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痛风易感基因RFX3条件性敲除小鼠构建及其调控炎症机制研究

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痛风易感基因RFX3条件性敲除小鼠构建及其调控炎症机制研究

作者：李脉超青岛大学

学位级别：硕士

研究目的:课题组前期研究发现RFX3是中国汉族人群痛风易感基因,但其参与痛风炎症过程的机制不清。本研究拟构建单核细胞RFX3条件性敲除小鼠模型,并应用该小鼠模型及原代骨髓单核细胞研究RFX3对痛风发病过程中的炎症细胞及炎症因子的调... 详细信息

研究目的:课题组前期研究发现RFX3是中国汉族人群痛风易感基因,但其参与痛风炎症过程的机制不清。本研究拟构建单核细胞RFX3条件性敲除小鼠模型,并应用该小鼠模型及原代骨髓单核细胞研究RFX3对痛风发病过程中的炎症细胞及炎症因子的调控作用及机制。研究方法:1.基于同源重组原理,本研究采用受精卵同源重组的方式,对RFX3基因进行flox修饰,获得条件性敲除RFX3基因的flox小鼠;将该flox小鼠和Lyz2-Cre工具鼠进行交配,获得选择性髓系单核细胞RFX3特异性敲除小鼠(KO小鼠)及其对照小鼠(WT小鼠)。剪尾法采集小鼠DNA,PCR法鉴定小鼠基因型;分离和培养小鼠骨髓单核细胞,利用L929细胞上清分化7天后采用免疫荧光染色及Western blot方法检测RFX3蛋白的表达水平。2.检测KO及对照小鼠血生化、血常规等指标,明确条件性敲除RFX3基因对小鼠表型的影响。3.构建MSU诱导的小鼠腹膜炎模型,4小时后采集小鼠腹腔灌洗液,分离灌洗液中细胞,Fc阻断剂封闭,加入ly6G抗体(FITC标记)、CD3抗体(Percp/cy5.5标记)、F4/80抗体(APC标记)、CD11b抗体(PE标记)及CD45抗体(PB标记)孵育,流式细胞术检测和分析单核/巨噬细胞(CD45F4/80CD11b)、中性粒细胞(CD45ly6GCD11b)、淋巴T细胞(CD45CD3)数量。收集腹腔灌洗液中细胞,提取RNA,q RT-PCR检测IL-1β,IL-6,TGF-β等炎症因子m RNA表达水平,并应用ELISA法检测灌洗液上清检测IL-1β分泌水平。4.分离培养小鼠骨髓单核细胞,L929细胞上清诱导为单核/巨噬细胞,流式细胞术检测细胞分化水平;细胞划痕及Transwell实验检测细胞迁移能力,明确RFX3对小鼠单核细胞功能的影响。5.鬼笔环肽染色观察RFX3对巨噬细胞细胞骨架的影响,蛋白组学研究探讨RFX3调控单核/巨噬细胞迁移能力及炎症水平的机制。研究结果:1.利用受精卵同源重组的方法,本研究成功构建RFX3基因条件性敲除小鼠。基因鉴定结果显示,KO小鼠表达出flox和Cre条带;Western blot和免疫荧光染色结果均显示,KO小鼠单核细胞RFX3蛋白表达水平明显降低。***小鼠血生化与血常规指标与对照组相比均无明显差异。3.本研究成功构建了MSU诱导的小鼠腹膜炎模型,对该模型腹腔灌洗液中炎症细胞的流式细胞术检测与分析结果显示,RFX3敲除小鼠巨噬细胞数量较对照小鼠明显增加(P<0.05),中性粒细胞和淋巴T细胞数量无明显变化;m RNA检测结果显示,KO小鼠腹腔灌洗液中炎症细胞IL-1β,IL-6及TGF-β表达水平与对照组无明显差异;ELISA检测结果显示,KO小鼠较WT小鼠腹腔灌洗液IL-1β表达水平明显降低。提示,RFX3可能参与对单核/巨噬细胞迁移的调节。4.对单核/巨噬细胞分化水平研究结果显示,RFX3敲除对骨髓单核细胞分化程度无明显影响;细胞划痕实验结果显示,RFX3基因敲除小鼠骨髓单核细胞迁移能力显著增加;细胞Transwell实验结果显示,RFX3基因敲除小鼠骨髓单核细胞迁移数量显著高于对照组(1052.27±56.88/cm vs.824.6±45.71/cm)。该研究结果表明RFX3敲除促进了单核/巨噬细胞的迁移能力;5.细胞骨架染色结果显示,KO小鼠骨髓单核细胞黏着斑面积及足小体数量明显增加;蛋白组学研究结果显示,actin cytoskeleton通路与痛风密切相关。上述研究结果提示,RFX3敲除后引起单核/巨噬细胞骨架结构发生变化,可能是其迁移能力增强的重要机制。结论:本研究成功构建了单核细胞RFX3条件性敲除小鼠模型,且基因敲除对小鼠血常规及血生化表型无明显影响;RFX3基因敲除明显降低痛风炎症水平,改变单核/巨噬细胞骨架结构,促进单核/巨噬细胞迁移可能其调控痛风炎症的关键机制。

