检索结果-南通市图书馆

作者：杜加祥山东大学

学位级别：硕士

挖掘机主控阀是挖掘机的关键液压件,中国目前全部依靠进口,主控阀的国产化是挖掘机产业发展的必由之路。本文通过研究主控阀制造技术和装配线的设计研究,建立了主控阀装配生产的制造模型,完成了主控阀装配工艺设计和装配线设计,这对于... 详细信息

挖掘机主控阀是挖掘机的关键液压件,中国目前全部依靠进口,主控阀的国产化是挖掘机产业发展的必由之路。本文通过研究主控阀制造技术和装配线的设计研究,建立了主控阀装配生产的制造模型,完成了主控阀装配工艺设计和装配线设计,这对于打破工程机械高端液压件国外垄断,实现国产化迈出了坚实的一步,具有重大的现实意义。本文通过分析国内外主控阀制造和装配线的发展状况,找出主控阀装配制造的几个关键要素：零部件质量特性、装配清洁度、装配工艺及装配技术、关键工艺装备,通过分析解决以上关键要素,完成主控阀装配线的设计。课题建立了主控阀零部件清洗的清洁度控制模型,通过试验验证,得出结论,确定主控阀小零部件采用超声波清洗机,在清洗温度、清洗液浓度确定的情况下,清洗150s,清洗后的零部件能够达到设计的清洁度控制要求,清洗零部件装配后主控阀液压系统清洁度在ISO 18/15/12等级以上。针对主控阀的装配环境需求进行分析,建设100000级清洁车间满足装配环境清洁度的要求。通过对关键零部件阀杆直径和温度的变化关系分析,找出了温度变化3℃影响1 um的变化规律,得出了全年车间温度控制范围为20℃—28℃,日温差变化波动范围小于3℃的环境温度控制要求。课题完成了UX28装配工艺设计,并解决了装配过程中部分拧紧力矩衰减问题。同时通过装配线设计理论分析,结合课题设计需求,完成主控阀装配线的整体布局设计,并依次完成部装线、装配线、清洗机、工作台、翻转机构等主要工艺装备设计,建设完成一条主控阀装配线,并经过验证达到设计要求。A公司通过完成该装配线的设计,初步具备了主控阀装配的国产化制造能力,提升了公司的核心竞争力,为公司的持续发展奠定了基础。同时也为研究主控阀制造技术提供参考。

关键词：主控阀装配线清洁度设计装配工艺

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水下滑翔机本体及调节机构研究

水下滑翔机本体及调节机构研究

作者：杜加友浙江大学

学位级别：硕士

水下滑翔机是一种新型的水下航行装置;它具有体积小、可反复使用、无污染等优点。水下滑翔机具有翅膀和尾翼，像一架小飞机。它可以在水中沿锯齿型路线优雅地航行。水下滑翔机从海洋表面滑翔到指定深度，并返回。在滑行过程中，它可以... 详细信息

水下滑翔机是一种新型的水下航行装置;它具有体积小、可反复使用、无污染等优点。水下滑翔机具有翅膀和尾翼，像一架小飞机。它可以在水中沿锯齿型路线优雅地航行。水下滑翔机从海洋表面滑翔到指定深度，并返回。在滑行过程中，它可以测量海水的温度、盐度、平均海流等数据。水下滑翔机没有螺旋桨或者推进器等动力装置，它通过浮力驱动来实现滑翔运动。因而，它必须借助于深度的变化来实现向上或向下的滑翔。水下滑翔机通过机内的可变浮力心系统来控制自身的浮力变化，并通过机翼所受的升力将竖直的速度变成向前的运动。在上浮和下沉过程中，机翼所受的浮力总是推动水下滑翔机向前运动。水下滑翔机通过改变内部重块的位置来控制自身的姿态变化。在海水表面时，水下滑翔机借助于GPS导航和双向的无线信号通讯，来实现远程控制和测量数据的实施传输。和其它的自控制式水下机器人相比，水下滑翔机要小得多(大约50千克左右)，运动速度为半节(0.25米／秒)。但是，经过精心的设计，浮力驱动式的水下滑翔机具有噪音小、功率低的优点，因而，它可以在长达数百公里的航程内，进行长达数月的航行。作为海洋的“长住居民”，水下滑翔机可以提供海洋最真实、最详细的资料。这些资料可以广泛应用于科学实验、矿藏探测以及军事侦察等方面。本项目首先运动机理入手，分析了影响水下滑翔机运动的力的各个分量，并通过仿真预测了它的运动轨迹，为下面的样机设计和水池实验提供了理论依据。然后，本文从姿态调节系统、可变浮力系统以及减阻壳体水部分三块入手，讲述了水下滑翔机的机构设计以及壳体设计。最后，本文通过一系列的实验对水下滑翔机各分系统和整机进行了测试，

