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幽门螺旋杆菌毒力蛋白CagA对B淋巴细胞IgA1分泌和低糖基化的影响

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幽门螺旋杆菌毒力蛋白CagA对B淋巴细胞IgA1分泌和低糖基化的影响

作者：李甫罡泸州医学院

学位级别：硕士

目的：IgA肾病是全世界范围内一种常见的原发性肾小球疾病，在我国已成为导致慢性肾功能衰竭最主要的肾小球疾病，大约25%0%的患者在疾病诊断后25年内发展到终末期肾衰竭(ESRD);幽门螺杆菌(Helicobacterpylori，Hp)在中国乃至整个亚太... 详细信息

目的：IgA肾病是全世界范围内一种常见的原发性肾小球疾病，在我国已成为导致慢性肾功能衰竭最主要的肾小球疾病，大约25%0%的患者在疾病诊断后25年内发展到终末期肾衰竭(ESRD);幽门螺杆菌(Helicobacterpylori，Hp)在中国乃至整个亚太地区人群中具有高感染率，目前已有研究提示Hp感染可能与IgA肾病发病有关，但缺乏相关的实验证据，具体致病机制也不明。本实验通过检测Hp的毒力蛋白——细胞毒素相关基因A蛋白(CagA)对人B细胞分泌的IgA1以及糖基化影响，初步研究Hp与IgA的相关性，并通过检测C1GALT1及Cosmc基因的表达变化，进一步探讨HP参与IgA肾病发生的分子机制，其研究结果可为明确Hp与IgA肾病发生的相关性提供实验依据,并为治疗伴有Hp感染的IgA肾病提供新的思路。方法：以培养的人B淋巴细胞系DAKIKI细胞为研究对象，在剂量依赖实验(给予不同浓度的CagA蛋白刺激，培养48h)和时间依赖实验(以1.6μg/ml的CagA刺激培养24h、48h、72h)中，采用细胞计数法和CCK8法检测细胞增殖情况，酶联免疫吸附法(ELISA)法检测培养上清中IgA1浓度，HAA凝集素结合试验法检测低糖基化程度，并在最适刺激浓度和作用时间条件下，运用实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测细胞内半乳糖基转移酶C1GALT1和伴侣蛋白Cosmc在基因与蛋白水平的表达变化，探讨CagA引起人B淋巴细胞分泌的IgA1异常糖基化的分子机制。结果：剂量依赖试验中，细胞计数与CCK8实验结果显示，与对照组相比，一定浓度范围的CagA可促进B细胞增殖，而较高浓度的CagA(3.2μg/ml)表现为明显的抑制作用，ELISA结果显示，不同浓度的CagA均可促进B细胞分泌IgA1，其中以1.6μg/ml的CagA效果最为显著，HAA凝集素结合试验结果显示，1.6μg/ml和3.2μg/ml的CagA蛋白可明显增加IgA1分子的低糖基化水平;时间依赖试验中，在不同的时间点，1.6μg/ml的CagA蛋白刺激组与对应的对照组相比，均出现IgA1分泌和低糖基化程度的增加，并呈明显的时间依赖性;综合以上结果，最终确定以1.6μg/ml CagA作用48h进行后续机制探讨：实时荧光定量RT-PCR与Westernblot研究结果显示，与正常对照组相比，CagA组与LPS组(12.5μg/ml)的C1GALT1和Cosmc的表达在基因和蛋白水平均出现明显降低(P<0.05)。结论：CagA可促进B细胞增殖，引起IgA1分泌增加，并能诱导IgA1分子低糖基化，其机制可能与下调C1GALT1和Cosmc的表达相关，提示幽门螺旋杆菌感染可能在IgA肾病的发病机制中起到重要促进作用，抗幽门螺杆菌或抗CagA治疗可能成为幽门螺杆菌感染的IgA肾病患者新的作用靶点。

关键词：细胞毒素相关蛋白A IgA1 低糖基化 IgA肾病

677例基层医院就诊女性HPV感染情况分析

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当代医学 2022年第28期28卷 87-91页

作者：陈涛李甫罡刘淼王钢卢峰郭晓兰简阳市人民医院中心实验室四川成都641400 简阳市人民医院输血科四川成都641400

目的了解于本院就诊的女性人乳头状瘤病毒(HPV)感染状况,为预防和控制HPV感染,提高女性健康水平。方法选取2019年1月至2020年4月于本院体检的276名无临床症状女性作为健康对照组,94例阴道炎患者作为阴道炎组,202例慢性宫颈炎患者作为慢... 详细信息

