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杜仲Dirigent1互作蛋白的筛选及表达分析

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杜仲Dirigent1互作蛋白的筛选及表达分析

作者：李紫云贵州大学

学位级别：硕士

杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)药用历史悠久,是国内名贵的滋补药材。杜仲主要的药用成分有苯丙素类、环烯醚萜类、木脂素类等,松脂醇双糖苷属于双环氧木脂素类,是杜仲调节血压的主要成分。研究发现DIR蛋白参与木脂素和木质素的合成,可... 详细信息

杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)药用历史悠久,是国内名贵的滋补药材。杜仲主要的药用成分有苯丙素类、环烯醚萜类、木脂素类等,松脂醇双糖苷属于双环氧木脂素类,是杜仲调节血压的主要成分。研究发现DIR蛋白参与木脂素和木质素的合成,可通过控制木质素聚合过程中特定化学键的形成来调控木质素的合成,参与细胞壁修饰,使植物木质化从而对抗病原微生物侵染和非生物胁迫。前期研究发现杜仲Eu DIR1在番茄和烟草中过表达可以提高对灰霉病、尖孢镰刀菌的抗性,其抵御作用与木质部的细胞壁增厚相关,同时在杜仲中进行逆境下胁迫表达发现其对高盐等非生物胁迫也有响应。本研究使用Eu DIR1作为诱饵蛋白筛选其互作蛋白,以期能通过研究Eu DIR1互作蛋白的途径进一步了解杜仲逆境胁迫下的调控机制,取得的主要研究成果如下:1)Eu DIR1的互作蛋白的筛选和归类利用酵母双杂交筛选获得了32个Eu DIR1的阳性克隆蛋白,将所有互作蛋白按功能归类,其中有13个蛋白具有逆境胁迫响应功能。这些逆境胁迫响应蛋白包括SBP转录因子、色胺氧还蛋白(Try X)、吡啶核苷酸二硫化物氧化还原酶(PYROXD)、硫氧还蛋白(TRX)、谷胱甘肽(GRX)、钙调蛋白(Ca M)、微管蛋白(Tubulin)、微管结合蛋白(MAP)、N-乙酰基转移酶(Eu NAT)、果胶乙酰酯酶(PAE)、脂联蛋白(APN)和主要乳胶蛋白(Eu MLP)。此外还有19个其他蛋白可能参与包括光合作用、糖酵解和三羧酸循环等生理生化进程。2)Eu MLP的克隆及生物信息学分析基于互作蛋白筛选得到主要乳胶蛋白基因,从杜仲转录组中获取基因全长序列,设计引物并通过RT-PCR成功克隆得到Eu MLP基因,该基因是一个逆境胁迫响应基因,可能参与白粉病等病菌以及高盐、干旱等非生物胁迫响应。Eu MLP基因全长为483 bp,共编码161个氨基酸,进行结构域分析其属于SRPBCC超家族和Bet v 1家族,亚细胞定位预测其定位于细胞质中。预测Eu MLP的二级结构,发现其中α-螺旋占比27.50%,β-折叠占比43.12%,无规则卷曲占比29.38%。Eu MLP三维结构预测结果显示其2-160位氨基酸存在Q64W突变体的晶体结构,包含主要过敏原Fra 1-2功能域,跨膜结构域及信号肽预测分析结果为Eu MLP无跨膜结构域及信号肽;预测Eu MLP磷酸化位点和糖基化位点,发现其有8个Ser、6个Thr、4个Tyr可能成为蛋白激酶磷酸化的位点,没有潜在的糖基化位点。Eu MLP密码子偏好性分析结果发现其在种内有明显密码子偏好,但其同义密码子间偏好性程度较低。3)Eu NAT的克隆及生物信息学分析进一步在互作蛋白基础上筛选得到N-乙酰基转移酶基因并成功克隆,该基因可能参与温度、干旱、盐胁迫响应,并且可富集和解毒氟。Eu NAT基因全长为927 bp,共编码309个氨基酸,进行结构域分析Eu NAT属于Rim I超家族,亚细胞定位预测其定位于叶绿体中。预测Eu NAT的二级结构,发现其中α-螺旋占比25.00%,β-折叠占比19.81%,无规则卷曲占比55.19%。Eu NAT三维结构预测结果显示其111-293位氨基酸存在NAA60与乙酰辅酶A复合的晶体结构,包含酰基辅酶A N-酰基转移酶(NAT)超家族蛋白结构域,跨膜结构域及信号肽预测分析结果为Eu NAT无跨膜结构域及信号肽;预测Eu NAT磷酸化位点和糖基化位点,发现其有28个Ser、11个Thr、4个Tyr可能成为蛋白激酶磷酸化的位点,没有潜在的糖基化位点。Eu NAT密码子偏好性分析结果发现其在种内有明显密码子偏好,但其同义密码子间偏好性程度较低。4)双分子荧光互补验证蛋白互作将Eu DIR1与YFP N端融合表达,Eu MLP和Eu NAT分别与YFP C端融合表达。p UC-SPYNE和p UC-SPYCE空载共转化结果中无黄色荧光,代表空载无蛋白互作;p UC-SPYNE-DIR1和p UC-SPYCE-MLP共转化,有明显的黄色荧光呈现,可以判断出YFP C端和N端相互靠近从而重新激发荧光,Eu MLP同Eu DIR1互作。同样,p UC-SPYNE-DIR1和p UC-SPYCE-NAT共转化也可以激发黄色荧光,可以证明Eu NAT可以同Eu DIR1互作。5)Eu MLP和Eu NAT的亚细胞定位及基因表达分析Eu MLP与GFP融合表达,结果表明叶绿体中和细胞质内均有GFP表达,说明主要乳胶蛋白定位于细胞质和叶绿体中。Eu NAT与GFP融合表达,结果表明仅在叶绿体中有GFP表达,说明乙酰转移酶定位于叶绿体中。Eu MLP的时空表达结果表明在叶中表达量最高,其次为茎,根中表达量最低;此外在茎中表达量几乎不受月份影响,在根中的表达量于6

