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COL1A1基因启动子区突变（-106C〉T）对其表达的影响

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中华小儿外科杂志 2010年第7期31卷 541-544页

作者：李连永赵群高红王莉莉中国医科大学附属盛京医院小儿骨科沈阳110104 卫生部小儿先天畸形重点实验室

目的探讨COL1A1基因启动子区突变（-106C〉T）对其表达的影响。方法PCR扩增正常人COL1A1基因转录起始点上游-1024＋36bp的启动子序列，片段长度为1060bp。经T／A克隆，连接酶切位点，再连接到PGL3-basic载体，得到野生型的PGL3-COL1A1... 详细信息

目的探讨COL1A1基因启动子区突变（-106C〉T）对其表达的影响。方法PCR扩增正常人COL1A1基因转录起始点上游-1024＋36bp的启动子序列，片段长度为1060bp。经T／A克隆，连接酶切位点，再连接到PGL3-basic载体，得到野生型的PGL3-COL1A1表达载体。再采用定点突变的方法，把-106位碱基的C突变成T，再连接到PGL3-basic载体，构建突变型的PGL3-COL1A1表达载体。用上述两种表达载体及PGL3-basic分别瞬时转染NIH3T3细胞。细胞培养48h后，测定各组细胞表达的荧光素酶的相对活性，以明确COL1A1启动子区-106位碱基C〉T突变对基因转录调控的影响。结果经琼脂糖凝胶及基因测序鉴定，证实载体构建成功。荧光素酶活性测定结果显示，在转染野生型PGL3-COL1A1表达载体的细胞组，荧光素酶的相对活性为3．8665，为阴性对照组（PGL3-basic）的4．8倍；转染突变型PGL3-COL1A1表达载体的细胞组，荧光素酶的相对活性为1．3917，为阴性对照组的1．7倍。COL1A1基因启动子-106位碱基C〉T突变后，其转录活性较野生型降低了64％。结论COL1A1基因启动子区-106C〉T突变可以在转录水平抑制该基因的表达。

关键词：髋发育不良先天性 COL1A1基因基因表达调控

社区民主何以可能——对当前社区民主建设几个流行观点的质疑

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理论文萃 2003年第5期 9-12,23页

作者：李连永中央党校科学社会主义教研部硕士

股骨干骨折后过度生长动物模型制作及差异蛋白质组学研究

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中华小儿外科杂志 2021年第6期42卷 556-562页

作者：岳宇航李连永李祁伟王恩波刘天婧中国医科大学附属盛京医院小儿骨科沈阳110004

目的建立股骨干骨折后过度生长动物模型,并通过蛋白质组学研究观察骺板的差异表达蛋白,以期明确股骨干骨折后过度生长的生物学机制。方法取48只雄性6周龄日本大耳白兔,利用环形剥离股骨干骨膜的方法建立兔股骨干骨折后过度生长动物模型... 详细信息

目的建立股骨干骨折后过度生长动物模型,并通过蛋白质组学研究观察骺板的差异表达蛋白,以期明确股骨干骨折后过度生长的生物学机制。方法取48只雄性6周龄日本大耳白兔,利用环形剥离股骨干骨膜的方法建立兔股骨干骨折后过度生长动物模型,右侧为手术侧,左侧为假手术侧。术后4周取术侧及假手术侧股骨测量全长,并取股骨远端骺板行串联质谱标签(tandem mass tag,TMT)定量蛋白质组学分析,通过对差异蛋白行基因本体(gene ontology,GO)分析及京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)分析研究相关蛋白表达变化。另取20只10周龄雄性日本大耳白兔作为空白对照组,测量其双侧股骨长度。对相关差异蛋白行蛋白质印迹法检测。股骨长度差及蛋白表达差异采用Kolmogorov-Smirnov检验验证正态性,F检验验证方差齐性,符合正态分布且方差齐,采用配对t检验比较分析两侧股骨长度,独立样本t检验比较分析手术组与空白组长度差,若不符合正态分布或方差不齐采用秩和检验。GO功能富集分析应用Fisher精确检验。结果术后4周,手术组双侧股骨长度差(手术侧-假手术侧)为(0.62±0.63)mm,空白组双侧股骨长度差(右侧-左侧)为(-0.025±0.26)mm,组间比较,差异有统计学意义(P<0.001)。共鉴定出283种差异蛋白,GO分析提示差异蛋白富集于细胞代谢、胞内结构、有机环状化合物结合等,KEGG富集提示差异蛋白通路集中于核糖体、蛋白质外排、剪切体、细胞凋亡及内质网中蛋白质加工等。蛋白质印迹法检测提示X型胶原蛋白α1链(type X collagen alpha 1 chain,COL10A1)在过度生长的股骨远端骺板软骨中表达上调。结论通过骨膜环切法可建立股骨过度生长的动物模型,COL10A1可能参与股骨过度生长的生物学行为。

