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作者：李焕苓福建农林大学

学位级别：硕士

荔枝(Litchi chinensis)在我国栽培历史至少有2000多年,是我国南方特色的热带珍贵果树之一;同时,在我国南方,荔枝还是重要的热带南亚热带风光代表性的风景树,在城市园林绿化和风景区得到广泛应用。古树、名木在园林景观中往往是一道无... 详细信息

荔枝(Litchi chinensis)在我国栽培历史至少有2000多年,是我国南方特色的热带珍贵果树之一;同时,在我国南方,荔枝还是重要的热带南亚热带风光代表性的风景树,在城市园林绿化和风景区得到广泛应用。古树、名木在园林景观中往往是一道无与伦比的风景线,是历代陵园、名胜古迹的佳景之一,也是一个城市重要的自然和人文景观;古树的基因图谱往往有其特殊性,具有长寿基因和抗性基因以及其他有价值的基因,是植物遗传改良的最宝贵的种质材料。福州市荔枝古树资源丰富,在荔枝史上的占重要地位。鉴于此,我们首先采用RAPD分子标记对福州市荔枝古树资源进行遗传多样性分析,进一步对福州市荔枝古树的核心种质进行离体限制生长保存研究,并采用分子生物学和蛋白组学手段对荔枝古树离体保存机理进行研究。主要研究结果如下:1.福州市荔枝古树遗传多样性的RAPD分析本试验采用RAPD技术对福州市66份荔枝古树资源(含2份据传说是福州西湖“十八娘”古荔枝后代的资源)进行了遗传多样性分析。研究结果表明:16个随机引物共产生232条RAPD带,其中216条为多态性带,占总带数的93.10%,表明66份荔枝古树资源有丰富的多样性。根据扩增条带多态性,利用UPGMA构建了荔枝古树的亲缘关系树状图,遗传距离为0.000-1.000。当D=0.909时,66份荔枝古树资源可以分为3组;当D=0.746时,分为9组;当D=0.578时,可归为18组,福州市区荔枝古树可分为17组,另1组为2份据传说是福州西湖十八娘古荔枝后代的资源。同一地方的荔枝古树基本可以划分在一起,但也有个别划分在不同组,亲缘关系较远,说明福州市区荔枝古树群体存在一定的遗传变异。根据荔枝古树RAPD条带的代表性,结合考虑树龄和知名度等因素,初步确定17个荔枝古树为福州市荔枝古树的核心种质。2.福州市荔枝古树种质资源的离体限制生长保存及体胚发生通过花药培养诱导得到了17个荔枝古树核心种质的胚性愈伤组织(emberyogenic callus, EC),并确定最佳离体保存方案为:接种量每瓶50 mg,分为3团接种于附加2,4-D1.0 m g?L-1、甘露醇2%、蔗糖20 g?L-1、琼脂8 g?L-1的MS培养基上,在20℃,pH 5.8,暗培养,可以将荔枝古树EC的继代周期延长至125 d。保存后的荔枝古树EC有强烈的体胚发生能力及植株再生能力。遗传稳定性进行RAPD检测表明:限制生长保存后荔枝古树EC的变异率为7.70%。3.福州市荔枝古树EC的GPX活性研究及其基因的克隆以常规继代保存和最佳离体保存的荔枝古树EC为材料,进行了保存过程中GPX活性变化的研究。结果表明:最佳离体保存和常规继代保存下,荔枝古树愈伤组织保存过程中的GPX活性呈规律表达,均出现两个高峰值,说明荔枝古树EC的GPX与维持荔枝古树胚性愈伤组织的离体保存密切相关。第一个GPX酶活性最高值的出现与胚性愈伤组织大量增殖有关,是生长高峰即将到来的标志。第2个GPX酶活性最高值的出现是愈伤组织进入衰老期的象征。但在最佳保存方案下,荔枝古树胚性愈伤组织的两个GPX高峰期的出现要分别比对照(常规继代保存)下迟得多。从西禅寺“宋荔”花药EC克隆获得抗性基因GPX的cDNA和DNA全长。其cDNA开放阅读框大小是507 bp(登录号:FJ172343);其DNA全长大小是1809 bp(登录号:FJ465145),由5个外显子和4个内含子组成。同时,应用生物信息学方法分析了GPX基因编码的蛋白质的理化性质、亲疏水特性、二级和三级结构、跨膜结构、结构功能域、信号肽、磷酸化位点预测、模序(Motif)分析、亚细胞定位、分子进化等进行预测分析。4.福州市荔枝古树胚性愈伤组织离体保存过程中蛋白组学研究采用固相pH梯度凝胶双向电泳技术和生物质谱(肽质量指纹谱PMF和串联质谱)技术对常规继代保存过程(15 d、20 d、30 d)中的荔枝古树胚性愈伤组织进行蛋白组学研究,并以常规继代保存30 d的EC和最佳离体保存方案下30 d的EC进行差异蛋白组学研究。(1)荔枝古树EC离体保存过程中蛋白组分、MW和pI变化荔枝古树EC在常规保存过程(15 d、20 d、30 d)和最佳保存方案保存(30 d)中的蛋白组分、MW和pI变化为:①随着培养天数的增加,蛋白点数目变化是先下降后上升趋势,分别为1311、1256、1441个;在最佳保存方案的蛋白点数目少于常规保存的蛋白点数目,仅为1023个,表明在快速生长和接近衰老时期蛋白质合成活跃,而在最佳保存方案则蛋白合成相对较少,处于“休眠”状态。②随着培养天数的增加,小分子量(<15KD)蛋白所占比例

