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新型H5亚型禽流感传染性法氏囊病二联疫苗的研制

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新型H5亚型禽流感传染性法氏囊病二联疫苗的研制

作者：李爱心中国农业科学院

学位级别：硕士

禽流感(Avian Influenza,AI)是由A型流感病毒引起的禽类烈性传染病。H5N1亚型禽流感病毒(Avian Influenza Virus,AIV)已遍及60多个国家和地区,造成数以万计的家禽和鸟类死亡,给养禽业带来极其严重的危害的。传染性法氏囊病(Infectious B... 详细信息

禽流感(Avian Influenza,AI)是由A型流感病毒引起的禽类烈性传染病。H5N1亚型禽流感病毒(Avian Influenza Virus,AIV)已遍及60多个国家和地区,造成数以万计的家禽和鸟类死亡,给养禽业带来极其严重的危害的。传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(Infectious Bursal Disease Virus,IBDV)引起,主要引起雏鸡的感染,诱发免疫抑制,使感染的鸡群对其他病毒、细菌等病原易感性增加,并可导致疫苗免疫失败。以上两种疫病是当前影响我国家禽养殖业最为重要的几种疫病中的两个。疫苗免疫是预防和控制AI和IBD的最有效手段之一。当前,我国家禽所使用的禽流感疫苗以全病毒灭活疫苗为主;同时,还有新城疫病毒重组禽流感病毒载体疫苗。而传染性法氏囊病的防治以弱毒活疫苗和全病毒灭活疫苗为主。由于病毒的不断变异和规模化养殖的需求不断提升,一些新型的疫苗逐渐被开发来克服传统疫苗存在的不足。重组弱毒活疫苗因其一苗多防、生产成本低等优势越来越受到重视。鸭瘟病毒(Duck Enteritis Virus,DEV)基因组容量大,可供外源基因插入的复制非必需区多。前期研究发现,表达H5N1亚型禽流感病毒HA基因的重组鸭瘟病毒rDEV-us78HA较之传统灭活疫苗,能诱导更为快速的免疫保护,且在鸡体内不复制不排毒,安全性高。证明DEV疫苗株是鸡形目禽类良好重组疫苗载体。本研究探索以鸭瘟病毒为载体研制在鸡中使用的禽流感和传染性法氏囊病疫苗及二联疫苗。将A/Chicken/Guizhou/4/2013(H5N1)(GZ/4)的HA基因、vvIBDV(HLJ-0504)的VP2基因以内部核糖体进入位点(Internal ribosome entry site,IRES)序列串联,即以HA-IRES-VP2和VP2-IRES-HA方式串联。将HA和VP2单基因片段和串联后的基因片段分别克隆入pENTR sv40载体中;再利用Gateway LR克隆技术将sv40-HA、sv40-VP2、sv40-HA/VP2和sv40-VP2/HA表达框架分别克隆到T-us78Kan ccdB粘粒中,并用重组的T粘粒与鸭瘟拯救系统其他粘粒共转染CEF,分别拯救出在鸭瘟病毒基因组中US7和US8基因之间插入目的基因的四株重组病毒rDEV H5-8、rDEV VP2、rDEV-HA/VP2和rDEV-VP2/HA。经系统的体外实验评价表明,插入的外源基因能稳定遗传和表达,且不影响重组病毒在鸡胚成纤维细胞中的复制。我们对重组病毒的免疫效力进行了评估,将不同重组病毒分别以10、10、10TCID免疫3周龄SPF鸡,免疫后第2周分别用100 LD的H5亚型禽流感强毒GZ/4及100 LD vvIBDV(HLJ-0504)攻击。结果显示,重组病毒rDEV H5-8诱导的对H5亚型禽流感强毒的最小免疫剂量为10 TCID,rDEV VP2诱导的对vvIBDV的最小免疫剂量为10 TCID,而rDEV-HA/VP2和rDEV-VP2/HA三个剂量组均无法诱导有效的对H5 AIV强毒或vvIBDV的免疫保护。重组疫苗免疫后第2周抗体检测结果显示,rDEV H5-8三组鸡HI抗体全部转阳,抗体平均值在4 Log及以上;rDEV-HA/VP2免疫的三组鸡均只有部分鸡的HI抗体转阳;rDEV-VP2/HA免疫组中未检测到HI抗体。rDEV VP2、rDEV-HA/VP2和rDEV-VP2/HA三株重组病毒免疫的鸡中均未检测到IBDV抗体。为了进一步探讨重组病毒的免疫效力,重组病毒rDEV H5-8、rDEV VP2以10 TCID,及rDEV H5-8和rDEV VP2各10 TCID混合分别免疫3周龄SPF鸡。免疫后1、2、5周分别用100LD的GZ/4及100 LD的HLJ-0504攻击,并用市售IBDV疫苗威力克和Gt株作为IBDV的对照组。结果显示,rDEV H5-8免疫后1周就能诱导对H5 AIV强毒的完全免疫保护,不发病,不排毒,不死亡;HI抗体第2周全部转阳。rDEV VP2免疫后用vvIBDV攻毒,不能完全避免法氏囊的病理性损伤,但免疫后第2周可诱导100%保护;IBDV抗体观察至第5周,未见转阳。Gt株活疫苗免疫后1周诱导100%保护,法氏囊轻度萎缩,但无其他病理性变化;第五周时抗体转阳率40%。威力克免疫后1周即诱导对vvIBDV的完全免疫保护,法氏囊不萎缩,无病理变化;免疫后第2周抗体全部转阳。rDEV H5-8和rDEV VP2混合免疫后第5周可以诱导对vvIBDV和AIV 100%的免疫保护,不能完全避免法氏囊的病理性损伤,诱导抗体水平比单独免疫组略低。而rDEV-HA