关键词：水下滑翔机壳体驱动控制水下装置

山东省中学生排球联赛可持续发展的制约因素与对策研究

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山东省中学生排球联赛可持续发展的制约因素与对策研究

作者：杜加均曲阜师范大学

学位级别：硕士

排球作为三大球之一,在我国体育发展史上获得过骄人的成绩,有着特殊的地位。近几年,作为排球运动重要组成部分的青少年排球的不断开展引起了体育、教育等相关部门的重视。青少年排球运动不仅有利于培养青少年的团队协作能力、促进青少... 详细信息

排球作为三大球之一,在我国体育发展史上获得过骄人的成绩,有着特殊的地位。近几年,作为排球运动重要组成部分的青少年排球的不断开展引起了体育、教育等相关部门的重视。青少年排球运动不仅有利于培养青少年的团队协作能力、促进青少年德智体全面发展,而且能够为我国排球运动的发展提供强大的人才储备,对我国排球水平的提升有着重要的作用。山东省历来非常注重青少年排球后备人才的选拔与培养。2011年由教育厅组织创办的山东省中学生排球联赛是我省重点发展的一项体育运动,影响范围涉及到教育、经济、文化等多个领域,对山东省青少年排球的开展产生积极的推动作用。自中学生排球联赛创办以来,如何使联赛可持续发展下去一直是联赛关注的重点。就目前联赛的发展状况来看,联赛的发展体系尚不成熟,组织管理体系有待完善,存在着诸多问题,这些问题的存在影响了联赛的可持续发展。希望通过本次研究能够对影响联赛可持续发展的因素进行分析,提出一些相对较合理的建议。本研究采用文献资料法、问卷调查法、实地调研法、数理统计法等研究方法,以2015年山东省中学生排球联赛为对象进行了调查分析。结果表明:1.我省各地对联赛的重视程度不断提高,投入力度不断加大,不仅促进了联赛的发展,也带动了各地区学校排球运动的开展。各地区学校代表队的规模不断扩大,竞技水平逐步提高,参与排球运动的学生不断增加,我省排球运动水平整体提高。2.当前影响我省联赛发展的最主要原因是尚未形成一条完善的体教结合的发展道路,运动员知识理论学习与课余训练的冲突,影响了联赛及排球运动整体的发展。同时缺乏对运动员后续发展以及升学就业的持续指导,影响了学校和学生参与联赛的热情,不利于联赛的可持续发展。3.我省联赛运行机制存在一定缺陷,社会参与度低、经费来源渠道单一等。需要建立全方位的能够促进联赛可持续发展的交流合作机制,适当提高社会力量及企业的联赛参与度,提高联赛市场化和商业化程度,扩充联赛经费来源渠道,以满足运动队发展的需要。4.我省中学排球联赛中教练的年龄构成比例相比较合理,理论知识水平较高,但是参与学习培训的机会与经历较少,部分教练带队参赛经验不足,一定程度上妨碍了教练队伍整体水平的提升。5.联赛中运动员的年龄、性别比例协调,参赛积极性也非常高。但联赛的比赛周期较短,导致运动员参赛时间短、机会少,难以使之保持长久的积极性。

关键词：山东省中学生排球联赛可持续发展影响因素对策

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菹草根际环境磷迁移转化研究

菹草根际环境磷迁移转化研究

作者：杜加春哈尔滨工业大学

学位级别：硕士

沉水植物是河流、湖泊的主要植物种群，对调控河、湖中的磷素有着重要意义。了解沉水植物根际环境磷迁移转化规律，对于实际应用沉水植物控制和修复富营养化河、湖有一定参考的意义。本研究选择常见沉水植物-菹草为研究对象，通过... 详细信息