目的了解于本院就诊的女性人乳头状瘤病毒(HPV)感染状况,为预防和控制HPV感染,提高女性健康水平。方法选取2019年1月至2020年4月于本院体检的276名无临床症状女性作为健康对照组,94例阴道炎患者作为阴道炎组,202例慢性宫颈炎患者作为慢性宫颈炎组,70例宫颈癌前病变患者作为宫颈癌前病变组,35例宫颈癌患者作为宫颈癌组。将所有样本分为<20岁年龄组,20~<30岁年龄组,30~<40岁年龄组,40~<50岁年龄组,50~<60岁年龄组,≥60岁年龄组。宫颈癌前病变组根据病理检查结果分为宫颈上皮内瘤样变Ⅰ级(CINⅠ)、宫颈上皮内瘤样变Ⅱ级(CINⅡ)、宫颈上皮内瘤样变Ⅲ级(CINⅢ),分别为25、22、23例,经过严格操作取样后采用聚合酶链式反应(PCR)、核酸分子快速杂交方法(HCⅡ)检测HPV。比较各组及不同分型、不同年龄组的HPV感染情况。结果677例样本中HPV感染率为44.9%。阴道炎组HPV阳性感染率为36.2%,慢性宫颈炎组HPV阳性感染率为44.1%,宫颈癌前病变组HPV阳性感染率为74.3%,宫颈癌组HPV阳性感染率为65.7%,健康对照组HPV阳性感染率为38.4%,宫颈癌前病变组及宫颈癌组的HPV阳性感染率明显高于其余组HPV阳性感染率,差异有统计学意义(P<0.05);各组单一型HPV感染率分别为22.3%、25.7%、48.6%、45.7%、26.4%,多重型HPV感染率分别为13.8%、18.3%、25.7%、20.0%、12.0%,各组单一型HPV感染率和多重型HPV感染率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。各年龄组间HPV阳性率比较差异无统计学意义。CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ3组HPV阳性感染率分别为60.0%、72.7%、91.3%,3组HPV阳性感染率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。感染的HPV亚型分型中前5位分别为HPV16、HPV6、HPV52、HPV33、HPV81,例数分别为91、55、53、42、36例。结论HPV在本地区女性中的感染情况不容乐观;HPV感染与女性宫颈疾病,尤其是宫颈癌的发生、发展密切相关;加强HPV感染早期筛查对于宫颈炎性疾病和宫颈癌的预防和治疗具有重要的临床意义。

关键词：人乳头瘤病毒感染率宫颈癌

CD8^(+)T淋巴细胞在成人传染性单核细胞增多症患者中的表达分析

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临床血液学杂志 2022年第6期35卷 423-427页

作者：卢峰李甫罡罗志刚冀承杰刘靳波西南医科大学附属医院医学检验部四川泸州646000 简阳市人民医院实验医学科

目的:检测EB病毒(EBV)感染所致成人传染性单核细胞增多症(IM)患者外周血淋巴细胞亚群和血浆EBV DNA载量,分析EBV载量与淋巴细胞亚群的相关性。方法:收集2016至2021年确诊的成人IM患者318例作为IM组,选择同期体检的健康成人31例作为对照... 详细信息

目的:检测EB病毒(EBV)感染所致成人传染性单核细胞增多症(IM)患者外周血淋巴细胞亚群和血浆EBV DNA载量,分析EBV载量与淋巴细胞亚群的相关性。方法:收集2016至2021年确诊的成人IM患者318例作为IM组,选择同期体检的健康成人31例作为对照组。采用多参数流式细胞术检测外周血各淋巴细胞亚群占总淋巴细胞百分比,实时荧光定量PCR测量血浆中的EBV DNA载量。结果:IM组CD8^(+)CD3^(+)(53.39±8.02)%和CD8弱阳性CD3^(+)(12.17±8.52)%比例明显增高,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);IM组EBV DNA载量与CD8^(+)CD3^(+)和CD8弱阳性CD3^(+)比例呈正相关(P0.05)。结论:成人IM患者外周血CD8^(+)T淋巴细胞和CD8弱阳性T淋巴细胞显著增多,EBV DNA载量与CD8^(+)T淋巴细胞和CD8弱阳性T淋巴细胞呈正相关,综合淋巴细胞亚群检测结果与血浆EBV DNA载量有助于疾病的诊断。

