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抗原致敏、基因修饰的树突状细胞诱导免疫杀伤多发性骨髓瘤细胞U266的研究

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抗原致敏、基因修饰的树突状细胞诱导免疫杀伤多发性骨髓瘤细胞U2...

作者：李纯团福建医科大学

学位级别：硕士

研究背景:多发性骨髓瘤(MM)是一种低增殖活性和低凋亡活性的克隆性疾病,因其缓解率低,复发率高,用传统化疗不能治愈而困扰着临床。目前采用的常规化疗不能从根本上延长患者的无病生存期(DFS)及总生存期(OS)。微小残留病(MRD)常是化疗耐... 详细信息

研究背景:多发性骨髓瘤(MM)是一种低增殖活性和低凋亡活性的克隆性疾病,因其缓解率低,复发率高,用传统化疗不能治愈而困扰着临床。目前采用的常规化疗不能从根本上延长患者的无病生存期(DFS)及总生存期(OS)。微小残留病(MRD)常是化疗耐药和复发的主要原因,因此迫切需要有新的治疗策略。正因为如此人们对免疫治疗寄予厚望。希望在化疗基础上结合适当的免疫治疗能够更彻底地清除MRD,进而达到痊愈。肿瘤的免疫治疗自80年代以后有了飞跃的发展,其中,以抗原特异性细胞毒T淋巴细胞(CTLs)介导的肿瘤免疫治疗成为新的热点。MM细胞本身可表达肿瘤特异性抗原和肿瘤相关性抗原,适于进行免疫冶疗。粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)是一种在抗原提呈细胞(APC)的成熟和功能发挥中起重要作用的细胞因子,它能够维持树突状细胞(DCs)成熟,增强DCs抗原捕获能力及促进共刺激分子的表达。因此,我们设想通过体外扩增健康人浓缩白细胞的DCs,然后以多发性骨髓瘤细胞U可溶性抗原冲击致敏DCs,并通过腺病毒转导GM-CSF基因到DCs细胞中,以诱导U抗原特异性CTLs,为基因工程技术辅助免疫治疗MM打下实验基础。目的:研究负载有U可溶性抗原并携带外源基因GM-CSF的DCs,在体外激活自身T细胞形成CTLs对U细胞的杀伤作用。方法:利用淋巴细胞分离液从健康人的外周血浓缩白细胞中分离出单个核细胞(PBMC),然后通过贴壁法得到单核细胞。所得的单核细胞应用GM-CSF和IL-4联合诱导培养,到第7天加TNF-α诱导成熟。通过光镜、透射电镜观察DCs形态,流式细胞术检测DCs白细胞免疫标记,ELISA检测DCs的IL-12分泌情况,混合淋巴细胞培养研究DCs免疫激活功能等生物学特性;用含有外源基因GM-CSF的腺病毒反复感染293细胞,以扩增病毒滴度;用U可溶性抗原致敏DCs,再用含有外源基因GM-CSF的腺病毒感染DCs,将所得的DCs与T细胞混合培养5天,以形成对U具有特异杀伤作用的CTLs,最后通过测定LDH以计算CTLs对U的杀伤率,并用ELISA法检测特异性CTLs的IFN-γ分泌情况。

关键词：多发性骨髓瘤树突状细胞 CTLs GM-CSF

抗PDL1-CAR慢病毒载体的构建及其转染培养体系的优化

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肿瘤预防与治疗 2023年第7期36卷 550-556页

作者：彭群艺李纯团郑艳朱雄鹏福建医科大学附属泉州市第一医院血液科福建泉州362000

目的:设计构建抗PDL1-CAR慢病毒载体,分析嵌合抗原受体T(chimeric antigen recptor T, CART)细胞的结构和功能,同时优化CART细胞的转染和培养,增加CART细胞的表达率和杀伤活性。方法:构建靶向程序性死亡配体1(programmed death-ligand1,... 详细信息

