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桑树溴结构域蛋白MuBRD1的功能及作用机制研究

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桑树溴结构域蛋白MuBRD1的功能及作用机制研究

作者：李素霞山东农业大学

学位级别：硕士

溴结构域蛋白作为“表观阅读器”可以与乙酰化组蛋白结合,调控众多基因的表达,广泛参与核小体的装配、基因的激活或抑制、酶活性的调节等,在生物的生长、发育和应激响应等过程中具有重要作用。但是,目前关于溴结构域蛋白的功能和作用机... 详细信息

溴结构域蛋白作为“表观阅读器”可以与乙酰化组蛋白结合,调控众多基因的表达,广泛参与核小体的装配、基因的激活或抑制、酶活性的调节等,在生物的生长、发育和应激响应等过程中具有重要作用。但是,目前关于溴结构域蛋白的功能和作用机制的研究报道主要集中在动物上面,有关植物溴结构域蛋白的研究报道较少,大多数植物溴结构域蛋白的功能和作用机制还不清楚。桑树是多年生经济林木,具有良好的生态、经济和社会效益。挖掘桑树抗逆新基因,培育抗性新品种是实现桑树经济和生态价值的重要途径。本研究从桑树中克隆得到了一种含有溴结构域的磷酸化蛋白基因(命名为MuBRD1),明确了MuBRD1蛋白的磷酸化位点和亚细胞定位,研究了MuBRD1基因的生物学功能,并探究了蛋白质磷酸化对其功能和作用机制的影响,鉴定了调控MuBRD1基因的上游转录因子及MuBRD1的互作蛋白,探讨了其作用机制。研究结果可望为桑树育种提供基因资源,同时也为植物溴结构域蛋白家族的功能和作用机制的研究提供参考。主要结果如下:(1)MuBRD1基因的克隆及其编码蛋白的特征。克隆得到了MuBRD1基因,该基因编码784个氨基酸,不含有信号肽以及跨膜结构域。MuBRD1蛋白与其它物种的同源蛋白具有1个共同的保守的溴结构域。另外,发现MuBRD1蛋白含有多个磷酸化位点,并利用Phos-tag SDS-PAGE和Western blot技术验证了其Ser363和Ser364位点的磷酸化修饰。MuBRD1蛋白定位于细胞核,将其Ser363和Ser364突变为丙氨酸(Mu BRD)及将Ser363和Ser364突变为天冬氨酸(Mu BRD),均不影响MuBRD1蛋白的亚细胞定位。(2)MuBRD1基因的表达特性及生物学功能。MuBRD1基因在桑树根、茎、叶中均有表达,但不同组织器官中的表达丰度不同。在拟南芥中过表达MuBRD1基因和过表达Mu BRD基因,均能显著促进开花基因FT和SOC1的表达,而抑制开花抑制基因FLC的表达,促进植株提前开花。而过表达Mu BRD的转基因植株中FT、SOC1和FLC的表达与野生型植株相比没有明显变化,植株的开花时间与野生型相比也没有明显差异。此外,还发现MuBRD1基因的表达受Na Cl诱导,该基因在拟南芥中表达可以增强盐胁迫下植株体内CAT、SOD和POD活性,减少活性氧和自由基的积累,提高转基因植株的耐盐性,而模拟去磷酸化突变不影响MuBRD1基因的耐盐功能,但模拟磷酸化突变则会影响该基因的耐盐功能。(3)MuBRD1基因的上游调控因子鉴定。酵母单杂交实验证明转录因子Mu MYB12能够与MuBRD1基因的启动子结合,GUS组织化学染色以及荧光素酶报告基因实验证明Mu MYB12能够增强MuBRD1基因启动子的转录活性。(4)MuBRD1相互作用蛋白质的预测与鉴定。通过生物信息学网站预测得到10个与MuBRD1互作的蛋白质,利用酵母双杂交和荧光素酶互补实验证明了组蛋白乙酰转移酶(Mu MYST)以及溴结构域包含蛋白3(Mu BRD3)能够与MuBRD1蛋白结合,而且模拟去磷酸化不影响MuBRD1与Mu MYST和Mu BRD3蛋白的相互作用,但模拟磷酸化后MuBRD1失去与Mu MYST和Mu BRD3结合的能力。

