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人鼻中隔软骨细胞和新型与改性聚乳酸支架在软骨组织工程的应用前期研究

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人鼻中隔软骨细胞和新型与改性聚乳酸支架在软骨组织工程的应用前...

作者：李雪盛第一军医大学

学位级别：硕士

目的：研究人鼻中隔软骨细胞作为软骨组织工程种子细胞和改进海绵状聚乳酸支架材料的生物学特性，为人鼻中隔软骨细胞和新型PLA支架在修复、重建耳、鼻、喉和气管软骨组织缺损的应用提供实验依据。方法： 1．人鼻中隔软骨细胞的... 详细信息

目的：研究人鼻中隔软骨细胞作为软骨组织工程种子细胞和改进海绵状聚乳酸支架材料的生物学特性，为人鼻中隔软骨细胞和新型PLA支架在修复、重建耳、鼻、喉和气管软骨组织缺损的应用提供实验依据。方法： 1．人鼻中隔软骨细胞的研究：取成人鼻中隔透明软骨，分离获得软骨细胞，进行体外培养，观察其生物学特性和胰岛素样生长因子-Ⅰ （IGF-1）对其增殖的影响;采用流式细胞技术研究IGF-Ⅰ影响人鼻中隔软骨细胞生长的机制;建立体外培养人鼻中隔软骨细胞的凋亡模型，观察胰岛素对其凋亡的影响。 2．新型和改性PLA支架的研究：（1）、采用新方法制备一种新型高孔隙率海绵状PLA支架，进行这种新型支架的体外、体内降解性和生物相容性观察以及体内成软骨能力观察。（2）、将PLA接枝丙烯酸β-羟乙酯，制成一种改性PLA支架，进行这种改性PLA支架的体外降解研究和生物相容性与安全性评价。结果： 1、软骨种子细胞：（1）、人鼻中隔软骨细胞于体外单层培养可正常生长增殖，4代以内可保持表型稳定，可分泌糖胺聚糖、碱性磷酸酶，并可形成其表型标志物Ⅱ型胶原。（2）、IGF-Ⅰ可促进体外培养人鼻中隔软骨细胞增殖，IGF-Ⅰ可缩短软骨细胞周期亚时相中的G1、G2M期。（3）、紫外线可诱导体外培养的人鼻中隔软骨细胞凋亡，胰岛素对紫外线诱导体外培养人鼻中隔软骨细胞的凋亡有抑制作用。 2、新型与改性PLA支架：（1）、新型中等分子量高孔隙率的海绵状 PLA支架具有良好的生物相容性和生物可降解性。（2）、改性的多孔海绵状PLA接枝丙烯酸β-羟乙酯具有良好的生物相容性和生物可降解性及安全性，增加了亲水性。（3）、软骨细胞-新型PLA支架复合物体内培养，很好地形成了新生软骨组织。结论： l、人鼻中隔软骨细胞可在体外培养扩增，可用作软骨种子细胞。 2。IGF－1可促进人鼻中隔软骨细胞增殖，胰岛素可抑制软骨细胞凋亡。 3、紫外线可诱导体外培养的人鼻中隔软骨细胞凋亡，这一模型可应用于检测体外培养软骨细胞凋亡的影响因子。 4、新型的高孔隙率PLA支架具有良好的生物相容性及生物可降解性，其高孔隙率特性有利于细胞在支架内增殖，植入软骨细胞的这种新型PLA支架复合物在体内能形成组织工程软骨。 5、接枝丙烯酸p－羟乙酯的改性PLA支架具有良好的生物相容性、安全性及生物可降解性，亲水性明显优于未改性的PLA支架。意义：本实验为人鼻中隔软骨细胞和新型与改性PLA支架应用于软骨组织工程提供了理论和实验依据。

关键词：组织工程软骨细胞细胞生物学聚乳酸生物相容性生物可降解性胰岛素胰岛素样生长因子-Ⅰ 细胞凋亡

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原位组织工程构建兔听小骨的研究

中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2007年第5期42卷 362-365页

作者：李雪盛孙建军海军总医院全军耳鼻咽喉科中心北京100037

目的将猪小柱状脱细胞松质骨与骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic proteins 2,BMP-2)复合制成听骨赝复物,植入兔听泡内,观察其原位成骨状况。方法制备猪小柱状脱细胞松质骨,与 BMP-2复合作为听骨赝复物。选择5只新西兰大耳白兔,采用... 详细信息

