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一株具有抗HepG2活性的胡桃楸内生真菌的分离及研究

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中国中药杂志 2009年第13期34卷 1623-1627页

作者：李美芽吴运帷蒋福升于湘莉唐克轩苗志奇上海交通大学农业与生物学院上海200240 浙江中医药大学生命科学学院浙江杭州310053

目的：从胡桃楸树皮部分离抗癌活性菌株，筛选抗癌活性菌株，进行菌种鉴定，并对其发酵产物体外抗癌活性进行初步研究。方法：采用菌丝顶端纯化法从胡桃楸树皮部分离、纯化抗癌活性菌株；以MTT法对上述活性菌株发酵液体外抗癌活性进行... 详细信息

目的：从胡桃楸树皮部分离抗癌活性菌株，筛选抗癌活性菌株，进行菌种鉴定，并对其发酵产物体外抗癌活性进行初步研究。方法：采用菌丝顶端纯化法从胡桃楸树皮部分离、纯化抗癌活性菌株；以MTT法对上述活性菌株发酵液体外抗癌活性进行初步评价；形态学观察结合ITS序列分析法对筛选出的高抗癌活性菌株进行了菌种鉴定；单独对高抗癌活性菌株进行了体外抗癌活性试验。结果：分离得到FSN001—014共14株内生真菌，初步评价发现菌株FSN006具有较强的抗癌活性，鉴定为半知菌亚门，丝孢纲，丛梗孢目，木霉菌属长枝木霉。MTT结果显示FSN006发酵液对人肝癌HepG2细胞具有明显的生长抑制作用，在稀释20倍后仍能达到半数抑制效果。同等条件下阳性对照药姜黄素的IC50为11．49mg·L^-1。同时发酵液对正常肝细胞HL-7702的抑制程度仅相当于癌细胞抑制率的I／4左右，表现出较好的癌细胞选择性，有望开发成一种水溶性的高效低毒的抗癌药物。结论：胡桃楸树皮部存在多种内生真菌，其中分离得到的一个菌株具有较强的抗癌活性；其抗癌活性成分及其是否与胡桃楸中抗癌活性物质存在相关性等问题有待进一步深入研究。

关键词：胡桃楸内生真菌发酵液抗肿瘤

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原壳小球藻对6种常用抗生素的敏感性评价

中国食品学报 2012年第7期12卷 171-177页

作者：淦志兵李美芽施春雷史贤明上海交通大学农业与生物学院食品科学与工程系陆伯勋食品安全研究中心上海200240

目的:评价原壳小球藻对6种常用抗生素的敏感性,找到合适的抗生素作为藻株遗传改造的抗性标记。方法:在固体培养基中筛选最适合用于原壳小球藻筛选的抗生素,然后在液体培养基中加入不同浓度的抗生素,分别在第4天,第7天,第14天和第21天测... 详细信息

目的:评价原壳小球藻对6种常用抗生素的敏感性,找到合适的抗生素作为藻株遗传改造的抗性标记。方法:在固体培养基中筛选最适合用于原壳小球藻筛选的抗生素,然后在液体培养基中加入不同浓度的抗生素,分别在第4天,第7天,第14天和第21天测定藻液的OD440值并计算抗生素对藻的生长抑制率(P%)。根据抑制率(P%)与抗生素浓度(C)的关系来评估原壳小球藻对抗生素的敏感性。结果:经过2周的筛选试验,在固体培养基中,潮霉素的致死剂量为20μg/mL,链霉素、卡那霉素、壮观霉素、氯霉素的致死剂量分别超过100、500、100、600μg/mL。而在G418质量浓度为5μg/mL时,原壳小球藻的生长就受到显著的抑制;当质量浓度为10μg/mL时已经完全抑制了原壳小球藻的生长,因此,对于G418而言,10μg/mL是原壳小球藻生长的致死剂量。在液体培养基中,G418的作用剂量与固体培养基中的剂量一致,并且5μg/mL对原壳小球藻生长的抑制率维持在80%以上,10μg/mL对原壳小球藻生长的抑制率维持在95%左右。结论:原壳小球藻对氯霉素不敏感,对卡那霉素、链霉素、壮观霉素较为敏感,对潮霉素表现出高度敏感性,对G418最敏感。与其它5种抗生素相比,G418更适合作为原壳小球藻遗传转化的抗生素抗性选择标记。

