检索结果-南通市图书馆

Acta Botanica Sinica 2002年第2期44卷 127-131页

作者：李辉陈孝辛志勇徐惠君杜丽璞马有志中国农业科学院作物育种栽培研究所农业部作物遗传育种重点实验室

The line of T240-6 was selected from 32 SC 2 lines of immature embryo culture of T240 (common wheat (Triticum aestivum L.)× Wheat-Haynaldia villosa (L.) Schur. 6D/6V substitution line) through powdery mildew characterization, glutamate oxaloacetate transaminase (GOT) enzyme and gliadin (Gli) analyses and in situ hybridization. All of the individual plants resistant to powdery mildew lacked the locus of GOT at 6VL arm (GOT-V 2) and had gliadin locus at 6VS arm (Gli-V 2) of Haynaldia villosa. All the plants resistant to powdery mildew had one or two telocentric chromosomes that did not pair with wheat chromosomes but paired between themselves. T240-6 was identified as a telocentric line through in situ hybridization.

关键词： Haynaldia villosa immature embryo culture telocentric chromosome glutamate oxaloacetate transaminase gliadin in situ hybridization

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小麦遗传转化几个因素的研究

中国农业科学 2001年第2期34卷 128-132页

作者：叶兴国徐惠君杜丽璞辛志勇中国农业科学院作物育种栽培研究所中国农业科学院作物育种栽培研究所农业部作物遗传育种重点实验室北京100081

影响小麦遗传转化的因素很多，如基因型、转化方式、表达载体上的启动子和筛选标记，以及转化后的有效筛选。为此，对小麦遗传转化的主要因素进行了研究。结果表明，针对载体上的ＮＰＴⅡ筛选标记基因．Ｇ４１８的适宜用量为２５～５... 详细信息

影响小麦遗传转化的因素很多，如基因型、转化方式、表达载体上的启动子和筛选标记，以及转化后的有效筛选。为此，对小麦遗传转化的主要因素进行了研究。结果表明，针对载体上的ＮＰＴⅡ筛选标记基因．Ｇ４１８的适宜用量为２５～５０ｍｇ／Ｌ，而不能用卡那霉素和新霉素，针对载体上的Ｂａｒ基因筛选标记，ＰＰＴ或Ｂｉａｌｏｐｈｏｓ的适宜用量为３～５ｍｇ／Ｌ，针对载体上的Ｈｐｔ筛选标记基因，潮霉素的适宜用量为１００～１５０ｍｇ／Ｌ；从２５个小麦基因型中，筛选到了扬麦１５８和扬麦１０号等几个幼胚培养力比较高的基因型；选择培养基中选择剂浓度的合理变化对于获得转基因再生植株是有益的。

关键词：小麦遗传转化选择标记基因型筛选程序

不同生长素类型及ABA搭配对小麦幼胚再生效果的影响

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核农学报 2011年第5期25卷 1023-1028页

作者：别晓敏杜丽璞佘茂云徐惠君叶兴国中国农业科学院作物科学研究所/农作物基因资源与基因改良国家重大科学工程/农业部作物遗传育种重点开放实验室北京100081

生长素是小麦幼胚产生胚性愈伤组织的关键成分,培养基中适宜的生长素种类、浓度和组合决定着小麦幼胚再生效果。本研究以小麦基因型CB037幼胚为材料,在分别确定dicamba、2,4,5-T和picloram的适宜用量的基础上,比较了2,4-D、dicamba、2,4... 详细信息

生长素是小麦幼胚产生胚性愈伤组织的关键成分,培养基中适宜的生长素种类、浓度和组合决定着小麦幼胚再生效果。本研究以小麦基因型CB037幼胚为材料,在分别确定dicamba、2,4,5-T和picloram的适宜用量的基础上,比较了2,4-D、dicamba、2,4,5-T、picloram在适宜浓度下诱导再生的效果,筛选出ABA搭配2,4-D的最佳浓度组合。结果表明,dicamba、2,4,5-T和picloram的适宜用量分别为2.5mg/L、3.0mg/L和3.0mg/L,2,4-D诱导小麦幼胚再生效果最好,其次为dicamba,picloram和2,4,5-T诱导效果较差;在含有2,4-D 2.0mg/L的培养基中加入ABA 0.3mg/L能明显抑制幼胚直接萌发,显著提高胚性愈伤组织诱导率和再生率。

