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高温木聚糖酶Pthxyn酶学性质及其在啤酒酿造中的应用

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食品科学 2023年第10期44卷 181-187页

作者：李青飞刘越言行聂新玲李相前谭中标时号淮阴工学院生命科学与食品工程学院江苏淮安223001

研究Pseudothermotoga thermarum木聚糖酶Pthxyn的高效表达及在啤酒酿造中的应用。通过构建、扩增重组质粒pET-20b(+)-pthxyn并在大肠杆菌中进行表达和纯化,重组木聚糖酶分子质量为130 kDa,最适pH值与最适反应温度分别为5.5和95℃。重... 详细信息

研究Pseudothermotoga thermarum木聚糖酶Pthxyn的高效表达及在啤酒酿造中的应用。通过构建、扩增重组质粒pET-20b(+)-pthxyn并在大肠杆菌中进行表达和纯化,重组木聚糖酶分子质量为130 kDa,最适pH值与最适反应温度分别为5.5和95℃。重组木聚糖酶在pH 5.0~8.0的情况下保温2 h仍能保持80%的酶活力,在75℃保温1 h仍保持83%活力。在啤酒酿造的糖化阶段,于65℃时将重组木聚糖酶分别加入以大麦、小麦为原料的反应体系中,采用高效液相色谱检测木糖与葡萄糖的产物。以不加重组木聚糖酶为对照,结果表明,以大麦作为反应体系原料时,木糖质量浓度由0.017 g/L升至1.25 g/L,葡萄糖质量浓度由20 g/L增至36.57 g/L;以小麦作为反应体系原料时,木糖质量浓度由0.003 g/L上升到0.708 g/L,葡萄糖质量浓度由21.9 g/L增加到36.63 g/L。结论:本研究获得的重组木聚糖酶具有pH值耐受性广和良好的热稳定性等特点,同时在啤酒糖化阶段与内源性酶产生协同效应使其具备较高的催化效率,因此在啤酒酿造中具有很好的应用前景。

关键词：木聚糖酶高效表达热稳定性啤酒酿造

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环孢菌素A柱层析硅胶再生工艺

化工进展 2022年第S1期41卷 461-468页

作者：黄晔言行吴巧薇柴小涛潘恭赢张金峰李相前江苏九阳生物制药有限公司江苏盐城224300 淮阴工学院生命科学与食品工程学院江苏淮安223003

环孢菌素A工业化生产涉及真菌发酵、萃取、浓缩、结晶、硅胶柱层析、脱色、二次结晶等步骤,目前硅胶柱层析步骤的硅胶只能一次使用,现实生产过程产生了大量的废硅胶,环保处理压力大、企业成本高。据此本文开展了环孢菌素A柱层析硅胶再... 详细信息

环孢菌素A工业化生产涉及真菌发酵、萃取、浓缩、结晶、硅胶柱层析、脱色、二次结晶等步骤,目前硅胶柱层析步骤的硅胶只能一次使用,现实生产过程产生了大量的废硅胶,环保处理压力大、企业成本高。据此本文开展了环孢菌素A柱层析硅胶再生工艺研究,针对硅胶上吸附的杂质性质,研究了硅胶再生洗脱溶剂系统,通过响应面法优化再生条件,结果表明:选用含有0.26%聚山梨醇的乙醇反向冲洗4个柱体积,再使用双氧水浓度为0.15%的去离子水正向冲洗2.1个柱体积,冲洗流速为5mL/min;使用压缩空气将再生后的硅胶压出,烘干至水分含量为6%。按照本方法得到的再生硅胶按原工艺使用时,环孢菌素A回收率完全达标,并且可以三次重复使用达标。本研究建立了一套切实可行的环孢素纯化硅胶再生工艺,可有效节约工厂生产成本和减轻环境压力。