关键词： EB病毒传染性单核细胞增多症淋巴细胞亚群

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蜂蜇伤与患者血清细胞因子水平变化的关系

国际检验医学杂志 2020年第5期41卷 633-635页

作者：刘利李甫罡陈德政张勇简阳市人民医院肾内科四川简阳641400 简阳市人民医院中心实验室四川简阳641400

目的探讨蜂蜇伤后患者白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-6、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)的变化以及与多器官功能衰竭综合征(MODS)的相关性。方法选取61例蜂蜇伤患者作为蜂蜇伤组,并根据是否发生MODS分为MODS组和非MODS... 详细信息

目的探讨蜂蜇伤后患者白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-6、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)的变化以及与多器官功能衰竭综合征(MODS)的相关性。方法选取61例蜂蜇伤患者作为蜂蜇伤组,并根据是否发生MODS分为MODS组和非MODS组;另选取21例健康人作为对照组。采用流式细胞术检测血清IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ的水平。比较蜂蜇伤患者和对照组、MODS组和非MODS组之间细胞因子水平的差异。结果蜂蜇伤患者血清IL-2、IL-6、IL-10、IFN-γ的水平明显高于对照组(P0.05);蜂蜇伤后发生MODS的患者血清IL-2、IL-10、IFN-γ水平明显高于非MODS组(P0.05)。结论蜂蜇伤后患者的部分细胞因子水平发生明显改变,细胞因子水平的改变可能参与到蜂蜇伤导致MODS发生的机制中。

关键词：蜂蜇伤多器官功能衰竭综合征细胞因子

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IL-17和IL-17基因多态性研究进展

西部医学 2012年第5期24卷 1015-1018页

作者：李甫罡杨满张晓燕樊均明泸州医学院附属医院肾脏科四川泸州646000 四川大学生物治疗国家重点实验室四川成都610041

白介素17(IL-17)是最近发现的辅助性T细胞Th17所分泌的细胞因子,在各种自身免疫性疾病以及其他相关疾病过程中起到了重要作用。已经报道IL-17与疾病的相关性,但是对其基因多态性研究较少,本文对IL-17及其基因多态性(SNP)研究进展做一综... 详细信息

白介素17(IL-17)是最近发现的辅助性T细胞Th17所分泌的细胞因子,在各种自身免疫性疾病以及其他相关疾病过程中起到了重要作用。已经报道IL-17与疾病的相关性,但是对其基因多态性研究较少,本文对IL-17及其基因多态性(SNP)研究进展做一综述,为今后转化研究方向提供一定的思路。

关键词： IL-17 IL-17基因基因多态性

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IgA肾病免疫发病机制及免疫抑制治疗

西部医学 2013年第2期25卷 161-163,168页

作者：樊均明李甫罡冯胜刚杨满泸州医学院附属医院肾病内科四川泸州646000 四川大学生物治疗国家重点实验室四川成都610041 南充市中心医院肾内科川北医学院第二临床医学院四川南充637000

IgA肾病是全球范围内最为常见的原发性肾小球疾病,发病率高,预后差,导致患者巨大的经济负担和社会负担。IgA肾病的发病机制及其防治研究具有重要的临床价值和社会意义。本文从IgA肾病免疫发病机制、免疫抑制治疗以及研究展望方面做一述评。

关键词： IgA肾病发病机制治疗免疫抑制

免疫球蛋白基因重排在B细胞非霍奇金淋巴瘤诊断中的意义

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临床检验杂志 2020年第9期38卷 695-698页

作者：卢峰罗志刚李甫罡王钢陈涛郭晓兰简阳市人民医院中心实验室四川简阳641400 川北医学院附属医院检验科四川南充637100

目的探讨骨髓及外周血免疫球蛋白(Ig)基因重排在B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)诊断中的临床意义。方法采用多重聚合酶链反应(mPCR)技术并根据BIOMED-2引物系统对103例B-NHL患者及20例反应性淋巴组织增生患者骨髓及外周血标本基因组DNA进... 详细信息

