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鸡毒害艾美耳球虫ROP30蛋白的原核表达及其对鸡免疫保护效果的观察

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畜牧兽医学报 2025年

作者：李慧中张弛严丹丽宋鹏慧汪飞燕冯茜茜刘丹丹许金俊陶建平扬州大学兽医学院江苏动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心

旨在克隆表达鸡毒害艾美耳球虫棒状体EnROP30基因，并用重组蛋白rEnROP30免疫雏鸡，评价其免疫保护效果。以毒害艾美耳球虫第二代裂殖子（MZ-2）的总RNA为模板，RT-PCR扩增EnROP30基因，连接至pGEM?-T-Easy载体，测序后构建pET28a（+）-... 详细信息

旨在克隆表达鸡毒害艾美耳球虫棒状体EnROP30基因，并用重组蛋白rEnROP30免疫雏鸡，评价其免疫保护效果。以毒害艾美耳球虫第二代裂殖子（MZ-2）的总RNA为模板，RT-PCR扩增EnROP30基因，连接至pGEM?-T-Easy载体，测序后构建pET28a（+）-EnROP30表达载体，转化至大肠杆菌BL21（DE3），重组菌经测序鉴定后诱导表达，并纯化重组蛋白。用重组蛋白免疫BALB/c小鼠，制备抗rEnROP30的多克隆抗体。利用多克隆抗体，分别用Western blot和间接免疫荧光试验检测子孢子（SZ）和MZ-2中的天然EnROP30蛋白及其定位。最后，应用荧光定量PCR分析EnROP30基因在SP和MZ-2中的转录水平。用重组蛋白按高剂量(200 μg·羽-1)、中剂量(100 μg·羽-1)和低剂量(50 μg·羽-1)免疫雏鸡，同时设置未免疫攻虫组和未免疫未攻虫组为对照，以成活率、平均增重、相对增重率、卵囊减少率、病变记分和抗球虫指数（ACI）为指标，评价重组蛋白的免疫保护力。结果显示：该基因全长1 605 bp，编码534个氨基酸，推导相对分子质量为55.55 ku；重组蛋白大小约为65 ku，以可溶形式存在，能被小鼠抗His标签单抗和鸡抗毒害艾美耳球虫阳性血清特异性识别；在SZ和MZ-2中均检测到天然EnROP30蛋白，其分子质量大约为62 ku；EnROP30蛋白定位在SZ和MZ-2的顶端；MZ-2中EnROP30转录水平显著高于SZ（P<0.05）。各试验组的成活率均为100%；免疫组的平均增重增加，病变记分显著降低（P＜0.05）；中剂量组的相对增重率（92.96%）、卵囊减少率（66.87%）和ACI值（158.96）均为最高。结论：成功克隆表达了EnROP30基因，重组蛋白rEnROP30对毒害艾美耳球虫具有一定的免疫保护力。

关键词：毒害艾美耳球虫 EnROP30 克隆表达免疫保护力

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漾濞槭全基因组微卫星分布特征

中南林业科技大学学报 2025年 178-186页

作者：史雯茜马秋月陈梓馨李倩中李淑娴李淑顺朱长虹朱璐颜坤元杜一鸣南京林业大学南方现代林业协同创新中心江苏省农业科学院休闲农业研究所襄阳市林业科学技术推广站

【目的】漾濞槭Acer yangbiense是世界濒危珍贵树种，研究其基因组中微卫星序列特征，为后期进行漾濞槭分子标记辅助育种，遗传多样性和遗传结构分析奠定基础和提供理论参考。【方法】基于测序获得的漾濞槭基因组序列，利用MISA软件进... 详细信息