关键词：禽流感传染性法氏囊病鸭瘟病毒载体疫苗

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孔雀石绿在草鱼体内的代谢及残留研究

孔雀石绿在草鱼体内的代谢及残留研究

作者：李爱心西南大学

学位级别：硕士

孔雀石绿(MG)是一种合成的三苯甲烷类工业染料,由于其抗菌效果好,价格便宜,容易获得,曾被广泛地用于水产养殖中。但是由于其具有潜在的致癌作用,已经被许多国家列为禁用药。目前,孔雀石绿被非法用于水产品的养殖和运输过程中的现象仍有... 详细信息

孔雀石绿(MG)是一种合成的三苯甲烷类工业染料,由于其抗菌效果好,价格便宜,容易获得,曾被广泛地用于水产养殖中。但是由于其具有潜在的致癌作用,已经被许多国家列为禁用药。目前,孔雀石绿被非法用于水产品的养殖和运输过程中的现象仍有存在,因此,加强对该药的检测监管,优化其检测方法,研究其在主要水产品中的代谢规律势在必行。本研究依据孔雀石绿(MG)和隐色孔雀石绿(LMG)的理化性质,建立了高效液相色谱可见光检测法(HPLC-VIS)和高效液相色谱紫外光检测法(HPLC-UV),前一种方法是加柱后氧化柱,将隐色孔雀石绿氧化为孔雀石绿,利用其洗脱时间不同,从而同时检测两种物质;后一种方法对隐色孔雀石绿的检测非常灵敏,且不用氧化柱,流动相可用甲醇,操作过程简单且节约成本。在检测草鱼肌肉样品时,用HPLC-VIS检测法,MG和LMG的外标法线性方程分别为:y=150986x-389.38和y=67995x-175.77,相关系数分别为:0.9995和0.9993,线性范围:0.001～0.1mg/kg;用HPLC-UV检测法,MG和LMG的外标法线性方程分别为:y=57138x-3786.4和y=179901x-1199.7,相关系数分别为:0.9927和0.9998,线性范围分别为:0.01～0.1mg/kg和0.001～0.1mg/kg。在检测草鱼血液样品时,用HPLC-VIS检测法,MG和LMG的外标法线性方程分别为:y=139259x-182.99和y=60093x-149.97,相关系数分别为:0.9991和0.9996,线性范围:0.005～0.5 mg/kg;用HPLC-UV检测法,MG和LMG的外标法线性方程分别为:y=56401x-3825.3和y=181863x-981.91,相关系数分别为:0.9903和0.9985,线性范围分别为:0.05～0.5 mg/kg和0.005～0.5 mg/kg。总之,HPLC—VIS检测法对MG和LMG都有较强的检测灵敏性,HPLC—UV检测法对LMG的检测灵敏度高。本研究优化了草鱼肌肉和血液样品的前处理方法,采用乙腈提取,二氯甲烷反萃取净化和离心除脂,35℃减压旋蒸浓缩的方法。