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组蛋白H3K14M突变抑制嗜肺军团菌来源甲基转移酶活性

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组蛋白H3K14M突变抑制嗜肺军团菌来源甲基转移酶活性

作者：李添添上海交通大学

学位级别：硕士

第一部分:组蛋白H3K14M突变抑制嗜肺军团菌来源甲基转移酶活性目的:嗜肺军团菌编码表达具有组蛋白甲基转移酶活性的RomA,通过催化细胞中组蛋白的H3K14甲基化（H3K14me）干扰宿主细胞的表观遗传调控,利于自身的复制和增殖。近期研究发现... 详细信息

第一部分:组蛋白H3K14M突变抑制嗜肺军团菌来源甲基转移酶活性目的:嗜肺军团菌编码表达具有组蛋白甲基转移酶活性的RomA,通过催化细胞中组蛋白的H3K14甲基化（H3K14me）干扰宿主细胞的表观遗传调控,利于自身的复制和增殖。近期研究发现组蛋白H3的K-to-M突变能够显著抑制对应的甲基转移酶的活性,因此本研究探讨真核宿主细胞中组蛋白H3上14位赖氨酸突变为甲硫氨酸（H3K14M）突变对嗜肺军团菌分泌的甲基转移酶RomA活性的影响及其内在机制。方法:构建组蛋白H3野生型（H3WT）以及H3K14M、H3K14I和H3K14R突变质粒,慢病毒包装并感染稳定过表达RomA的293T、THP-1等真核细胞。用Western blotting检测并比较带有不同H3K14突变的细胞中内源H3K14位点表观修饰的改变。并利用免疫共沉淀技术检测H3K14M与RomA蛋白的相互作用。结果:嗜肺军团菌的分泌效应物RomA通过靶向宿主细胞核,增加其H3K14甲基化水平同时降低H3K14乙酰化水平,从而抑制宿主基因的表达,促进嗜肺军团菌有效的细胞内复制;但组蛋白H3K14M突变可以通过增强与RomA蛋白的相互作用以抑制其甲基转移酶活性,阻断RomA对H3K14位点的甲基化。结论:组蛋白H3K14M突变显著抑制嗜肺军团菌来源甲基转移酶RomA活性。第二部分:通过靶向e IF4A有效抑制MYC扩增的髓母细胞瘤生长目的:髓母细胞瘤（Medulloblastoma,MB）是高发病率的恶性儿童脑肿瘤类型,其四个分子亚型WNT、SHH、第3型和第4型中以第3型预后最差,临床上缺乏靶向药物。癌基因MYC扩增或高表达是第3型MB的一大特征,并且MYC扩增预示着更差的预后。更重要的是,MYC已经被证明是第3型MB的有效药物靶标,所以我们希望找到能有效靶向MYC的治疗策略。方法:我们首先评估MYC基因RNA和蛋白质的稳定性,并尝试通过靶向MYC的转录或者翻译以达到杀伤MYC扩增髓母细胞瘤的目的。接着我们通过R2数据库分析找到在第3型MB中相对于正常脑组织和其他亚型MB高表达并且与MYC表达高度相关的翻译相关基因。我们通过CRISPR/Cas9技术或者相应抑制剂Silvestrol在体内体外验证靶向e IF4A1对MYC扩增髓母细胞瘤的杀伤效果。此外,我们通过Ed U细胞增殖试验、细胞凋亡试验、蛋白质免疫印迹及细胞活力检测探究靶向e IF4A1治疗肿瘤的分子机制。结果:我们发现MYC蛋白和RNA稳定性都很低,并且在第3型MB中e IF4A1与MYC的表达具有高度相关性,e IF4A1在第3型髓母细胞瘤中的表达显著高于其他亚型髓母细胞瘤及正常脑组织。我们在体内体外都证实了通过CRISPR/Cas9技术靶向e IF4A1的抗肿瘤效应。此外,e IF4A1抑制剂Silvestrol能够通过下调MYC蛋白抑制第3型髓母细胞瘤。在MYC低表达的细胞中过表达MYC可以提高细胞对Silvestrol的敏感性,与此相反,MYC高表达细胞中敲低MYC可以显著降低细胞对Silvestrol的敏感性。结论:我们的研究证明通过靶向e IF4A1抑制MYC蛋白的翻译可能是治疗MYC扩增髓母细胞瘤的有效策略。