【目的】漾濞槭Acer yangbiense是世界濒危珍贵树种，研究其基因组中微卫星序列特征，为后期进行漾濞槭分子标记辅助育种，遗传多样性和遗传结构分析奠定基础和提供理论参考。【方法】基于测序获得的漾濞槭基因组序列，利用MISA软件进行搜索筛选，分析其微卫星分布特征。【结果】漾濞槭全基因组大小为665.89 Mb，其中筛选出1～6碱基重复类型的微卫星342 227个，总长度为5 621 833 bp，相对丰度为513.94个/Mb，相对密度为8 442.59 bp/Mb，约占整个基因组序列的0.84%。在漾濞槭6种类型的微卫星中，数量最多的碱基类型为单碱基，占6种碱基类型总数的62.23%；其次是二碱基，占总数的27.87%；三碱基、四碱基、五碱基和六碱基的数量依次减少。在各碱基重复单元中数量最多的分别为T、AT、AAT、AAAT、TTTTA、ATGGGG；漾濞槭全基因组微卫星中，前15种优势重复单元为T、A、AT、TA、CA、TG、C、G、AG、TC、AAT、GA、CT、TTA和ATT，其中重复单元A和T的数量最多，且远多于其他重复单元，表现出明显的A/T碱基优势。所有搜索得到的微卫星中，挂载到染色体上的微卫星数量约占微卫星总数的98.04%，长度约占微卫星总长的98.07%。其中2号染色体上分布的微卫星数量最多，约占所有染色体上微卫星总数的12.02%。【结论】漾濞槭全基因组具有丰富的微卫星序列信息，存在A碱基和T碱基偏好性。漾濞槭在12～20 bp长度范围内SSR数量最多，在漾濞槭基因组中存在大量具有潜在多态性的SSR序列，具有较高的开发应用价值。

关键词：漾濞槭微卫星基因组分布特征

新型抗凝药Ⅺ因子抑制剂监测方法及逆转策略研究进展

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中国全科医学 2025年第3期28卷 379-384页

作者：陈越秀姚媛媛孙大伟王颖吴超敏赵麟茜唐志峰张冯江浙江大学医学院附属第二医院麻醉科浙江省杭州市310009 浙江大学生物医学工程与仪器科学学院浙江省杭州市310030

Ⅺ因子(FⅪ)在血栓形成中扮演关键角色,而在止血过程中的作用较为有限。这种作用差异为预防和治疗血栓性疾病开辟了新的途径,即靶向FⅪ可能是一种更为安全的抗凝策略。目前,越来越多的FⅪ抑制剂进入Ⅲ期临床试验,尽管这些抑制剂展现出... 详细信息

Ⅺ因子(FⅪ)在血栓形成中扮演关键角色,而在止血过程中的作用较为有限。这种作用差异为预防和治疗血栓性疾病开辟了新的途径,即靶向FⅪ可能是一种更为安全的抗凝策略。目前,越来越多的FⅪ抑制剂进入Ⅲ期临床试验,尽管这些抑制剂展现出巨大的临床潜力,但其监测和逆转策略尚未明确,这给实验室监测和临床实践带来了新的挑战。本文在FⅪ的生理功能和FⅪ抑制剂在研药物的基础上,系统地探讨了FⅪ抑制剂的实验室检测抗凝活性证据,结合遗传性Ⅺ因子缺乏患者的治疗方案总结了FⅪ抑制剂的逆转方法,为制订临床治疗方案及逆转策略提供一定的参考。

关键词：抗凝药因子Ⅺ 血栓性疾病抗凝治疗药物监测逆转

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蓝莓新品种丰可来的选育

果树学报 2025年

作者：温立柱熊熹海孙佳艺宋清秋吕梓茜李其煊王楠张文基王贺新刘国玲徐国辉大连大学生命健康学院大连大学现代农业研究院大连森茂现代农业有限公司

丰可来是从日出（Sunrise）的播种实生苗中筛选而来的北高丛蓝莓新品种，具有果实香甜，细腻多汁，风味佳，有香气、丰产等特点。该品种的果穗密度中等，果蒂痕小，果萼直立生长，果实酸度水平适中，可溶性固形物含量（w）为10.5%，果... 详细信息