此方法操作简便,在对肌肉样品和血液样品进行处理后检测,HPLC-VIS检测法中孔雀石绿的相对回收率范围在79.66%～98.341%之间,隐色孔雀石绿的相对回收率范围在75.150%～103.6435%之间;HPLC-UV检测法中孔雀石绿的相对回收率范围在68.1355%～99.6754%之间,隐色孔雀石绿的相对回收率范围在76.1725%～97.0892%之间。符合《兽药残留试验技术规范(试行)》的规定,该方法的回收率在60%～93%之间,符合残留检测的要求。对草鱼肌肉和血液样品的HPLC-VIS和HPLC-UV检测法所测得的日内精密度均小于3,日间精密度均小于8,能够满足检测要求。本研究先用HPLC-UV检测法研究了肌注孔雀石绿后,草鱼血液中孔雀石绿和隐色孔雀石绿的代谢规律。发现草鱼在注射孔雀石绿15分钟后,在血液中可同时检测到孔雀石绿和隐色孔雀石绿。孔雀石绿在血液中浓度远远高于注射浓度,表明其在鱼体内吸收、分布、代谢都很迅速,并且可在体内蓄积。在用药15分钟后草鱼血液中隐色孔雀石绿的浓度就达到0.54mg/kg,2小时后其浓度比孔雀石绿高,其消除时间比孔雀石绿长,3天时其在血液中的浓度仍然达到0.51mg/kg。在268nm的检测波长下未见到其他明显的代谢产物,可以初步判定隐色孔雀石绿是孔雀石绿在草鱼体内的主要代谢产物。模拟生产实践中常用的用药方式:0.3 mg/kg的MG药浴1小时后,检测孔雀石绿在草鱼肌肉和血液中的时间-浓度变化。肌肉组织和血液中MG的峰浓度C分别达到1.80318mg/kg和1.37742mg/kg,远远高于用药浓度,与注射用药结果相同,表明MG在水产品肌肉和血液组织中都有蓄积作用。孔雀石绿在草鱼肌肉和血液中的吸收半衰期T1/2分别为:2.74999小时和1.93770小时,分布半衰期T2/2分别为:0.20468小时和0.17945小时,消除半衰期T3/2分别为:100.38503小时和46.03478小时,表明孔雀石绿具有较强的血管外分布能力,孔雀石绿在草鱼肌肉和血液组织中的吸收分布快,但消除较慢。孔雀石绿在草鱼肌肉和血液中持续了30天,隐色孔雀石绿在草鱼血液和肌肉中分别持续了45天和70天。本研究中草鱼在0.3 mg/kg的MG中药浴1小时后,其肌肉和血液中LMG的浓度分别达到:0.006 mg/kg和0.0053 mg/kg。因此LMG完全可以做为草鱼体内的残留标示物。HPLV-UV检测法可用于草鱼肌肉中孔雀石绿和隐色孔雀石绿的残留检测。采用HPLC-UV检测法对

关键词：孔雀石绿隐色孔雀石绿代谢残留

互联网企业回归路径及效应研究 ——以世纪佳缘回归百合网为例

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互联网企业回归路径及效应研究 ——以...

