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蓝莓花色苷的分离纯化及其初步药效学实验研究

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蓝莓花色苷的分离纯化及其初步药效学实验研究

作者：李知敏重庆大学

学位级别：硕士

蓝莓是近几年来世界上发展最为迅速的集营养与保健于一身的新兴果品,它具有防止脑神经老化、强心、抗癌、软化血管、增强人机体免疫力等多种功能。而其中所含的花色苷类物质对视疲劳的防治作用目前更是倍受关注。本文以蓝莓花色苷为研... 详细信息

蓝莓是近几年来世界上发展最为迅速的集营养与保健于一身的新兴果品,它具有防止脑神经老化、强心、抗癌、软化血管、增强人机体免疫力等多种功能。而其中所含的花色苷类物质对视疲劳的防治作用目前更是倍受关注。本文以蓝莓花色苷为研究对象,对蓝莓花色苷的提取、纯化、稳定性和药理药效活性为研究重点,为进一步研究或开发具有防视疲劳功能保健食品或药品提供一定的理论依据。通过实验研究,获得了以下几个方面的结论: 1、蓝莓花色苷的提取工艺研究:在提取过程中,温度、醇浓度、料液比、时间这四个因素对花色苷含量均有一定影响。影响的主次顺序分别为醇浓度>温度>时间>料液比。醇浓度对花色苷的含量影响是极显著的,温度和时间的影响是显著的,而料液比的影响是不显著的。最终优化出的提取方案为温度50℃,料液比1:10,提取时间1h,醇浓度75%。 2、蓝莓花色苷适合用聚酰胺树脂进行纯化,乙醇溶液洗脱。纯化条件为:花色苷粗提物上柱后,先用蒸馏水洗脱4个柱体积,然后用50%乙醇洗脱6个柱体积,收集该部分洗脱液,干燥,便为精制的花色苷。通过差异pH法进行测定,所得的花色苷的纯度为46.45%,色价为2047,达到了国际上规定的花色苷类物质医药用品原料含量大于20%,天然色素色价大于40的相关规定。 3、花色苷稳定性研究:研究表明花色苷在酸性条件下是比较稳定的,而在碱性条件下是极不稳定的;花色苷在温度小于60℃的条件下较为稳定,当温度大于80℃时,温度对花色苷有较明显的降解作用;光对花色苷的稳定性影响很大,因此,花色苷在保存和使用过程中,应该尽量避免强光直照;花色苷的抗氧化还原能力很差,因此,应该注意防止氧化,避免和还原剂一起使用;NaCl、蔗糖和防腐剂对花色苷的稳定性影响不大,在加工过程中可以放心使用。 4、蓝莓花色苷对细胞的氧化损伤研究:用15μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml的蓝莓花色苷预先处理过的ECV-304细胞与H2O2损伤组相比,细胞存活率由损伤组的19.09%分别上升至38.67%、68.97%、79.00%和61.10%,具有极显著的差异。该结果说明蓝莓花色苷在这4个浓度对细胞的氧化损伤具有明显的保护作用,因此具有开发成抗视疲劳保健食品和药品的潜力。

关键词：蓝莓花色苷提取纯化稳定性药理活性

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植物多糖提取液的几种脱蛋白方法的比较分析

重庆大学学报（自然科学版） 2004年第8期27卷 57-59页

作者：李知敏王伯初周菁彭亮重庆大学生物工程学院生物力学与组织工程教育部重点实验室重庆400030

多糖对肿瘤、病毒、心血管等方面具有独特的生物活性,且细胞毒性很低,因此多糖的分离及纯化一直是一个很有意义的研究课题。实验以多糖损失率和脱蛋白率(r)为衡量指标,通过对几种脱蛋白方法的比较,优化出植物多糖提取液的脱蛋白方法,为... 详细信息

多糖对肿瘤、病毒、心血管等方面具有独特的生物活性,且细胞毒性很低,因此多糖的分离及纯化一直是一个很有意义的研究课题。实验以多糖损失率和脱蛋白率(r)为衡量指标,通过对几种脱蛋白方法的比较,优化出植物多糖提取液的脱蛋白方法,为多糖的纯化提供了一定的参考。选用了3种较为常见的方法:三氯乙酸法、盐酸法及沙维积法(Sevag法)对植物多糖提取液进行脱蛋白处理。三氯乙酸法、盐酸法及Sevag法的脱蛋白率分别为46.1%、72.5%和42.3%,多糖损失率分别为6.1%、15.1%和14.3%。盐酸法脱蛋白率高,但它的多糖损失率较高;三氯乙酸法较温和,但除蛋白效率不高;Sevag法的脱蛋白效果不及前两种方法。

关键词：多糖提取液脱蛋白比较

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大孔吸附树脂纯化蒺藜中总皂苷工艺的优化

中成药 2011年第5期33卷 886-889页

作者：彭亮李知敏祝珍芳江西科技师范学院药学院江西南昌330013

目的探讨大孔吸附树脂纯化蒺藜中总皂苷的工艺条件。方法首先对AB-8、D101、HPD-450三种大孔吸附树脂进行筛选,然后对上柱液浓度、最大上样量、上柱液pH、洗脱剂乙醇度及洗脱剂用量等因素进行了优化。结果 D101型大孔树脂最适合蒺藜总... 详细信息