丰可来是从日出（Sunrise）的播种实生苗中筛选而来的北高丛蓝莓新品种，具有果实香甜，细腻多汁，风味佳，有香气、丰产等特点。该品种的果穗密度中等，果蒂痕小，果萼直立生长，果实酸度水平适中，可溶性固形物含量（w）为10.5%，果个大，平均单果大小为1.57 cm × 1.78 cm，形状为扁圆形。丰可来的果粉厚度中等、分布均匀，果实颜色为中蓝色（102-B），果实中等硬度（2.77 N），平均单个果实的最大质量为2.34 g，最大果实质量为2.57 g。自然状态下种植，于6月下旬开始成熟，属于早熟品种，适宜在中国北方或高海拔地区种植，土壤质地以壤土或壤砂土为宜，pH值4.0～5.5，种植区域需冷量为600～1200 h。

关键词：蓝莓新品种丰可来

布鲁氏菌BP26蛋白原核表达及双抗原夹心ELISA方法的建立

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中国兽医科学 2025年

作者：席韬罗俊聪朱昱茜林永玉陈婕张帆石鑫泰何印娣李帅鹏徐继英田宏郑海学西北民族大学生命科学与工程学院中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室

以期建立鉴别检测布鲁氏菌血清抗体的ELISA方法，用于区分BP26基因缺失疫苗免疫。本研究根据NCBI公布的布鲁氏菌M5-90株的参考序列，通过预测BP26的同源性、跨膜区及抗原性等，构建了pET-28a-BP26和pMAL-c2x-BP26两个载体，利用大肠杆... 详细信息

以期建立鉴别检测布鲁氏菌血清抗体的ELISA方法，用于区分BP26基因缺失疫苗免疫。本研究根据NCBI公布的布鲁氏菌M5-90株的参考序列，通过预测BP26的同源性、跨膜区及抗原性等，构建了pET-28a-BP26和pMAL-c2x-BP26两个载体，利用大肠杆菌表达蛋白，亲和层析纯化目的蛋白。采用Western-blot方法分析目的蛋白反应活性，以His-BP26作为包被抗原，HRP标记的MBP-BP26作为检测抗原，经过优化，建立了一种双抗原夹心ELISA方法。结果显示，根据统计学分析，双抗原夹心ELISA临界值为0.35；经检验，该方法与口蹄疫病毒-O型、牛结节皮肤病病毒、牛传染性腹泻病毒的抗体阳性血清以及赤羽病病毒多抗均无交叉反应，敏感性可达1∶640；批间及批内变异系数均小于10％。用该方法对40份已知虎红平板凝集试验检测背景的羊血清进行检测，结果检出8份阳性，32份阴性。由此说明，本研究建立的ELISA方法特异性强、敏感性高、重复性好，可区分BP26基因缺失疫苗免疫，用于布鲁氏菌病的血清学调查和临床诊断。

关键词：布鲁氏菌 BP26 原核表达双抗原夹心ELISA

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生物化学实验报告对培养学生综合素质的思考

基础医学教育 2025年 54-57页

作者：李梦瑶武丽涛蓝茜宁启兰蒋小英朱文华西安交通大学医学部基础医学院生物化学与分子生物学系

随着生物化学实验教学内容的不断改进和丰富,实验教学改革取得了初步的成效。但实验教学的改革,不仅体现在实验内容和实验技术,还包括学生实验报告的改革。实验报告不仅可以反映学生对实验的掌握情况,也能体现学生对实验和理论结合的思... 详细信息

随着生物化学实验教学内容的不断改进和丰富,实验教学改革取得了初步的成效。但实验教学的改革,不仅体现在实验内容和实验技术,还包括学生实验报告的改革。实验报告不仅可以反映学生对实验的掌握情况,也能体现学生对实验和理论结合的思考,还可以直观地反映出实验教学改革的成效。对实验报告的内容进行优化,不仅可以打破固有的实验报告书写模式,更好地培养学生的科研逻辑思维,还可以加强学生对理论知识的理解,激发学生对实验的兴趣,从而提高学生的综合素质。因此,对实验报告进行优化,在推进生物化学实验教学改革中有着不可替代的作用。