关键词：小麦幼胚生长素胚性愈伤组织诱导率植株再生率

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小麦转基因方法及其评述

遗传 2011年第5期33卷 422-430页

作者：叶兴国陈明杜丽璞徐惠君中国农业科学院作物科学研究所北京100081

小麦是遗传转化比较困难的作物之一。为了克服小麦基因工程育种和功能基因组学研究的障碍,人们分别尝试利用基因枪、花粉管通道、超声波、离子束注入、激光微束穿刺、PEG(Polyethylene glycol)、电击和农杆菌等方法转化小麦,涉及的受体... 详细信息

小麦是遗传转化比较困难的作物之一。为了克服小麦基因工程育种和功能基因组学研究的障碍,人们分别尝试利用基因枪、花粉管通道、超声波、离子束注入、激光微束穿刺、PEG(Polyethylene glycol)、电击和农杆菌等方法转化小麦,涉及的受体材料包括幼胚、成熟胚、花药愈伤组织、幼穗、芽尖和花器官。文章对小麦主要遗传转化方法及其应用进行了介绍、回顾和评述,分析、比较了获得安全型转基因小麦的几种策略,以期增强读者对小麦转基因技术和进展的了解,促进小麦转化技术的持续改进和提高。

关键词：小麦遗传转化

大麦α-淀粉酶抑制基因对小麦α-淀粉酶的抑制作用研究

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作物学报 1998年第6期24卷 763-767页

作者：肖世和陈孝徐慧君林志珊杜丽璞中国农业科学院作物育种栽培研究所北京100081

α-淀粉酶活性的调控是小麦生产和加工的一个重要问题。本研究比较了大麦、小麦、黑麦和小黑麦α-淀粉酶抑制蛋白对小麦α-淀粉酶作用的等电聚焦电泳图谱,并测定了具有大麦α-淀粉酶抑制基因或小麦种子休眠基因的发育种子内源α-淀粉酶... 详细信息

α-淀粉酶活性的调控是小麦生产和加工的一个重要问题。本研究比较了大麦、小麦、黑麦和小黑麦α-淀粉酶抑制蛋白对小麦α-淀粉酶作用的等电聚焦电泳图谱,并测定了具有大麦α-淀粉酶抑制基因或小麦种子休眠基因的发育种子内源α-淀粉酶同工酶谱。结果表明,大麦α-淀粉酶抑制蛋白可在小麦遗传背景中抑制α-淀粉酶-1活性。小麦种子萌动时,α-淀粉酶抑制蛋白使α-淀粉酶-1受到抑制,α-淀粉酶-2的合成以及整体整个发芽过程也随之推迟。在具有大麦α-淀粉酶抑制基因或小麦种子休眠基因的小麦发育种子中,α-淀粉酶-1活性均可较早消失,但受不同遗传背景影响。这些结果说明大麦α-淀粉酶抑制基因在小麦遗传背景中表达良好,可用于控制小麦种子穗发芽。

关键词：小麦大麦 α淀粉酶抑制作用

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农杆菌介导大麦无筛选标记转基因植株的获得

中国农业科学 2020年第18期53卷 3638-3649页

作者：龚强王轲叶兴国杜丽璞徐延浩长江大学农学院中国农业科学院作物科学研究所

【目的】目前,国内外大麦遗传转化主要利用Golden Promise品种,基因依赖性严重,尤其是大麦的转化效率较低,并且获得安全型转基因大麦植株对其进一步产业化非常重要。建立高效、无筛选标记大麦遗传转化体系,拓展大麦遗传转化的受体基因型... 详细信息

