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解放军医学情报 1991年第5期5卷 233-236页

作者：李风知

水蛭素12肽与低分子量尿激酶融合基因的构建和表达

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军事医学科学院院刊 1998年第1期22卷 16-19页

作者：刘凤云李秀珍李风知程度胜军事医学科学院生物工程研究所

目的：旨在获得既能抗栓又能溶栓的双功能蛋白，并在大肠杆菌中表达。方法：化学合成水蛭素１２肽基因编码序列。通过ＤＮＡ重组技术将水蛭素１２肽基因片段连接到低分子量尿激酶ｃＤＮＡ片段５′端，构建成融合基因。结果：构建了水蛭... 详细信息

目的：旨在获得既能抗栓又能溶栓的双功能蛋白，并在大肠杆菌中表达。方法：化学合成水蛭素１２肽基因编码序列。通过ＤＮＡ重组技术将水蛭素１２肽基因片段连接到低分子量尿激酶ｃＤＮＡ片段５′端，构建成融合基因。结果：构建了水蛭素１２肽与低分子量尿激酶的融合基因，在大肠杆菌中获得表达。重组融合蛋白具有溶栓与抗栓双功能。结论：运用ＤＮＡ重组技术可将两种不同功能的蛋白合理地融合在一起，使其具有溶纤活性和抗凝活性。

关键词：水蛭素12肽低分子量尿激酶抗凝血酶融合基因

pXMT-uk和pMTSV-duk中尿激酶原基因在cos-7细胞中表达水平的比较

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pXMT-uk和pMTSV-duk中尿激酶原基因在cos-7细胞中表达水平的比较

中国细胞生物学学会第五次会议

作者：李风知军事医学科学院生物工程研究所

pXMT-UR是一个含有小鼠金属硫蛋白 (MT)基因启动子调控着尿激酶原基因的细菌动物细胞穿梭表达载体;在这一载体的基础上,

关键词：

尿激酶原cDNA在中国仓鼠卵巢细胞中的高效表达(Ⅰ)

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军事医学科学院院刊 1993年第2期17卷 89-92页

作者：李风知李军李秀珍林建波俞炜源生物工程研究所分子遗传中心

借鉴基因表达调控理论的研究结果和作者多年来对高效表达的研究经验,自行设计和构建了一个适合在哺乳动物细胞中高效表达外源基因的新型载体。将插入尿激酶原(pro—UK)cDNA的这一表达载体用磷酸钙共沉淀法转染CHO—dhfr^-细胞,经一系列... 详细信息

借鉴基因表达调控理论的研究结果和作者多年来对高效表达的研究经验,自行设计和构建了一个适合在哺乳动物细胞中高效表达外源基因的新型载体。将插入尿激酶原(pro—UK)cDNA的这一表达载体用磷酸钙共沉淀法转染CHO—dhfr^-细胞,经一系列筛选、MTX加压扩增、亚克隆和锌离子诱导,获得了高效表达尿激酶型纤溶酶原激活物(u-PA)的细胞株,表达水平达800～1500IU/(10~6细胞·d)。

关键词：表达载体尿激酶原 cDNA

外源基因在哺乳动物细胞中的表达产物抗原性和生物活性的不一致现象

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外源基因在哺乳动物细胞中的表达产物抗原性和生物活性的不一致现...

中国细胞生物学学会第五次会议

作者：李风知林建波李军军事医学科学院生物工程研究所

在用中国仓鼠卵巢(CHO)细胞表达尿激酶原的研究中,当对不同的转化克隆细胞灶用 ELISA法和纤维平板溶圈法分别测定表达产物抗原性和生物活性时,我们发现某些有较强

关键词：

人尿激酶原在CHO细胞中的基因扩增与高效表达

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中国科学（B辑） 1993年第5期23卷 512-518页

作者：张宏权李风知俞炜源李秀珍方继明费恩阁黄翠芬军事医学科学院基础医学研究所北京100850 军事医学科学院生物工程研究所解放军分子遗传学中心北京100850

本文通过基因共转染和基因共扩增方法,在SV40病毒晚期启动子控制下成功地在中国仓鼠卵巢细胞二氢叶酸还原酶缺陷株(CHO-DHFR^-)中高效表达了人尿激酶原,其表达水平在5×10^(-6) mol/L氨甲喋呤存在下可达2—3μg/10~6细胞/24 h。采用PMA... 详细信息

本文通过基因共转染和基因共扩增方法,在SV40病毒晚期启动子控制下成功地在中国仓鼠卵巢细胞二氢叶酸还原酶缺陷株(CHO-DHFR^-)中高效表达了人尿激酶原,其表达水平在5×10^(-6) mol/L氨甲喋呤存在下可达2—3μg/10~6细胞/24 h。采用PMA诱导可将表达水平提高至3.5—4μg/10~6细胞/24 h。相应的Pro-UKcDNA在细胞基因组上整合的拷贝数为200—300拷贝/细胞。Western blot分析表明,表达出来的重组Pro-UK与天然Pro-UK具有相似的分子量:S_(2444)测活法证明重组Pro-UK具有体外酰胺水解活性。

关键词：人尿激酶原 CHO细胞基因扩增

pMTSV-duk和p91023B-uk中尿激酶原基因在CHO-dhfr-细胞中的稳定性表达研究

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pMTSV-duk和p91023B-uk中尿激酶原基因在CHO-dhfr-细胞中的稳定性...