关键词：生物化学实验报告教学改革综合素质学习兴趣

基于Box-Behnken响应曲面法的混凝处理污水处理厂尾水工艺参数优化

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环境保护科学 2025年

作者：黎佳茜刘雪瑜阿蓉王栋友张娟娟刘明亮中国环境科学研究院水生态环境研究所北京市太阳能研究所有限公司太阳能事业部

再生水循环利用是解决我国水资源短缺的有效途径，污水处理厂尾水是再生水循环利用系统的重要水源。文章以山东省曲阜市某市政污水处理厂尾水为处理对象，首先比较了6种常用混凝剂，以景观用水标准为基准，对比这六种混凝剂对污水处理... 详细信息

再生水循环利用是解决我国水资源短缺的有效途径，污水处理厂尾水是再生水循环利用系统的重要水源。文章以山东省曲阜市某市政污水处理厂尾水为处理对象，首先比较了6种常用混凝剂，以景观用水标准为基准，对比这六种混凝剂对污水处理厂尾水中氨氮(NH4+-N)、总氮（TN）、总磷（TP）和化学需氧量（COD）的去除效果。结果发现，选用聚合硫酸铁（PFS）作为混凝剂时，出水浓度不仅满足景观环境用水回用标准且单位水处理成本最低。通过单因素实验考察了混凝剂PFS投加量、pH、助凝剂聚丙烯酰胺（PMA）投加量和快速搅拌时间对混凝处理污水处理厂尾水效果的影响，得到优势实验条件为PFS投加量为40 mg/L，pH为6.0，PAM投加量为1.5 mg/L，快速搅拌时间为15 min。然后，基于Box-Behnken响应曲面法实验设计原理，建立响应曲面模型，模型拟合效果较好；探究了混凝剂PFS投加量、PAM投加量、快速搅拌时间对混凝效果的交互影响，结果表明对NH4+-N去除率而言，PFS投加量与PAM投加量两者之间交互作用明显；对TN去除率而言，PAM投加量与快速搅拌时间两者之间交互作用明显。三维荧光光谱和区域积分法证明，经混凝处理后溶解性有机物的最大荧光强度显著降低，混凝对污水处理厂尾水中有机物具有较好的降解作用。

关键词：再生水污水处理厂尾水混凝 Box-Behnken 响应曲面法

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组织工程化口腔黏膜等效物的血管化特征

中国组织工程研究 2025年第22期29卷 4748-4760页

作者：石丽娟韦建张旋何凌霄江小茜聂敏海陈佳娜刘旭倩西南医科大学附属口腔医院牙周黏膜病科四川省泸州市646000 口颌面修复重建和再生泸州市重点实验室四川省泸州市646000 西南医科大学口腔医学研究所四川省泸州市646000

背景:前期研究中三维细胞重建组织工程化口腔黏膜等效物结构类似于正常口腔黏膜,即存在类上皮样结构、类固有层样结构、类血管腔样结构,并已初步实现了等效物的血管化建立,但其血管化特征尚不十分明确。目的:采用血管内皮细胞特异性标... 详细信息