目的:设计构建抗PDL1-CAR慢病毒载体,分析嵌合抗原受体T(chimeric antigen recptor T, CART)细胞的结构和功能,同时优化CART细胞的转染和培养,增加CART细胞的表达率和杀伤活性。方法:构建靶向程序性死亡配体1(programmed death-ligand1,PDL1)的CAR慢病毒载体,按病毒感染复数(multiplicity of infection, MOI)=10、20、40的条件进行转染,采用非磁珠法进行培养扩增,荧光显微镜和流式细胞仪检测转染后CART细胞的表达,最后采用流式绝对计数法检测CART细胞的杀伤性。结果:采用GV401质粒构建的抗PDL1-CAR慢病毒载体,经培养扩增后3组MOI的CART细胞阳性表达率分别为28.80%±0.46%、54.77%±0.32%、71.37%±0.42%,并在荧光显微镜下观察到抗PDL1-CAR细胞表达绿色荧光。在效靶比为2:1、5:1和10:1时,抗PDL1-CAR细胞比T细胞对PDL1-CA46细胞的杀伤率更高(Z=-1.964, P <0.05)。结论:构建抗PDL1-CAR慢病毒载体,可以为其他各种CART细胞的构建提供良好参考,CART细胞的表达率和杀伤活性的提高,为CART细胞的功能研究奠定基础。

关键词： CART 细胞 PD-L1 转染培养

稳定沉默钙网蛋白表达通过下调VEGF、MMP2/9的表达抑制SNK6细胞侵袭能力

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中国实验血液学杂志 2019年第2期27卷 433-438页

作者：郑艳朱雄鹏李纯团黄远玲福建医科大学附属泉州第一医院血液内科福建泉州362000

目的:探索稳定下调钙网蛋白(calreticulin,CALR)对NK/T细胞淋巴瘤细胞SNK6细胞侵袭性的影响及其可能机制。方法:设计靶向人钙网蛋白的特异性短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)序列,构建重组慢病毒载体;三质粒系统包装慢病毒颗粒,感染S... 详细信息

目的:探索稳定下调钙网蛋白(calreticulin,CALR)对NK/T细胞淋巴瘤细胞SNK6细胞侵袭性的影响及其可能机制。方法:设计靶向人钙网蛋白的特异性短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)序列,构建重组慢病毒载体;三质粒系统包装慢病毒颗粒,感染SNK6细胞,嘌呤霉素抗性筛选稳定下调钙网蛋白表白的SNK6细胞。应用CCK8法测定细胞增殖活力,Transwell小室测定细胞侵袭。Western blot检测SNK6细胞CALR表达水平,荧光定量PCR检测SNK6细胞CALR、MMP2、MMP9和VEGF的转录水平。结果:成功构建重组慢病毒载体pLKO.1-puro-shCALR,并包装慢病毒,筛选出稳定下调钙网蛋白的SNK6细胞株。稳定下调SNK6细胞钙网蛋白表达后,SNK6侵袭性减弱,MMP2、MMP9和VEGF的转录水平降低。结论:稳定下调SNK6细胞钙网蛋白的表达可使SNK6细胞侵袭性减弱,其机制可能与降低MMP2、MMP9和VEGF的转录水平有关。

关键词： NK/T细胞淋巴瘤侵袭钙网蛋白血管内皮生长因子金属蛋白酶

磷脂酰肌醇3-激酶信号通路及其抑制剂在淋巴瘤中的研究进展

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白血病．淋巴瘤 2019年第9期28卷 568-571页

作者：许雅虹李纯团朱雄鹏福建医科大学附属泉州第一医院血液科 362000

磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)信号通路过度活化与恶性肿瘤的发生发展密切相关,该通路异常表达参与调控细胞的生长增殖、恶性转化、凋亡及转移,针对PI3K信号通路特定位点制定的靶向治疗是近年来的研究热点,多种不同类型的PI3K抑制剂已经上市... 详细信息

磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)信号通路过度活化与恶性肿瘤的发生发展密切相关,该通路异常表达参与调控细胞的生长增殖、恶性转化、凋亡及转移,针对PI3K信号通路特定位点制定的靶向治疗是近年来的研究热点,多种不同类型的PI3K抑制剂已经上市或进入临床试验阶段,并对恶性淋巴瘤的治疗起着可观疗效,文章对PI3K信号通路在淋巴瘤中的活化形式及PI3K抑制剂在淋巴瘤中的最新研究进展作一综述。

