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2018-2021年中国发热伴血小板减少综合征流行特征分析

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中华流行病学杂志 2024年第1期45卷 112-116页

作者：黄晓霞杜珊珊李阿茜李川田婷婷刘铁柱王芹梁米芳王世文李建东李德新中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所/国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

目的分析我国发热伴血小板减少综合征(SFTS)流行现状及趋势。方法采集中国疾病预防控制信息系统2018-2021年全国SFTS病例数据,采用Excel 2016、Joinpoint 5.0.2、SPSS 26.0和GraphPad Prism 8.0等软件进行统计学和描述流行病学分析,尤... 详细信息

目的分析我国发热伴血小板减少综合征(SFTS)流行现状及趋势。方法采集中国疾病预防控制信息系统2018-2021年全国SFTS病例数据,采用Excel 2016、Joinpoint 5.0.2、SPSS 26.0和GraphPad Prism 8.0等软件进行统计学和描述流行病学分析,尤其重点省份按月报告SFTS病例情况。结果2018-2021年,全国共有25个省份累计报告病例8835例,年报告发病率呈上升趋势,病例具有一定的区域聚集性,但以散发为主,报告病例数自3月开始逐渐增多,主要集中在4-10月(96.79%,8551/8835),一般在5-7月达高峰;人群分布以中老年农民为主,女性略多于男性,平均病死率为5.38%,不同地区差异较大,病死率随年龄增长而增加。结论2018-2021年,我国SFTS流行特征虽维持稳定,但报告病例数逐渐增多,分布范围呈扩大趋势,应予以关注。

关键词：发热伴血小板减少综合征流行特征监测

基于CRISPR/Cas9系统建立SNX11基因敲除A549细胞系

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病毒学报 2022年第3期38卷 652-657页

作者：刘铁柱李阿茜李川梁米芳王世文中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

为了建立SNX11基因稳定敲除A549细胞系,本研究通过构建针对人SNX11基因的特异性打靶慢病毒载体,将该慢病毒感染A549细胞系,使用嘌呤霉素对慢病毒感染阳性的A549细胞进行筛选,利用梯度稀释法获得单细胞并扩增培养,提取细胞基因组DNA,PCR... 详细信息

为了建立SNX11基因稳定敲除A549细胞系,本研究通过构建针对人SNX11基因的特异性打靶慢病毒载体,将该慢病毒感染A549细胞系,使用嘌呤霉素对慢病毒感染阳性的A549细胞进行筛选,利用梯度稀释法获得单细胞并扩增培养,提取细胞基因组DNA,PCR扩增后进行测序验证,同时提取细胞蛋白后利用Western Blot方法进行蛋白敲除验证,最后进行细胞活性检测和脱靶效应评估。最后,本研究获得了一株SNX11基因敲除A549细胞系;通过脱靶效应评估,结果显示最可能的20个脱靶位点均不存在脱靶现象;该基因敲除对细胞增殖活性没有影响。本研究成功构建了一株SNX11基因敲除A549细胞系,为SNX11蛋白的功能研究建立了细胞模型。

关键词： CRISPR/Cas9 SNX11 基因敲除细胞系

云南省2004—2021年肾综合征出血热流行特征分析

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疾病监测 2023年

作者：杜珊珊邓雪飞黄晓霞李阿茜王芹李川冯云李建东云南省地方病防治所中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部医学病毒和病毒病重点实验室

目的：对云南省2004—2021年肾综合征出血热（HFRS）报告病例进行流行病学分析，了解HFRS流行特征。方法：从国家法定传染病监测系统获得了云南省2004年至2021年HFRS报告病例数据，采用描述性流行病学方法对全省2004—2021年HFRS时间、... 详细信息