关键词：嗜肺军团菌 RomA SET结构域 H3K14M 表观遗传修饰翻译 eIF4A1 MYC扩增MB Silvestrol

基于离散元法的涂层硬质合金刀具建模及其加工损伤预测研究

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基于离散元法的涂层硬质合金刀具建模及其加工损伤预测研究

作者：李添添湘潭大学

学位级别：硕士

涂层硬质合金刀具较好地结合了基体材料高强度、高韧性和涂层材料高硬度、高耐磨性的优点,极大地提高了涂层刀具的切削性能,延长了工具的使用寿命,被广泛应用于车削、铣削、钻削等机械加工场合,尤其在于切削、高速切削等领域发挥不可替... 详细信息

涂层硬质合金刀具较好地结合了基体材料高强度、高韧性和涂层材料高硬度、高耐磨性的优点,极大地提高了涂层刀具的切削性能,延长了工具的使用寿命,被广泛应用于车削、铣削、钻削等机械加工场合,尤其在于切削、高速切削等领域发挥不可替代的作用。与此同时,由于刀具涂层与基体材料的弹性模量、热膨胀系数等不一样,在切削过程中(尤其是断续切削时),当受到冲击或交变载荷作用时,切削刃附近的涂层内部将会出现裂纹,导致涂层局部剥落以及产生粘结层等现象,进而影响其切削性能以及加工效率。本文采用离散元法建立涂层硬质合金刀具的离散元模型,对涂层硬质合金刀具切削过程进行数值仿真,预测切削加工用量对涂层刀具裂纹扩展及破坏的影响。其主要研究内容如下：1.介绍了论文的研究背景以及意义,对涂层硬质合金刀具切削性能、离散元法在脆性材料切削加工中的应用以及刀具磨损等方面的研究现状进行了简单介绍。2.建立了适合于切削过程的涂层硬质合金刀具的离散元模型。根据涂层硬质合金刀具的物理特性选用合适的颗粒几何参数、刚度参数、接触参数等,根据涂层硬质合金刀具涂层、基体以及结合界面的不同特性,分别对涂层与基体内部的颗粒使用平行键模型连接,而涂层与基体界面结合处则采用位移软化模型表征结合界面的双线性本构关系。3.校准了涂层硬质合金刀具的离散元模型。由于涂层硬质合金刀具涂层材料的特殊性和结合界面的复杂性,本文首先通过三点弯曲、单轴压缩、单边切口梁等数值实验方法初步校准涂层刀具硬质合金基体离散元模型的微观参数;在此基础上,通过模拟涂层硬质合金刀具的纳、微米压痕和变载荷划痕试验过程,通过对模拟结果与实验结果中的切向力、摩擦系数、压痕压入载荷与深度变化的曲线等进行对比,进一步校准了涂层硬质合金刀具离散元模型的微观参数。4.利用已校准的涂层硬质合金刀具离散元模型,对涂层硬质合金刀具切削加工过程进行了离散元模拟,分析了涂层刀具在切削过程中的材料磨损、裂纹的形成与扩展和局部剥落的演化过程;预测了切削加工用量和刀具性能参数对刀具磨损的影响。

关键词：涂层硬质合金刀具裂纹扩展切削加工离散元法

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元明清计谋题材三国戏研究

元明清计谋题材三国戏研究

作者：李添添福建师范大学

学位级别：硕士

“三国戏”是我国戏曲舞台上长演不衰的传统剧目,在中国戏曲史上有重要地位。计谋题材三国戏以精彩纷呈的计谋为主要表现对象,精心刻画了各种各样的妙计,如美人计、诈降计、火攻计、连环计、请君入瓮计、骄兵计、反间计等等。计谋题材... 详细信息

