晶体,紫外分光光度计快速测定了不同磁... 详细信息

为研究强磁场对卟啉类化合物的影响,以四苯基卟啉(TPP)为研究对象,比较分析了无外加磁场和强磁场条件下TPP的结晶,及Co^2+、Zn^2+与TPP的配位反应。采用X射线粉末衍射测试不同磁场强度下获得的TPP晶体,紫外分光光度计快速测定了不同磁场强度下配合物产率,并分析了配位反应的动力学。TPP的结晶度随磁场强度的增强而提高,晶体尺寸随磁场强度的增加而增大;随磁场的增强,四苯基钴卟啉(CoTPP)和四苯基锌卟啉(ZnTPP)的产率下降,但两者的反应动力学不受磁场影响,其反应速率随磁场强度提高而下降。由研究结果可知,强磁场有利于四苯基卟啉的结晶取向,四苯基卟啉在溶液中垂直于磁场取向是配位反应速率降低的主要原因,随磁场强度的增加,四苯基卟啉的取向程度提高。

关键词：强磁场四苯基卟啉配位反应结晶取向

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采区高压供电深入负荷中心

煤矿机电 1985年第4期 40-44页

作者：杜次志牛马司煤矿铁箕山工区

南方小型矿井由于地质变化大,采区服务限短,设备安装容量小,因而采区供电往往就形成了变电所远离采掘工作面的状况。由于低压网路过长,使线路压降大,影响起动力矩;最远点两相短路电流小,达不到《矿井低压电网短路保护装置的整定细则》... 详细信息

南方小型矿井由于地质变化大,采区服务限短,设备安装容量小,因而采区供电往往就形成了变电所远离采掘工作面的状况。由于低压网路过长,使线路压降大,影响起动力矩;最远点两相短路电流小,达不到《矿井低压电网短路保护装置的整定细则》的要求。(以下简称《细则》)有时不得已而采用大量大截面橡套电缆,致造成极大的浪费。为使采区供电达到安全和经济的目的,如实行升压运行,设备改造工作量将很大,运行中对系统绝缘水平要求较高,因而只能逐步报

关键词：电缆百分数负荷中心电压损失短路保护继电保护低压干线采区盘区

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调整负性情绪的钥匙

大众心理学 2014年第2期 23-24页

作者：杜次威四川省成都市慢性病医院

负性情绪，有的书上又写成负面情绪或负向情绪。如：烦闷、内疚、沮丧、憋屈、嗔恨、悲痛、抑郁、恼怒、怨怼、百无聊赖、失败感、害怕、罪恶感、焦虑、自卑、自责、后悔、恐惧、慌乱、被嫌弃、凄苦等等。一句话“怨恨恼怒烦”，一旦将... 详细信息

负性情绪，有的书上又写成负面情绪或负向情绪。如：烦闷、内疚、沮丧、憋屈、嗔恨、悲痛、抑郁、恼怒、怨怼、百无聊赖、失败感、害怕、罪恶感、焦虑、自卑、自责、后悔、恐惧、慌乱、被嫌弃、凄苦等等。一句话“怨恨恼怒烦”，一旦将人攫住，就有一种缠缚的力量。人陷入其中，很难挣脱。

关键词：负性情绪钥匙调整负面情绪失败感罪恶感抑郁自卑

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高血压病个体化治疗67例疗效观察

现代临床医学 1999年第2期30卷 71-72页

作者：杜次威成都市第九人民医院 610016

高血压病是一种常见的以动脉血压增高为主要临床表现的慢性心血管病。近年来发病率升高,笔者按高血压病分型进行个体化治疗,疗效满意,报告如下。1 一般资料本组67例中,男性52例,女性15例。年龄最大78岁,最小42岁。其中42～51岁14例,52... 详细信息

高血压病是一种常见的以动脉血压增高为主要临床表现的慢性心血管病。近年来发病率升高,笔者按高血压病分型进行个体化治疗,疗效满意,报告如下。1 一般资料本组67例中,男性52例,女性15例。年龄最大78岁,最小42岁。其中42～51岁14例,52～62岁28例,63～78岁35例。病程最短2年,最长41年。一般在12年至25年。主要症状有头晕眼花、心悸、

关键词：个体化治疗高血压病疗效观察倍他乐克双氢克尿塞联合用药血浆肾素活性小动脉平均血压肾并发症