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羟异黄酮对异种混合淋巴细胞增殖和凋亡作用的实验研究

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中国现代医学杂志 2002年第13期12卷 9-11页

作者：杜敦峰叶启发宫念樵华中科技大学同济医学院附属同济医院武汉430030

目的 :探讨三羟异黄酮 (genistein)对异种混合淋巴细胞增殖和凋亡的作用。方法 :建立异种单向混合淋巴细胞培养模型 ,然后分别经 2 0 μmol/Lgenistein和 5 0mg/mlCsA处理 5d ,应用MTT比色法观察各处理组和对照组淋巴细胞增殖改变 ,流... 详细信息

目的 :探讨三羟异黄酮 (genistein)对异种混合淋巴细胞增殖和凋亡的作用。方法 :建立异种单向混合淋巴细胞培养模型 ,然后分别经 2 0 μmol/Lgenistein和 5 0mg/mlCsA处理 5d ,应用MTT比色法观察各处理组和对照组淋巴细胞增殖改变 ,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 :与CsA组和对照组相比 ,genistein处理组淋巴细胞增殖明显减弱 (P 0 .0 5 ) ,genistein处理组、CsA组和对照组的凋亡率分别为 10 .72 % ,2 .2 2 %和 1.89%。genistein处理组的凋亡率明显高于其他两组 (P <0 .0 5 )。结论 :genistein可以抑制异种混合淋巴细胞增殖。

关键词：细胞增殖三羟异黄酮异种单向混和淋巴细胞培养细胞凋亡蛋白酪氨酸激酶异种移植移植免疫学

UTI和MPG在鼠肝脏缺血再灌注损伤保护效应的实验研究

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中国现代医学杂志 2002年第12期12卷 8-10页

作者：玛娜叶启发杜敦峰华中科技大学同济医学院附属同济医院武汉430030

目的 :研究蛋白酶抑制剂 -乌司他丁 (urinarytrypsininhibitor ,UTI)和氧自由基清除剂 (N - 2 -mercapto propionylglycine ,MPG)在鼠肝缺血再灌注损伤发病机制中的作用。方法 :Wistar雄性大鼠 2 8只 ,随机分为A、B、C、D四组 :A为空白... 详细信息

目的 :研究蛋白酶抑制剂 -乌司他丁 (urinarytrypsininhibitor ,UTI)和氧自由基清除剂 (N - 2 -mercapto propionylglycine ,MPG)在鼠肝缺血再灌注损伤发病机制中的作用。方法 :Wistar雄性大鼠 2 8只 ,随机分为A、B、C、D四组 :A为空白对照组 ,B为I/R组 ,C为MPG组 ,D为UTI组 ,B、C、D三组分别缺血 6 0min后 ,均再灌注 30min、6 0min、2 4h、72h ,A、B、C、D四组在 30min、6 0min、2 4h、72h检测AST、ALT、LDH以及鼠肝的光镜和电镜切片 ,计算各组生存率。结果 :D组AST、ALT、LDH明显低于B组 (P <0 .0 5 ) ,C组则高于B组 (P<0 .0 5 ) ;光镜和电镜形态学损伤程度由轻到重依次为D、B、C ;术后 3d存活率分别为 :A组 10 0 % ,B组 4 2 .86 % ,C组 0 ,D组 85 .71%。结论 :乌司他丁 (UTI)能有效减轻、改善大鼠肝脏缺血再灌注损伤 ,MPG则加重鼠肝缺血再灌注损伤。

关键词：肝脏缺血再灌注 MPG UTI 保护效应

实体器官移植受者术后可逆性后部白质脑病综合征3例并文献复习

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中华器官移植杂志 2023年第3期44卷 183-186页

作者：王子沛赵光远蒋继贫周平杜敦峰华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所、器官移植教育部重点实验室、国家卫生健康委员会器官移植重点实验室、中国医学科学院器官移植重点实验室武汉430030

本研究对华中科技大学同济医学院附属同济医院收治的1例儿童肝移植及2例成人肾移植术后并发可逆性后部白质脑病综合征(posterior reversible encephalopathy syndrome,PRES)的临床资料进行回顾性总结,分析其发病特点、诊疗经过并复习相... 详细信息