沉水植物是河流、湖泊的主要植物种群，对调控河、湖中的磷素有着重要意义。了解沉水植物根际环境磷迁移转化规律，对于实际应用沉水植物控制和修复富营养化河、湖有一定参考的意义。本研究选择常见沉水植物-菹草为研究对象，通过室内模拟其在静态河流或湖泊断面上的生长过程，首先监测了上覆水和沉积物的不同形态磷分布变化特征，初步推测了各形态磷的迁移转化关系。其次，探索了沉积物中磷细菌的数量变化情况。最后，考察了沉积物对磷的吸附特征，并在实验基础上确定了磷在水-沉积物界面的交换方向及潜力，并估算了磷通量。本研究主要成果如下：（1）菹草可降低水中总磷、溶解性总磷和溶解态活性磷浓度，且对溶解态活性磷利用最为彻底，而对溶解态非活性磷和颗粒态磷无明显削减作用。菹草在生长过程中可改变上覆水磷的主要成分，由实验初的溶解态总磷是总磷的主要成分、溶解态活性磷是溶解态总磷的主要成分变成溶解态总磷、颗粒态并重于总磷、溶解态非活性磷是溶解态总磷的主要成分。（2）菹草对沉积物总磷、无机磷、有机磷、铁/铝结合态磷和钙结合态磷无影响;实验过程中，有机磷和铁/铝结合态磷有一定积累。（3）除可加强溶解态活性磷由上覆水迁移到沉积物转化为铁/铝结合态磷;沉积物由铁/铝结合态磷转化为有机磷;上覆水溶解态非活性磷的增加是由沉积物有机磷引起的，菹草还可使沉积物有机磷转化为上覆水溶解态活性磷。菹草的磷总量为24.688g，其中1.202mg来源于水，23.486mg来自沉积物，比例分别为4.87%和95.13%，菹草生长过程吸收的磷主要来自沉积物。（4）准二级动力学方程可准确描述沉积物对磷的吸附随时间的变化规律，沉积物对磷的吸附分为快速吸附和慢吸附两个阶段，0~0.5h为快吸附阶段，0.5~24h为慢吸附阶段。交叉型Langmuir方程能较准确地描述磷在沉积物上的等温吸附行为。基于交叉型Langmuir模型的δ值评估法，可以较好表征水-沉积物界面磷交换方向和潜力，菹草根际沉积物由磷的“汇”变为“源”。菹草生长可降低水和沉积物之间的磷通量。

关键词：沉水植物磷形态上覆水沉积物磷细菌吸附

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时代化与马克思主义哲学教育研究

时代化与马克思主义哲学教育研究

作者：杜加友新疆师范大学

学位级别：硕士

马克思主义哲学时代化,就是把马克思主义哲学同当前时代特征、时代发展结合起来,紧扣时代脉搏,反映时代精神,回答时代课题,使之能够适应时代需要,引领时代潮流。马克思主义哲学教育是指依照马克思主义哲学理论本性展开马克思主义哲学的... 详细信息