关键词：蛋白质组学生长板股骨干骨折

偏光显微镜观察发育性髋关节脱位圆韧带组织的病理变化

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中国组织工程研究与临床康复 2009年第41期13卷 8057-8060页

作者：李洪秋阿良王恩波赵群李连永中国医科大学附属盛京医院儿童骨科辽宁省沈阳市110004 沈阳医学院附属奉天医院骨外二科辽宁省沈阳市110024

背景:发育性髋关节脱位与关节囊、韧带等致密结缔组织细胞外基质中的胶原蛋白有密切关系。目的:观察发育性髋关节脱位与正常儿的髋关节圆韧带的形态学特点,分析Ⅰ型和Ⅲ型胶原含量及二者比例(Ⅰ/Ⅲ)变化规律。设计、时间及地点:分组对... 详细信息

背景:发育性髋关节脱位与关节囊、韧带等致密结缔组织细胞外基质中的胶原蛋白有密切关系。目的:观察发育性髋关节脱位与正常儿的髋关节圆韧带的形态学特点,分析Ⅰ型和Ⅲ型胶原含量及二者比例(Ⅰ/Ⅲ)变化规律。设计、时间及地点:分组对照观察,于2006-10/2007-03卫生部先天畸形实验室完成。对象:选择2005-06/2006-08在中国医科大学附属盛京医院儿童骨科住院并第1次手术发育性髋关节脱位患儿21例。根据术前X射线片按T?nnis标准分3组,髋臼发育不良组3例、髋关节半脱位组12例、髋关节脱位组6例。选择因其他疾病第1次行髋关节手术及尸检患儿13例为对照组。标本取自患者股骨头相连接部位圆韧带。方法:将各组标本行苦味酸-天狼猩红染色。主要观察指标:分别在普通显微镜和偏振光显微镜下并测量Ⅰ型和Ⅲ型胶原含量及计算比例(Ⅰ/Ⅲ)。结果:Ⅰ型和Ⅲ型胶原含量随年龄增加而增加;对照组Ⅰ型胶原明显高于各病例组(P0.05);各病例组胶原含量比例明显低于对照组(P<0.05)。结论:发育性髋关节脱位患儿和对照组间圆韧带Ⅰ和Ⅲ型胶原含量及比例(Ⅰ/Ⅲ)有较大差别,发育性髋关节脱位发生可能与关节囊中胶原紊乱有关。

关键词：胶原发育性髋关节脱位苦味酸-天狼猩红偏光显微

维生素D受体基因BsmI多态性与发育性髋关节发育不良的相关性研究

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中国矫形外科杂志 2010年第20期18卷 1673-1676页

作者：孙晶晶李连永李祁伟张立军赵群高红中国医科大学附属盛京医院小儿骨外科沈阳110004 中国医科大学附属盛京医院卫生部小儿先天畸形重点实验室沈阳110004

[目的]明确我国北方汉族人维生素D受体基因(vitamin dreceptor gene,VDR)BsmI位点多态性分布及与发育性髋关节发育不良(developmental dysplasia of the hip,DDH)的相关性。[方法]采用PCR-测序的方法,对54个DDH患儿及55个正常儿的VDR基... 详细信息