“三国戏”是我国戏曲舞台上长演不衰的传统剧目,在中国戏曲史上有重要地位。计谋题材三国戏以精彩纷呈的计谋为主要表现对象,精心刻画了各种各样的妙计,如美人计、诈降计、火攻计、连环计、请君入瓮计、骄兵计、反间计等等。计谋题材三国戏设置了精彩纷呈的计谋情节,塑造了一批聪慧敏捷的智谋型人物形象,其中不仅有谋士形象,还有武将形象,以及鲜少在三国故事中出现的女性形象,其计谋的描写和呈现都取得了一定的艺术成就。本文以元明清时期计谋题材的三国戏为研究对象,考述其戏曲文献的存佚情况、谋略渊源,重点论述其情节书写,包括计谋的开展如何在戏曲叙事中表达,人物形象的塑造、蕴含的文化内涵等。本文首先参考朱一玄、胡世厚、陈翔华等多位学者三国戏整理研究的成果对“计谋题材三国戏”进行定义,以《三十六计》中对于计谋类型的划分为依据,并以叙录的形式概述元明清各个时期计谋题材三国戏的存佚情况。在此基础上,从文本研究的视角重点探讨计谋题材三国戏的情节书写与文化内涵,具体包括以下五个方面:第一,根据计谋实施的对象、过程和结果的不同,将其分为内政、外交和军事计谋,从叙事学的角度探讨计谋在戏曲文本中的展开,分析其具体的计谋叙事策略。第二,戏曲叙事本质上是一种代言体叙事,故本文对代言体叙事,尤其是独白和对话在故事发展中发挥的作用进行探讨。第三,从丰富多彩的叙事情节中,探究神机妙算的谋士形象、智勇双全的武将形象和女性形象,这些人物所具有的共性的、个性的以及独特复杂的性格亦围绕计谋施展而呈现。第四,计谋文化本质是一种政治文化,故计谋主题三国戏实质上是对仁德的追慕、对智谋的崇尚和尊刘贬曹等政治情感、倾向的独特表达。第五,本文引入西方互文性理论,针对同一计谋题材在不同体裁文本中的差异性,探究它们之间奇妙的联系,探究它们如何接续、传播三国故事的发展。三国戏是传播三国故事和文化的一种表现形式,其舞台表演的灵活性、直观性使得三国文化更深入人心,人们也能从其中获得智慧的启迪。

关键词：三国戏计谋叙事文化内涵

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血管介入治疗再内皮化修复的研究进展

生物医学工程学杂志 2016年第1期33卷 177-183,187页

作者：李添添丁杨楠吴江沈阳刘肖珩四川大学华西基础医学与法医学院生物医学工程研究室成都610041

冠心病是冠状动脉粥样硬化引起的心脏病,主要是由于脂质沉积于血管壁造成冠状动脉狭窄或阻塞,引起的心肌缺血和供氧不足,近年来逐渐呈现年轻化趋势。冠脉动脉血管支架等介入治疗利用导管和球囊疏通狭窄闭塞的冠状动脉管腔,改善心肌的血... 详细信息

冠心病是冠状动脉粥样硬化引起的心脏病,主要是由于脂质沉积于血管壁造成冠状动脉狭窄或阻塞,引起的心肌缺血和供氧不足,近年来逐渐呈现年轻化趋势。冠脉动脉血管支架等介入治疗利用导管和球囊疏通狭窄闭塞的冠状动脉管腔,改善心肌的血流灌注,能够迅速有效地缓解病情,挽救患者的生命,是治疗缺血性心脏病、动脉内膜增生等心血管疾病的有效手段。由于血管支架等介入治疗不可避免地对血管壁造成一定的损伤并破坏内皮层,因此术后常伴随着急性和亚急性血栓形成、内膜增生、再狭窄等不良事件的发生。研究表明,损伤血管段的再内皮化直接决定了术后愈合的效果,而再内皮化的修复速率取决于介入治疗对血管的损伤程度及局部的微环境。本文就再内皮化的细胞来源、血管损伤程度、血流动力学改变等影响血管介入治疗后再内皮化修复速率的研究进展进行综述。

关键词：再内皮化修复血管内支架血管内皮细胞内皮祖细胞剪切应力

组蛋白H3K14M突变对嗜肺军团菌来源甲基转移酶活性的抑制

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上海交通大学学报（医学版） 2019年第3期39卷 224-232页