关键词：环孢菌素A 柱层析硅胶再生纯化

海栖热袍菌内切葡聚糖酶Cel12B与木聚糖酶XynA CBD结构域融合基因的构建、表达及融合酶性质分析

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微生物学报 2006年第5期46卷 726-729页

作者：李相前邵蔚蓝江南大学工业生物技术教育部重点实验室

海栖热袍菌内切葡聚糖酶Cel12B是极耐热胞外酶，氨基酸序列分析表明不含有纤维素结合结构域（CBD），对结晶纤维素无活性，但同样菌种来源的木聚糖酶XynA有催化结构域和纤维素结合结构城。用同样极耐热酶CBD区域和Cel12B融合构建重组质... 详细信息

海栖热袍菌内切葡聚糖酶Cel12B是极耐热胞外酶，氨基酸序列分析表明不含有纤维素结合结构域（CBD），对结晶纤维素无活性，但同样菌种来源的木聚糖酶XynA有催化结构域和纤维素结合结构城。用同样极耐热酶CBD区域和Cel12B融合构建重组质粒pET-20b—Cel12B—CBD，经诱导表达后，对结晶纤维素有活性，酶学特性研究表明：最适反应温度为100℃、最适pH为5．8、在pH4．5—7．0时酶活力稳定，90℃保温2h仍有87％的酶活。

关键词：海栖热袍菌纤维素结合域内切葡聚糖酶基因融合

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双阈值的特定英语音频句子边界检测

哈尔滨工业大学学报 2010年第2期42卷 259-263页

作者：刘秉权徐帅李相前哈尔滨工业大学计算机科学与技术学院哈尔滨150001

为了提高英语音频句子切分的效果,提出了基于双阈值的句子边界检测方法.该方法针对VOA、BBC等特别适合英语学习者的音频所具有的波形规范、环境噪声小、速率通常比较稳定等特点,利用静音能量阈值和静音时延阈值来检测音频句子的边界,并... 详细信息

为了提高英语音频句子切分的效果,提出了基于双阈值的句子边界检测方法.该方法针对VOA、BBC等特别适合英语学习者的音频所具有的波形规范、环境噪声小、速率通常比较稳定等特点,利用静音能量阈值和静音时延阈值来检测音频句子的边界,并辅以对照文本信息进行校正.针对VOA慢速英语的实验结果表明:单纯使用双阈值方法,音频切分的召回率超过96%,精确率超过94%;利用对照文本校正后,可进一步提高精确率.

关键词：音频切分边界检测双阈值

基于双阈值的特定英语音频切分方法的研究与实现

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基于双阈值的特定英语音频切分方法的研究与实现

作者：李相前哈尔滨工业大学

学位级别：硕士

移动学习是近年来随着网络技术、无线通信技术、移动计算技术和多媒体技术等的迅速发展及融合而悄然兴起的一种新型的学习技术与方式。结合移动学习技术,构建移动英语学习平台是一件十分具有研究价值和实用价值的事情。为适应移动英语... 详细信息

移动学习是近年来随着网络技术、无线通信技术、移动计算技术和多媒体技术等的迅速发展及融合而悄然兴起的一种新型的学习技术与方式。结合移动学习技术,构建移动英语学习平台是一件十分具有研究价值和实用价值的事情。为适应移动英语学习平台构建时对资源的需求,本文实现了MP3解码模块,提出了基于双阈值的特定英语音频切分算法,并对文本在音频切分中的作用进行了积极的探索。在此基础上,设计并实现了音频切分系统。网络上广泛流行的VOA、BBC等音频具有良好的适合英语学习者的特性,本文主要就是对这些特定英语音频进行切分。但它们在网络上主要是以MP3格式进行存储,而不是采用无压缩的波形文件格式。因此,本文首先对MP3的相关理论进行研究,详细介绍了MP3编码算法和解码算法的处理流程以及若干细节问题。接着,本文在对特定英语音频波形特点和不同语言单元边界之间的异同进行仔细分析的基础上,提出了基于双阈值的音频切分算法。这里,双阈值是指静音能量阈值和静音时延阈值。算法首先利用合适的方法估测出双阈值,然后对音频数据提取能量序列,并将序列通过双阈值两级门限,最终检测到音频句子边界。对28篇VOA Special音频进行切分的实验数据表明,该算法的精确率和召回率都在90%以上。每个音频都有对应的文本,大致来说,文本在音频切分中的作用有两方面,一方面为句子级音频提供句子级文本对照,另一方面可以考虑利用文本信息校正音频切分结果。对于前者,本文采用了基于规则的方法对文本进行切分,实验数据表明切分正确率接近100%。对于后者,本文利用了文本切分后的信息,提出了双阈值校正算法。最后,本文组合MP3解码模块、文本切分模块和音频切分模块等,搭建了一个音频切分系统,并设计了简洁的界面。