[目的]明确我国北方汉族人维生素D受体基因(vitamin dreceptor gene,VDR)BsmI位点多态性分布及与发育性髋关节发育不良(developmental dysplasia of the hip,DDH)的相关性。[方法]采用PCR-测序的方法,对54个DDH患儿及55个正常儿的VDR基因BsmI位点进行分型。采用精确概率的x2检验,比较病例组及对照组中等位基因及基因型频率分布的差异。并把正常组与文献报道的不同人群该位点的多态性分布情况相比较,以了解VDR基因BsmI位点多态性在不同种族人群中的差异。[结果]VDR基因BsmI位点的基因型及等位基因频率分布,在DDH组与对照组之间均无明显的统计学差异(P值分别为0.527和0.428);我国北方汉族人该位点的基因型以GG为主,与美国人、澳洲人及法国人均存在明显的统计学差异(P<0.01)。[结论]VDR基因BsmI位点基因型分布存在人群差异;该位点多态性与我国北方汉族人DDH的发生可能无关。

关键词：发育性髋关节发育不良维生素D受体基因多态性关联分析

三维CT评价骨盆内移截骨后青少年髋臼发育不良的效应

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中国组织工程研究与临床康复 2009年第22期13卷 4304-4308页

作者：李连永吉士俊张立军李祁伟赵群中国医科大学附属盛京医院小儿骨科辽宁省沈阳市110004

背景：通过传统的X射线评价,Chiari截骨能明显改善股骨头的覆盖,但对截骨后效果的三维立体评价研究很少。目的：利用三维CT评价Chiari截骨术后髋关节的形态变化,同时比较X射线及三维CT方法测量股骨头覆盖是否存在差异。设计、时间及地... 详细信息

背景：通过传统的X射线评价,Chiari截骨能明显改善股骨头的覆盖,但对截骨后效果的三维立体评价研究很少。目的：利用三维CT评价Chiari截骨术后髋关节的形态变化,同时比较X射线及三维CT方法测量股骨头覆盖是否存在差异。设计、时间及地点：测量性试验,病例来自2003-01/2006-12中国医科大学附属盛京医院小儿骨科。对象：选择中国医科大学附属盛京医院小儿骨科收治的髋臼发育不良患儿12例（12髋）,男5例,女7例;左侧8例,右侧4例;手术时年龄7.2～15.2岁,平均11.5岁。方法：12例患者（12髋）均行Chiari截骨治疗。5髋在关节囊外截骨，7髋行关节囊小切口紧邻髋臼外上缘截骨。根据Colton提出的评分方法进行临床功能评价；在前后位X射线平片测量手术前、后的股骨头覆盖率及截骨的高度；在三维CT图像上测量股骨头前1／4、中1，2、后1/4部位的覆盖率。主要观察指标：X射线测量截骨前后股骨头覆盖率、截骨高度；三维CT测量冠状面上股骨头前1／4、中1／2、后1／4的覆盖率及髋臼前倾角；Colton法测量髋关节的功能评分。结果：所有12髋术后临床功能评定，优6髋，良3髋，3髋为一般；在切开关节囊的7髋中，优2髋，良3髋，未行关节囊切开的5髋中，优良各2髋；在切开关节囊的髋中，截骨高度低于未行关节囊切开髋中的截骨高度[（3．64±1．54），（11．00±2．09）mm，P〈0．01]；不同截骨高度与临床评定结果之间差异无显著性意义（P〉0．05）。术前9例有明显的髋痛，随访时，5例已无疼痛（其中4髋截骨高度适宜），4髋截骨过高者仍有疼痛；无深部感染、坐骨神经损伤、骨不连等严重并发症发生。术后，X射线及三维CT测得的股骨头覆盖率较术前均明显增加（P〈0．01）；但三维CT测得的股骨头前外侧、中外侧覆盖率明显小于X射线测量结果（P〈0．01）；术后在股骨头的前外侧仍存在覆盖不良。结论：利用X射线测量评价Chiari截骨术后股骨头的覆盖存在假像，真实情况并非像X射线测量结果那样完美。术前、术后利用三维CT仔细评价髋关节的病理缺陷是必要的。Chiari截骨后，在股骨头前外侧仍覆盖不良。为达到合适的截骨高度，行关节囊小切口准确显示髋臼的外上缘对术后关节活动无明显影响。