本研究对华中科技大学同济医学院附属同济医院收治的1例儿童肝移植及2例成人肾移植术后并发可逆性后部白质脑病综合征(posterior reversible encephalopathy syndrome,PRES)的临床资料进行回顾性总结,分析其发病特点、诊疗经过并复习相关文献,为临床诊疗提供参考。

关键词：肝移植肾移植可逆性后部白质脑病综合征

血红素氧合酶-1抑制T淋巴细胞对血管内皮细胞的粘附作用

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中华器官移植杂志 2005年第6期26卷 363-365页

作者：杜敦峰昌盛陈必成周鸿敏陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院武汉430030

目的研究血红素氧合酶-1(HO-1)抑制T淋巴细胞对血管内皮细胞的粘附作用。方法采用脂质体介导基因转染技术将PcDNA3-HO-1质粒转入血管内皮细胞。用间接免疫荧光技术在蛋白质水平检测HO-1在血管内皮细胞上的表达;用γ-干扰素(INF-γ)活化... 详细信息

目的研究血红素氧合酶-1(HO-1)抑制T淋巴细胞对血管内皮细胞的粘附作用。方法采用脂质体介导基因转染技术将PcDNA3-HO-1质粒转入血管内皮细胞。用间接免疫荧光技术在蛋白质水平检测HO-1在血管内皮细胞上的表达;用γ-干扰素(INF-γ)活化血管内皮细胞;用CFSE标记植物血凝素(PHA)活化的JurkatT细胞;采用粘附阻断实验观察转染HO-1的血管内皮细胞和JurkatT细胞间的粘附作用。结果HO-1可在人血管内皮细胞系中稳定表达;转染HO-1的活化内皮细胞与JurkatT细胞的粘附作用显著下降,CFSE标记的阳性率为21.24%,而未转染的对照组CFSE标记的阳性率为56.16%,两组相比,差异有统计学意义(P<0.05);应用HO-1抑制剂ZnPP后,粘附抑制作用消失。结论HO-1可以明显抑制T淋巴细胞对血管内皮细胞的粘附作用。

关键词： T淋巴细胞粘附作用血红素氧合酶-1 Jurkat 间接免疫荧光技术血管内皮细胞系 HO-1 基因转染技术 CFSE 粘附抑制作用脂质体介导 INF-γ γ-干扰素植物血凝素水平检测实验观察稳定表达 ZnPP T细胞阳性率蛋白质活化

移植物转染血红素氧合酶-1基因抑制慢性移植物血管病

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中华器官移植杂志 2006年第1期27卷 44-48页

作者：杜敦峰昌盛郭晖陈必成周鸿敏陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所武汉430030

目的探讨移植物转染血红素氧合酶1(HO1)基因对慢性移植物血管病的影响。方法克隆HO1基因,并构建含有HO1基因的重组腺病毒载体(AdHO1),实验分为4组:A组为同系移植对照组,供、受者均为Lewis大鼠,无特殊处理;B组为同种移植对照组,Lewis大... 详细信息

目的探讨移植物转染血红素氧合酶1(HO1)基因对慢性移植物血管病的影响。方法克隆HO1基因,并构建含有HO1基因的重组腺病毒载体(AdHO1),实验分为4组:A组为同系移植对照组,供、受者均为Lewis大鼠,无特殊处理;B组为同种移植对照组,Lewis大鼠接受未经处理的BN大鼠胸主动脉移植;C组为同种移植空载体对照组,Lewis大鼠接受以空载体(不含HO1基因)处理的BN大鼠的胸主动脉移植;D组为同种移植实验组,Lewis大鼠接受转染HO1基因的BN大鼠的胸主动脉移植。于移植后60d取移植动脉,进行组织形态学观察,测量内膜厚度;免疫组化和逆转录聚合酶链反应检测HO1在移植动脉中的表达。结果A组移植动脉形态正常;B组、C组移植动脉呈移植物血管病表现,血管内膜显著增厚,D组移植动脉呈内膜炎改变,内膜厚度与B组、C组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。免疫组化及RTPCR检测显示,与A组、B组和C组相比,D组移植动脉可以检测到HO1基因及其蛋白表达。结论在移植血管中预先转染HO1基因,能明显缓解移植动脉的纤维化进程以及内膜的增生,对慢性排斥反应所致的移植物血管病具有抑制作用。