关键词：移动学习切分 mp3 阈值规则

同方学位论文库评论

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酵母菌发酵植物粕类饲料研究进展

中国饲料 2023年第3期 5-10页

作者：信珊珊丁浩杨阳陈伊灵朱小燕李相前刘培淮阴工学院生命科学与食品工程学院江苏淮安223003 江苏省益生制剂重点建设实验室江苏淮安223003 江苏省生物质转化与过程集成工程实验室江苏淮安223003

养殖业的迅速发展使蛋白质饲料缺口不断拉大,豆粕、菜籽粕、花生粕等植物粕类饲料资源丰富且富含蛋白质,可以作为蛋白饲料源开发和利用。但是植物粕类的抗营养因子会对动物机体产生不良影响。通过微生物发酵技术降解粕类饲料中的抗营养... 详细信息

养殖业的迅速发展使蛋白质饲料缺口不断拉大,豆粕、菜籽粕、花生粕等植物粕类饲料资源丰富且富含蛋白质,可以作为蛋白饲料源开发和利用。但是植物粕类的抗营养因子会对动物机体产生不良影响。通过微生物发酵技术降解粕类饲料中的抗营养因子,提高粕类饲料的利用率,可以极大的缓解饲料缺口。本文主要概述了酵母菌发酵豆粕、菜籽粕、棉籽粕、棕榈粕、花生粕、芝麻粕、油茶粕这几类植物粕类的研究进展,旨在为酵母菌发酵植物粕类技术的开发利用提供参考。

关键词：酵母菌微生物发酵植物粕类蛋白质饲料抗营养因子

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以秸秆为原料制备低聚木糖工艺研究

现代化工 2008年第S2期28卷 380-382页

作者：李相前任世英淮阴工学院化学和生物工程学院江苏淮安223001

研究了稻草粉经氯化钠预处理后加氢氧化钠高温蒸煮提取木聚糖,然后再加酶水解生产低聚木糖的工艺路线。稻草粉在质量分数为2.5%的NaCl溶液中浸泡12 h后,滤去浸泡液,然后采用固液比1∶10、120℃、120 min的蒸煮条件进行蒸煮。结果表明,... 详细信息

研究了稻草粉经氯化钠预处理后加氢氧化钠高温蒸煮提取木聚糖,然后再加酶水解生产低聚木糖的工艺路线。稻草粉在质量分数为2.5%的NaCl溶液中浸泡12 h后,滤去浸泡液,然后采用固液比1∶10、120℃、120 min的蒸煮条件进行蒸煮。结果表明,木聚糖的提取得率达29.05%(按稻草粉中木聚糖计),用底物质量分数为3%的木聚糖,加入木聚糖酶液,水解温度80℃,反应时间5 h,最后测得还原糖总质量浓度可达3.54 g/L。

关键词：稻草粉酶法水解木聚糖低聚木糖

牙鲆半乳糖凝集素6基因的克隆、表达及功能研究

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渔业科学进展 2022年第4期43卷 147-157页

作者：刘晓飞张爽爽 Endri Hendriansyah 李英瑞苏琳李相前修云吉顾伟南京师范大学海洋科学与工程学院江苏南京210023 青岛农业大学海洋科学与工程学院山东青岛266109 淮阴工学院江苏省益生制剂重点建设实验室江苏淮安223003

