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高产耐高温单宁酶菌株的筛选及其胞外单宁酶酶学性质分析与应用

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高产耐高温单宁酶菌株的筛选及其胞外单宁酶酶学性质分析与应用

作者：李红歌南昌大学

学位级别：硕士

单宁酰基水解酶(Tannase EC3.***.1.20),又称单宁酶,是一种由微生物在单宁存在条件下诱导而产生的细胞膜结合酶,能催化单宁及没食子酸酯类中的酯键和缩酚键的水解。食品中的主要涩味来源——单宁能在单宁酶作用下生成中间产物1,2,3,4,6-pe... 详细信息

单宁酰基水解酶(Tannase EC3.***.1.20),又称单宁酶,是一种由微生物在单宁存在条件下诱导而产生的细胞膜结合酶,能催化单宁及没食子酸酯类中的酯键和缩酚键的水解。食品中的主要涩味来源——单宁能在单宁酶作用下生成中间产物1,2,3,4,6-pentagalloyglucose和2,3,4,6-tetragalloylglucose,并进一步催化分子中酯键的断裂,将其降解为没食子酸和葡萄糖。美国食品与药物管理局(FDA)已经认定单宁酶为安全产品。单宁酶是酶法制备抗菌剂甲氧苄氨嘧啶中间体没食子酸和食品添加剂没食子酸丙酯的催化用酶;作为添加剂也广泛应用于速溶茶、咖啡软饮料、啤酒和白酒等食品工业生产中,以解决因含单宁而引起的浑浊、涩味等品质问题;在皮革的生产过程中,单宁酶可作为工业鞣剂用于匀化生皮,同时固定化单宁酶还用于处理制革厂排放的含单宁的废水;在化妆品行业中,单宁酶也可用以解决因添加含单宁植物提取液而引起的浑浊或结块现象。目前,工业单宁酶存在的主要问题是酶活力低、热稳定性低,制约了单宁酶的工业化发展。本文从富含单宁的云南红茶中筛选得到一株高产耐高温胞外单宁酶菌株Aspergillus awamori FCYN206,优化了其发酵产酶条件,并对胞外单宁酶的酶学性质进行了研究,同时将Aspergillus awamori FCYN206应用于香蕉茎叶发酵饲料的制备。主要研究结果概括如下： 1.筛选并鉴定了一株高产胞外单宁酶菌株。从云南红茶中筛选出3株产胞外单宁酶活力较高的菌株。产酶能力最高的菌株FCYN206(50.24U/mL)经菌种形态学判定为真菌,提取其基因组DNA,经18S rRNA测序鉴定,克隆得到的18S rRNA基因组大小为1333bp,所获序列在GenBank中进行同源性比对,显示与泡盛曲霉Aspergillus awamori strain PSFW1RH-1序列同源性为99%,根据该序列及菌落形态将菌株FCYN206鉴定为泡盛曲霉Aspergillus awamori,并在NCBI申请了新菌种序列,GenBank菌株序列号：JQ728449。 2.通过响应面实验优化得到了Aspergillus awamori FCYN206的最佳产胞外单宁酶条件。首先通过单因素实验得到培养基中单宁浓度、额外添加碳源种类及添加量、氮源种类及添加量、初始pH值等因素对产酶的影响。然后利用软件Design-Expert8.05,采用Box-Behnkens设计响应面实验,建立Aspergillus awamori FCYN206液体摇瓶发酵产胞外单宁酶的二次多项数学模型,检验证明该模型是合理可靠的。单宁浓度、蔗糖浓度对胞外单宁酶活力影响显著,最优产酶条件为：单宁2.18%、蔗糖1.88%、NaNO30.12%、初始pH值4.01,在此条件下250mL三角瓶装培养液50mL,接种1mL孢子悬液(5×109个/mL),30-C、120rpm培养72h后,胞外单宁酶活力高达172.54U/mL,比优化前提高了3.43倍。 3.对Aspergillus awamori FCYN206胞外单宁酶的稳定性进行了研究。发现该胞外单宁酶具有良好的储存稳定性,单宁酶在4℃恒温储存4周和12周后仍保存98.02%和90.49%的酶活力;耐高温性能优越,20～80℃水浴1h,酶活力保留率均在90%以上,90℃保温1h仍能保持88%的酶活,最适酶促反应温度为40℃;具有较广的pH稳定性,4℃、pH3.0-6.5储存24h,.酶活力保存率均在90%以上,最适酶促反应pH值5.5。 4.研究了盐浓度对Aspergillus awamori FCYN206胞外单宁酶活力的影响。实验表明,当NaCl浓度小于1mmol/L时,菌株Aspergillus awamori FCYN206胞外单宁酶活力略有上升,而当NaCl浓度大于1mmol/L时,随着离子强度的增大,酶活力迅速下降,当NaCl浓度达到5mmol/L时,胞外单宁酶活力仅为原有酶活力的66.32%。 5.研究了金属离子对Aspergillus awamori FCYN206胞外单宁酶活力的影响。在浓度为2mmol/L时,K+、Ag+、Zn2+等金属离子可促进酶促反应的进行,其中Ag+能提高酶活力26.35%,K+、Zn2+分别能提高酶活力2.34%、6.27%;而同等浓度的Na+、Mg2+, Ca2+、Fe2+、Fe3+、Hg2+、Co2+、Mn2+、Cu2+、Ba2+均能在不同程度上抑制酶活力,其中Co2+、Cu2+对胞外单宁酶抑制性最强,分别抑制胞外单宁酶活力31.01%、35.04%。 6.研究了醇类有机溶剂对Aspergillus awamori FCYN206胞外单宁酶活力的影响。实验表明