作者：李爱心广州大学

学位级别：硕士

互联网企业的知识密度高,获取资本的基础通常是人才和知识,人才与知识结合构思出新颖的想法,再通过尖端设备和数据库等资源获得收益。大多数互联网企业前期处于亏损的阶段并不能符合A股的上市条件,但是美国市场对于互联网、科技企业比... 详细信息

互联网企业的知识密度高,获取资本的基础通常是人才和知识,人才与知识结合构思出新颖的想法,再通过尖端设备和数据库等资源获得收益。大多数互联网企业前期处于亏损的阶段并不能符合A股的上市条件,但是美国市场对于互联网、科技企业比较看好,估值也相对较高,因此大多数互联网企业选择远赴海外上市。然而中概股在境外市场的情况并不是一帆风顺的,当美国形成做空中概股产业链的时候,中概股在美国市场遭受信任危机。很多企业把握市场时机之后又纷纷展开退市计划,试图重新回归境内资本市场。世纪佳缘作为中概股回归热潮中的一员,于2016年5月13日与百合网海外的子公司Love World Inc.和Future World Inc.签订协议,以天津幸福时代的全资子公司的身份间接完成了回归。这标志着世纪佳缘以吸收合并的方式合并百合网在境外的（特殊目的）全资子公司,成为第一家以并购方式回归新三板的中概股。基于世纪佳缘成功回归百合网的案例,归纳总结了百合网并购世纪佳缘前后的一系列操作,整理了百合网和世纪佳缘并购事件前后的股权结构,针对其选择以并购百合网回归新三板的回归路径,与其他回归路径作对比,综合分析其选择这一路径的优势。同时在并购效果的分析部分运用EVA、财务指标法以及Z值评分模型进行,通过上述方法结合百合网2013-2018年的年报数据,对百合网并购世纪佳缘之后的绩效进行多方位的剖析。分析发现世纪佳缘采用的回归路径是并购回归新三板,并且选择并购的公司属于同行业公司。该路径的选取使得世纪佳缘尽快退出美国市场,用较低的成本回归国内资本市场,并且在行业产生影响力。而分析百合网并购后的财务报表发现,在2016年（并购发生当年）及2017年,财务数据有明显上升趋势,但并未发现有继续向好的趋势,因此后续业绩还有待继续观察。结合分析结果,为监管部门、企业和个人投资者提供建议,期望为互联网企业回归境内资本市场的方式做出一定的补充,为监管部门进一步完善规章制度提供参考。

关键词：互联网企业并购绩效回归路径

植被EVI动态变化及其对气候变化的响应分析

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植被EVI动态变化及其对气候变化的响应分析

作者：李爱心重庆大学

学位级别：硕士

近年来,由于全球生态环境逐渐恶化,植被变化特征与气候变化之间的关系已成为环境领域的研究热点。本文基于MODIS-EVI数据和气候数据,利用Mann-Kendall检验、Hurst指数、偏最小二乘分析法和空间偏最小二乘自回归法等研究方法,探讨了西南... 详细信息