关键词：痛风 RFX3 条件性敲除单核/巨噬细胞

提质增效背景下成本管理的管控体系和方法探讨

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金融文坛 2024年第3期 72-74页

作者：李脉琛韩春峰中电科蓉威电子技术有限公司

在强调提质增效的营商背景下，降低成本开支是企业提升经营质量的重要措施之一。提升核心竞争力、降低成本开支、优化资源配置是促进企业长远发展的必然举措。企业建立成本管理体系，发挥全面协同效应，能够促进降低成本方案的落地执行。

关键词：提质增效降低成本方法成本管理体系

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适应于弱光环境的ORB-SLAM算法

北京邮电大学学报 2024年第1期47卷 106-111页

作者：黎萍操超超电子科技大学中山学院机电工程学院中山528402 广东工业大学自动化学院广州510006

针对视觉同步定位与地图构建(SLAM)算法在弱光照或黑暗等复杂条件下定位失败和跟踪丢失等问题,提出了一种基于ORB-SLAM2算法的适合弱光环境的ORB-SLAM算法,其中应用了一种新的自适应图像增强模块,利用多尺度高斯函数提取的输入图像照度... 详细信息

针对视觉同步定位与地图构建(SLAM)算法在弱光照或黑暗等复杂条件下定位失败和跟踪丢失等问题,提出了一种基于ORB-SLAM2算法的适合弱光环境的ORB-SLAM算法,其中应用了一种新的自适应图像增强模块,利用多尺度高斯函数提取的输入图像照度分量,所设计的校正因子可根据照度分量进行动态调整,从而自适应地调整图像亮度。在公开数据集上进行了算法性能测试。结果表明,该算法能够有效地增强弱光照甚至黑暗等复杂条件下视觉图像的特征匹配,从而有效提升ORB-SLAM算法的鲁棒性。

关键词：弱光环境同步定位与地图构建图像增强多尺度高斯函数自适应校正

基于Fe_(3)O_(4)磁分子印迹纳米粒子比色检测蔬菜中6-苄氨基腺嘌呤残留

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食品与机械 2024年第6期40卷 69-76,103页

作者：刘艺丹栗鑫王婧丽李脉泉刘霞湖南农业大学食品科学技术学院湖南长沙410128 食品科学与生物技术湖南省重点实验室湖南长沙410128

[目的]实现蔬菜中6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)残留的快速、灵敏、可视化检测。[方法]基于Fe_(3)O_(4)磁分子印迹纳米粒子(Fe_(3)O_(4)MMIP NPs)的类过氧化物酶活性和特异识别性,构建了一种简单、快速、高选择性检测6-BA的比色方法,并用于蔬菜... 详细信息