【目的】目前,国内外大麦遗传转化主要利用Golden Promise品种,基因依赖性严重,尤其是大麦的转化效率较低,并且获得安全型转基因大麦植株对其进一步产业化非常重要。建立高效、无筛选标记大麦遗传转化体系,拓展大麦遗传转化的受体基因型,为大麦基因功能解析和大麦转基因育种及商业化种植提供技术保障。【方法】以优良大麦品种Vlamingh为受体,取开花授粉后14 d左右的幼胚为转化材料,通过对培养基成分及培养步骤优化,建立农杆菌介导的高效遗传转化体系,并利用该体系将Bar和GUS在不同T-DNA区段的双T-DNA表达载体pWMB123转化大麦,获得候选转基因植株,然后利用PCR、Bar试纸条、组织化学染色和Southern blot等检测方法,在T1代转基因植株中成功获得无筛选标记大麦转基因植株。【结果】在愈伤组织分化阶段,发现培养基中添加1.0 mg·L-1KT、0.5 mg·L-16-BA和0.05 mg·L-1NAA明显促进愈伤组织分化。在转基因植株生根阶段,发现采用添加1.0 mg·L-1的IBA的SM1(无其他生长素)的生根效果最佳,培养基中添加2.5 mg·L-1CuSO4显著降低了大麦转基因植株白化现象。共转化了138个幼胚,最终获得14株大麦转基因植株,转化效率10.14%。PCR、Bar试纸条、GUS染色等检测证实,T0代转基因植株中均含有Bar,而仅有10株含有GUS,2个T-DNA的共转化效率为71.43%。选取4个同时含有Bar和GUS的转基因植株,对其自交后代进行检测,在BL8株系中筛选到2株只含GUS而不含Bar的转基因植株,无筛选标记效率为6.9%。在T1代转基因植株中对Bar和GUS进行了Southern blot鉴定,发现在多数转基因植株中Bar和GUS均为多拷贝整合,进一步证实BL8-15和BL8-19为无筛选标记的转基因植株。【结论】利用大麦品种Vlamingh为转化材料可以较高效率获得转基因植株,提高愈伤组织分化效率和转基因植株生根效率,降低转基因植株白化现象。利用农杆菌介导双T-DNA表达载体转化大麦,成功获得了无筛选标记转基因植株。

关键词：大麦遗传转化无筛选标记农杆菌介导法

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小麦农杆菌介导转基因植株的稳定获得和检测

中国农业科学 2001年第5期34卷 469-474+581-582页

作者：叶兴国,Shirley Sato,徐惠君,杜丽璞,Tom Clemente 中国农业科学院作物育种栽培研究所美国内布拉斯加大学生物技术中心中国农业科学院作物育种栽培研究所中国农业科学院作物育种栽培研究所美国内布拉斯加大学生物技术中心农业部作物遗传育种重点实验室北京100081 NE68588 Lincoln USA 农业部作物遗传育种重点实验室

以预培养 4 d的小麦幼胚愈伤组织为受体 ,L B培养基上激活培养 3 d或 AB培养基上激活培养 4 d,并在WCC培养基中重悬的 C5 8c1农杆菌菌系为供体 ,将含有目的基因、标记基因的 p PTN2 4 9、p PTN 2 5 4、p PTN2 70、p SIS-GFP等重组 DNA... 详细信息

以预培养 4 d的小麦幼胚愈伤组织为受体 ,L B培养基上激活培养 3 d或 AB培养基上激活培养 4 d,并在WCC培养基中重悬的 C5 8c1农杆菌菌系为供体 ,将含有目的基因、标记基因的 p PTN2 4 9、p PTN 2 5 4、p PTN2 70、p SIS-GFP等重组 DNA质粒转入了小麦 ,经在含 10～ 5 0 mg/ L geneticin( G4 18)、5 0 mg/ L cefotaxime、5 0 m g/ L vancomycin、5 0 m g/ L ticillicin选择培养基上多次选择 ,移栽前利用 npt EL ISA检测 ,移栽后利用叶片离体退绿、PCR和 South-ern blot 4种方法综合检测 ,共获得了 2 9株转基因植株 ,转化频率平均为 0 .82 %。在所获得的转基因植株中 ,单拷贝整合植株占 65 .5 2 %。研究结果还表明 ,不同基因型的转化效率显著不同 ,除了 Bobwhite外 ,笔者也从扬麦 10号获得了转基因植株 ;EL ISA测定值的高低与外源 DNA整合的拷贝数有一定关系 ;初步建立了农杆菌介导稳定转化小麦的技术体系。

关键词：小麦农杆菌转基因植株单拷贝整合

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组织培养途径改良定型小麦品种的研究

作物学报 1998年第3期24卷 310-314页

作者：叶兴国徐惠君赵乐莲杜丽璞中国农业科学院作物育种栽培研究所北京100081

选用CA9070、CA8694、京411三个定型品种进行组织培养,比较了三种培养方式的培养效果,凋查了H_2、R_2株系主要农艺性状的遗传变异情况。结果表明,幼胚培养的培养效率最高,基因型间差异小,花药培养的基因型间差异显著。花药培养后代农艺... 详细信息