关键词：移植物闭塞血管基因转移血红素氧化酶移植物排斥

凋亡抑制蛋白survivin在活化T细胞中的表达及其意义

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第2期21卷 147-150页

作者：陈必成唐莉张鑫郭晖昌盛杜敦峰陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植国家重点实验室湖北武汉430030

目的: 探讨survivin在活化T细胞的表达及其意义.方法: 经丝裂原与同种抗原刺激激活T细胞, 免疫细胞化学染色后观察survivin和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.用流式细胞术检测CD3、 CD25、 Survivin的表达及细胞凋亡.给BALB/c裸鼠输注C57B... 详细信息

目的: 探讨survivin在活化T细胞的表达及其意义.方法: 经丝裂原与同种抗原刺激激活T细胞, 免疫细胞化学染色后观察survivin和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.用流式细胞术检测CD3、 CD25、 Survivin的表达及细胞凋亡.给BALB/c裸鼠输注C57BL/6小鼠脾细胞后第4～7天, 观察肝脏内T细胞浸润和survivin的表达.结果: ConA刺激后培养的脾细胞可表达survivin(表达不局限于G2/M期).survivin+细胞为T细胞, T淋巴母细胞可同时表达CD25和survivin.survivin+细胞中仅部分细胞表达CD25.ConA刺激淋巴细胞后第6天, 凋亡细胞的百分率明显增加(22.90% vs 5.23% P<0.001).于BALB/c裸鼠输注C57BL/6小鼠的脾细胞后, 于第4～7天,在BALB/c裸鼠肝脏中可观察到T细胞浸润并表达Survivin.结论: T细胞激活后可表达survivin, 故可作为活化T细胞的标志.T细胞持续表达survivin, 需要在体内与抗原持续接触.

关键词： T细胞 survivin CD25

供者特异性抗原静脉输注联合抗γ链单克隆抗体诱导小鼠皮肤移植物免疫耐受

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中华器官移植杂志 2005年第3期26卷 154-156页

作者：昌盛沈世乾陈必成杜敦峰周洁张鑫陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部器官移植国家重点实验室武汉430030

目的　探讨静脉输注供者特异性抗原联合抗白细胞介素2受体(IL 2R)γ链单克隆抗体诱导移植免疫耐受的可行性。方法　在C57BL/6小鼠建立H Y皮肤移植模型,术前7 d给予5×106个供者脾细胞静脉输注,并分别于术前6 d和4 d给予抗白细胞介素2受... 详细信息

目的　探讨静脉输注供者特异性抗原联合抗白细胞介素2受体(IL 2R)γ链单克隆抗体诱导移植免疫耐受的可行性。方法　在C57BL/6小鼠建立H Y皮肤移植模型,术前7 d给予5×106个供者脾细胞静脉输注,并分别于术前6 d和4 d给予抗白细胞介素2受体γ链单克隆抗体(4G3、3E12及TUGm2各0.5 mg)和抗IL 2Rβ单克隆抗体(TM β1,0.5 mg)混合液2.0 mg腹腔注射,以单纯行H Y皮肤移植模型和静脉输注供者特异性抗原的H Y皮肤移植模型为对照,观察皮肤移植物的存活时间。结果　联合给予抗白细胞介素2受体γ链单克隆抗体和供者特异性抗原输注组的皮肤移植物存活时间均超过100 d,显著长于单纯H Y皮肤移植组的33.42 d(P<0.01)及仅输注供者特异性抗原H Y皮肤移植组的14.71 d(P<0.01)。结论　在H Y皮肤移植模型中,静脉输注供者特异性抗原联合抗白细胞介素2受体γ链单克隆抗体可以成功地诱导受者对皮肤移植物的免疫耐受。

关键词：皮肤移植供者特异性抗原静脉输注单克隆抗体白细胞介素2受体联合植物存活时间混合液

探讨抗γ公共链单抗诱导移植免疫耐受的作用机制

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中华器官移植杂志 2005年第8期26卷 470-473页