关键词：原壳小球藻抗生素选择标记基因工程

桑黄提取物对C3H10t1/2细胞增殖与成脂分化的影响

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毒理学杂志 2017年第3期31卷 215-218页

作者：蓝巧帅张婷尹芬芬葛格李美芽吕圭源蒋福升浙江中医药大学浙江杭州310053

目的探讨桑黄提取物对C3H10t1/2细胞体外增殖及成脂分化的影响。方法采用95%乙醇回流提取,RP18柱色谱乙醇梯度洗脱制备桑黄提取物,水提醇沉制备多糖,通过MTS法分析各洗脱组分和多糖对C3H10t1/2细胞增殖影响,油红O染色法检测其对C3H10t1/... 详细信息

目的探讨桑黄提取物对C3H10t1/2细胞体外增殖及成脂分化的影响。方法采用95%乙醇回流提取,RP18柱色谱乙醇梯度洗脱制备桑黄提取物,水提醇沉制备多糖,通过MTS法分析各洗脱组分和多糖对C3H10t1/2细胞增殖影响,油红O染色法检测其对C3H10t1/2细胞成脂分化影响。结果桑黄各组分对C3H10t1/2均无明显生长抑制作用;桑黄多糖对C3H10t1/2成脂分化无明显抑制作用,但95%乙醇提取物抑制作用明显,50μg/ml抑制率可达81.36%,而其有效成分主要集中于RP18柱色谱95%乙醇洗脱部位,其30μg/ml对C3H10t1/2成脂抑制率可达85.70%。结论桑黄提取物对C3H10t1/2毒性较低,但95%乙醇提取物具有显著成脂抑制活性,主要成分为极性较小的脂溶性成分。

关键词：桑黄提取物 C3H10t1/2细胞细胞增殖成脂分化多糖

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不同来源白及中3个主要化学成分的含量比较

中国中药杂志 2019年第13期44卷 2762-2767页

作者：蒋福升沈徐婷姚玥丁滨李美芽丁志山吕圭源浙江中医药大学生命科学学院浙江杭州310053 浙江中医药大学医学技术学院浙江杭州310053 浙江中医药大学中医药科学院浙江杭州310053 浙江中医药大学药学院浙江杭州310053

为了了解相同种植条件下60个不同来源白及中贝母兰宁、山药素Ⅲ和3’-O-甲基山药素Ⅲ的含量差异。该研究采用UPLC进行测定,采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18(2. 1 mm×100 mm,1. 7μm)色谱柱,以乙腈-0. 1%甲酸水为流动相进行梯度洗脱,... 详细信息

为了了解相同种植条件下60个不同来源白及中贝母兰宁、山药素Ⅲ和3’-O-甲基山药素Ⅲ的含量差异。该研究采用UPLC进行测定,采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18(2. 1 mm×100 mm,1. 7μm)色谱柱,以乙腈-0. 1%甲酸水为流动相进行梯度洗脱,流速为0. 208 m L·min-1,检测波长270 nm,柱温35℃,进样量为4μL。结果表明,在上述色谱条件下3个成分分离度良好,在0. 156~5. 000 mg·L-1线性良好,测得贝母兰宁、山药素Ⅲ和3’-O-甲基山药素Ⅲ平均质量分数分别达(0. 116±0. 071)%,(0. 386±0. 185)%,(0. 086±0. 034)%。不同来源、不同品种白及在相同条件下种植2年后,化学组成差异不大,但3个成分含量具有一定的地域性差异,表现为西部地区高于东部地区的趋势;而华白及中贝母兰宁、山药素Ⅲ含量稍高于白及。该色谱方法简单,稳定性、重复性好,可用于3个成分的定量分析;不同来源白及成分含量分析可为今后白及优良品种选育和质量标准制定提供参考。