半乳糖凝集素6(Galectin-6)是β-半乳糖苷结合凝集素家族的成员之一。本研究首次分离并鉴定了牙鲆(Paralichthys olivaceus)Galectin-6(PoGalectin-6),分析了其分子特征和表达模式,并对其免疫相关功能进行了研究。PoGalectin-6基因的开... 详细信息

半乳糖凝集素6(Galectin-6)是β-半乳糖苷结合凝集素家族的成员之一。本研究首次分离并鉴定了牙鲆(Paralichthys olivaceus)Galectin-6(PoGalectin-6),分析了其分子特征和表达模式,并对其免疫相关功能进行了研究。PoGalectin-6基因的开放阅读框长为1089 bp,共编码362个氨基酸,其中包含2个糖识别结构域(CRDs)。同源序列比对和系统进化树分析显示,PoGalectin-6与大菱鲆(Scophthalmus maximus)Galectin-4的相似性为80.9%。组织分布结果显示,PoGalectin-6基因主要在肠组织中特异性表达。迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)感染后,PoGalectin-6基因在肠组织中的表达显著升高,感染后12 h表达量最高,随后逐渐降低并恢复至正常水平。细菌结合实验证实,PoGalectin-6重组蛋白(rPoGalectin-6)能够结合枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)、杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)、迟缓爱德华氏菌和创伤弧菌(Vibrio vulnificus),但并不结合短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)。此外,rPoGalectin-6以钙离子依赖的方式对短小芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、杀鲑气单胞菌和迟缓爱德华氏菌表现出明显的凝集作用。研究表明,PoGalectin-6基因参与了由迟缓爱德华氏菌感染引起的免疫应答,这一发现为探索Galectin-6在硬骨鱼类中的免疫功能奠定了基础。

关键词：糖凝集素6 牙鲆迟缓爱德华氏菌免疫应答

一种快速筛选重组耐高温β-葡聚糖酶大肠杆菌的方法

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食品与发酵工业 2009年第7期35卷 44-48页

作者：吴华伟夏帆李相前长江大学生命科学学院淮阴工学院江苏淮安223001

目的:建立一种快速筛选重组耐高温葡聚糖酶大肠杆菌(Escherichia coli)菌株的方法,期望以此为高通量筛选模型,通过体外定向进化后得到在不改变耐高温性能的同时提高其纤维素酶解活性的突变体。方法:以刚果红染色法为基础,带有耐高温葡... 详细信息

目的:建立一种快速筛选重组耐高温葡聚糖酶大肠杆菌(Escherichia coli)菌株的方法,期望以此为高通量筛选模型,通过体外定向进化后得到在不改变耐高温性能的同时提高其纤维素酶解活性的突变体。方法:以刚果红染色法为基础,带有耐高温葡聚糖酶基因cel12B重组质粒的E.coli菌株依次经过通过菌落的原位尼龙膜转印、裂解、底物和酶的高温反应、显色、脱色一系列步骤,建立了完整的筛选流程,并考察了诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)用量和加入方式、转印前重组菌的培养时间、平板上的菌落密度、筛选平板中琼脂的用量、筛选平板的孵育温度与时间对筛选效果的影响。结果:当在诱导平板上预先涂上4μL5mg/mL诱导剂IPTG,于37℃放置2-3h后,再将适当菌液涂在平板上于同样温度诱导15h并控制每个平板上的菌落密度为50个/板,筛选平板中琼脂浓度为20g/L,筛选平板的孵育温度为70℃、时间为3h时产生的透明圈形状规则、大小合适、分布均匀,筛选效果最好。

关键词：筛选方法耐高温葡聚糖酶透明圈