[目的]实现蔬菜中6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)残留的快速、灵敏、可视化检测。[方法]基于Fe_(3)O_(4)磁分子印迹纳米粒子(Fe_(3)O_(4)MMIP NPs)的类过氧化物酶活性和特异识别性,构建了一种简单、快速、高选择性检测6-BA的比色方法,并用于蔬菜中6-BA残留检测。[结果]在pH 4.0、H 2O 2浓度0.02 mol/L、TMB浓度0.02 mol/L和反应时间5 min时,Fe_(3)O_(4)MMIP NPs表现出最佳的类过氧化物酶催化活性。6-BA在1~300 ng/mL质量浓度范围内与空白和样品吸光度值的差值呈良好的线性关系,检测限为0.697 ng/mL。该方法被成功应用于蔬菜(黄瓜、西红柿、黄豆芽、绿豆芽)中6-BA残留检测,回收率为83.47%~106.76%,相对标准差为0.37%~5.66%。此外,4℃下,Fe_(3)O_(4)MMIP NPs贮存60 d后仍能保持良好的催化活性。[结论]基于Fe_(3)O_(4)MMIP NPs检测6-BA的比色方法具有简便、快速、经济等优势,能够用于蔬菜中6-BA残留检测,具备一定的可靠性和实用性。

关键词：磁分子印迹纳米粒子类过氧化物酶 6-苄氨基腺嘌呤比色检测蔬菜

南水北调前后北京平原区地下水和地面沉降演变特征

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地质学报 2024年第2期98卷 591-610页

作者：雷坤超北京市地质环境监测所北京100195 中国科学院地质与地球物理研究所中国科学院页岩气与地质工程重点实验室北京100029

超量开采地下水引发的地面沉降已成为制约北京区域社会经济可持续发展的重要因素之一。2014年12月,南水北调中线工程正式通水,每年向北京输水超过10×10^(8)m^(3),改变了北京供水格局,也为地下水压采、涵养及控制地面沉降创造了条件。... 详细信息

超量开采地下水引发的地面沉降已成为制约北京区域社会经济可持续发展的重要因素之一。2014年12月,南水北调中线工程正式通水,每年向北京输水超过10×10^(8)m^(3),改变了北京供水格局,也为地下水压采、涵养及控制地面沉降创造了条件。本文利用多种监测数据,分析南水进京前后,北京平原区地下水和地面沉降的变化;研究不同水位变化模式下不同岩性及深度土层的变形特征;计算土层不同变形阶段的弹性和非弹性储水率;并对黏性土层产生较大残余变形和滞后变形的原因进行了探讨。结果表明:①2015~2020年,平原区大部分地区第一至第四含水层组地下水位逐渐上升,地面沉降呈减缓的趋势。②第二和第三压缩层组是沉降主要贡献层,除平各庄和榆垡站外,其余各站第三压缩层组沉降占比逐渐增大,沉降主控层有向深部转移的规律。③平原区北部和东部,第二和第三压缩层组对应的地下水位由降转升。在水位下降阶段,土层呈塑性和蠕变变形;水位上升阶段,土层以塑性变形为主,部分时间出现弹性变形,具有黏弹塑性。平原区南部,地下水位始终持续下降,土层变形始终呈塑性和蠕变变形。含水砂层则主要呈弹性变形。④土层变形的不同阶段,弹性和非弹性储水率并不是恒定的,随着地下水位下降,储水率呈减小的趋势。⑤黏性土层存在较大残余变形和变形滞后的原因,一是非弹性储水率大于弹性储水率,二是黏性土层的弱渗透性。

关键词：北京平原区南水北调工程地下水和地面沉降土层变形储水率

MXenes等离激元诱导热载流子产生与输运温度依变性

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物理学报 2024年第11期73卷 313-324页

作者：见超超马向超赵子涵张建奇西安电子科技大学光电工程学院西安710071

MXenes可以实现大规模合成且具有诸多优异光电特性,被用于构建各种结构和功能独特的热载流子光电探测器件.然而,变温环境条件下MXenes并不稳定,一方面环境温度升高会加速材料氧化降解,另一方面温度变化可能影响光电器件的寿命和性能稳定... 详细信息