关键词：泡盛曲霉高温稳定性酶学性质发酵饲料

高中英语人教版必修一Unit 4 Earthquakes课本要点精练

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中学生英语(高中版) 2011年第26期 7-9+47-48页

作者：李红歌河南省洛阳市第三中学

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试论审查逮捕阶段证据的审查与判断

法制与社会 2010年第6期 138-139页

作者：李红歌重庆大学法学院

我国司法实践中,审查逮捕还存在许多问题,如何对证据进行审查与判断是保证办案质量的关键。本文在此就审查逮捕阶段证据的审查与判断作简要的分析和论述。

关键词：审查逮捕证据审查证据判断

现代主动型安全监察技术的应用——以河南省煤层气开发利用有限公司为例

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矿业工程研究 2011年第3期26卷 52-55页

作者：李红歌周岩河南省煤层气开发利用有限公司安全监察局河南郑州450016

以具有煤炭资源开发、煤层气开发利用、机械装备制造、煤炭物流运销等多种业务的综合型企业(河南省煤层气开发利用有限公司)为实验单位,提出了将主动型现代信息化技术应用于煤矿和能源管理企业安全监察工作中的理念,在政策的约束下形成... 详细信息

以具有煤炭资源开发、煤层气开发利用、机械装备制造、煤炭物流运销等多种业务的综合型企业(河南省煤层气开发利用有限公司)为实验单位,提出了将主动型现代信息化技术应用于煤矿和能源管理企业安全监察工作中的理念,在政策的约束下形成基层单位主动输入、总部安全监察局主动监察、监察信息层次化管理的一体化监管体系,开发了安全监察和监测监控自动化软件系统,从而实现了高效率、高质量的企业安全监察和控管.

关键词：安全监察主动型现代信息化煤层气

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炮放工作面支柱防倒方法的应用

煤炭工程 2009年第3期41卷 34-35页

作者：季景文李荣伟王晓伟杨慧鹏李红歌郑煤集团公司告成煤矿河南登封452477 郑煤集团公司河南郑州452371

炮采放顶煤技术已在郑煤集团推广应用多年,采面单产、煤炭回收率和节支降耗方面都得到显著提高,但采面支柱卸载伤人事故有所增加,已成为影响安全生产的重大因素。论文提出的防倒方法改进意见,可提高现场可操作性,有效地解决采面支柱倾... 详细信息

炮采放顶煤技术已在郑煤集团推广应用多年,采面单产、煤炭回收率和节支降耗方面都得到显著提高,但采面支柱卸载伤人事故有所增加,已成为影响安全生产的重大因素。论文提出的防倒方法改进意见,可提高现场可操作性,有效地解决采面支柱倾倒伤人问题。