目的将猪小柱状脱细胞松质骨与骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic proteins 2,BMP-2)复合制成听骨赝复物,植入兔听泡内,观察其原位成骨状况。方法制备猪小柱状脱细胞松质骨,与 BMP-2复合作为听骨赝复物。选择5只新西兰大耳白兔,采用耳后进路,听泡后外侧骨壁钻孔,清除听泡内部分黏膜组织,一侧植入复合 BMP-2听骨赝复物,对侧耳植入单纯脱细胞骨小柱作为对照。术后3个月,通过大体及病理切片观察听骨赝复物成骨情况。结果术后5只兔健康状况良好。术后3个月,植入的复合 BMP-2脱细胞松质骨与听泡骨壁接触部位结合紧密,表面被再生黏膜覆盖,病理学检查发现有新骨形成,而对照耳仅有黏膜覆盖,无新骨形成。结论复合 BMP-2的猪脱细胞松质骨可于兔听泡内形成新生骨组织,有可能用于听骨链缺损重建。

关键词：组织工程听小骨假体骨形态发生蛋白质类

脱细胞松质骨/骨形态发生蛋白-2/胶原海绵重建兔上颌窦外侧骨壁伴黏膜缺损实验研究

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中华医学杂志 2007年第18期87卷 1276-1278页

作者：李雪盛孙建军海军总医院全军耳鼻喉中心北京100037

目的利用胶原海绵及复合骨形态发生蛋白-2(BMP-4)的脱细胞松质骨,原位修复兔上颌窦外侧骨壁伴黏膜缺损,观察 BMP-2原位诱导成骨及上颌窦外侧骨壁、黏膜修复状况。方法制备复合 BMP-2的片状脱细胞松质骨,单侧以生物蛋白胶固定薄层胶原海... 详细信息

目的利用胶原海绵及复合骨形态发生蛋白-2(BMP-4)的脱细胞松质骨,原位修复兔上颌窦外侧骨壁伴黏膜缺损,观察 BMP-2原位诱导成骨及上颌窦外侧骨壁、黏膜修复状况。方法制备复合 BMP-2的片状脱细胞松质骨,单侧以生物蛋白胶固定薄层胶原海绵作为修复材料,未加BMP-2材料用做对照。手术去除兔上颌窦外侧骨壁及附着黏膜,胶原海绵侧面向窦腔,原位修复缺损,术后3个月进行大体标本及病理切片观察,了解其修复效果及成骨情况。结果兔术后健康状况良好,术后3个月大体观察兔上颌窦外侧壁缺损修复良好,窦腔内侧面有新生黏膜覆盖。病理学检查发现实验组脱细胞松质骨内有新骨形成,对照组仅有纤维结缔组织长入。结论 BMP-2具有诱导成骨能力,胶原海绵可用作黏膜再生支架,脱细胞松质骨/BMP-2/胶原海绵,可用于修复上颌窦局部骨壁伴黏障缺损。

关键词：骨形态发生蛋白质类上颌窦骨重建成骨细胞

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原位组织工程技术的发展与应用前景

中华医学杂志 2007年第6期87卷 430-431页

作者：李雪盛孙建军海军总医院耳鼻喉-头颈外科北京100037

组织工程学（tissue engineering）是一门将细胞生物学和材料学相结合，在体内和体外进行组织或器官构建的新兴学科，其基本方法是将一定数量的具有特定功能的种子细胞与可降解的多孔生物支架材料复合，经过一段时间体外培养后植入体内... 详细信息

组织工程学（tissue engineering）是一门将细胞生物学和材料学相结合，在体内和体外进行组织或器官构建的新兴学科，其基本方法是将一定数量的具有特定功能的种子细胞与可降解的多孔生物支架材料复合，经过一段时间体外培养后植入体内。支架材料在体内逐渐降解吸收，种子细胞则不断分裂增殖，合成并分泌细胞外基质，最终支架完全降解，形成具有正常结构与功能的新生组织或器官。

关键词：组织工程技术生物支架材料分泌细胞外基质原位植入体内种子细胞体外培养组织工程学

兔骨髓基质干细胞成骨诱导及复合培养的生长状况

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中国临床康复 2004年第14期8卷 2658-2659页

作者：李雪盛孙建军解放军海军总医院全军耳鼻喉中心北京市100037

目的:研究体外培养的兔骨髓基质干细胞的成骨诱导及复合培养生长状况。方法:体外培养兔骨髓基质干细胞,向成骨细胞方向诱导分化,并接种于三维多孔羟基磷灰石材料上,观察其体外生长状况。结果:体外培养条件下,骨髓基质干细胞容易存活,可... 详细信息

目的:研究体外培养的兔骨髓基质干细胞的成骨诱导及复合培养生长状况。方法:体外培养兔骨髓基质干细胞,向成骨细胞方向诱导分化,并接种于三维多孔羟基磷灰石材料上,观察其体外生长状况。结果:体外培养条件下,骨髓基质干细胞容易存活,可向成骨细胞转化,并能在支架材料上贴附生长。结论:骨髓基质干细胞可在体外培养条件下大量增殖,向成骨细胞转化,并能在三维多孔羟基磷灰石材料上贴附生长。