目的：对云南省2004—2021年肾综合征出血热（HFRS）报告病例进行流行病学分析，了解HFRS流行特征。方法：从国家法定传染病监测系统获得了云南省2004年至2021年HFRS报告病例数据，采用描述性流行病学方法对全省2004—2021年HFRS时间、地区和人群分布和诊断类别资料进行统计分析，并以县级为单位进行空间聚集分析。结果：2004—2021年全省共报告HFRS病例2556例，年均发病率为0.30 /10万，死亡病例17例，病死率为0.67%；每年主要以3—8月（春夏季）为发病高峰，70.81%患者为男性，16～60岁患者占76.72%，77.11%病例为农民；全局空间自相关分析Moran’s I系数0.010～0.319之间，仅2011—2021年有相关性（P＜0.05），高-高聚集区主要集中在大理白族自治州、楚雄彝族自治州和丽江市，实验室确诊病例和病死率存在较强的负相关（r＝-0.720，P=0.019），疑似病例和病死率存在较强的正相关（r=0.649，P=0.042），报告病例数少的地区病死率高。结论：云南省HFRS在2012—2021年间处于相对高发期，波及地理范围有扩大趋势，但仍呈现明显的时空聚集特征，累及人群逐渐向高龄人群偏移，应推动高发地区落实综合防控措施，提高病例诊断与实验室检测能力。

关键词：肾综合征出血热流行特征疾病监测汉坦病毒

基于慢病毒包装和CRISPR技术建立病毒感染关键基因CLTC敲除细胞系

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病毒学报 2023年第3期39卷 800-804页

作者：刘铁柱黄涛李阿茜李川梁米芳王世文中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

网格蛋白是病毒进入内体系统时的关键蛋白,同时还可能参与病毒的胞内转运,目前该蛋白的具体作用范围报道还不一致。为了构建网格蛋白重链基因敲除细胞系,以研究其在病毒感染过程中的功能,本研究基于CRISPR/Cas9系统,首先通过包装慢病毒... 详细信息

网格蛋白是病毒进入内体系统时的关键蛋白,同时还可能参与病毒的胞内转运,目前该蛋白的具体作用范围报道还不一致。为了构建网格蛋白重链基因敲除细胞系,以研究其在病毒感染过程中的功能,本研究基于CRISPR/Cas9系统,首先通过包装慢病毒建立网格蛋白重链基因特异性打靶载体,使用嘌呤霉素对慢病毒感染的Huh7细胞进行阳性筛选,利用96孔板梯度稀释法获得单克隆细胞,提取细胞基因组DNA,PCR扩增后进行测序验证,同时提取细胞蛋白,利用Western Blot实验进行蛋白敲除验证,最后进行细胞增殖活性检测和脱靶效应评估。最终本研究获得了一株网格蛋白重链基因敲除Huh7细胞系;通过脱靶效应评估,显示最可能的10个脱靶位点均不存在脱靶现象,且该基因敲除不影响细胞增殖活性。本研究成功构建了一株网格蛋白重链基因敲除Huh7细胞系,为研究网格蛋白在病毒进入宿主细胞时的功能建立了细胞模型。

关键词： CRISPR/Cas9 CLTC 基因敲除

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一种寨卡病毒富集检测方法的性能评价

协和医学杂志 2022年第3期13卷 455-460页

作者：李阿茜孔令君刘洋伊洁李川梁米芳窦亚玲中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒性出血热室北京102206 中国医学科学院北京协和医院检验科北京100730

目的对一种无需核酸提取纯化的寨卡病毒实时荧光定量反转录PCR检测方法的性能进行评价。方法该检测方法基于实时荧光定量反转录PCR技术,样本处理采用病毒富集法:取100~200μL待测样本,加入112~224μL样本处理液Ⅰ,5~10μL样本处理液Ⅱ... 详细信息