选用CA9070、CA8694、京411三个定型品种进行组织培养,比较了三种培养方式的培养效果,凋查了H_2、R_2株系主要农艺性状的遗传变异情况。结果表明,幼胚培养的培养效率最高,基因型间差异小,花药培养的基因型间差异显著。花药培养后代农艺性状的变异率高于幼胚培养,且其性状值向更小的方向变异,而幼胚培养诱发的变异范围大于花药培养。获得了CA8694的花培变异株系95H055,株高降低了11.5cm,获得了CA9070的幼胚培养变异株系95H221、95H012,穗长增加了0.6～1.0cm。

关键词：小麦组织培养无性系变异育种

利用组织培养技术向普通小麦导入簇毛麦抗白粉病基因的研究

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中国农业科学 1996年第5期 2-9页

作者：陈孝徐惠君杜丽璞尚立民韩彬施爱农肖世和中国农业科学院作物育种栽培研究所

对硬粒小麦（Ｔ．ｄｕｒｕｍ）－簇毛麦（Ｈ．ｖｉｌｏｓａ）杂种幼胚和Ｆ１幼穗诱导的愈伤组织进行秋水仙素处理获得硬－簇双二倍体ＴＨ１，ＴＨ１Ｗ，ＴＨ２Ｗ，ＴＨ３，ＴＨ３Ｗ。平均加倍率为７８．８％，最高为９４．１％。通过与... 详细信息

对硬粒小麦（Ｔ．ｄｕｒｕｍ）－簇毛麦（Ｈ．ｖｉｌｏｓａ）杂种幼胚和Ｆ１幼穗诱导的愈伤组织进行秋水仙素处理获得硬－簇双二倍体ＴＨ１，ＴＨ１Ｗ，ＴＨ２Ｗ，ＴＨ３，ＴＨ３Ｗ。平均加倍率为７８．８％，最高为９４．１％。通过与普通小麦（Ｔ．ａｅｓｔｉｖｕｍ）回交，幼胚和花药培养，得到了６Ｄ／６Ｖ异代换系９４Ｇ２２－１，９４Ｇ２５－１，９４Ｇ３２－１，９４Ｇ３３－１。谷草转氨酶（ＧＯＴ）和酯酶（ＥＳＴ）同工酶可作为这些材料的生化标记。ＲＡＰＤ分析中，引物ＯＰＡＮ３可作为其分子标记引物

关键词：硬粒小麦普通小麦簇毛麦组织培养双二倍体电泳 RAPD

源于L1的小麦抗黄矮病基因的特异PCR标记及辅助育种的研究

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作物学报 2002年第4期28卷 486-491页

作者：张增艳辛志勇陈孝王晓萍刘景芳杜丽璞中国农业科学院作物育种栽培研究所

以小麦 -中间偃麦草附加系 L1为抗源 ,选育出抗黄矮病小麦异源易位系 HW6 4 2 ,YW4 4 3,YW2 4 3,Y9910 2 9等。本文以上述易位系及其抗源、小麦亲本作供试材料 ,鉴定出一个微卫星 (Simple sequence repeat,SSR)标记gwm37- 450 ,可跟踪... 详细信息

以小麦 -中间偃麦草附加系 L1为抗源 ,选育出抗黄矮病小麦异源易位系 HW6 4 2 ,YW4 4 3,YW2 4 3,Y9910 2 9等。本文以上述易位系及其抗源、小麦亲本作供试材料 ,鉴定出一个微卫星 (Simple sequence repeat,SSR)标记gwm37- 450 ,可跟踪、检测源于 L1的抗黄矮病基因。将难以分辨、稳定性差的 gwm37- 450 特异带分离、克隆、测序 ,根据测序结果重新设计 1对特异 PCR引物 ,转化为扩增产物有无的 SCAR(sequence characterizied amplified region)标记SC- W374 50 。利用 HW6 4 2 /中 86 0 1的 F2 群体 ,对 gwm 37- 450 和 SC- W374 50 进行分析 ,结果表明 ,二者均与抗黄矮病基因紧密连锁 ,后者较前者稳定。利用 SC- W374 50 跟踪抗黄矮病基因 ,将抗黄矮病基因、抗白粉病基因向优良小麦品种中麦 16、宛 710 7转育 ,快速选育出兼抗黄矮病、白粉病的回交植株 2 7个。实践了分子标记辅助抗黄矮病小麦育种的技术路线。

关键词： L1 小麦抗黄矮病基因特异PCR标记辅助育种中间偃麦草易位系