关键词：荔枝古树 RAPD 胚性愈伤组织限制生长保存 GPX 基因克隆蛋白质组学

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氨基酸对荔枝愈伤组织增殖及体胚发生体系优化的研究

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果树学报 2023年第11期40卷 2466-2476页

作者：王果刘耀婷王家保李焕苓中国热带农业科学院环境与植物保护研究所·农业农村部儋州农业环境科学观测实验站海南儋州571737 海南大学热带作物学院海口570228

【目的】探究氨基酸对荔枝愈伤组织增殖及体胚诱导的影响。【方法】采用L9(34)正交设计,分别在妃子笑荔枝愈伤组织继代及体胚诱导阶段添加不同氨基酸,比较其对愈伤组织增殖及体胚诱导的影响。【结果】在愈伤组织增殖阶段培养基中添加氨... 详细信息

【目的】探究氨基酸对荔枝愈伤组织增殖及体胚诱导的影响。【方法】采用L9(34)正交设计,分别在妃子笑荔枝愈伤组织继代及体胚诱导阶段添加不同氨基酸,比较其对愈伤组织增殖及体胚诱导的影响。【结果】在愈伤组织增殖阶段培养基中添加氨基酸均显著提高愈伤组织增殖率,最优处理为基础继代培养基添加0.1 g·L^(-1)γ-氨基丁酸+0.2 g·L^(-1)谷氨酰胺,愈伤组织增殖率为初始接种量的14.04倍。与对照相比,氨基酸处理组的胚性愈伤组织淡黄,颗粒较小,细胞呈椭圆形,细胞质浓厚,多为正在分裂状态;非胚性愈伤组织浅白,水渍严重,着生于顶部或者边缘,易于剔除。在愈伤组织增殖阶段培养基中添加γ-氨基丁酸、谷氨酰胺和丙氨酸对后续的体胚发生及萌发影响极显著(p<0.01),最优配方为基础继代培养基添加0.3 g·L^(-1)γ-氨基丁酸+0.4 g·L^(-1)谷氨酰胺+0.05 g·L^(-1)丙氨酸,每克愈伤组织可获得461个体胚,77株组培苗。在体胚发生阶段培养基中添加氨基酸,获得的体胚发生及萌发最优配方为基础诱导培养基添加0.3 g·L^(-1)γ-氨基丁酸+0.4 g·L^(-1)谷氨酰胺+0.05 g·L^(-1)丙氨酸,每克愈伤组织可获得270个体胚,72株组培苗。【结论】氨基酸可调节愈伤组织胚性,提高愈伤组织增殖率,促进体胚发生及萌发。