马克思主义哲学时代化,就是把马克思主义哲学同当前时代特征、时代发展结合起来,紧扣时代脉搏,反映时代精神,回答时代课题,使之能够适应时代需要,引领时代潮流。马克思主义哲学教育是指依照马克思主义哲学理论本性展开马克思主义哲学的教育活动,其目的是培养受教育者的马克思主义哲学理论素养,使受教育者在学习马克思主义哲学的过程中确立正确的世界观、方法论和人生观,并逐渐形成创造性的思维方式。把时代化与马克思主义哲学教育联系起来研究,是由马克思主义哲学理论本性决定的,具有重要的理论价值和实践价值。从理论上讲,站在时代的最前沿,敏锐把握科学技术重大突破给经济社会乃至人们思维方式带来的深刻影响,学习并运用最新的科学思想推进马克思主义哲学时代化,可以丰富马克思主义哲学教育的内容。从实践上讲,可以推进马克思主义哲学教育内容、方法和手段的创新,促使马克思主义哲学教育工作者的素质不断提高,有利于提升大学生哲学素养,进而造就高层次的创新型人才。本文的主体部分由引言、正文和结语三部分构成,引言主要介绍了选题意义、选题研究现状、选题的研究思路、方法以及选题的重点、难点和创新点。正文由以下三部分构成: 一是时代化与马克思主义哲学教育的理论探析:主要分别论述了马克思主义哲学时代化和马克思主义哲学教育的内涵、理论依据和特征,探讨了马克思主义哲学时代化推进马克思主义哲学教育的重要意义。二是时代化推进马克思主义哲学教育面临的主要问题和原因分析:当前,时代化推进马克思主义哲学教育面临的主要问题有马克思主义哲学教育不能完全体现哲学精神吸引力下降、马克思主义哲学教育的内容受到时代课题的挑战、马克思主义哲学教育工作者的素质有待于进一步提高、培养的大学生还不能适应时代的要求等四个方面;与之相对应,原因主要也有四个。三是时代化推进马克思主义哲学教育的实现对策:主要从转变教育理念、理论创新、提高马克思主义哲学教育工作者素质以及提升大学生哲学素养四个方面进行探讨。总之,时代化的马克思主义哲学理论,可以推进马克思主义哲学教育,它不仅是一种理论诉求,更是一种历史使命,是马克思主义哲学保持旺盛的生命力的原因所在。时代化的马克思主义哲学理论,可以完善当代大学生的人格、提升大学生的哲学素养。

关键词：马克思主义哲学时代化马克思主义哲学教育推进

基于数据仿真技术实现航海仪器设备的综合应用研究

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基于数据仿真技术实现航海仪器设备的综合应用研究

作者：杜加宝大连海事大学

学位级别：硕士

为满足STCW公约马尼拉修正案要求和我国交通运输令2009年第10号对航海院校教学设备的要求,越来越多的航海相关院校开始拥有航海操纵模拟器,同时各航海院校都需配备船用航海仪器设备作为《航海仪器的使用》训练评估使用,而这些设备在内... 详细信息

为满足STCW公约马尼拉修正案要求和我国交通运输令2009年第10号对航海院校教学设备的要求,越来越多的航海相关院校开始拥有航海操纵模拟器,同时各航海院校都需配备船用航海仪器设备作为《航海仪器的使用》训练评估使用,而这些设备在内陆地区由于无法得到必要的航海实测数据而不能正常工作或无法开展正常的航海教学。本研究主要是通过计算机串口技术、网络、数据库编程技术,将现有的航海操纵模拟器所产生的符合NMEA0183的数据通过多个串口,将其数据存储至将要开发的数据管理系统中,随后通过局域网编程技术将数据发送至相应的计算机终端,通过串口传给相关的航海导航设备。使其设备能正常的显示相应的符合航海实训要求的数据,有效解决现在航海导航设备不能正常在教学中有效使用的问题。在研究过程中,将要解决通过NMEA0183的数据格式进行分析,数据库管理系统模型和局域网数据传输模型的建立等一系列关键问题。然后将航海导航仪器中的几个典型的航海仪器设备如GPS, AIS, VDR等接入到所建立的系统中。最终验证此系统的有效性。经过此研究,将为航海操纵模拟器到航海仪器设备的数据传输打开传输通道,定义有效的航海操纵模拟器数据输出的格式和协议,同时将系统的对多种航海设备工作原理进行详细的研究,为以后的全真航海操纵模拟器研究提供理论研究基础,同时为实船数字化船桥的研制提供有效的尝试。

关键词：航海操纵模拟器 NMEA0183 数据管理系统

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植物油脂包膜尿素缓释性能和施用效果的研究

植物油脂包膜尿素缓释性能和施用效果的研究

作者：杜加银浙江大学

学位级别：硕士

化学氮肥的施用对农业生产,尤其是粮食生产的发展具有重要的作用,世界粮食产量的增加约有50%应归功于化肥的施用,对我国粮食产量的贡献率也在40%以上。国际上公认的施氮量(N)上限为225kg/ha,氮肥利用率达到46%-68%;我国单季作物的氮肥... 详细信息