目的探讨大孔吸附树脂纯化蒺藜中总皂苷的工艺条件。方法首先对AB-8、D101、HPD-450三种大孔吸附树脂进行筛选,然后对上柱液浓度、最大上样量、上柱液pH、洗脱剂乙醇度及洗脱剂用量等因素进行了优化。结果 D101型大孔树脂最适合蒺藜总皂苷的分离纯化。工艺条件为:上柱液浓度为0.369 mg/mL,pH为5.0～5.5,上样体积为5BV,待吸附平衡后,用70%的乙醇进行洗脱,收集3BV的洗脱液,洗脱率可达70%以上,而纯化产品中总皂苷量可达80%左右。结论 D101大孔吸附树脂对蒺藜总皂苷的综合性能较好,适合于蒺藜总皂苷的分离纯化。

关键词：大孔吸附树脂蒺藜总皂苷优化

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灰兜巴提取物体外清除自由基活性的研究

安徽农业科学 2010年第14期38卷 7343-7344,7347页

作者：彭亮李知敏徐玲江西科技师范学院药学院江西南昌330013

[目的]研究灰兜巴提取物的体外清除自由基的活性。[方法]以维生素C为对照,比较灰兜巴提取物在3个不同提取过程中的中间产物HDB-1、HDB-2和HDB-3,对超氧阴离子自由基、羟基自由基、DPPH自由基3种自由基的清除效果。[结果]灰兜巴的3个不... 详细信息

[目的]研究灰兜巴提取物的体外清除自由基的活性。[方法]以维生素C为对照,比较灰兜巴提取物在3个不同提取过程中的中间产物HDB-1、HDB-2和HDB-3,对超氧阴离子自由基、羟基自由基、DPPH自由基3种自由基的清除效果。[结果]灰兜巴的3个不同提取阶段的中间提取产物中,以HDB-1对超氧阴离子自由基、羟基自由基和DPPH自由基的清除活性最强。在该试验浓度条件下,HDB-1对3种自由基的清除率分别为36.2%、31.1%和35.0%;而HDB-2和HDB-3对自由基的清除活性差异不大。[结论]该方法提取的灰兜巴产物有开发为天然抗氧化剂的潜力。

关键词：灰兜巴提取物自由基清除

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某高校大学生营养保健知识现状调查

现代预防医学 2011年第6期38卷 1011-1013页

作者：彭亮李知敏江西科技师范学院药学院

[目的]了解高校大学生的营养知识、态度和行为状况,帮助他们建立合理的膳食结构,掌握常见疾病防治知识。[方法]自行设计大学生营养知识、行为及态度调查问卷,对500名在校学生随机进行了问卷调查,并与其中43人进行交谈。[结果]大学生对... 详细信息

[目的]了解高校大学生的营养知识、态度和行为状况,帮助他们建立合理的膳食结构,掌握常见疾病防治知识。[方法]自行设计大学生营养知识、行为及态度调查问卷,对500名在校学生随机进行了问卷调查,并与其中43人进行交谈。[结果]大学生对营养保健知识的了解程度为好的有0人,2.12%的人了解程度为较好,49.07%的人了解程度为一般,48.81%的人了解程度为差,而且大部分的学生都有熬夜、不吃早饭、吃饭不规律、偏食等不良生活习惯。但大多数学生具有良好的营养态度,迫切想了解合理膳食模式,如何安排食物的种类和数量以及一些生活中常见疾病的预防与治疗手段等。[结论]大学生普遍缺乏营养保健的知识,应采用全校公选课的方式提高他们的营养保健知识教育。

关键词：大学生营养知识行为态度

紫萍提取物对过氧化氢诱导内皮细胞氧化损伤的保护作用研究

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时珍国医国药 2009年第4期20卷 996-998页

作者：彭亮李知敏江西科技师范学院药学院江西南昌330013

目的研究紫萍提取物是否具有保护内皮细胞免受过氧化氢损伤的作用。方法采用MTT比色法筛选紫萍提取物作用于内皮细胞的安全剂量,建立H2O2对内皮细胞的氧化损伤模型,并研究紫萍提取物的保护作用。最后采用检测试剂盒方法分析紫萍提取物... 详细信息

目的研究紫萍提取物是否具有保护内皮细胞免受过氧化氢损伤的作用。方法采用MTT比色法筛选紫萍提取物作用于内皮细胞的安全剂量,建立H2O2对内皮细胞的氧化损伤模型,并研究紫萍提取物的保护作用。最后采用检测试剂盒方法分析紫萍提取物作用后内皮细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性变化。结果紫萍提取物的浓度<100μg/ml,作用时间为24 h时,无明显细胞毒性。以1 mmol/L的H2O2作用于ECV-304细胞1 h造氧化损伤模型,10,25,50μg/ml的紫萍提取物具有预防氧化损伤作用,可使细胞的存活率由21.98%分别上升至37.49%,51.71%和64.74%,其机理可能是紫萍提取物能够剂量依赖性的增强SOD,CAT和GSH-Px等酶的活性。但是紫萍提取物无治疗氧化损伤的作用。结论紫萍提取物可以有效保护内皮细胞免受氧化损伤。