关键词：杜仲 EuDIR1 蛋白互作酵母双杂双分子荧光互补

新型A环氧化甘草脲类衍生物通过调控STING/NF-κB信号通路减轻顺铂诱导的急性肾损伤

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新型A环氧化甘草脲类衍生物通过调控STING/NF-κB信号通路减轻顺...

作者：李紫云安徽医科大学

学位级别：硕士

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中班幼儿礼貌品格教育活动的行动研究

中班幼儿礼貌品格教育活动的行动研究

作者：李紫雲鞍山师范学院

学位级别：硕士

幼儿的3～6岁是礼貌品格培养的关键时期,特别是对处于承上启下的中班幼儿。具备良好的礼貌品格对幼儿未来的发展具有重要的意义,因此更应重视对幼儿品格的培养。本研究以“礼貌”品格为主题,采取行动研究的范式,在分析现状与问题归因后... 详细信息

幼儿的3～6岁是礼貌品格培养的关键时期,特别是对处于承上启下的中班幼儿。具备良好的礼貌品格对幼儿未来的发展具有重要的意义,因此更应重视对幼儿品格的培养。本研究以“礼貌”品格为主题,采取行动研究的范式,在分析现状与问题归因后,设计了初始的行动研究计划。在此基础上,通过集体教学活动、游戏活动、社会体验活动、一日生活指导以及家园合作等方式,不断地反思和调整活动方案,达到努力探索更好的幼儿礼貌品格教育活动的目的。研究采用“三段式”行动研究,将幼儿“礼貌”品格教育活动设计为三轮,每一轮都指向幼儿需要提升的礼貌品格,每一轮的品格教育模式均为感知礼貌——体验礼貌——践行礼貌,强调道德认知、道德情感和道德行为的统一。每一次行动研究都是以计划、行动、观察、反思、再计划为步骤形成一个螺旋式的发展过程,再从教育目标、内容及实践活动的实施等方面出发设计活动方案。行动研究中,通过对幼儿的观察、访谈以及家长的反馈,幼儿在礼貌认知、礼貌情感还是礼貌品格方面上有了明显改善,部分幼儿的行为表现也有一定程度的变化;同时此研究对研究者以及参与教师在专业化发展方面也产生了一定的积极影响。

关键词：品格教育活动行动研究幼儿礼貌

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我国物流上市公司财务绩效评价研究

我国物流上市公司财务绩效评价研究

作者：李紫云中北大学

学位级别：硕士

物流业是我国国民经济的重要组成部分,对我国经济发展的促进作用不言而喻。当前面对产业结构调整,物流资源配置全球化的趋势加强,提高物流效率,降低成本是实现经济转型的重要途径。经济的发展促使跨国物流公司涌入中国物流市场,使得物... 详细信息

物流业是我国国民经济的重要组成部分,对我国经济发展的促进作用不言而喻。当前面对产业结构调整,物流资源配置全球化的趋势加强,提高物流效率,降低成本是实现经济转型的重要途径。经济的发展促使跨国物流公司涌入中国物流市场,使得物流行业竞争加剧。物流企业想要在经济全球化过程中获得一席之地,务必要提高自身素质,着重降低物流成本,提高物流企业的整体效率,所以对物流上市公司进行绩效评价具有极其重要的意义。高级的评估能力和卓越的绩效是密不可分的,进一步细化我国上市公司分类,有利于对企业绩效进行合理评估从而提高企业绩效。本文运用SPSS19.0软件,采用主成分分析法,逐步线性回归法对财务指标进行筛选,确定权重并构建我国物流上市公司财务绩效评价指标体系。对物流上市公司财务绩效进行研究。本文第一章是绪论。第二章是相关概念和理论阐述。第三章介绍我国物流上市公司财务绩效评价指标体系的构建,并运用搜集到的数据计算出我国物流上市公司财务绩效评价体系下的各物流上市公司财务绩效综合得分和排序。第四章对财务绩效评价的结果进行横向和纵向分析,并提出合理对策。最后一部分是研究结论和展望。比较分析后,对我国物流上市公司发展现状有了一个全面的认识。对物流上市公司发展中存在的问题提出相应解决对策,完善我国物流上市公司财务绩效评价体系。