关键词：淋巴瘤磷脂酰肌醇3-激酶信号传导蛋白激酶抑制剂

mTOR抑制剂雷帕霉素对伯基特淋巴瘤细胞增殖抑制的研究

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中国实验血液学杂志 2017年第5期25卷 1397-1405页

作者：周伦欢朱雄鹏肖慧芳辛鹏亮李纯团湖北医药学院附属随州市中心医院肾病内科湖北随州441300 福建医科大学附属泉州第一医院血液科福建泉州362000

目的:探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)抑制剂雷帕霉素对伯基特淋巴瘤细胞株Raji细胞和CA46细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响及其作用机制,寻找其靶向治疗方法。方法:采用MTT法观察雷帕霉素对Raji细胞和CA46细胞增殖抑制作用,PI单染流... 详细信息

目的:探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)抑制剂雷帕霉素对伯基特淋巴瘤细胞株Raji细胞和CA46细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响及其作用机制,寻找其靶向治疗方法。方法:采用MTT法观察雷帕霉素对Raji细胞和CA46细胞增殖抑制作用,PI单染流式细胞术分析雷帕霉素对Raji细胞和CA46细胞周期分布的影响,Annexin V-FITC+PI双染流式细胞术分析雷帕霉素对Raji细胞和CA46细胞凋亡的影响,Western blot法检测雷帕霉素对Raji细胞和CA46细胞RPS6磷酸化水平及survivin、caspase-3蛋白表达水平的影响。结果:雷帕霉素能够明显抑制Raji细胞和CA46细胞的增殖,在雷帕霉素为1 nmol/L时,细胞增殖抑制率即达到20%,表现出雷帕霉素良好的生物活性,且抑制作用具有时间依赖性(r=0.507)和浓度依赖性(r=0.838)。不同浓度雷帕霉素分别作用于Raji和CA46细胞24和48 h后,与对照组相比,发现细胞周期处于G_1/G_0期细胞逐渐增多,S期和G2/M期细胞则逐渐减少,呈现时间依赖性(r=0.961)和浓度依赖性(r=0.947)。雷帕霉素100 nmol/L作用于Raji和CA46细胞48 h后,Annexin V+PI双染流式细胞术检测显示细胞明显凋亡,且主要为中晚期凋亡。Western blot法检测显示,雷帕霉素作用于Raji细胞和CA46细胞后,RPS6磷酸水平及survivin表达水平明显降低,caspase-3表达水平明显升高,且具有时间依赖性(r=0.926)和浓度依赖性(r=0.985)。结论:雷帕霉素能够通过抑制mTOR下游通路RPS6蛋白磷酸化,进而抑制mTOR/RPS6通路活化,阻滞细胞周期于G_1/G_0期,达到有效抑制伯基特淋巴瘤细胞株Raji细胞和CA46细胞增殖,同时下调抗凋亡蛋白survivin的表达,激活内源性促凋亡蛋白caspase-3而诱导细胞发生凋亡。

关键词：雷帕霉素伯基特淋巴瘤 mTOR caspase-3 survivin 细胞凋亡

嵌合抗原受体T细胞靶向PD-L1的初步研究

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中国免疫学杂志 2022年第2期38卷 196-200页

作者：彭群艺朱雄鹏(指导) 李纯团辛鹏亮郑艳福建医科大学附属泉州第一医院泉州362000

目的:采用嵌合抗原受体(CAR)T细胞技术将肿瘤免疫检查点抑制剂序列(MEDI4736)整合至CART细胞,构建一种新的抗PD-L1的CART(αPDL1-CART)细胞,并探索αPDL1-CART细胞的作用机制。方法:共培养结合实验检测αPDL1-CAR的结合性,流式细胞术分... 详细信息