作者：昌盛沈世乾陈必成张鑫杜敦峰周洁陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院教育部卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的探讨抗γ公共链单抗在诱导移植免疫耐受中的作用机制。方法将实验动物分为2组,每组20只。实验组:在Balb/c裸小鼠(H-2d)体内用CFSE标记的Balb/c小鼠(H-2d)T细胞(3×107个)重建其免疫系统,同时给予经丝裂霉素C处理的供者C57BL/6小鼠(H... 详细信息

目的探讨抗γ公共链单抗在诱导移植免疫耐受中的作用机制。方法将实验动物分为2组,每组20只。实验组:在Balb/c裸小鼠(H-2d)体内用CFSE标记的Balb/c小鼠(H-2d)T细胞(3×107个)重建其免疫系统,同时给予经丝裂霉素C处理的供者C57BL/6小鼠(H-2b)脾细胞(5×106个)静脉输注,24h后实验组受鼠经腹腔注射抗γc单克隆抗体(4G3,3E12,TUGm2,各0.5mg)和抗白细胞介素2受体(IL-2R)β链单克隆抗体(TM-β1,0.5mg)混合液;对照组:以IgG2a2.0mg作为同型对照代替抗体腹腔注射,余处理与实验组相同。经上述处理后12h和48h后处死受鼠,取其脾细胞及外周血,利用流式细胞技术检测T细胞的增殖及凋亡。结果经抗体处理12h和48h后,实验组T细胞未发生明显增殖;而对照组两时间点均可观察到CFSE标记细胞荧光强度明显地减低,表明T细胞发生了分裂增殖。同时AnnexinV法可见,实验组标记有CD3-PE单抗的T细胞12h发生了明显的凋亡,但48h却几乎无明显的凋亡细胞;而对照组两时间点则均未检测到明显的细胞凋亡。两组间12h结果差异有统计学意义(P0.05)。结论移植术前给予抗γ公共链单抗联合供者细胞特异性输注,通过有效抑制针对供者抗原发生效应的T细胞增殖,可进一步促使其发生凋亡而被有效清除,从而最终实现免疫耐受,且此种耐受具有抗原特异性。

关键词：抗γ公共链单抗移植免疫耐受作用机制丝裂霉素C

聚乙二醇化干扰素联合利巴韦林治疗肝移植术后丙型肝炎复发

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中华器官移植杂志 2012年第12期33卷 725-727页

作者：王平良杜敦峰魏来张玄陈知水华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所武汉430030

目的探讨聚乙二醇化干扰素（PEG-IFNα）联合利巴韦林治疗肝移植术后丙型肝炎复发的效果及安全性。方法回顾性分析9例丙型肝炎相关终末期肝病患者接受肝移植的临床资料，其中5例受者术后出现丙型肝炎复发，均给予PEG-IFNα-2a联合利巴... 详细信息

目的探讨聚乙二醇化干扰素（PEG-IFNα）联合利巴韦林治疗肝移植术后丙型肝炎复发的效果及安全性。方法回顾性分析9例丙型肝炎相关终末期肝病患者接受肝移植的临床资料，其中5例受者术后出现丙型肝炎复发，均给予PEG-IFNα-2a联合利巴韦林抗HCV治疗，疗程为48周。观察治疗前后血红蛋白、白细胞计数、移植肝功能及HCVRNA复制水平等指标的变化，评估治疗后的早期病毒应答（EVR）、持续性病毒应答（SVR）及不良反应等。结果5例受者中有3例在治疗12周内达到EVR，并在治疗后获得SVR，移植肝功能也恢复正常；1例因在治疗12周后HCVRNA的下降达不到2个对数级而停药，1例虽HCVRNA下降2个对数级以上，但治疗至24周时HCVRNA未转阴而停药，至48周时HCVRNA均维持在较低水平。5例丙型肝炎复发受者在治疗后均发生白细胞减少和（或）发热等不良反应，给予对症处理后好转。结论PEC-IFNα联合利巴韦林治疗肝移植后丙型肝炎复发安全性好，多数受者可取得持续性病毒学应答。

关键词：肝移植丙型肝炎治疗