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肉鸡呼肠孤病毒的分离鉴定及致病性研究

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2020年第4期48卷 41-48,55页

作者：张玉杰刘东刘红祥宫晓李陆梅赵子曈邹敏范根成杜元钊青岛易邦生物工程有限公司动物基因工程疫苗国家重点实验室山东青岛266114

【目的】从临床发病的疑似感染鸡呼肠孤病毒的白羽肉鸡病料中分离鉴定获得1株鸡源呼肠孤病毒SD18,对SD18株进行致病性及传播特性研究,为该病毒的深入研究和综合防治奠定基础。【方法】无菌采集疑似感染鸡呼肠孤病毒发病鸡跗关节处的肌... 详细信息

【目的】从临床发病的疑似感染鸡呼肠孤病毒的白羽肉鸡病料中分离鉴定获得1株鸡源呼肠孤病毒SD18,对SD18株进行致病性及传播特性研究,为该病毒的深入研究和综合防治奠定基础。【方法】无菌采集疑似感染鸡呼肠孤病毒发病鸡跗关节处的肌腱和渗出物,分离病原物,在LMH细胞上培养,并连续盲传3代,经无菌生理盐水倍比稀释,采用Reed-Muench法测定病毒鸡胚半数致死量(ELD 50)和组织细胞半数感染量(TCID 50);对分离毒株进行理化特性和血凝特性测定;利用设计的鸡呼肠孤病毒L1和S1基因特异性引物,对提取的病毒总RNA进行RT-PCR扩增,经PCR鉴定为阳性的菌落进行基因测序以及核苷酸同源性比对和系统遗传进化分析;用该分离株病毒对SPF鸡和白羽肉鸡进行动物回归试验,并用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定攻毒后的SPF鸡血清中呼肠孤病毒抗体滴度。【结果】从疑似感染鸡呼肠孤病毒发病鸡跗关节处的肌腱和渗出物中分离获得1株鸡源呼肠孤病毒SD18,其ELD 50为10-6.5/0.1 mL,TCID 50为10-7.36/0.1 mL。RT-PCR结果显示,目的基因片段长度分别为1100,750,265 bp,依次为鸡呼肠孤病毒的S1、σC和L1基因片段。核苷酸同源性比对结果显示,该分离株SD18与Ⅴ群鸡源呼肠孤病毒TW-918(台湾株)的S1基因序列同源性达92.7%,与Ⅰ群鸡病毒性关节炎疫苗S1133株的同源性仅为59.0%。核酸序列遗传进化分析表明,该分离株SD18与Ⅴ群鸡源呼肠孤病毒TW-918(台湾株)处于同一进化分支上,与Ⅰ群鸡源呼肠孤病毒S1133株处于不同的进化分支上,说明新分离的肉鸡呼肠孤病毒SD18株属于基因Ⅴ群,可能是Ⅰ群经典鸡源呼肠孤病毒S1133株的变异毒株。SPF鸡和白羽肉鸡回归试验表明,SD18株病毒能够引起鸡病毒性关节炎,与临床发病一致,并能水平传播。接种试验表明,病毒SD18能致死鸡胚,打开死亡鸡胚可见其绒毛尿囊膜增厚、尿酸盐沉积、胚体出血等症状,符合呼肠孤病毒的致病特点。【结论】该分离株SD18为新型肉鸡呼肠孤病毒,能够引起鸡发生病毒性关节炎。

关键词：鸡呼肠孤病毒病毒分离鉴定病毒致病性

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附红细胞体病研究进展

中国动物检疫 2011年第7期28卷 71-74页

作者：邹兰邹敏李陆梅党启峰王树杰新疆生产建设兵团农八师143团农业科新疆石河子832021 青岛易邦生物工程有限公司山东青岛266032 新疆西部牧业股份有限公司新疆石河子832000

根据国内外文献及临床实践,综述了附红细胞体病的病原学、流行病学、发病机理、临床症状、病理变化、诊断和防治等方面研究现状,为今后的研究提供参考。

关键词：附红细胞体疫病诊断

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小电流接地系统单相接地故障点查找方法

电世界 2017年第5期58卷 10-11页

作者：孙德斌蔡其芬孙彤彤李陆梅国网江苏省电力公司如东县供电公司江苏南通226400 南京源纳科技有限公司江苏南京210005

1问题的提出中压（6kV～35kV）电力系统通常采用小电流接地系统（非有效接地系统）运行方式，即系统的中性点采用不接地或经消弧接地的方式运行。它的优点是在系统发生单相接地后可运行2h，从而提高供电可靠性；但在人口密集地区（如... 详细信息