关键词：桑树溴结构域蛋白蛋白质磷酸化盐胁迫生物功能

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溶组织梭菌胶原酶H在大肠杆菌中的分泌表达

华东理工大学学报（自然科学版） 2022年第6期48卷 797-805页

作者：赵钱山刘晓李素霞华东理工大学生物反应器国家重点实验室上海200237 上海雅心生物技术有限公司上海200231

溶组织梭菌Clostridium histolyticum胶原酶H(ColH)作用于胶原蛋白的Y-Gly处,将其水解成小分子肽。通过在colH基因中融合大肠杆菌外膜蛋白A的信号肽序列,成功构建了分泌高分子量的ColH(116 kDa)的菌株,结果发现信号肽在N端的位置影响其... 详细信息

溶组织梭菌Clostridium histolyticum胶原酶H(ColH)作用于胶原蛋白的Y-Gly处,将其水解成小分子肽。通过在colH基因中融合大肠杆菌外膜蛋白A的信号肽序列,成功构建了分泌高分子量的ColH(116 kDa)的菌株,结果发现信号肽在N端的位置影响其分泌效果,N端若有多余的氨基酸片段会显著降低信号肽引导胶原酶的分泌功能。通过正交试验与单因素实验对诱导条件和培养基添加剂优化提高其分泌表达量,结果表明:在诱导温度为25℃、诱导菌浓OD=0.9、IPTG(异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷)浓度为0.1 mmol/L、装液量为20%,镁离子浓度为10 mmol/L,诱导2.5 h后添加w为2%甘氨酸、诱导培养20 h,胞外胶原酶活性最高为0.68 U/mL,是优化前酶活的38.1倍,显著提高了分泌表达量。研究结果还表明,镁离子的添加可增加ColH的胞外分泌。

关键词：溶组织梭菌胶原酶H 正交实验信号肽镁离子分泌表达

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加强高校思政课教师队伍建设刍议

学校党建与思想教育 2023年第24期 32-35页

作者：李素霞刘孝林河北师范大学马克思主义学院河北省人文社会科学重点研究基地河北师范大学马克思主义理论与立德树人研究中心石家庄铁路职业技术学院思想政治理论教学研究部河北石家庄050024

党的二十大报告作出用习近平新时代中国特色社会主义思想凝心铸魂的战略安排,这是当前高校立德树人根本任务的时代表达,对高校思政课教师队伍建设提出了新要求。当前,高校思政课教师队伍仍然存在部分教师政治站位不够高、理论阐释能力... 详细信息

党的二十大报告作出用习近平新时代中国特色社会主义思想凝心铸魂的战略安排,这是当前高校立德树人根本任务的时代表达,对高校思政课教师队伍建设提出了新要求。当前,高校思政课教师队伍仍然存在部分教师政治站位不够高、理论阐释能力不够强、课堂教学实效性不够强、教学训练不足等问题。对此,要着力从净化思想源头、改革考核评价机制、优化教师教育培训、提升人才培养质量等方面入手,继续加强思政课教师队伍建设。

关键词：高校思政课教师队伍建设

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奶牛场冬季防寒保暖应对措施

北方牧业 2024年第3期 24-24页

作者：刘廷玉邱晓东马军红郑泽军李素霞蒋桂娥姚鹏飞河北省畜牧良种工作总站河北石家庄050061 丰宁满族自治县农业农村局土城区域站河北丰宁068350 丰宁满族自治县农业农村局选将营区域站河北丰宁068354 承德市畜牧工作站河北承德067000 石家庄现代农业学校河北石家庄050024

冬季冷空气活动频繁,“三九”以后,气温更是大幅降低,尤其是张家口、承德坝上地区和保定西北部山区,夜间最低温度达到-20℃~-30℃,并时长伴有大风和降雪,寒潮天气持续时间较长,漫长的冬季对奶牛场是严峻的考验,所以降低冷应激对奶牛的... 详细信息

冬季冷空气活动频繁,“三九”以后,气温更是大幅降低,尤其是张家口、承德坝上地区和保定西北部山区,夜间最低温度达到-20℃~-30℃,并时长伴有大风和降雪,寒潮天气持续时间较长,漫长的冬季对奶牛场是严峻的考验,所以降低冷应激对奶牛的免疫力、产奶量、流产、冻伤等影响,做好奶牛场冬季防寒保暖工作尤为重要。1奶牛场设施设备管理1.1奶厅管理保障奶厅供暖,奶厅制冷间、机房、挤奶操作厅、待挤区等相关区域要做好防冻保温和保暖工作,奶厅要有充足的热水供应,满足每天班次挤奶设施设备等相关器具的清洗需求;挤奶前、后禁止用水直接冲洗乳房,应使用防冻药浴,保证乳房干燥;延长奶厅设施设备冲洗、抽空时间,保证清洗残水及时排空,防止冻结影响设施设备使用或冻裂损坏,影响正常挤奶。