关键词：生物医学工程/发展趋势干细胞骨髓细胞培养

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再生医学之组织工程耳廓软骨再生与功能重建

临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2019年第6期33卷 567-571页

作者：李雪盛孙建军解放军总医院第六医学中心全军耳鼻咽喉头颈外科中心北京100048

对于人类来说,耳廓收集声波的功能意义远低于其外观价值,因此,耳廓外形或位置的任何异常都是难以接受的。耳廓组织缺损的常见原因包括四类:先天畸形、炎症、外伤或手术(医源性)。支撑耳廓外形的软骨属于弹力软骨,维持着耳廓独特的外形... 详细信息

对于人类来说,耳廓收集声波的功能意义远低于其外观价值,因此,耳廓外形或位置的任何异常都是难以接受的。耳廓组织缺损的常见原因包括四类:先天畸形、炎症、外伤或手术(医源性)。支撑耳廓外形的软骨属于弹力软骨,维持着耳廓独特的外形与功能,相对于软骨表面的皮肤组织,软骨再生能力弱,而且来源有限,因此耳廓缺损重建的重点在于如何恢复其弹性软骨支架。另外,与其他部位的软骨修复不同,耳廓软骨重建不仅要考虑其功能,而且对外观的要求更高。

关键词：软骨组织工程耳廓重建软骨细胞培养支架

类胰岛素样生长因子I在人鼻中隔软骨细胞体外培养中的作用

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中国临床康复 2003年第4期7卷 554-555页

作者：李雪盛孙建军解放军海军总医院全军耳鼻喉中心北京市100037

目的:为加速体外培养的人鼻中隔软骨细胞的增殖,观察类胰岛素样生长因子I(IGF-I)对体外培养软骨细胞的影响。方法:体外培养人鼻中隔软骨细胞,MTT法观察IGF-I对软骨细胞增殖的影响;流式细胞仪检测IGF-I对软骨细胞周期的影响;斑点杂交法了... 详细信息

目的:为加速体外培养的人鼻中隔软骨细胞的增殖,观察类胰岛素样生长因子I(IGF-I)对体外培养软骨细胞的影响。方法:体外培养人鼻中隔软骨细胞,MTT法观察IGF-I对软骨细胞增殖的影响;流式细胞仪检测IGF-I对软骨细胞周期的影响;斑点杂交法了解IGF-I对软骨细胞II型胶原mRAN的影响。结果:IGF-I浓度大于5ng/ml即可促进体外培养软骨细胞的增殖,缩短软骨细胞增殖周期,有助于II型胶原mRNA的合成。结论:IGF-I促进人鼻中隔软骨细胞增殖与缩短细胞周期有关,并可能通过促进软骨细胞II型胶原mRNA的合成使软骨细胞保持表型稳定。

关键词：类胰岛素样生长因子Ⅰ 人鼻中隔软骨细胞体外培养

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组织工程种子细胞的研究进展

临床耳鼻咽喉科杂志 2004年第5期18卷 313-314页

作者：李雪盛孙建军海军总医院全军耳鼻咽喉科中心北京100037

随着组织或器官移植物需要的增加,组织工程研究已取得了重大进展,如组织工程皮肤已经应用于临床,组织工程软骨、骨及人工肝正在进行临床实验,极有可能在近几年内进入临床应用.

关键词：组织工程种子细胞干细胞移植

突发性聋的研究进展——病因、病理及治疗策略

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中华耳科学杂志 2007年第4期5卷 446-449页

作者：孙建军李雪盛海军总医院-全军耳鼻咽喉头颈外科中心北京100037

突发性聋（sudden hearing loss,SHL）是指单耳或双耳不明原因的突发听力下降,诊断标准为数小时至3天内,纯音测听检查至少连续三个频率感音神经性听力损失大于或等于30dB。SHL可以伴有眩晕和耳鸣,眩晕多伴发于高频听力有严重损失患者。... 详细信息

突发性聋（sudden hearing loss,SHL）是指单耳或双耳不明原因的突发听力下降,诊断标准为数小时至3天内,纯音测听检查至少连续三个频率感音神经性听力损失大于或等于30dB。SHL可以伴有眩晕和耳鸣,眩晕多伴发于高频听力有严重损失患者。一般认为，听力下降越严重，听力下降伴眩晕、听力曲线为下降型的SHL患者预后较差。中华耳鼻咽喉头颈外科杂志编辑委员会及中华医学会耳鼻咽喉头颈外科学分会于2005年制定中国SHL的诊断和治疗指南，定义SHL为“突然发生的，可在数分钟、

关键词：突发性聋治疗指南耳鼻咽喉头颈外科突发听力下降感音神经性听力损失中华医学会病因病理