关键词：炮采放顶煤工作面支柱防倒防倒器

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普通高校体育教师实施"说课"的理论分析

吉林体育学院学报 2004年第4期20卷 81-82页

作者：刘小辉李红歌王书雯长春工业大学吉林长春130021

"说课"是普通高校体育教师行之有效的教学研究手段之一,就其内容、特点及作用做了分析。

关键词： “说课” 体育教师普通高校教学研究手段内容特点作用分析

一种高效处理白酒酿造企业底锅水的厌氧反应器的设计

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酿酒科技 2014年第8期 73-75页

作者：方骥李红歌汤有宏刘国英孙加政李晓欢安徽古井贡酒股份有限公司安徽亳州236820

通过对升流式厌氧污泥床、厌氧膨胀颗粒污泥床和厌氧内循环反应器3种工艺对古井贡酒酿造车间底锅水进行厌氧处理的对比分析,发现厌氧内循环反应器工艺稍好于其他2种工艺,在此基础上根据该酿造车间底锅水性质设计一种新的高效GJ厌氧反应器。

关键词：底锅水厌氧处理白酒废水处理

泡盛曲霉FCYN206对EM菌青贮香蕉茎叶中单宁的影响

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中国饲料 2016年第11期 39-44页

作者：王少曼陈百莹李红歌游向荣孙健万茵刘成梅付桂明南昌大学食品科学与技术国家重点实验室江西南昌330047 南昌大学食品学院江西南昌330031 南昌大学中德食品工程中心江西南昌330047 广西农业科学院农产品加工研究所广西南宁530007

为了高效降解青贮香蕉茎叶中的单宁,本试验研究添加产单宁酶菌株——泡盛曲霉FCYN206对香蕉茎叶青贮品质的影响。试验设计对照组、泡盛曲霉FCYN206菌组、EM菌组和EM菌+泡盛曲霉FCYN206菌组,青贮20 d,开封测定青贮品质。结果表明:与对照... 详细信息

为了高效降解青贮香蕉茎叶中的单宁,本试验研究添加产单宁酶菌株——泡盛曲霉FCYN206对香蕉茎叶青贮品质的影响。试验设计对照组、泡盛曲霉FCYN206菌组、EM菌组和EM菌+泡盛曲霉FCYN206菌组,青贮20 d,开封测定青贮品质。结果表明:与对照组比,菌株泡盛曲霉FCYN206可减少干物质损失,显著降低单宁含量(P<0.05),但对饲料粗蛋白质含量无明显作用;EM菌能提高饲料粗蛋白质含量,但对单宁降解无效果;EM菌+泡盛曲霉FCYN206组p H为3.91,达到青贮标准,感官评价最好,且与对照组相比,单宁含量显著降低4.49%(P<0.05)。添加泡盛曲霉FCYN206对EM菌青贮香蕉茎叶中的单宁有明显降解作用,能改善青贮香蕉茎叶饲料的感官品质和风味。

关键词：泡盛曲霉FCYN206 EM菌青贮品质单宁

应用纳米细化和复合生物酶解技术开发杜仲全叶系列产品

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食品科技 2011年第11期36卷 82-85页

作者：罗阳帆万茵柴建新陈建芳李红歌王建涛胡明付桂明南昌大学食品科学与技术国家重点实验室南昌330047 南昌大学生命科学与食品工程学院南昌330047 南昌大学中德食品工程中心南昌330047

以杜仲叶为原料,利用纳米细化和复合生物酶解技术开发杜仲全叶系列产品,将杜仲叶中的粗纤维加工成细小的微晶纤维素,解决了食用时渣状口感,同时这些细小的微晶纤维素具有很强的吸附作用,能充分吸附杜仲叶中的活性成分并保护其不被破坏,... 详细信息

以杜仲叶为原料,利用纳米细化和复合生物酶解技术开发杜仲全叶系列产品,将杜仲叶中的粗纤维加工成细小的微晶纤维素,解决了食用时渣状口感,同时这些细小的微晶纤维素具有很强的吸附作用,能充分吸附杜仲叶中的活性成分并保护其不被破坏,全面利用杜仲全叶有效成分。处理后的杜仲叶通过配料、杀菌、灌装、造粒干燥和压片等技术处理,进一步加工成杜仲全叶汁、杜仲全叶冲剂和杜仲全叶咀嚼片等系列产品,符合天然、健康、营养的食品发展趋势,为杜仲叶的有效利用提供了一条新途径。

关键词：杜仲全叶微射流纳米细化技术复合生物酶解技术保健产品