化学氮肥的施用对农业生产,尤其是粮食生产的发展具有重要的作用,世界粮食产量的增加约有50%应归功于化肥的施用,对我国粮食产量的贡献率也在40%以上。国际上公认的施氮量(N)上限为225kg/ha,氮肥利用率达到46%-68%;我国单季作物的氮肥施用量已超过250kg/ha,氮肥的当季利用率只有30%-35%,明显低于国际平均水平。过量施用氮肥,不仅造成资源的浪费,而且对环境带来明显的污染和潜在的威胁,减少氮素损失,提高化学氮肥的利用率已成为农田氮素管理的关键环节。包膜肥料的研制和应用,能延缓养分的释放,是改善肥料利用率的新兴技术。由于采用合成高分子聚合物为包膜材料,不仅价格昂贵,而且容易产生二次污染,已成为缓/控释肥料研发的主要限制因素。本文以环境友好的植物油脂为主要材料,采用流化喷涂法自行制备包膜尿素,研究其养分释放特性和施用效果,取得以下主要结果：1.以大颗粒尿素和氧化改性的植物油脂为原料,运用自制的流化喷涂装置制得了两种包膜尿素POU1(N:38.2%)、POU2(N:33.3%).2.扫描电镜观测结果表明,植物油脂能够在玻璃平板和尿素颗粒表面上形成完整的膜;POU1肥料表面的混合阻隔层由植物油脂-干燥添加剂组成,POU2肥料表面的混合阻隔层由一层完整的植物油脂膜和植物油脂-干燥添加剂共同组成,其形貌更完整,尿素颗粒表面形成的膜具有层状叠加结构,对养分释放起到物理阻隔的作用。3.连续溶出试验结果表明,POU1和POU2的氮素溶出量显著小于商品包膜尿素(CCU)(P加黑麦草地上部氮磷钾的吸收量,提高氮肥表观利用率。6.田间试验结果表明,施肥处理(除单施钾肥外)的饱粒产量显著高于不施肥处理(P<0.05),植物油脂包膜尿素处理(PPN, POU1:POU2普通尿素=0.3：0.4：0.3)的饱粒产量显著高于NU处理(P<0.05);PPN处理分蘖期地上部、秸秆和糙米的含氮量显著高于NU处理(P＜.05), PPN处理秸秆和糙米中的氮、磷积累量及地上部氮、磷(除N5P2Kc外)总积累量显著高于NU处理(P<0.05),PPN处理糙米中的钾积累量显著高于NU处理(P<0.05);在施氮量为82.5kg/ha-247.5kg/ha的范围内,PPN处理的氮素表观利用率显著高于NU处理(P<0.05);说明施用植物油脂包膜尿素能改善水稻氮、磷营养状况,促进水稻地上部氮、磷、钾的吸收,提高水稻产量和氮肥表观利用率,具有实际应用价值。根据产量效应方程,PPN处理条件下的适宜施氮量为96.3～139.6kg/ha,可作为推荐的氮肥用量。

关键词：植物油脂包膜尿素氨挥发缓释性能多年生黑麦草水稻氮肥表观利用率

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基于卷积神经网络的遥感图像全色锐化方法

基于卷积神经网络的遥感图像全色锐化方法

作者：杜加浩重庆邮电大学

学位级别：硕士

遥感已成为如今人类获取地面信息的重要方式之一,高分辨率的多光谱遥感图像在军事侦察、地貌勘测等众多领域都得到了广泛的应用。但是由于硬件和其他因素的限制,单一传感器获取的遥感图像无法兼具高质量的空间信息和光谱信息,因此将遥... 详细信息