关键词：荔枝愈伤组织体胚发生体胚萌发氨基酸

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2个海南荔枝稀优品种花药培养诱导胚性愈伤组织的研究

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热带作物学报 2013年第4期34卷 669-674页

作者：王果李焕苓王家保海南大学农学院海南海口570228 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所海南海口571101

以紫娘喜和无核荔枝花药为外植体,采用L16(44)正交表,探讨不同生长调节剂及组合对荔枝愈伤组织诱导率及质量的影响,以期建立紫娘喜和无核荔枝花药愈伤组织诱导技术体系。结果表明:以MS+0.4 g/L水解乳蛋白(LH)+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂为基... 详细信息

以紫娘喜和无核荔枝花药为外植体,采用L16(44)正交表,探讨不同生长调节剂及组合对荔枝愈伤组织诱导率及质量的影响,以期建立紫娘喜和无核荔枝花药愈伤组织诱导技术体系。结果表明:以MS+0.4 g/L水解乳蛋白(LH)+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂为基本培养基,紫娘喜花药在添加1 mg/L KT、0.5 mg/L NAA和2 mg/L 2,4-D的培养基上诱导胚性愈伤组织效果较好;无核荔枝花药在添加0.5 mg/L BA、0.5 mg/L NAA、3 mg/L 2,4-D培养基上诱导胚性愈伤组织效果较好。

关键词：荔枝花药组织培养

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黄花青花菜杂种1代的离体繁殖

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福建农林大学学报（自然科学版） 2010年第1期39卷 30-36页

作者：李焕苓林顺孚赖钟雄福建农林大学园艺植物生物工程研究所福建福州350002 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所海南儋州571737

以黄花青花菜杂种1代无菌试管苗茎段为材料,进行增殖、生根、移栽等试验.结果表明:茎段增殖的适宜培养基为MS+0.2 mg.L-1BA+0.01 mg.L-1NAA,增殖系数为2.95,苗质量等级为1.67;诱导生根的适宜培养基为1/2MS+0.2 mg.L-1IBA,生根率为94.45%... 详细信息

以黄花青花菜杂种1代无菌试管苗茎段为材料,进行增殖、生根、移栽等试验.结果表明:茎段增殖的适宜培养基为MS+0.2 mg.L-1BA+0.01 mg.L-1NAA,增殖系数为2.95,苗质量等级为1.67;诱导生根的适宜培养基为1/2MS+0.2 mg.L-1IBA,生根率为94.45%,苗质量等级为3.00;长势良好的植株,株高4-5 cm,根数4-5条,根长2-3 cm,移栽至泥炭土∶蛭石∶河沙=1∶1∶1的混合基质中,成活率达83.33%.

关键词：黄花青花菜茎段离体培养快繁

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2个荔枝品种体胚发生过程中几种抗氧化酶与多胺氧化酶活性的变化

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热带作物学报 2018年第4期39卷 681-686页

作者：吉训志李焕苓王果王家保中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所海南海口571101 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所海南海口571101 海南大学热带农林学院海南海口570228

以‘新球蜜荔’和‘大丁香’2个荔枝品种胚性愈伤组织为材料,研究了‘新球蜜荔’(XQTD)和‘大丁香’(DDXTD)接种在TD(MS+0.1 mg/L NAA+0.5 mg/L TDZ+0.1 g/L肌醇+0.4 g/L水解乳蛋白(LH)+100 mL/L椰汁+60g/L蔗糖+10 g/L琼脂)培养基与‘... 详细信息