目的:采用嵌合抗原受体(CAR)T细胞技术将肿瘤免疫检查点抑制剂序列(MEDI4736)整合至CART细胞,构建一种新的抗PD-L1的CART(αPDL1-CART)细胞,并探索αPDL1-CART细胞的作用机制。方法:共培养结合实验检测αPDL1-CAR的结合性,流式细胞术分析αPDL1-CART细胞表达,细胞毒性实验检测αPDL1-CART细胞杀伤性。结果:αPDL1-K562细胞可特异性结合PDL1-K562细胞,阳性表达率为(48.9±13.9)%;与T vs K562组、T vs PDL1-K562组和αPDL1-CART vs K562组相比,αPDL1-CART vs PDL1-K562组αPDL1-CART细胞可显著减少PDL1-K562细胞数[(2 136.9±766.1)个,P<0.05]。结论:αPDL1-CART细胞可特异性结合和杀伤PDL1-K562细胞,将进一步促进CART细胞与免疫检测点结合研究。

关键词： CART细胞 PD-L1 K562细胞 MEDI4736

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出院患者实施电话随访对减少医疗纠纷的作用

中国卫生标准管理 2016年第4期7卷 253-254页

作者：王美春李纯团福建医科大学附属泉州市第一医院 362000

目的探讨血液科出院患者实施电话随访对于减少医疗纠纷的作用。方法将我科2015年出院患者按出院时间先后分组,1~6月532例为对照组,只接受出院指导;7~12月548例为实验组,除接受出院指导外,还由责任护士及总值班护士长在规定时间内根据院... 详细信息

目的探讨血液科出院患者实施电话随访对于减少医疗纠纷的作用。方法将我科2015年出院患者按出院时间先后分组,1~6月532例为对照组,只接受出院指导;7~12月548例为实验组,除接受出院指导外,还由责任护士及总值班护士长在规定时间内根据院部制定的表格对其实施电话回访。结果实验组医疗纠纷的发生率少于对照组（P〈0.001）。结论在出院后实施电话随访减少医疗纠纷。

关键词：出院患者电话随访医疗纠纷

如意金黄散加蜂蜜外敷治疗机械性静脉炎43例

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中国卫生标准管理 2019年第1期10卷 106-108页

作者：王美春李纯团福建省泉州市第一医院血液科福建泉州362000

目的探讨蜂蜜调剂如意金黄散外敷治疗机械性静脉炎的疗效。方法将78例PICC所致机械性静脉炎随机分为实验组(43例)及对照组(35例)。实验组使用如意金黄散适量加蜂蜜调匀成糊状,外敷于静脉炎处,对照组使用25%硫酸镁湿敷于静脉炎处。结果... 详细信息

目的探讨蜂蜜调剂如意金黄散外敷治疗机械性静脉炎的疗效。方法将78例PICC所致机械性静脉炎随机分为实验组(43例)及对照组(35例)。实验组使用如意金黄散适量加蜂蜜调匀成糊状,外敷于静脉炎处,对照组使用25%硫酸镁湿敷于静脉炎处。结果实验组总有效率为97.7%,对照组总有效率为82.9%,两者之间差异有统计学意义(P <0.05),实验组费用为(24.79±2.95)元,起效时间为(47.77±19.07)h,对照组费用为(36.60±3.99)元,起效时间为(79.63±16.71)h,两组人均费用及起效时间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论如意金黄散加蜂蜜治疗机械性静脉炎相比25%硫酸镁,起效快,费用省,效果好。

关键词：如意金黄散蜂蜜硫酸镁外敷机械性静脉炎有效率费用

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特发性血小板减少性紫癜的抗幽门螺杆菌治疗

血栓与止血学 2006年第2期12卷 82-85页

作者：李纯团朱雄鹏福建医科大学教学医院泉州市第一医院血液科泉州362000

特发性血小板减少性紫癫（ITP）是以出血及外周血血小板减少、骨髓巨核细胞数正常或增多伴有成熟障碍为主要表现的疾病。ITP患者体内产生血小板自身抗体与血小板膜糖蛋白（GPs）结合后,使得血小板在网状内皮系统（RES）被大量破坏,而形... 详细信息

特发性血小板减少性紫癫（ITP）是以出血及外周血血小板减少、骨髓巨核细胞数正常或增多伴有成熟障碍为主要表现的疾病。ITP患者体内产生血小板自身抗体与血小板膜糖蛋白（GPs）结合后,使得血小板在网状内皮系统（RES）被大量破坏,而形成出血症状。

关键词：特发性血小板减少性紫癫抗幽门螺杆菌治疗