遥感已成为如今人类获取地面信息的重要方式之一,高分辨率的多光谱遥感图像在军事侦察、地貌勘测等众多领域都得到了广泛的应用。但是由于硬件和其他因素的限制,单一传感器获取的遥感图像无法兼具高质量的空间信息和光谱信息,因此将遥感卫星捕获的多光谱图像与全色图像融合从而得到高分辨率的多光谱遥感图像已成为遥感应用中的一个关键性问题。近年来卷积神经网络因其卓越的图像处理效果在图像识别、图像融合以及超分辨率重建等计算机视觉领域研究中得到广泛关注。本文主要研究利用卷积神经网络将多光谱图像和全色图像融合(全色锐化),得到兼具高质量空间信息与光谱信息的融合图像。本文的主要研究内容如下:1.提出一种多流融合与光谱补偿的生成对抗网络全色锐化方法。将基于变分框架与基于深度学习的全色锐化方法结合,综合两者的优势。基于变分框架的全色锐化方法能够很好权衡空间信息保真与光谱信息保真,但存在时间复杂度高、求解困难等难题。基于深度学习的全色锐化方法能够有效的拟合全色图像和多光谱图像到融合图像的非线性映射函数,得到融合结果。该方法将变分模型与条件生成对抗网络结合,参考变分模型能量函数,设计了带有光谱约束和空间结构约束的生成器损失函数。同时,根据多源图像本身特征差异设计了多流融合卷积神经网络架构的生成器网络,并设计光谱补偿结构以补充光谱信息,构建引入空间结构信息的判别器网络,通过生成器与判别器对抗优化图像生成质量,获得融合图像。通过实验证明该方法生成的融合图像优于大多对照的方法。2.提出一种多流融合和多尺度学习的卷积神经网络全色锐化方法。相比于大多数基于深度学习的方法普遍忽略多光谱图像上采样过程重要性,直接在上采样后的多光谱图像上进行光谱信息提取,本方法通过构建频谱特征提取子网直接在原始多光谱图像提取光谱特征,减少了上采样过程带来的噪声影响。同时,考虑现有基于深度学习方法未充分利用网络不同层次的特征信息,该方法构建由多个骨干网络组成的金字塔模块,对在不同的空间感受野下提取的特征进行融合,多尺度学习图像信息。最后,构建空间光谱预测子网融合金字塔模块输出的高级特征和网络前端的低级特征得到融合结果。通过实验证明,该方法生成的融合图像在主观目视检验与客观指标评价上相较于大多对照方法都更优秀。

关键词：遥感图像全色锐化卷积神经网络多流融合光谱补偿多尺度学习

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无线传感器网络在智能电网中应用的研究

无线传感器网络在智能电网中应用的研究

作者：杜加根武汉理工大学

学位级别：硕士

无线传感网络技术是当前信息领域里一个前沿性的研究热点,它的出现具有重大的科学意义和广阔的应用前景。随着器件水平的发展和相关通信协议研究的深入,无线传感器网络技术在电力系统中具有越来越重要的应用价值。智能电网是一个较为... 详细信息

无线传感网络技术是当前信息领域里一个前沿性的研究热点,它的出现具有重大的科学意义和广阔的应用前景。随着器件水平的发展和相关通信协议研究的深入,无线传感器网络技术在电力系统中具有越来越重要的应用价值。智能电网是一个较为复杂的综合系统,高安全性是它的主要特点之一,其安全性表现在多个方面,如发电设备安全、输电设备安全、数据传输安全等等。作者所讨论的安全性主要集中在输电线路故障的快速准确定位与数据传输安全两个大的方面。基于前者作者提出了针对输电线路安全的定位机制DVameop,该机制通过在输电线路上安装传感器,结合输电线路的实际特点,改进传统的定位算法。新的定位方法满足健壮性、自组织性、能量高效、分布式计算等要求,且简单可行,实验表明它是一种理想的输电线路监测方案。智能电网的数据传输网的组成包括有线网络与无线网络,其中无线网络主要指无线传感器网络。相应地智能电网数据传输安全涉及有线传输安全与无线传感网络安全。有线网络发展的历史较长,安全机制与技术比较成熟,而无线传感器网络是面向具体应用型的网络,在智能电网中还是一个较新与较热的研究领域。作者就数字水印技术来解决智能电网下的传感器网络数据传输安全,提出了用以解决传感器网络安全的水印算法,综合考虑智能电网与传感网络的各自的特点,利用交变电流时刻变化的特性生成水印信息。由于传感网络节点能量受限,充分考虑了算法的低复杂度,并用实验仿真数据阐明了该水印算法的合理性。作者所做的具体如下： (1) DVop定位算法是建立在距离信息基础上的技术,跳步值是对多跳距离做平均值而估算得来,因而误差较大,所做的定位也必将粗糙,作者根据电网输电线路的特点,设计出等跳步模型,并以此来布置传感器节点,进而计算跳步的物理距离。作者分析三边计算法定位的不足,利用双曲线定位模式计算未知节点的坐标,求解方法使用Chan算法,最后通过仿真进行性能分析。 (2)通过分析无线传感器网络传输特点并结合数字水印技术,以此来解决智能电网中无线传感器网络数据传输的数据安全性问题,提出了基于交变电流的水印生成、嵌入及检验算法,并通过仿真实验证明了该算法的正确性与可行性。本课题受到输配电装备及系统安全与新技术国家重点实验室开放课题(编号：2007DA10512710407)、教育部博士点基金项目(编号：200804971030)以及中央高校基本科研业务费专项资金项目(编号：No.2010-Ia-049)的资助。