近年来,由于全球生态环境逐渐恶化,植被变化特征与气候变化之间的关系已成为环境领域的研究热点。本文基于MODIS-EVI数据和气候数据,利用Mann-Kendall检验、Hurst指数、偏最小二乘分析法和空间偏最小二乘自回归法等研究方法,探讨了西南样区和东北样区2000—2019年植被EVI和气象因子的时空变化特征及植被EVI对气象因子的响应。主要结论如下:(1)时间上,西南样区和东北样区夏季植被EVI分别位于0.37—0.44、0.43—0.51之间,两个样区降水量的时间动态变化都大于气温。空间上,西南样区植被由西向东递增,降水量和气温由西北方向东南方递减。东北样区植被EVI平均值在0.5左右。高植被覆盖区域主要位于北部和南部,低植被区域主要分布于东北平原。植被覆盖变化趋势及趋势可持续性上,西南样区改善区占76.1%,退化区占9%。东北样区显著改善区占63%,退化区占5.2%。西南样区和东北样区大部分区域的植被覆盖变化趋势呈反持续性。(2)使用SPLSAR得出西南样区和东北样区EVI之间的空间相关系数分别为0.15和0.13,在西南样区使用PLS得出MSE和方差分别为0.68和0.62,而使用SPLSAR得出分别为0.26和0.30。在东北样区使用PLS得出MSE和方差分别为0.26和0.42,而使用SPLSAR得出分别为0.23和0.25。对两个地区使用SPLSAR计算出的回归系数方差都小于使用PLS。因此,利用考虑了响应变量间空间自相关性的SPLSAR进行植被覆盖与气象因子相关性分析更具科学性和说服力。当响应变量间空间自相关效应越强,使用SPLSAR进行植被覆盖与气象因子相关性研究越可靠。(3)利用SPLSAR得出西南样区气温和东北样区降水量对各自所在研究区植被EVI有显著的解释意义,东北样区降水量对EVI影响大于气温,降水量对西南样区EVI基本不具有解释意义。时间上,西南样区降水量对植被的重要性在下降,而气温对植被的重要性程度逐渐处于稳定且保持较高状态。东北样区降水量和气温都对植被有重要的作用,两者交替呈现出显著作用。空间上,西南样区大部分区域的降水量对植被呈负面影响,而气温多呈正面影响。东北样区西南方向的降水量对植被为正面影响,而气温呈负面影响。

关键词：空间偏最小二乘自回归偏最小二乘分析空间自相关降水气温

外国影视作品影响下的越南青少年教育问题 ——以金庸作品为例

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外国影视作品影响下的越南青少年教育问题 ...

作者：李爱心广西民族大学

学位级别：硕士

随着全球经济一体化的到来,外国影视剧作品不断涌入,在给国人带来丰富娱乐的同时,也对正在成长中的越南青少年的思想及行为带来了诸多的影响。文中以金庸作品为例,全面地分析了金庸影视剧及其转生文化产品——金庸网络游戏版本的播放或... 详细信息

随着全球经济一体化的到来,外国影视剧作品不断涌入,在给国人带来丰富娱乐的同时,也对正在成长中的越南青少年的思想及行为带来了诸多的影响。文中以金庸作品为例,全面地分析了金庸影视剧及其转生文化产品——金庸网络游戏版本的播放或使用给越南青少年带来的正面影响和负面影响,由此引发对外国影视剧影响下的越南青少年的教育问题进行思考。在此基础上,文中提出了关于如何对引进影视作品进行选择,如何根据青少年的活动特点安排播放时段,如何对引进的影视剧组织评论,学校与家长、与电视台如何配合开展教育,以及如何利用原声影视剧作为部分外语补充教材等一系列相应的对策,以及达到充分利用外来影视剧作品,取得良好的教育效果。

关键词：外国影视作品越南青少年教育

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气象因子对植被指数影响的偏最小二乘分析

测绘科学 2019年第12期44卷 158-161,183页

作者：张亚利李爱心高攀重庆大学土木工程学院

针对相关分析在研究气象因子对植被影响时系统性不强的问题,该文以2009—2016年贵州省EVI时序数据和34个气象站点的观测数据为依据,采用偏最小二乘方法分析了各气象因子对EVI的影响程度。结果表明:当月的水汽压和温度以及前推一月的降... 详细信息

针对相关分析在研究气象因子对植被影响时系统性不强的问题,该文以2009—2016年贵州省EVI时序数据和34个气象站点的观测数据为依据,采用偏最小二乘方法分析了各气象因子对EVI的影响程度。结果表明:当月的水汽压和温度以及前推一月的降水、水汽压和温度是贵州植被变化的关键因素,而前推一月日照和当月降水对植被变化的影响不显著。气象因子对EVI影响的空间差异表明:降水主要影响贵州西部、南部和西南部地区,日照主要影响东南部地区,而水汽压和温度则影响贵州全境。