目的探讨骨髓及外周血免疫球蛋白(Ig)基因重排在B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)诊断中的临床意义。方法采用多重聚合酶链反应(mPCR)技术并根据BIOMED-2引物系统对103例B-NHL患者及20例反应性淋巴组织增生患者骨髓及外周血标本基因组DNA进行扩增,对PCR产物进行IgH、IgK基因重排的克隆性分析。结果103例B-NHL患者中IgH和IgK单克隆重排阳性率分别为41.7%和50.5%,IgH和IgK联合检出率为64.1%。59例慢性淋巴细胞白血病(CLL)/小B细胞淋巴瘤(SLL)患者中共检出Ig基因单克隆重排49例(83.1%);除CLL/SLL以外的其他44例B-NHL患者中有17例(38.6%)检出Ig基因单克隆重排,而在20例反应性淋巴组织增生患者中均未检出。70例B-NHL患者外周血标本Ig基因重排检出率与骨髓标本之间的差异无统计学意义(45.7%vs 54.3%,χ2=1.03,P=0.31);26例CLL/SLL患者外周血Ig基因重排率与骨髓标本之间的差异无统计学意义(69.2%vs 80.8%,χ2=0.92,P=0.34);44例非CLL/SLL患者外周血Ig基因重排率与骨髓标本之间的差异亦无统计学意义(31.8%vs 38.6%,χ2=0.45,P=0.50)。结论Ig基因重排可用于B-NHL的临床诊断,外周血与骨髓Ig基因重排检测具有同等的诊断价值。

关键词： B细胞非霍奇金淋巴瘤 Ig基因重排 BIOMED-2引物系统

消化性溃疡患者中幽门螺杆菌感染与细胞因子水平关系研究

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国际检验医学杂志 2020年第7期41卷 880-883页

作者：陈涛李甫罡刘淼卢峰王钢郭晓兰罗志刚简阳市人民医院中心实验室四川简阳641400

目的探讨消化性溃疡患者中幽门螺旋杆菌(Hp)感染与血清细胞因子水平变化的关系。方法选取简阳市人民医院2018年1月至2019年4月收治确诊的消化性溃疡患者94例,作为观察组;同时期来该院体检经胃镜检查未发现消化性溃疡的健康者28例,作为... 详细信息

目的探讨消化性溃疡患者中幽门螺旋杆菌(Hp)感染与血清细胞因子水平变化的关系。方法选取简阳市人民医院2018年1月至2019年4月收治确诊的消化性溃疡患者94例,作为观察组;同时期来该院体检经胃镜检查未发现消化性溃疡的健康者28例,作为对照组。并根据14碳尿素呼气试验、免疫印迹法将消化性溃疡患者分为Hp感染阳性患者及Hp感染阴性患者、Ⅰ型Hp感染患者与Ⅱ型Hp感染患者,对各组之间血清细胞因子水平进行对比分析。结果观察组血清白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ)水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。消化性溃疡患者中,Hp阳性患者血清IL-2、IL-4、IL-6、TNF-α、IFN-γ的水平明显高于Hp阴性患者,差异有统计学意义(P<0.05)。消化性溃疡Hp阳性患者中,Ⅰ型Hp感染患者血清IL-2、IL-4、IL-6、TNF-α、IFN-γ水平明显高于Ⅱ型Hp感染患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论消化性溃疡患者血清细胞因子水平明显升高,在Hp感染尤其是Ⅰ型Hp感染患者中升高更加明显,提示细胞因子水平改变可能参与到消化性溃疡的发病机制中。

关键词：消化性溃疡幽门螺旋杆菌细胞因子

血清高尔基体糖蛋白73在慢性肝病诊断中的应用研究

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临床输血与检验 2018年第4期20卷 428-431页

作者：王钢陈涛卢峰李甫罡郭晓兰罗志刚四川省简阳市人民医院中心实验室 641400

目的探讨高尔基体蛋白73(GP73)在慢性肝病诊断中的临床应用价值。方法收集本院原发性肝癌(HCC)(91例)、乙肝后肝硬化(217例)、慢性乙型病毒性肝炎患者(230例)和健康人群(62例)血清,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)和电化学发光法分别检... 详细信息

目的探讨高尔基体蛋白73(GP73)在慢性肝病诊断中的临床应用价值。方法收集本院原发性肝癌(HCC)(91例)、乙肝后肝硬化(217例)、慢性乙型病毒性肝炎患者(230例)和健康人群(62例)血清,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)和电化学发光法分别检测血清GP73、AFP含量,并对其特异性和敏感性进行统计分析。结果 HCC患者血清GP73最高,其次分别为肝硬化、慢性乙型肝炎患者,健康人群不升高,两两比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。GP73的敏感性和特异性(分别为65.9%、79.5%)与AFP的敏感性和特异性(分别为61.5%、74.6%)基本一致,但AFP与GP73联合检测可明显提高诊断的敏感性和特异性(84.6%和90.1%);并且HCC患者血清GP73含量与其TBIL、DBIl、TBA、ALT、AST水平具有相关性。结论 GP73在肝癌筛查中敏感性和特异性均较高,且GP73与AFP联合检测可提高HCC诊断准确性与临床应用价值。

关键词：原发性肝癌高尔基体蛋白73 甲胎蛋白