MXenes可以实现大规模合成且具有诸多优异光电特性,被用于构建各种结构和功能独特的热载流子光电探测器件.然而,变温环境条件下MXenes并不稳定,一方面环境温度升高会加速材料氧化降解,另一方面温度变化可能影响光电器件的寿命和性能稳定性,目前MXenes温度不稳定性受到越来越多关注.鉴于实验研究变温条件下MXenes热载流子性质的局限,本文基于多体微扰理论和量子力学理论,研究环境温度对电子态分布和散射效应的影响.从表面等离激元非辐射衰减角度出发,采用第一性原理计算量化热载流子的产生效率、能量分布和输运,系统研究了MXenes表面等离激元诱导热载流子的环境温度依变特性.结果表明,MXenes中带间跃迁和声子协助电子跃迁共同高效率产生了高能热空穴主导的热载流子,且表现出与硼烯媲美的长寿命和输运距离.环境温度升高显著提高了红外波段的热载流子产生效率,同时可见光波段的热空穴表现出优异环境温度稳定性.此外,环境温度升高降低了热载流子的寿命和输运距离,主要源于增强的电子与光学声子散射效应.

关键词： MXenes 热载流子温度特性介电函数

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转胶蛋白通过阻断丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶信号通路抑制人甲状腺癌细胞的增殖和侵袭

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中华内分泌代谢杂志 2021年第6期37卷 567-573页

作者：于佳睿赵燕芸李脉超迟静薇车奎王颜刚孙文海胡建霞赵世华青岛大学附属医院内分泌与代谢病科 266003 青岛大学附属医院甲状腺实验室 266003 青岛大学附属医院甲状腺外科 266003

目的探究转胶蛋白(transgelin,TAGLN)在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)发生发展中的作用及其可能的信号通路。方法收集100例PTC组织及对应100例癌旁正常甲状腺组织,分别采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术、Western印... 详细信息

目的探究转胶蛋白(transgelin,TAGLN)在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)发生发展中的作用及其可能的信号通路。方法收集100例PTC组织及对应100例癌旁正常甲状腺组织,分别采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术、Western印迹法和免疫组化分析PTC组织和癌旁正常甲状腺组织中TAGLN的表达水平。分别使用质粒和shRNA慢病毒载体过表达和敲减PTC细胞中的TAGLN,通过细胞增殖实验(cell counting kit-8,CCK-8)、细胞侵袭和迁移实验(Transwell)检测TAGLN对PTC细胞增殖、侵袭和迁移的影响。应用Western印迹法检测TAGLN对丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)/细胞外信号调节激酶(extracellular-signal regulating kinase,ERK)信号通路的影响。结果RT-qPCR结果显示,PTC组织中的TAGLN mRNA表达与癌旁正常甲状腺组织无差异(P>0.05);Western印迹结果显示,TAGLN蛋白在PTC组织中表达水平明显低于癌旁正常甲状腺组织(P<0.01);免疫组化结果显示,在PTC组织中TAGLN的表达水平明显低于癌旁正常甲状腺组织。上调TAGLN的表达抑制PTC细胞的增殖、侵袭和迁移(P<0.01),而下调TAGLN的表达促进PTC细胞的增殖、侵袭和迁移(P<0.01)。在PTC细胞中,过表达TAGLN可降低磷酸化ERK的表达(P<0.05),而沉默TAGLN可增加磷酸化ERK的表达(P<0.01)。结论TAGLN在PTC中表达显著降低且与PTC的发生发展相关,其作用机制可能与MAPK/ERK信号通路有关。

关键词：甲状腺乳头状癌转胶蛋白 MAPK/ERK信号通路

REF-XT01型尿酸测试仪的准确性及临床应用研究

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中华内分泌代谢杂志 2020年第11期36卷 932-937页