关键词：髋臼发育不良骨盆内移截骨术青少年三维CT

试析党的三代领导人关于“民主集中制”的科学内涵

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理论建设 2003年第5期19卷 46-50页

作者：李连永汪东中共中央党校科社部 100091 中共中央党校党建部 100091

“民主集中制”在中国,随着客观环境的变化,其科学内涵越来越完善,大致经历了三个历史发展时期,党的三代领导人分别对“民主集中制”的发展做出了历史性的贡献。本文分别对此作了理论的梳理和探析。

关键词：民主集中制三代领导人中国共产党科学内涵邓小平毛泽东江泽民

COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达

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中国矫形外科杂志 2008年第17期16卷 1339-1342页

作者：王恩波赵群李连永史立伟李建军高红中国医科大学附属盛京医院小儿外科沈阳110004 中国医科大学附属盛京医院卫生部小儿先天畸形重点实验室沈阳110004

[目的]探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中Ⅰ、Ⅲ型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。[方法]选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比较。采用半定量RT-PCR及Western-B... 详细信息

[目的]探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中Ⅰ、Ⅲ型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。[方法]选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比较。采用半定量RT-PCR及Western-Blot法检测COL1a1、COL3a1在mRNA及蛋白水平的表达。图像分析软件进行量化分析,并经统计学处理。[结果]COL1a1在DDH组mRNA及蛋白水平表达均较正常对照组降低(P0.05)。[结论]DDH患儿圆韧带中Ⅰ型胶原在mRNA及蛋白水平表达较正常同性同龄儿降低,可能是导致DDH患儿髋关节松弛的原因。DDH患儿髋关节松弛可能与Ⅲ型胶原含量无关。

关键词：发育性髋脱位圆韧带关节松弛胶原

染色体17q21区域发育性髋关节发育不良易感基因的定位

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中华医学遗传学杂志 2010年第6期27卷 620-625页

作者：李连永孙学科赵群张立军李祁伟王莉莉高红中国医科大学附属盛京医院小儿骨科沈阳110004 辽宁省刑事科学技术研究所DNA鉴定中心卫生部小儿先天畸形重点实验室

目的在染色体17q21区域的D17S1820附近定位发育性髋关节发育不良（developmental dysplasia of the hip,DDH）的易感基因.方法根据等位基因的数目（≥5）、杂合度（≥0.70）及多态信息含量（≥0.5）,在D17S1820附近选择了11个短串联... 详细信息

目的在染色体17q21区域的D17S1820附近定位发育性髋关节发育不良（developmental dysplasia of the hip,DDH）的易感基因.方法根据等位基因的数目（≥5）、杂合度（≥0.70）及多态信息含量（≥0.5）,在D17S1820附近选择了11个短串联重复序列（short tandem repeat,STR）位点,采用PCR-毛细管电泳的方法,对103个DDH核心家系的309名成员进行基因分型,并进行传递不平衡检验（transmission disequilib rium test,TDT）.结果 D17S810和D17S931因不能提供充足的多态信息,未进行TDT检验.其余9个STR多态位点在103个核心家系中的基因型分析结果符合孟德尔遗传模式.TDT检验结果显示,位于两端的D17S1787和D17S787与DDH不存在传递不平衡,而D17S855、D17S858、D17S806、D17S1877、D17S941、D17S752及D17S790与DDH均存在传递不平衡.将DDH易感基因的区域初步定位于D17S855～D17S790之间约11.70 cM的范围内.结论 17号染色体D17S855～D17S790之间约11.70 cM的区域与DDH有关联,在该区域可能存在DDH的易感基因.

关键词：发育性髋关节发育不良传递不平衡检验易感基因基因定位