关键词：绩效评价主成分分析物流上市公司

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第三层交换技术在校园网中的应用

计算机工程与应用 2000年第9期36卷 166-168页

作者：李紫云黄烟波黄家林中南工业大学网络中心长沙410083

文章简述了第三层交换技术的特点及其实现机制，并以３ＣｏｍＣｏｒｅＢｕｉｌｄｅｒ９０００为例，分析了第三层交换技术在我校校园网中的应用。

关键词：三层交换机路由器校园网第三层交换技术

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锦橙果实发育进程香气成分及品质特性分析

食品科学 2012年第8期33卷 260-264页

作者：唐会周曾凯芳明建李紫云西南大学食品科学学院重庆400715 贵阳医学院公共卫生学院贵州贵阳550004 重庆市特色食品工程技术研究中心重庆400715

以固相微萃取技术为香气富集方法,采用气相色谱-质谱联用分析锦橙果实发育过程中香气成分的变化,同时测定果实品质指标的变化。结果显示:在锦橙果实发育中共检测出76种香气成分,随着成熟度的增加,在5个取样阶段果实中分别检出香气成分4 ... 详细信息

以固相微萃取技术为香气富集方法,采用气相色谱-质谱联用分析锦橙果实发育过程中香气成分的变化,同时测定果实品质指标的变化。结果显示:在锦橙果实发育中共检测出76种香气成分,随着成熟度的增加,在5个取样阶段果实中分别检出香气成分4 0、4 1、3 6、3 8、3 9种,分属于醛类、醇类、酯类和萜烯类等,其中醛类相对含量和种类数量先上升后下降,酯类相对含量和种类数量呈上升趋势。随着果实发育,可溶性固形物、VC和还原糖含量指标均呈上升趋势,可滴定酸含量呈先下降后上升趋势。

关键词：锦橙香气成分品质指标果实发育

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老来伴

厦门文学 2015年第4期 40-46页

作者：李紫云

张余文每天下午都要外出一小时，这个时问她去市场买菜，完全是奔着下午的蔬菜便宜去的。她的老伴宋涛多次嗔怪她，为了便宜那几块钱，至于每天下午冒着大太阳去买菜吗？别说几块钱，就是五毛钱我也要节省。每天节约五块，一个月就是一... 详细信息

张余文每天下午都要外出一小时，这个时问她去市场买菜，完全是奔着下午的蔬菜便宜去的。她的老伴宋涛多次嗔怪她，为了便宜那几块钱，至于每天下午冒着大太阳去买菜吗？别说几块钱，就是五毛钱我也要节省。每天节约五块，一个月就是一百五，

关键词：小说文学文学作品当代作品

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小小孩

福建文学 2017年第3期 74-83页

作者：李紫云福建省作家协会

已经整整一个月了,眼看那玩意还是没有来,嫣然多少猜到了一些,那就是她有了,可是她连孩子他爸是谁都不知道.多么搞笑,嫣然对着镜子里的自己哼笑了一声,打开粉饼给自己补妆.镜子里,嫣然看到了那个妖娆得不成人形的女人,她那涂得鲜红的嘴... 详细信息

已经整整一个月了,眼看那玩意还是没有来,嫣然多少猜到了一些,那就是她有了,可是她连孩子他爸是谁都不知道.多么搞笑,嫣然对着镜子里的自己哼笑了一声,打开粉饼给自己补妆.镜子里,嫣然看到了那个妖娆得不成人形的女人,她那涂得鲜红的嘴唇以及嘴角流露的那抹灿然笑容,短短几秒钟如电流之速传递到嫣然体内的每一根神经.嫣然颤抖着,直到听见手中的粉饼掉入地板,发出的“哐当”一声,她才鼓起勇气转身往角落里一瞥,发现摇椅上别无一人.是幻觉,是幻觉,这样想着,嫣然重新把目光投射回镜子里,却再也无心梳妆打扮了,而是一头栽在床上.

关键词：镜子粉饼摇椅投射体内神经女人电流地板成人

来源：评论

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抉择

厦门文学 2017年第1期 49-55页

作者：李紫云

蓝英同女儿乘上拥挤的公交车，她抓住扶手的同时，紧紧揽住女儿的肩膀。中途一个急刹车，她趔趄了一下，险些和女儿一起摔倒。这时候，一个热心的男子起身。把座位让了出来，和往常一样，女儿要蓝英抱着她坐。蓝英当然知道这是懂事的女... 详细信息

蓝英同女儿乘上拥挤的公交车，她抓住扶手的同时，紧紧揽住女儿的肩膀。中途一个急刹车，她趔趄了一下，险些和女儿一起摔倒。这时候，一个热心的男子起身。把座位让了出来，和往常一样，女儿要蓝英抱着她坐。蓝英当然知道这是懂事的女儿在体贴她，换成往日，她一定会毫不犹豫地抱着女儿坐下。如今，脸色凝重的她瞪了女儿一眼，女儿不再吭声，老实地坐在位子上。

关键词：女儿公交车急刹车体贴