背景:前期研究中三维细胞重建组织工程化口腔黏膜等效物结构类似于正常口腔黏膜,即存在类上皮样结构、类固有层样结构、类血管腔样结构,并已初步实现了等效物的血管化建立,但其血管化特征尚不十分明确。目的:采用血管内皮细胞特异性标志物表达谱关联激光捕获显微切割系统靶向获取血管化口腔黏膜等效物的血管样结构,评价其成血管能力,揭示其血管化特征。方法:分别从人牙龈上皮组织和固有层组织原代培养人牙龈上皮细胞、人牙龈成纤维细胞、人牙龈间充质干细胞,人牙龈间充质干细胞经单克隆扩增培养后诱导分化形成血管内皮样细胞。将人牙龈上皮细胞、人牙龈成纤维细胞、血管内皮样细胞分层负载于脱细胞血管基质-0.25%类人Ⅰ型胶原支架上,构建血管化口腔黏膜等效物。将血管化口腔黏膜等效物(实验组)与脱细胞血管基质-0.25%类人Ⅰ型胶原支架(对照组)分别植入裸鼠背部皮下,14 d后两组切口表面涂布生物胶,实验组生物胶表面接种人牙龈上皮细胞,对照组不接种细胞,继续饲养14 d后取材,利用形态学观察口腔黏膜等效物分层结构;采用较为全面的血管内皮细胞特异性标志物表达谱对口腔黏膜等效物中的新生血管样结构进行免疫组化、免疫荧光标记,进行血管化特征分析;采用激光捕获显微切割系统靶向捕获免疫组化特异性标记的口腔黏膜等效物中新生血管样结构,靶向分析其血管化特征。结果与结论:(1)形态学观察显示口腔黏膜等效物细胞层次清晰,结构类似于正常口腔黏膜,即存在类上皮样结构、类固有层样结构、类血管腔样结构,类血管腔样结构内存在散在红细胞;(2)口腔黏膜等效物组中EdU Apollo示踪种子细胞结果显示:EdU Apollo 488标记的人牙龈上皮细胞呈绿色荧光表达;DAPI标记的人牙龈成纤维细胞呈蓝色荧光表达,体内形成类固有层样结构;Ed U Apollo 567标记的血管内皮样细胞呈红色荧光表达,体内形成类血管样结构;(3)血管内皮细胞特异性标志物表达谱免疫荧光标记血管结构显示,与正常口腔黏膜相比,口腔黏膜等效物中CD31、CD51、CD54、CD105、Tie-2、VWF、血管内皮生长因子受体1、血管内皮生长因子受体2表达升高(P0.05);(4)与特异性标记的口腔黏膜血管结构相比,激光捕获显微切割系统靶向捕获的口腔黏膜等效物血管样结构中CD51、CD54、CD105、Tie-2、VWF、血管内皮生长因子受体1、血管内皮生长因子受体2表达升高(P0.05);(5)结果表明,通过三维细胞分层重建的口腔黏膜等效物能够实现良好的血管化,其血管化特征符合新生血管生成的免疫学功能及特点;血管化助力三维细胞分层重建的口腔黏膜等效物再生。

关键词：脱细胞血管基质血管内皮样细胞三维细胞重建血管化口腔黏膜等效物激光捕获显微切割系统

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脑卒中患者主动健康行为概念框架的构建研究

中国全科医学 2025年第5期28卷 534-540,547页

作者：周辰茜林蓓蕾唐尚锋张振香王晓萱江湖张杜杜刘博文李昕郑州大学护理与健康学院河南省郑州市450001 华中科技大学医药卫生管理学院湖北省武汉市430030 郑州大学第二附属医院河南省郑州市450000

背景脑卒中发病率逐年上升,行为控制是预防脑卒中直接有效的干预手段。主动健康医学模式提高了慢性病防控的主动性和可及性,而脑卒中患者主动健康行为概念内涵有待探索。目的探索脑卒中患者主动健康认知及行为方式,构建脑卒中患者主动... 详细信息

背景脑卒中发病率逐年上升,行为控制是预防脑卒中直接有效的干预手段。主动健康医学模式提高了慢性病防控的主动性和可及性,而脑卒中患者主动健康行为概念内涵有待探索。目的探索脑卒中患者主动健康认知及行为方式,构建脑卒中患者主动健康行为概念框架。方法2023年8—10月,采用目的抽样方法,选取郑州大学第二附属医院神经内科的26例脑卒中住院患者作为研究对象,运用诠释主义扎根理论方法论,对26例脑卒中患者进行半结构式访谈,通过编码和持续性比较方法对资料进行分析。结果析出主题“脑卒中患者主动健康行为”的10项主范畴和4项核心范畴,包括“健康动机、健康责任、心理健康”3个内在行为,“生活方式管理”1个惯性行为,“主动遵医、社会关系、信息寻求”3个社会行为和“意识觉醒、自我控制、资源可及”3个干预条件,并确立概念框架。结论脑卒中患者主动健康行为概念框架包含内在行为、惯性行为、社会行为和干预条件,该框架有助于脑卒中患者主动健康行为测评工具的进一步开发和个性化干预措施的制订,对促进脑卒中患者主动健康行为的研究及实践具有指导意义。

关键词：脑卒中主动健康行为概念框架质性研究