关键词：防寒保暖设施设备奶牛场冷应激防冻保温热水供应冷空气活动寒潮天气

新型辅料提高环孢素A眼部制剂生物利用度的研究概况

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中国医药工业杂志 2023年第11期54卷 1569-1577页

作者：董星闫梦何朝星李素霞向柏河北医科大学药学院河北石家庄050017 河北化工医药职业技术学院河北石家庄050030

环孢素A免疫抑制效力强,被广泛应用于眼科治疗中,但由于相对分子质量大、疏水性强,难以突破眼部生理屏障,导致生物利用度低。有效结合新型辅料与制剂技术,可从增加药物溶解度、促进眼表黏液穿透、增强角膜组织深层渗透以及延长眼表停留... 详细信息

环孢素A免疫抑制效力强,被广泛应用于眼科治疗中,但由于相对分子质量大、疏水性强,难以突破眼部生理屏障,导致生物利用度低。有效结合新型辅料与制剂技术,可从增加药物溶解度、促进眼表黏液穿透、增强角膜组织深层渗透以及延长眼表停留时间4个方面提高环孢素A的生物利用度。该文重点围绕环孢素A眼用制剂中应用的新型辅料的特点、作用机制和相关制剂技术进行综述,以期为实现环孢素A的高效递送和今后新型制剂的开发提供参考。

关键词：环孢素A 赋形剂促吸收作用眼用制剂生物利用度

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全株玉米青贮在肉牛养殖中的应用

北方牧业 2024年第6期 13-13页

作者：李素霞郭建军冯曼李健刘艳红李树桐杜治广刘国才韩明达承德市畜牧工作站河北承德067000 承德市农林科学院河北承德067000 宽城满族自治县农业农村局河北宽城067600 承德市动物卫生检疫站河北承德067000 丰宁满族自治县农业农村局河北丰宁068300

近年来,随着人民生活水平和消费观念的转变,牛肉购买量逐年增多,肉牛在肉类市场中份额变大,带动了肉牛养殖行业的发展。河北省作为肉牛养殖的大省,2022年河北省肉牛存栏近250万头。畜禽养殖离不开饲料,随着肉牛养殖量升高,全株玉米青贮... 详细信息

近年来,随着人民生活水平和消费观念的转变,牛肉购买量逐年增多,肉牛在肉类市场中份额变大,带动了肉牛养殖行业的发展。河北省作为肉牛养殖的大省,2022年河北省肉牛存栏近250万头。畜禽养殖离不开饲料,随着肉牛养殖量升高,全株玉米青贮饲料的需求量也随之增加,在“粮改饲”政策引导下,目前全株玉米青贮在规模化肉牛养殖中得到广泛推广,本文以提高牧场全株玉米青贮利用率为目的,结合全株玉米青贮制作及质量把控要点,以期为提高全株玉米青贮的应用效果提供支撑。

关键词：全株玉米青贮肉牛养殖肉类市场购买量畜禽养殖质量把控粮改饲广泛推广

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春季角结膜炎的发病机制及治疗研究进展

中华实验眼科杂志 2022年第5期40卷 481-486页

作者：李素霞(综述) 史伟云(审校) 山东第一医科大学附属眼科研究所山东第一医科大学附属眼科医院山东省眼科医院山东省眼科学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地山东第一医科大学眼科学院济南250021

春季角结膜炎(VKC)是一种慢性变应性角结膜炎,常见于学龄期儿童,临床上根据病变累及的组织分为睑结膜型、角膜缘型及混合型。尽管不同类型的变应性结膜炎大多数不引起视力下降,但VKC除了引起结膜病变外还可能发生角膜损害,进而导致视力... 详细信息