关键词：紫萍氧化损伤过氧化氢超氧化物歧化酶过氧化氢酶谷胱甘肽过氧化物酶

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大孔吸附树脂分离紫萍中总黄酮的工艺研究

时珍国医国药 2008年第2期19卷 420-422页

作者：彭亮李知敏江西科技师范学院药学院江西南昌330013

目的探讨大孔吸附树脂法纯化紫萍总黄酮的工艺。方法将AB-8，HPD-450和HPD-6003种大孔吸附树脂对紫萍总黄酮的吸附效果进行了比较，并对AB-8的吸附特性进行了研究。结果AB-8，HPD-450和HPD～600对紫萍总黄酮的吸附量分别为：80．04，82... 详细信息

目的探讨大孔吸附树脂法纯化紫萍总黄酮的工艺。方法将AB-8，HPD-450和HPD-6003种大孔吸附树脂对紫萍总黄酮的吸附效果进行了比较，并对AB-8的吸附特性进行了研究。结果AB-8，HPD-450和HPD～600对紫萍总黄酮的吸附量分别为：80．04，82．26和75．96mg／g，解吸率分别为90．47％，80．88％和75．84％。AB-8纯化紫萍总黄酮的工艺条件为：上柱样品pH值为5～6，以1BV／h的速度流过树脂，待吸附平衡后，用4BV的蒸馏水以2BV／h的速度淋洗树脂，然后用70％的乙醇溶液以1BV／h的流速进行洗脱，收集第2～3BV时的洗脱液，其干燥品中的黄酮纯度可达80％左右。结论AB-8型大孔吸附树脂最适合于紫萍总黄酮的分离纯化。

关键词：大孔吸附树脂紫萍总黄酮

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灰兜巴体外抑制α-葡萄糖苷酶的活性研究

时珍国医国药 2012年第6期23卷 1379-1380页

作者：李知敏彭亮江西科技师范学院.药学院江西南昌330013

目的研究灰兜巴体外抑制α-葡萄糖苷酶的活性。方法制备灰兜巴石油醚萃取部分、乙酸乙酯萃取部分、萃取剩余部分和水提部分,用pNPG方法测定各个样品对α-葡萄糖苷酶的体外抑制作用。结果灰兜巴石油醚萃取部分、乙酸乙酯萃取部分、萃取... 详细信息

目的研究灰兜巴体外抑制α-葡萄糖苷酶的活性。方法制备灰兜巴石油醚萃取部分、乙酸乙酯萃取部分、萃取剩余部分和水提部分,用pNPG方法测定各个样品对α-葡萄糖苷酶的体外抑制作用。结果灰兜巴石油醚萃取部分、乙酸乙酯萃取部分、萃取剩余部分均具有明显的α-葡萄糖苷酶抑制活性,且显示出明显的剂量依赖性,而水提物的抑制活性最弱。结论灰兜巴具有较强的α-葡萄糖苷酶抑制作用。

关键词：灰兜巴醇提液 α-葡萄糖苷酶抑制作用

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灰兜巴抗糖尿病作用的实验研究

时珍国医国药 2010年第12期21卷 3060-3061页

作者：彭亮李知敏江西科技师范学院药学院江西南昌330013

目的考察灰兜巴的抗糖尿病作用,并初步了解其具有降血糖作用的物质基础。方法将灰兜巴先用75%乙醇溶液提取,再用热水提取得到水提部分(HDB-4);醇提部分浓缩除去乙醇后,用石油醚、醋酸乙酯分别萃取,得到石油醚萃取部分(HDB-1)、醋酸乙酯... 详细信息

目的考察灰兜巴的抗糖尿病作用,并初步了解其具有降血糖作用的物质基础。方法将灰兜巴先用75%乙醇溶液提取,再用热水提取得到水提部分(HDB-4);醇提部分浓缩除去乙醇后,用石油醚、醋酸乙酯分别萃取,得到石油醚萃取部分(HDB-1)、醋酸乙酯萃取部分(HDB-2)和醇提萃取剩余部分(HDB-3)。以给予大鼠高糖高脂饮食配合小剂量腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法建立2型糖尿病大鼠模型,以消渴丸为阳性对照,观察上述4种样品的降血糖作用。结果 HDB-1给药14d后,空腹血糖值明显降低,与模型组相比,具有统计学意义(P<0.05),其余3个部分均有一定的降低空腹血糖趋势,但无统计学差异。结论灰兜巴具有一定的抗糖尿病作用,并且石油醚萃取部分的效果最好。

关键词：灰兜巴糖尿病链脲佐菌素石油醚萃取醋酸乙酯萃取