关键词：白及超高效液相色谱含量测定贝母兰宁

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热休克蛋白90抑制剂的临床应用

中国医药指南 2017年第20期15卷 22-23页

作者：潘洁莉李美芽浙江中医药大学分析测试中心浙江杭州310053

热休克蛋白90(HSP90)是细胞内进化保守的蛋白之一,通过与效应蛋白和分子伴侣形成复合物产生生理作用。HSP90在胃癌、肺癌、肝癌、乳腺癌等肿瘤组织中高表达,且和肿瘤分级、分期及预后呈正相关性。HSP90抑制剂主要分为天然HSP90抑制剂及... 详细信息

热休克蛋白90(HSP90)是细胞内进化保守的蛋白之一,通过与效应蛋白和分子伴侣形成复合物产生生理作用。HSP90在胃癌、肺癌、肝癌、乳腺癌等肿瘤组织中高表达,且和肿瘤分级、分期及预后呈正相关性。HSP90抑制剂主要分为天然HSP90抑制剂及其衍生物和合成的抑制剂两大类,且有多个药物进入临床试验阶段。HSP90已成为一类重要的抗肿瘤治疗靶标,HSP90抑制剂将在抗肿瘤的治疗领域得到长久的关注。

关键词： HSP90 肿瘤抑制剂

氯化钠处理对原壳小球藻生长及油脂积累的影响

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生物工程学报 2017年第7期33卷 1101-1108页

作者：潘洁莉高丽娜赵双双刘巧郁吉峰何一君李美芽浙江中医药大学分析测试中心浙江杭州310053 浙江中医药大学生命科学学院浙江杭州310053 浙江中医药大学医学技术学院浙江杭州310053

采用Basal培养基,通过光学显微镜、电子显微镜、激光共聚焦显微镜以及尼罗红染色定量等方法研究了不同浓度氯化钠(0、150、300、600 mmol/L)对小球藻属原壳小球藻的生长状态、脂滴分布、总脂含量的影响。结果表明,添加不同浓度的氯化钠... 详细信息

采用Basal培养基,通过光学显微镜、电子显微镜、激光共聚焦显微镜以及尼罗红染色定量等方法研究了不同浓度氯化钠(0、150、300、600 mmol/L)对小球藻属原壳小球藻的生长状态、脂滴分布、总脂含量的影响。结果表明,添加不同浓度的氯化钠对原壳小球藻的生长有明显的影响,随着氯化钠浓度的增加,小球藻的生长速度受到明显的抑制,600 mmol/L氯化钠处理时生长几乎完全被抑制。在显微镜下观察,可见氯化钠浓度的增加会导致小球藻聚集成团,这种现象在150 mmol/L和300 mmol/L氯化钠培养下比较明显;通过电子显微镜下观察,可以发现培养初期,随着氯化钠浓度的增加,小球藻细胞壁增厚,脂滴增多。通过尼罗红染色对脂含量进行定量,处理初期脂滴的合成量在600 mmol/L时最高,但到后期,随着藻生物量的增加,150 mmol/L和300 mmol/L处理下脂合成量逐渐升高,而对照小球藻脂合成量基本不变。稳定期后,从生物量(干重)和脂总量来看,300 mmol/L氯化钠培养处理的小球藻虽然生物量只有对照的73.55%,但是总脂含量却是对照的2.22倍,可见一定浓度的氯化钠处理一定时间可显著提高原壳小球藻的油脂含量。

关键词：氯化钠原壳小球藻脂滴

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肠道病原菌gyrB基因系统发育分析

浙江中医药大学学报 2015年第7期39卷 548-554页

作者：倪萍李美芽葛尔宁侯晓丽浙江中医药大学分析测试中心杭州310053

[目的]探讨gyrB基因区分鉴别肠道病原菌的能力,为临床快速鉴定病原菌提供依据。[方法]通过PCR扩增及测序方法,获得肠杆菌科和弧菌科的14种临床常见肠道病原菌gyrB基因序列,合并采集来自GenBank的标准菌株序列,采用距离法构建系统发育树... 详细信息