作者：李脉超贺玉伟李海龙路杰张洁王雪峰任伟王灿庞磊王明李长贵纪晓朋青岛大学附属医院山东省代谢性疾病重点实验室 266003 青岛大学代谢病研究院 266003

目的本研究旨在评估REF-XT01型尿酸测试仪检测血尿酸浓度的准确性,以判断该尿酸测试仪检测结果能否用于指导痛风患者降尿酸药物的调整。方法对青岛大学附属医院痛风病临床医学中心就诊的1551例受试者,空腹采集静脉血,用全自动生化分析... 详细信息

目的本研究旨在评估REF-XT01型尿酸测试仪检测血尿酸浓度的准确性,以判断该尿酸测试仪检测结果能否用于指导痛风患者降尿酸药物的调整。方法对青岛大学附属医院痛风病临床医学中心就诊的1551例受试者,空腹采集静脉血,用全自动生化分析仪测定血尿酸浓度,同时采集指尖末梢血用REF-XT01型尿酸测试仪测定血尿酸浓度。应用线性回归、组内相关系数(ICC)、Bland-Altman分析法评估全自动生化分析仪血尿酸浓度(sUABA)检测值和尿酸测试仪血尿酸浓度(sUAUM)检测值间的相关性。使用受试者操作特性曲线(ROC曲线),评估sUAUM能否用于指导痛风患者的降尿酸用药。结果回归分析表明sUABA和sUAUM之间有良好的相关性,Y=0.875X+39.525(r=0.84,P<0.01);ICC为0.829(95%CI 0.814~0.844,P<0.01);Bland-Altman图显示sUABA和sUAUM具有较好的一致性,绝对偏差95%一致性界限(95%LoA)-143.4~114.5μmol/L,平均偏差-14.4μmol/L。以300μmol/L作为尿酸测试仪的检测临界值,灵敏度为96.61%,特异度为48.81%,ROC曲线下面积(AUC)为0.926(P<0.01),而以360μmol/L作为检测临界值,灵敏度为90.98%,特异度为66.78%,AUC为0.914(P<0.01)。结论REF-XT01型尿酸测试仪具有较高的精确度,其检测血尿酸数值可用于指导痛风患者降尿酸药物的调整。

关键词：尿酸测试仪痛风降尿酸药物

放电等离子烧结Cu-15Ni-8Sn/石墨自润滑复合材料摩擦磨损性能研究

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摩擦学学报（中英文） 2024年第4期44卷 509-518页

作者：马文林刘益超王小超苏博兰州交通大学机电工程学院甘肃兰州730070 中国科学院兰州化学物理研究所中国科学院材料磨损与防护重点实验室甘肃兰州730000

以Cu-15Ni-8Sn合金为基体,石墨为润滑剂,采用放电等离子烧结技术制备了Cu-15Ni-8Sn/石墨自润滑复合材料.使用扫描电子显微镜、X射线衍射仪和万能试验机研究了复合材料的微观组织、物相组成和室温力学性能,通过球-盘式摩擦试验机测试复... 详细信息

以Cu-15Ni-8Sn合金为基体,石墨为润滑剂,采用放电等离子烧结技术制备了Cu-15Ni-8Sn/石墨自润滑复合材料.使用扫描电子显微镜、X射线衍射仪和万能试验机研究了复合材料的微观组织、物相组成和室温力学性能,通过球-盘式摩擦试验机测试复合材料的摩擦磨损性能,利用三维轮廓仪测量材料磨损体积,借助扫描电子显微镜对磨痕形貌进行表征.结果表明:向Cu-15Ni-8Sn基体材料中添加石墨后,材料的硬度明显降低;随着石墨含量的提高,复合材料的抗压强度逐渐降低.当添加质量分数为3%的石墨时,Cu-15Ni-8Sn/石墨自润滑复合材料的耐磨性最好,磨损率最小为3.0×10^(-6)mm^(3)/(N·m),其磨损机理主要以磨粒磨损为主.

关键词：自润滑复合材料 Cu-15Ni-8Sn 放电等离子烧结抗压强度磨粒磨损

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