目的对一种无需核酸提取纯化的寨卡病毒实时荧光定量反转录PCR检测方法的性能进行评价。方法该检测方法基于实时荧光定量反转录PCR技术,样本处理采用病毒富集法:取100~200μL待测样本,加入112~224μL样本处理液Ⅰ,5~10μL样本处理液Ⅱ,混匀后进行离心富集(12 000 r/min,离心半径8.6 cm,离心5 min)。离心后弃上清液,加入20μL复溶缓冲液重悬沉淀;取10μL重悬液,加入50μL PCR反应液上机检测。从定量检测下限、交叉反应、抗干扰性、精密度方面评价该检测方法的性能。收集北京协和医院检验科临床样本(血清、尿液、唾液样本),随机选取约1/5构建寨卡病毒感染模拟临床样本,进一步评定该检测方法的性能。结果该检测方法对MR766、ZKC2/2016毒株的检测下限均为10;半数组织培养感染剂量(50%tissue culture infective dose, TCID50)/mL;对17种常见虫媒病原体检测结果均为阴性,无交叉反应发生;潜在干扰物质胆红素(15 mg/L)、血红蛋白(100 mg/L)、甘油三酯(2000 mg/L)、IgG(37.5 g/L)和EDTA-Na;(2.5 g/L)对其检测结果无干扰;检测低、中、高浓度寨卡病毒的批次内和批次间Ct值变异系数均<10%,精密度良好。共收集344份北京协和医院检验科临床样本,其中构建寨卡病毒感染模拟临床样本73份。采用该检测方法对344份样本进行检测,结果均与实际相符,无假阳性和假阴性。结论寨卡病毒简单富集后再检测的方法特异性高、重复性好,检测结果不受干扰物质的影响,检测下限满足临床需求,且操作简便,但应用效果仍需在真实临床样本中进一步验证。

关键词：寨卡病毒快速检测病毒富集法性能评价

2004-2021年云南省肾综合征出血热流行特征分析

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疾病监测 2023年第11期38卷 1357-1362页

作者：杜珊珊邓雪飞黄晓霞李阿茜王芹李川冯云李建东中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部医学病毒和病毒病重点实验室北京102206 云南省地方病防治所云南大理671000

目的对2004—2021年云南省肾综合征出血热(HFRS)报告病例进行流行病学分析,了解HFRS流行特征。方法从国家法定传染病监测系统获得了2004—2021年云南省HFRS报告病例数据,采用描述性流行病学方法对全省2004—2021年HFRS时间、地区和人群... 详细信息

目的对2004—2021年云南省肾综合征出血热(HFRS)报告病例进行流行病学分析,了解HFRS流行特征。方法从国家法定传染病监测系统获得了2004—2021年云南省HFRS报告病例数据,采用描述性流行病学方法对全省2004—2021年HFRS时间、地区和人群分布和诊断类别资料进行统计分析,并以县级为单位进行空间聚集分析。结果2004—2021年全省共报告HFRS病例2556例,年均发病率为0.30/10万,死亡病例17例,病死率为0.67%;每年主要以3—8月(春夏季)为发病高峰,70.81%患者为男性,16~60岁患者占76.72%,77.11%病例为农民;全局空间自相关分析Moran’s I系数0.010~0.319,仅2011—2021年有相关性(P<0.05),高-高聚集区主要集中在大理白族自治州、楚雄彝族自治州和丽江市,实验室确诊病例和病死率存在较强的负相关(r=-0.720,P=0.019),疑似病例和病死率存在较强的正相关(r=0.649,P=0.042),报告病例数少的地区病死率高。结论云南省HFRS在2012—2021年间处于相对高发期,波及地理范围有扩大趋势,但仍呈现明显的时空聚集特征,累及人群逐渐向高龄人群偏移,应推动高发地区落实综合防控措施,提高病例诊断与实验室检测能力。

关键词：肾综合征出血热流行特征疾病监测汉坦病毒

发热伴血小板减少综合征病毒核蛋白特异结合宿主细胞60kD SSA/Ro

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病毒学报 2014年第3期30卷 233-237页

作者：郑斌王涛张硕李阿茜李川张全福梁米芳李德新中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

为了初步探索发热伴血小板减少综合征病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV)核蛋白(nucleoprotein,NP)对宿主细胞免疫功能的影响。将SFTSV NP和NSs蛋白的编码基因插入真核表达载体VR1012中,通过免疫共沉淀(IP)、SDS-PAGE、质谱检测及蛋白质免疫印迹等方法寻找宿主细胞中与NP相互作用,同时又与免疫功能有关的蛋白质分子,并利用细胞免疫荧光方法检测SFTSV NP与该分子在细胞中的共定位情况。IP和质谱检测结果显示NP能与免疫功能相关的60kD SSA/Ro蛋白发生特异性结合,细胞免疫荧光试验进一步显示NP与60kD SSA/Ro蛋白在细胞质中存在共定位。提示SFTSV可能通过其核蛋白与免疫相关分子60kD SSA/Ro蛋白发生特异性结合,从而引起机体一系列的免疫反应和临床症状。