中国细胞生物学学会第五次会议

作者：李风知林建波俞炜源军事医学科学院生物工程研究所

p91023B是国外构建的一个细菌与动物细胞高效表达的穿梭载体,它含有以下主要成份: SV40复制起点和增强子序列;腺病毒主要晚期启动子和VAⅠ,VAⅡ基因区;含有两个不同来源的拼接位点的杂合内含子;所有这些结构

关键词：

用国产SH－2型微载体和低血清培基灌流培养CHO工程细胞

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军事医学科学院院刊 1995年第2期19卷 81-85页

作者：肖成祖黄子才陈昭烈郭智霞高丽华李风知周鹤山李予川军事医学科学院生物工程研究所

采用国产ＳＨ—２型聚苯乙烯微载体和新研制的低血清培基添加剂ＢＩＧＢＥＦ—２，在改进了的灌流控制系统的控制下灌流培养产尿激酶原ＣＨＯ工程细胞ＣＬ—１１Ｇ，所得细胞密度超过１×１０￣７细胞／ｍｌ，尿激酶原平均活性为４００... 详细信息

采用国产ＳＨ—２型聚苯乙烯微载体和新研制的低血清培基添加剂ＢＩＧＢＥＦ—２，在改进了的灌流控制系统的控制下灌流培养产尿激酶原ＣＨＯ工程细胞ＣＬ—１１Ｇ，所得细胞密度超过１×１０￣７细胞／ｍｌ，尿激酶原平均活性为４００７ＩＵ／ｍｌ，最高达６６１４ＩＵ／ｍｌ，均高于以前采用５％血清的培基和Ｂｉｏｓｉｌｏｎ微载体培养时的水平，从而更有利于中试和未来的大规模工业化生产。

关键词：微载体低血清培基添加剂灌流培养尿激酶原

激活蛋白AP-2抑制A549中survivin基因的高表达

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激活蛋白AP-2抑制A549中survivin基因的高表达

华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会

作者：张梦杰廖雅成孙明李风知同济大学生命科学与技术学院上海 200092 Roswell Park Cancer Institute BuffaloNew YorkUSA

Survivin是细胞凋亡抑制蛋白家族(inhibitor of apoptosis protein family,IAP)中最重要的一员。该基因在几乎所有的肿瘤细胞中呈高水平表达,但在正常组织中不表达或只在很少数组织细胞中表达很低。Survivin基因的高表达往往与肿瘤发生... 详细信息

Survivin是细胞凋亡抑制蛋白家族(inhibitor of apoptosis protein family,IAP)中最重要的一员。该基因在几乎所有的肿瘤细胞中呈高水平表达,但在正常组织中不表达或只在很少数组织细胞中表达很低。Survivin基因的高表达往往与肿瘤发生、发展、抗化疗与放疗、病

关键词： survivin AP-2 细胞转染 A549

转录因子AP-2对乳腺癌细胞凋亡和增殖的影响

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转录因子AP-2对乳腺癌细胞凋亡和增殖的影响

2010中国青年遗传学家论坛

作者：张梦杰祝建廖雅成孙明李风知同济大学生命科学与技术学院同济大学生命科学与技术学院模式生物技术开放实验室 Department of Pharmacology and Therapeutics Roswell Park Cancer InstituteBuffaloNYUSA

核转录因子AP-2是一个重要的转录因子家族,该家族成员主要参与哺乳动物的胚胎发育、细胞分化、细胞周期调控等过程。腺病毒(Adenovirus,Ad)表达载体在哺乳动物和多种细胞上能够高效地进行基因转移和蛋白表达,使其在基因疫苗及基因治疗... 详细信息

核转录因子AP-2是一个重要的转录因子家族,该家族成员主要参与哺乳动物的胚胎发育、细胞分化、细胞周期调控等过程。腺病毒(Adenovirus,Ad)表达载体在哺乳动物和多种细胞上能够高效地进行基因转移和蛋白表达,使其在基因疫苗及基因治疗的研究中备受人们的青睐。我们利用pAdTrack-CMV/pAdEasy-1腺病毒系统,成功构建了含有目的基因AP-2的腺病毒表达载体pAdEasy-1/AP-2,PacI酶切线性化后将其转染到HEK293细胞中进行包装,获得含有AP-2的重组腺病毒。将收获的腺病毒感染不表达AP-2的恶性乳腺癌MDA-MB-231细胞,western检测到AP-2在MDA-MB-231肿瘤细胞中重新表达。AP-2重组腺病毒感染MDA-MB-231细胞48h后,流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡情况,软琼脂集落形成实验确定AP-2对癌细胞集落形成的影响,以及细胞划痕愈合实验检测AP-2对癌细胞迁移是否有影响。实验结果表明,转录因子AP-2能够显著地诱导乳腺癌MDA-MB-23 1细胞凋亡,并抑制癌细胞集落的形成和癌细胞迁移。

关键词： AP-2 转录因子腺病毒肿瘤细胞细胞凋亡细胞集落形成