1问题的提出中压（6kV～35kV）电力系统通常采用小电流接地系统（非有效接地系统）运行方式，即系统的中性点采用不接地或经消弧接地的方式运行。它的优点是在系统发生单相接地后可运行2h，从而提高供电可靠性；但在人口密集地区（如华东地区），电力线路断线接地故障或其他设备绝缘故障可能导致故障点周围人员伤亡事故。

关键词：小电流接地系统接地故障点单相接地非有效接地系统人员伤亡事故供电可靠性电力系统消弧接地

鸡γ-干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其抗病毒活性研究

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中国家禽 2017年第1期39卷 30-33页

作者：刘新文王秀丽郭东春邹敏郭伟伟宫晓李陆梅范根成青岛易邦生物工程有限公司山东青岛266032 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所黑龙江哈尔滨150001

将克隆的鸡γ-干扰素(Ch IFNγ)基因亚克隆至酵母表达载体p PICZα-A中,构建重组质粒p PIC-Ch IFNγ。将鉴定正确的质粒p PIC-Ch IFNγ线性化,通过电转化整合到毕赤酵母菌株X-33基因组中,得到阳性菌株。经1%甲醇连续诱导4 d,表达产物经S... 详细信息

将克隆的鸡γ-干扰素(Ch IFNγ)基因亚克隆至酵母表达载体p PICZα-A中,构建重组质粒p PIC-Ch IFNγ。将鉴定正确的质粒p PIC-Ch IFNγ线性化,通过电转化整合到毕赤酵母菌株X-33基因组中,得到阳性菌株。经1%甲醇连续诱导4 d,表达产物经SDS-PAGE检测,结果表明Ch IFNγ在酵母中获得了分泌型表达,表达产物分子量约为20 ku。表达产物粗提后以细胞病变抑制法检测其活性,效价为107.69U/m L;在鸡胚中能有效抑制H9N2亚型禽流感病毒的增殖;动物攻毒保护试验结果显示,表达的蛋白具有较好的抗病毒活性。

关键词：鸡γ-干扰素分泌表达抗病毒活性

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鸡新城疫疫苗研究及应用概况

湖北畜牧兽医 2013年第9期34卷 65-67页

作者：宫晓程增青李陆梅徐保娟朱艳梅郭伟伟范根成青岛易邦生物工程有限公司山东青岛5632800

介绍了鸡新城疫病的流行情况及疫苗的应用现状,概述了灭活疫苗、活疫苗及基因工程苗等主要的鸡新城疫疫苗研究及应用现状,旨为鸡新城疫疫苗的研制和应用提供一定的参考依据。

关键词：新城疫疫苗研制应用

2012年—2015年我国部分地区禽偏肺病毒的分子流行病学分析

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动物医学进展 2016年第10期37卷 30-34页

作者：朱艳梅宫晓郭伟伟徐保娟李陆梅郎枫刘红祥刘东范根成动物基因工程疫苗国家重点实验室/青岛易邦生物工程有限公司山东青岛266114

为了调查鸡群中禽偏肺病毒（aMPV）的流行情况,本研究从江苏、辽宁、河南、山东、河北等地有肿头症状的鸡群中取其鼻甲骨和鼻黏液进行RT-PCR检测,随机选取9株PCR阳性产物对其F基因进行序列测定与遗传进化分析。结果表明,280份病料中检... 详细信息

为了调查鸡群中禽偏肺病毒（aMPV）的流行情况,本研究从江苏、辽宁、河南、山东、河北等地有肿头症状的鸡群中取其鼻甲骨和鼻黏液进行RT-PCR检测,随机选取9株PCR阳性产物对其F基因进行序列测定与遗传进化分析。结果表明,280份病料中检出阳性样品142份,阳性检出率达50.7%;9个试验毒株之间F基因同源性为99.4%～100%,与B型aMPV代表株的同源性为97.7%～99.9%,而与A型、C型和D型aMPV代表株的同源性为71.9%～79.4%;由遗传进化树可见,这9株aMPV均属于B型分支。说明我国鸡群中目前存在aMPV感染,B型毒株是优势流行基因型,从而为禽偏肺病毒疫苗的开发提供了流行病学资料。