关键词：发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV) 核蛋白(NP) 60kD SSA Ro

人类肠道病毒71型亚单位疫苗壳聚糖佐剂作用的研究

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病毒学报 2014年第3期30卷 221-225页

作者：张硕张福顺李阿茜刘林芜为李川张全福梁米芳李德新中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

为了解人类肠道病毒71型(EV71)重组保护性衣壳蛋白(rVP1)亚单位疫苗壳聚糖佐剂的作用,本研究利用rVP1蛋白与壳聚糖佐剂制备的疫苗口服免疫新西兰白兔,通过ELISA方法检测兔血清、粘膜洗液(小肠、鼻腔和肺)及粪便中特异性IgG、IgA抗体水平... 详细信息

为了解人类肠道病毒71型(EV71)重组保护性衣壳蛋白(rVP1)亚单位疫苗壳聚糖佐剂的作用,本研究利用rVP1蛋白与壳聚糖佐剂制备的疫苗口服免疫新西兰白兔,通过ELISA方法检测兔血清、粘膜洗液(小肠、鼻腔和肺)及粪便中特异性IgG、IgA抗体水平,中和试验检测血清中和抗体滴度,并通过抗原刺激体外培养的兔脾淋巴细胞分泌细胞因子(IFN-γ、IL-4)的水平评价rVP1口服免疫效果。结果显示,单纯口服rVP1蛋白仅可诱导产生较低水平的血清IgG和粘膜IgA抗体,而含佐剂疫苗组与单纯抗原免疫组差异显著,并可诱导产生中和抗体。细胞免疫检测结果显示rVP1含佐剂组兔脾淋巴细胞分泌IFN-γ和IL-4水平明显高于未加佐剂组。本研究为研制EV71VP1口服疫苗奠定了基础。

关键词：肠道病毒71型 VP1蛋白壳聚糖口服疫苗免疫原性

抗发热伴血小板减少综合征病毒结构蛋白单克隆抗体的制备和功能分析

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病毒学报 2015年第1期31卷 18-23页

作者：李阿茜刘林张硕李川张全福梁米芳李德新中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

为制备抗发热伴血小板减少综合征病毒（Severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV）结构蛋白的单克隆抗体,本研究用灭活纯化的SFTSV病毒颗粒免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术获得分别分泌抗糖蛋白单抗和核蛋白单抗... 详细信息

为制备抗发热伴血小板减少综合征病毒（Severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV）结构蛋白的单克隆抗体,本研究用灭活纯化的SFTSV病毒颗粒免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术获得分别分泌抗糖蛋白单抗和核蛋白单抗的杂交瘤细胞株。用免疫荧光法和免疫沉淀方法对制备的单克隆抗体的抗原特异性进行鉴定,并初步进行单抗效价、中和活性及亲和力等功能分析。结果显示,通过细胞融合和克隆化,共筛选出13株稳定分泌抗糖蛋白（Glycoprotein,GP）单抗和7株稳定分泌抗核蛋白（Nucleoprotein,NP）单抗的杂交瘤细胞株。免疫荧光和免疫沉淀鉴定显示获得的单抗有良好的抗原特异性。抗GP单抗中6株针对Gn,7株针对Gc,大部分的间接免疫荧光（Indirect immunofluorescence assay,IFA）滴度在1 280-20 480之间,其中4株抗Gn单抗具有中和活性。获得的7株抗NP单抗均与NP特异性结合,IFA滴度范围在5 120-20 480,均无中和活性。此外,经非竞争ELISA检测的两株抗GP单抗（1C8和1G8）均有较高亲和力。本研究为SFTS诊断方法的发展及SFTSV致病机制研究奠定了基础。

关键词：发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV) 核蛋白(NP) 糖蛋白(GP) 单克隆抗体