关键词：增强型植被指数偏最小二乘植被变化贵州省

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孔雀石绿在水产品中残留检测的研究

安徽农业科学 2008年第1期36卷 102-103,121页

作者：李爱心李逐波李军锋何小燕西南大学药学院重庆400716 重庆市科学技术信息中心重庆401147

[目的]为了对孔雀石绿及其代谢产物隐色孔雀石绿的残留研究有更全面、更深入的了解,并为进一步开展孔雀石绿残留检测工作提供参考。[方法]从化学检测法和生物检测法2个方面分别综述了孔雀石绿在水产品中残留检测的主要方法,包括薄层色... 详细信息

[目的]为了对孔雀石绿及其代谢产物隐色孔雀石绿的残留研究有更全面、更深入的了解,并为进一步开展孔雀石绿残留检测工作提供参考。[方法]从化学检测法和生物检测法2个方面分别综述了孔雀石绿在水产品中残留检测的主要方法,包括薄层色谱法、分光光度法、共振瑞利散射法、气质联用法、高效液相色谱法和酶联免疫法等。[结果]由于MG和LMG的活性很强,其前处理过程复杂,有待进一步简化并提高回收率。同时,MG和LMG的最大吸收波长1个在可见光范围,1个在紫外范围。给其同时测定带来了一定的难度,因而其残留分析过程比较复杂。[结论]基层的大规模筛选检测以免疫学检测方法更适用更有应用前景,但国际公认的确证方法仍是化学分析法。

关键词：孔雀石绿隐色孔雀石绿残留捡测

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新时代新商业融合发展的新特点

上海商业 2019年第9期 31-32页

作者：李爱心

新动态:传统零售加速接轨智慧零售前段时间,家乐福卖给了苏宁,价格不贵,但也不便宜。48个亿,买了80%的股份。与其说是外资巨头在华撤退,不如说是智能化零售的前沿发展让这些曾经领先于全球的海外零售巨头,有点跟不上步伐。最近,叶国富... 详细信息

新动态:传统零售加速接轨智慧零售前段时间,家乐福卖给了苏宁,价格不贵,但也不便宜。48个亿,买了80%的股份。与其说是外资巨头在华撤退,不如说是智能化零售的前沿发展让这些曾经领先于全球的海外零售巨头,有点跟不上步伐。最近,叶国富的名创优品以其"三高"(高颜值、高品质、高效率)+"三低"(低成本、低毛利、低价格)的核心能力也在筹备IPO,或拟通过IPO募资10亿美元。

关键词：电商网站传统零售中国银联新零售名创优品商业形态智慧零售无界化互联网消费零售额实物商品沃尔玛智能产品实体店平台型企业

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开封地区奶牛肠道寄生虫感染情况调查

畜牧与兽医 2014年第12期46卷 84-87页

作者：王海燕齐萌李爱心罗楠楠周欢汪明中国农业大学动物医学院北京100083 河南农业职业学院动物科学系河南郑州451450 河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002

为了解开封地区奶牛肠道寄生虫感染情况,采用离心沉淀法、卢戈氏碘液染色法和饱和蔗糖溶液漂浮法对4个奶牛养殖场和5个奶牛养殖小区共622份新鲜粪便样本进行检查。共检出7种肠道寄生虫,总感染率为41.6%,以球虫为主要感染虫种,感染率33.... 详细信息

为了解开封地区奶牛肠道寄生虫感染情况,采用离心沉淀法、卢戈氏碘液染色法和饱和蔗糖溶液漂浮法对4个奶牛养殖场和5个奶牛养殖小区共622份新鲜粪便样本进行检查。共检出7种肠道寄生虫,总感染率为41.6%,以球虫为主要感染虫种,感染率33.4%,贾第虫、隐孢子虫、环孢子虫、食道口线虫、鞭虫和莫尼茨绦虫感染率分别为3.4%、8.4%、0.3%、0.8%、0.6%和0.3%。结果分析显示,不同调查点奶牛肠道寄生虫感染率统计学差异极显著(P<0.01);不同年龄段奶牛肠道寄生虫感染率统计学差异极显著(P<0.01);不同饲养条件下奶牛肠道寄生虫感染率统计学差异极显著(P<0.01)。

关键词：奶牛肠道寄生虫调查开封

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