春季角结膜炎(VKC)是一种慢性变应性角结膜炎,常见于学龄期儿童,临床上根据病变累及的组织分为睑结膜型、角膜缘型及混合型。尽管不同类型的变应性结膜炎大多数不引起视力下降,但VKC除了引起结膜病变外还可能发生角膜损害,进而导致视力下降,年龄较小的儿童一旦发生角膜损害还可能导致弱视。虽然VKC疾病名称似有季节性指向,但研究发现20%~60%的患者可能会全年发病,误诊或者不规范的治疗可引起病情迁延甚至导致眼部并发症。既往认为VKC是一种Ⅰ型和Ⅳ型超敏反应共同参与的疾病,目前发现免疫学因素、遗传因素和内分泌因素均参与疾病的发生和发展。VKC的诊断主要依据患者主观症状、角膜和结膜的特征性体征、激光共焦显微镜下组织中树突状细胞浸润和变应原检测试验。VKC的治疗以药物对症治疗为主,除了常规抗过敏、抗炎及人工泪液治疗,免疫抑制剂治疗成为新的趋势。本文对发病机制和治疗研究进展进行综述。

关键词：春季角结膜炎发病机制治疗

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酸性农田土壤镉污染修复钝化材料筛选研究

土壤通报 2022年第1期53卷 213-220页

作者：刘冬冬李素霞刘海霞北部湾大学资源与环境学院/钦州市环境生态修复重点实验室广西钦州535011 桂林理工大学环境科学与工程学院广西桂林541006 广西生态工程职业技术学院生态环境保护学院广西柳州545000

【目的】研究0.3 mg kg^(−1)、1.0 mg kg^(−1)、1.5 mg kg^(−1)三种不同镉污染水平的酸性农田土壤单一或复配添加海泡石(H)、膨润土(P)、钙镁磷肥(G)、磷矿粉(L)四种钝化剂钝化镉污染的效果。【方法】采用室内培养模拟实验,添加单一纯... 详细信息

【目的】研究0.3 mg kg^(−1)、1.0 mg kg^(−1)、1.5 mg kg^(−1)三种不同镉污染水平的酸性农田土壤单一或复配添加海泡石(H)、膨润土(P)、钙镁磷肥(G)、磷矿粉(L)四种钝化剂钝化镉污染的效果。【方法】采用室内培养模拟实验,添加单一纯化剂处理于开始培养后10 d、20 d、30 d,复配添加钝化剂处理于开始培养后30 d,取样测定土壤pH、有效态镉含量评价添加钝化剂对土壤镉钝化效果。【结果】三种镉污染土壤pH值添加H和G钝化剂后升高(P0.05);1.0 mg kg^(−1)镉含量土壤,单一添加H、G钝化剂有效镉含量明显下降而单一添加P、L钝化剂有效镉含量变化不显著(P>0.05);复配添加2%H、1%G钝化剂,土壤有效态镉降低52.73%,效果最好;1.5 mg kg^(−1)镉污染土壤,单一添加H、G钝化剂有效镉含量显著下降,单一添加P、L钝化剂的有效镉含量下降不显著(P>0.05),而复配添加1.5%H和1%G钝化剂处理土壤有效态镉降低了56.45%,效果良好。【结论】建议对0.3 mg kg^(−1)镉含量土壤不进行钝化修复,对1.0 mg kg^(−1)和1.5 mg kg^(−1)镉含量土壤分别推荐使用复配添加2%H、1%G和1.5%H、1%G钝化剂进行修复。

关键词：镉污染酸性土壤钝化剂

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浅谈建筑给排水节能节水技术方法

中国科技期刊数据库工业A 2022年第2期 20-22页

作者：李素霞河北省石家庄市赵县韩村镇河北石家庄050000

绿色建筑是建筑全寿命周期内最大限度节能、节水、节地以及节材,给排水工程更应重视节水、节能技术的应用,其原因是给排水系统是建筑内部空间的重要结构组成,重视给排水项目的节能节水技术应用,可推动绿色建筑理念的落实与发展。基于此... 详细信息

绿色建筑是建筑全寿命周期内最大限度节能、节水、节地以及节材,给排水工程更应重视节水、节能技术的应用,其原因是给排水系统是建筑内部空间的重要结构组成,重视给排水项目的节能节水技术应用,可推动绿色建筑理念的落实与发展。基于此,文章以绪论开篇,侧重内涵与技术应用原则进行总结,而后对建筑节水、节能措施进行分析,最后以案例作对技术方案进行可行性研究。

关键词：建筑工程给排水项目节能节水技术探讨