以‘新球蜜荔’和‘大丁香’2个荔枝品种胚性愈伤组织为材料,研究了‘新球蜜荔’(XQTD)和‘大丁香’(DDXTD)接种在TD(MS+0.1 mg/L NAA+0.5 mg/L TDZ+0.1 g/L肌醇+0.4 g/L水解乳蛋白(LH)+100 mL/L椰汁+60g/L蔗糖+10 g/L琼脂)培养基与‘新球蜜荔’接种在TX(MS+0.1 mg/L NAA+5 mg/L ZT+0.1 g/L肌醇+0.4 g/L水解乳蛋白(LH)+100 ml/L椰汁+60 g/L蔗糖+10 g/L琼脂)培养基(XQTX)上各培养物体胚发生过程中抗氧化酶与多胺氧化酶活性变化。结果表明:体胚发生过程中,三者的可溶性蛋白含量变化都呈单峰曲线,峰值出现在第6天,在前12 d的培养中,XQTD高于XQTX,仅在第9天,DDXTD高于XQTD。三者的丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性都变化平缓且差异不大。三者的过氧化物酶(POD)活性变化都呈单峰曲线,XQTD的峰值出现在第9天,其余出现在第12天,体胚发生过程中DDXTD最高。XQTD和XQTX的过氧化氢酶(CAT)活性都呈先降后升趋势,而DDXTD只是后期下降。三者的多胺氧化酶(PAO)活性变化都呈先降后升趋势,在前15 d的培养中,XQTX和DDXTD都低于XQTD,且DDXTD在前6 d里基本无变化。培养物中可溶性蛋白含量、POD和PAO活性变化可能与‘新球蜜荔’及‘大丁香’的体胚发生效率差异有关。

关键词：荔枝体胚发生抗氧化物酶多胺氧化酶

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荔枝剪枝还田腐解及养分释放特征研究

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广东农业科学 2020年第4期47卷 77-84页

作者：侯宪文张军符瑞益李焕苓李光义中国热带农业科学院环境与植物保护研究所海南海口571101 农业农村部儋州农业环境科学观测实验站海南儋州571737 米易县农业农村局四川米易617200

【目的】研究荔枝剪枝在土壤中的腐解和养分释放特征,为荔枝剪枝还田利用和有机替代技术的研究提供理论基础,也为其他果树剪枝的合理利用提供参考。【方法】以粉碎荔枝枝条和叶片为供试材料,应用网袋法研究其在覆土和覆盖处理下干物质... 详细信息

【目的】研究荔枝剪枝在土壤中的腐解和养分释放特征,为荔枝剪枝还田利用和有机替代技术的研究提供理论基础,也为其他果树剪枝的合理利用提供参考。【方法】以粉碎荔枝枝条和叶片为供试材料,应用网袋法研究其在覆土和覆盖处理下干物质、粗纤维、全氮、全磷、全钾质量变化。【结果】荔枝枝条和叶片在处理0~30 d腐解速率快,处理30 d 时,荔枝枝条在覆土和覆盖处理下质量累积减少率分别为20.8%、13.9%;荔枝叶片在覆土和覆盖处理下质量累积减少率分别为27.8%、20.9%;荔枝枝条处理240 d质量累积减少率分别为51.7%、38.8%,荔枝叶片处理150 d质量累积减少率分别为55.2%、42.5%,表现为覆土>覆盖。在整个腐解过程中,荔枝枝条的养分释放速率表现为K>P>N,荔枝叶片的养分释放速率表现为K>N>P。荔枝枝条和叶片中的全钾在覆土处理下累积释放率均达90%以上。【结论】荔枝剪枝还田利用,可以采用将荔枝剪枝粉碎后先覆盖果园再适时翻耕入土的管理方式,要适当减少基肥中钾、磷肥用量,适时补充氮肥。

关键词：荔枝土壤腐解特征养分释放特征土壤肥力

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外源多胺对荔枝愈伤组织增殖及体胚发生的作用

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果树学报 2021年第12期38卷 2135-2147页

作者：王果刘耀婷李焕苓李芳王树军王家保中国热带农业科学院环境与植物保护研究所·农业农村部儋州农业环境科学观测实验站海南儋州571737 海南大学热带作物学院海口570228