[目的]探讨gyrB基因区分鉴别肠道病原菌的能力,为临床快速鉴定病原菌提供依据。[方法]通过PCR扩增及测序方法,获得肠杆菌科和弧菌科的14种临床常见肠道病原菌gyrB基因序列,合并采集来自GenBank的标准菌株序列,采用距离法构建系统发育树。[结果]在系统发育树的拓扑结构中,除志贺氏菌、大肠杆菌、嗜水气单胞菌外,同一菌种的不同菌株均聚类形成具有较高的自举支持率单系类群。大肠杆菌演化支内混杂有志贺氏菌分支;嗜水气单胞菌的临床分离株与标准菌株相距较远,未能聚类成单系类群。另外,除乙型副伤寒沙门氏菌外,其余沙门氏菌gyrB序列在血清型水平呈现高度同源性,使得5种血清型各自聚类区分。[结论]采用gyrB基因作为肠道病原菌系统发育分析靶基因是合适的,其可以在菌种水平区分包含肠杆菌与弧菌科的肠道病原菌。

关键词：肠杆菌科弧菌科 gyrB基因系统发育分析

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白术根腐病病原菌的分离鉴定及特性研究

中华中医药杂志 2021年第5期36卷 2908-2911页

作者：黄幸鸽李美芽杨蒋舜宋腾蛟袁小凤浙江中医药大学杭州310053 浙江中医药大学生命科学学院杭州310053

目的:分离白术根腐病病原菌,探究温度和pH值对病原菌生长状态的影响。方法:采用组织分离法分离、纯化得到病原菌,致病性试验判定其对白术的致病性。通过分子生物学鉴定病原菌的种属。分别采用不同的温度和p H值探究不同条件对病原菌生... 详细信息

目的:分离白术根腐病病原菌,探究温度和pH值对病原菌生长状态的影响。方法:采用组织分离法分离、纯化得到病原菌,致病性试验判定其对白术的致病性。通过分子生物学鉴定病原菌的种属。分别采用不同的温度和p H值探究不同条件对病原菌生长的影响。结果:白术根腐病病原菌为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)。在温度超过30℃、p H值为9时尖孢镰刀菌生长缓慢。结论:温度和pH值都会对尖孢镰刀菌的生长产生影响。

关键词：白术根腐病尖孢镰刀菌温度 p H值分离鉴定特征

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白及须根化学成分及其体外抗菌活性研究

中药材 2016年第3期39卷 544-547页

作者：俞杭苏代斌玲钱朝东丁志山蒋福升金波李美芽浙江中医药大学浙江杭州310053

目的：研究白及须根化学成分及其体外抗菌活性。方法：采用硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱以及制备型HPLC等色谱方法进行分离纯化,根据理化性质和波谱分析鉴定化合物结构,并且利用96孔板对倍稀释法测定体外抗菌活性。结果：本研究从... 详细信息

目的：研究白及须根化学成分及其体外抗菌活性。方法：采用硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱以及制备型HPLC等色谱方法进行分离纯化,根据理化性质和波谱分析鉴定化合物结构,并且利用96孔板对倍稀释法测定体外抗菌活性。结果：本研究从白及须根中分离得到7个化合物,分别鉴定为：对羟基苯甲醛（1）、2,7-二羟基-4-甲氧基-9,10-二氢菲（2）、4,5-二羟基-2-甲氧基-9,10-二氢菲（3）、2-羟基-4,7-二甲氧基菲（4）、militarine（5）、dactylorhin A（6）、天麻素（7）。其中,化合物2~4对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、粪肠球菌及枯草芽孢杆菌等革兰氏阳性菌具有中等强度的抗菌作用（MIC 8~128μg/m L）。结论：白及须根富含与白及块茎结构相同或相似的化合物,包括2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯以及对革兰氏阳性菌具有抗菌作用的菲类化合物。其中,单菲化合物3和4为首次从白及属植物中分离得到。

关键词：白及须根菲二氢菲抗菌活性