关键词：智能电网数字水印无线传感器网络定位技术 DVHop

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氟罗沙星噬菌体抗体库的构建及鉴定

氟罗沙星噬菌体抗体库的构建及鉴定

作者：杜加茹郑州大学

学位级别：硕士

目的氟罗沙星（Fleroxacin,FLE）是在医学临床以及动物饲料添加剂中广泛应用的一种氟喹诺酮类抗菌药物,由于其广谱抗菌作用,在动物源性食品及药品中过度使用导致残留量过高,严重威胁人类的身体健康,进一步加强监测并提高其检测方法很有... 详细信息

目的氟罗沙星（Fleroxacin,FLE）是在医学临床以及动物饲料添加剂中广泛应用的一种氟喹诺酮类抗菌药物,由于其广谱抗菌作用,在动物源性食品及药品中过度使用导致残留量过高,严重威胁人类的身体健康,进一步加强监测并提高其检测方法很有必要。本研究旨在构建天然鼠源噬菌体抗体库,从中筛选氟罗沙星单链抗体并进行表达与鉴定。基于基因工程方法制备的重组抗体作为第三代抗体,生产周期短且容易改造,为快速低成本制备目的抗体提供了新的方法。方法1.选用未经免疫的健康Balb/c小鼠,提取总细胞RNA,反转录为cDNA作为模板,经RT-PCR扩增出抗体的重链可变区与轻链可变区基因,经重叠延伸PCR用Linker（Gly4Ser）3连接,组装成为单链抗体基因,并引入Sfi Ⅰ和Not Ⅰ酶切位点。双酶切目的片段与噬菌粒pCANTAB5E并连接,电转化*** TG1,构建出初级噬菌体抗体库。2.合成氟罗沙星的人工抗原,以FLE-OVA为包被原对抗体库进行三轮富集筛选,随机选择10株单克隆进行phage-ELISA鉴定及基因测序。3.氟罗沙星单链抗体和pET-32a载体经BglⅡ和HindⅢ限制酶消化后,用T4连接酶将FLE-ScFv插入pET-32a载体。转化大肠杆菌BL21（DE3）菌株并在LB培养基中震荡培养至OD600达到0.7,加入1.0 mmol/L IPTG置于20℃摇床诱导表达10h。离心收集菌体用PBS重悬,超声破碎后收集上清与沉淀,磁珠纯化后SDS-PAGE与Western blot分析蛋白表达,ELISA鉴定效价与抑制。结果1.扩增出340bp的抗体重链可变区与320bp的抗体轻链可变区基因,拼接获得约750bp的单链抗体片段,成功构建库容量大小为2.1 ×1011的初级噬菌体抗体库。2.成功合成氟罗沙星的人工抗原,以FLE-OVA为包被原对抗体库进行三轮富集筛选结果表明:噬菌体回收率逐轮增高,抗体库得到了有效的富集。phage-ELISA结果表明:成功筛选得到能够与FLE-OVA特异性结合的氟罗沙星单链抗体。3.纯化后的FLE-ScFv的SDS-PAGE与Western blot结果表明:抗体在大肠杆菌中主要为包涵体表达,获得大小约47kD的目的条带。基因测序结果经Ediseq序列分析,与单链可变区抗体基因的结构与特征相符。间接竞争ELISA鉴定结果:标准曲线回归方程的线性相关系数≥0.99,IC50为42ng/ml,能够检测出国家规定的氟罗沙星残留标准低限值以下的食品药品残留。结论本研究成功构建天然噬菌体单链抗体库,筛选获得能够与氟罗沙星特异性结合的单链抗体,为抗体的快速制备与检测以及食品药品残留的分析提供了技术支持。

关键词：氟罗沙星人工抗原单链抗体噬菌体天然抗体库酶联免疫吸附分析