【目的】研究多胺[腐胺(Put)、亚精胺(Spd)、精胺(Spm)]对愈伤组织增殖及体胚诱导的作用,为揭示多胺在荔枝离体再生中的功能提供依据。【方法】采用单因素试验设计,分别在愈伤组织增殖及体胚诱导过程中添加多胺及其合成抑制剂[D-精氨酸(... 详细信息

【目的】研究多胺[腐胺(Put)、亚精胺(Spd)、精胺(Spm)]对愈伤组织增殖及体胚诱导的作用,为揭示多胺在荔枝离体再生中的功能提供依据。【方法】采用单因素试验设计,分别在愈伤组织增殖及体胚诱导过程中添加多胺及其合成抑制剂[D-精氨酸(D-Arg)、环己胺(Cha)],比较不同处理下妃子笑荔枝愈伤组织增殖及体胚诱导差异。【结果】低浓度多胺或高浓度多胺合成抑制剂促进愈伤组织增殖,愈伤组织增殖量达显著水平,胚性愈伤组织(EC)与非胚性愈伤组织(NEC)颜色状态界限更加明显。与对照相比,经过多胺处理增殖的愈伤组织乳白胚诱导数及萌发率均降低,而多胺合成抑制剂处理增殖的愈伤组织乳白胚诱导数及萌发率随着多胺合成抑制剂浓度升高而升高,当Cha质量浓度为200 mg·L^(-1)时,乳白胚数量最多,达960个·g^(^(-1)),萌发率29.41%;当D-Arg质量浓度为700 mg·L^(-1)时,乳白胚萌发率最高,为32.35%,胚数量为450个·g^(-1)。体胚诱导培养基上添加多胺及其合成抑制剂对体胚诱导作用差异较大,Spd促进体胚发生作用较明显,当Spd质量浓度为20 mg·L^(-1)时,乳白胚数量为590个·g^(-1),萌发率为30.30%。体胚发生培养基上添加Cha或高浓度D-Arg抑制体胚发生,而添加低浓度D-Arg则促进体胚发生。【结论】在愈伤组织增殖培养基上添加3种多胺可促进愈伤组织增殖并保持胚性,且抑制原胚发生,而Cha及高浓度D-Arg促进原胚发生。体胚诱导培养基中添加低浓度Spd促进体胚分化。

关键词：荔枝愈伤组织体胚发生植株再生多胺

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2个荔枝品种胚性愈伤组织诱导体胚发生过程的细胞学观察

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热带作物学报 2018年第3期39卷 502-506页

作者：吉训志王果李焕苓王家保海南大学热带农林学院海南海口570228 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所海南海口571101

以'新球蜜荔'和'大丁香'2个荔枝品种胚性愈伤组织为材料,利用石蜡切片技术研究了'新球蜜荔'和'大丁香'接种在TD(MS+0.1 mg/L NAA+0.5 mg/L TDZ+0.1 g/L肌醇+0.4 g/L水解乳蛋白(LH)+100 m L/L椰汁+60 g/L蔗糖+10 g/L琼脂)培养基(XQTD和DD... 详细信息

以'新球蜜荔'和'大丁香'2个荔枝品种胚性愈伤组织为材料,利用石蜡切片技术研究了'新球蜜荔'和'大丁香'接种在TD(MS+0.1 mg/L NAA+0.5 mg/L TDZ+0.1 g/L肌醇+0.4 g/L水解乳蛋白(LH)+100 m L/L椰汁+60 g/L蔗糖+10 g/L琼脂)培养基(XQTD和DDXTD)与'新球蜜荔'接种在TX(MS+0.1 mg/L NAA+5 mg/L ZT+0.1 g/L肌醇+0.4 g/L水解乳蛋白(LH)+100 ml/L椰汁+60 g/L蔗糖+10 g/L琼脂)培养基(XQTX)上各培养物体胚发生过程中细胞学变化。结果显示:XQTD从6 d开始变褐,9 d时观察到球状凸起,石蜡切片中观察到球形胚结构,12~21 d时观察到球形胚、心形胚和鱼雷形胚等不同形态体胚;而DDXTD从9 d开始逐渐变褐,15~21 d时石蜡切片中能看到少量的球形胚和心形胚。XQTX在第12 d时观察到有完整原形成层的球形胚,21 d时石蜡切片中观察到子叶形胚。2个荔枝品种的体胚发生过程中都观察到内起源和外起源两种起源方式,体胚发生均为单细胞起源,都经历了球形胚、心形胚、鱼雷形胚和子叶形胚等相似的发育过程。