关键词：禽偏肺病毒流行病学 F基因同源性

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猪细小病毒PCR检测方法的建立与应用

中国动物检疫 2016年第8期33卷 94-97页

作者：邹敏李陆梅宫晓王红杨旭兵范根成青岛易邦生物工程有限公司动物基因工程疫苗国家重点实验室山东青岛266114

参考Gen Bank中发表的猪细小病毒(PPV)VP2基因序列,应用Primer5.0软件设计了一对引物,预期目的条带约591 bp。对该方法的特异性、敏感性、重复性进行了试验,建立了PPV的PCR检测方法。符合性实验结果表明,该PCR方法优于HA、VI以及IHA。... 详细信息

参考Gen Bank中发表的猪细小病毒(PPV)VP2基因序列,应用Primer5.0软件设计了一对引物,预期目的条带约591 bp。对该方法的特异性、敏感性、重复性进行了试验,建立了PPV的PCR检测方法。符合性实验结果表明,该PCR方法优于HA、VI以及IHA。使用该方法对215份病料进行了检测,检出阳性样品25份,检出率为11.63%。结果表明,该方法可用于PPV的诊断及流行病学监测。

关键词：猪细小病毒 VP2基因聚合酶链式反应检测

猪圆环病毒2型抗体间接ELISA检测方法的建立

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中国动物传染病学报 2019年第2期27卷 25-34页

作者：徐保娟王丽萍崔晓霞宫晓孙厚民郭伟伟李陆梅范根成荣俊青岛易邦生物工程有限公司青岛266114 动物基因工程疫苗国家重点实验室青岛266114 长江大学荆州434000

为了更加快速灵敏地检测血清中猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)抗体的水平,我们通过优化反应条件建立了快速检测猪圆环病毒2型抗体的间接ELISA方法。结果显示,本研究研制的试剂盒检测3份PCV2抗体阳性血清的阳性滴度为1∶... 详细信息

为了更加快速灵敏地检测血清中猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)抗体的水平,我们通过优化反应条件建立了快速检测猪圆环病毒2型抗体的间接ELISA方法。结果显示,本研究研制的试剂盒检测3份PCV2抗体阳性血清的阳性滴度为1∶12 800～1∶25 600,而韩国JBT PCV2试剂盒检测的阳性滴度为1∶3200～1∶6400;对猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪口蹄疫病毒等10种其他病原体的20份阳性血清的检测结果均为阴性,表明本研究研制的试剂盒具有良好的特异性;批内重复性试验变异系数(C.V%)为2.26%～7.60%,批间重复试验的变异系数(C.V%)为1.67%～6.41%,变异系数均小于10%,呈现良好的可重复性。因此,我们成功建立了敏感性高、特异性强及重复性好的猪圆环病毒2型抗体间接ELISA检测方法。

关键词：猪圆环病毒2型间接ELISA 阴性血清阳性血清

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山东省青岛市猫病毒性鼻气管炎流行情况调查

中国动物检疫 2022年第3期39卷 4-8,12页

作者：孙厚民李陆梅祝洪伟陈玉霞孙鹏楚电峰范根成青岛易邦生物工程有限公司动物基因工程疫苗国家重点实验室山东青岛266100

为了解山东省青岛市猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)的流行情况,2019年6月至2021年6月共采集猫眼鼻拭子样本218份,提取样本DNA后利用PCR方法进行FHV-1核酸检测,共检出阳性样本22份,阳性率为10.1%(22/218)。宠物救助站猫的FHV-1阳性率(16.7%)略高... 详细信息

为了解山东省青岛市猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)的流行情况,2019年6月至2021年6月共采集猫眼鼻拭子样本218份,提取样本DNA后利用PCR方法进行FHV-1核酸检测,共检出阳性样本22份,阳性率为10.1%(22/218)。宠物救助站猫的FHV-1阳性率(16.7%)略高于其他来源猫,2~6月龄幼猫的FHV-1阳性率(13.6%)略高于成年猫(7.0%),成年公猫阳性率(7.3%)稍高于成年母猫(6.7%),但各组间均无显著性差异(P>0.05)。对2021年3月采集的60份猫血清进行了FHV-1中和抗体检测,共检出阳性样本40份,抗体阳性率为66.7%。结果表明,青岛市猫群中存在一定的FHV-1流行,抗体保护水平不高,应加快国产FHV-1相关疫苗的研制,及时对猫进行免疫预防。

关键词：猫疱疹病毒Ⅰ型感染率中和抗体抗体阳性率