关键词：荔枝体胚发生细胞学观察基因型

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多胺对荔枝胚性愈伤组织增殖与体胚分化的影响

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广西植物 2024年

作者：王果刘耀婷李焕苓王树军李芳王家保中国热带农业科学院环境与植物保护研究所.农业农村部儋州农业环境科学观测实验站海南大学热带作物学院

为探讨外源多胺（PAs）对荔枝胚性愈伤组织（EC）增殖及体胚分化的影响机制，该研究以“妃子笑”荔枝EC为材料，采用单因素法在增殖培养基中添加腐胺（Put）、亚精胺（Spd）及精胺（Spm），分析了不同PAs处理后EC形态、结构、内源PAs含... 详细信息

为探讨外源多胺（PAs）对荔枝胚性愈伤组织（EC）增殖及体胚分化的影响机制，该研究以“妃子笑”荔枝EC为材料，采用单因素法在增殖培养基中添加腐胺（Put）、亚精胺（Spd）及精胺（Spm），分析了不同PAs处理后EC形态、结构、内源PAs含量及相关酶指标的变化。结果表明：（1）外源Put、Spd和Spm处理均显著提高了EC增殖率，降低了体胚诱导及萌发数量。经外源PAs处理增殖的EC胚性细胞大小较一致，染色深且均匀，多细胞原胚减少，可见已经分化完全的早期子叶胚。（2）外源PAs处理均显著提高了EC中内源PAs含量，其中Put处理EC中各类内源PAs及总PAs含量最高；当在含外源PAs培养基上增殖的EC转入不含外源PAs的培养基上增殖时（恢复培养），EC中的Put含量仍然显著高于对照，内源Spd和Spm则显著降低。（3）外源Put处理显著提高了EC中的鸟氨酸脱羧酶（ODC）、精氨酸脱羧酶（ADC）和二胺氧化酶（DAO）活性，而外源Spd、Spm处理显著降低了EC中的ODC及ADC活性，外源Spd显著提高了多胺氧化酶（PAO）活性；恢复培养后，EC中ADC和DAO活性比恢复培养前显著降低，ODC、PAO无显著性差异。综上认为，外源PAs可以通过调节PAs代谢相关酶活性影响内源PAs含量，进而影响荔枝EC增殖和体胚诱导。该研究结果为进一步研究PAs调节荔枝体胚发生机制，提高荔枝离体再生效率提供了基础。

关键词：荔枝离体再生组织切片多胺酶活性

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古树名木基因资源的挖掘与利用

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国土绿化 2007年第5期 6-7页

作者：赖钟雄李焕苓

一株古树名木,不仅是一部自然与社会发展史,一件珍贵、古老的历史文物,一种人文和自然景观,还是一座优良种源的基因库。但是由于自然或人为等因素的影响,部分古树濒临或已经死亡,某些特有基因就此丢失,造成了无法弥补的损失。因此,如何... 详细信息

一株古树名木,不仅是一部自然与社会发展史,一件珍贵、古老的历史文物,一种人文和自然景观,还是一座优良种源的基因库。但是由于自然或人为等因素的影响,部分古树濒临或已经死亡,某些特有基因就此丢失,造成了无法弥补的损失。因此,如何借助先进技术把古树名木的基因资源保存下来是我们亟待解决的一个问题。

关键词：古树名木基因资源挖掘自然景观历史文物优良种源资源保存发展史

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