作者：李添添隋怡刘芳唐玉杰上海交通大学基础医学院病理生理学系细胞分化与凋亡教育部重点实验室上海200025

目的·探讨真核细胞中组蛋白H3K14M突变对嗜肺军团菌分泌的甲基转移酶RomA活性的影响及其内在机制。方法·构建组蛋白H3野生型(H3WT)以及组蛋白H3上14位赖氨酸突变为甲硫氨酸、异亮氨酸、精氨酸(H3K14M、H3K14I、H3K14R)的真核表达质粒... 详细信息

目的·探讨真核细胞中组蛋白H3K14M突变对嗜肺军团菌分泌的甲基转移酶RomA活性的影响及其内在机制。方法·构建组蛋白H3野生型(H3WT)以及组蛋白H3上14位赖氨酸突变为甲硫氨酸、异亮氨酸、精氨酸(H3K14M、H3K14I、H3K14R)的真核表达质粒,慢病毒包装并感染稳定表达RomA的293T、THP-1等细胞。用Western blotting检测并比较带有不同H3K14突变的细胞中内源H3K14位点表观修饰的改变。并利用免疫共沉淀技术检测H3K14M与RomA蛋白的相互作用。结果·嗜肺军团菌的分泌效应物RomA通过靶向宿主细胞核,增加其H3K14甲基化水平同时降低H3K14乙酰化水平,从而抑制宿主基因的表达,促进嗜肺军团菌有效的细胞内复制;但组蛋白H3K14M突变可以通过增强与RomA蛋白的相互作用以抑制其甲基转移酶活性,阻断RomA对H3K14位点的甲基化。结论·组蛋白H3K14M突变显著抑制嗜肺军团菌来源甲基转移酶RomA活性。

关键词：嗜肺军团菌 RomA SET结构域 H3K14M 翻译后修饰

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防火墙在多出口环境下的应用探析

软件导刊 2010年第6期9卷 147-149页

作者：李添添上海思博职业技术学院上海201300

随着互联网的快速发展,特别是国内Internet的高速发展,使得使用互联网的用户成几何级的增长,越来越多的业务在互联网开展,这样必然要求网络运营商为用户提供的网络接入具有可用性和可靠性。分析了防火墙在运营商多出口环境下的应用。

关键词：计算机网络网络安全防火墙技术

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T-2毒素对孕鼠及子代小鼠影响的研究进展

中华地方病学杂志 2016年第7期35卷 540-542页

作者：李添添任海娟曹艳红哈尔滨医科大学中国疾病预防控制中心地方病控制中心大骨节病防治研究所哈尔滨150081

T-2毒素是单端孢霉烯族真菌毒素中的一种次级代谢产物，在A类单端孢霉烯族真菌毒素中毒性最强。T-2毒素能够诱导具有高增殖活性的细胞凋亡，极易通过胎盘散发到胚胎组织中，引发胚胎脑损伤、骨畸形、胸腺萎缩甚至死亡。以下就近年来国... 详细信息

T-2毒素是单端孢霉烯族真菌毒素中的一种次级代谢产物，在A类单端孢霉烯族真菌毒素中毒性最强。T-2毒素能够诱导具有高增殖活性的细胞凋亡，极易通过胎盘散发到胚胎组织中，引发胚胎脑损伤、骨畸形、胸腺萎缩甚至死亡。以下就近年来国内外关于T-2毒素对孕鼠及其子代小鼠免疫系统、血液系统、细胞毒性等方面影响的研究进行综述。

关键词： T-2毒素孕鼠子代小鼠

不同剂量T-2毒素对BALB/c母鼠及子代小鼠脏器和骨骼的影响

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中华地方病学杂志 2018年第12期37卷 954-959页

作者：李添添任海娟领兄曹艳红哈尔滨医科大学中国疾病预防控制中心地方病控制中心大骨节病防治研究所哈尔滨150081 南京医科大学附属老年医院编辑部南京210024

目的观察不同剂量T-2毒素对BALB/c母鼠及子代小鼠脏器和骨骼的影响。方法选择清洁级6周龄BALB/c小鼠雌性60只、雄性30只,雌鼠按体质量采用随机数字表法分为对照组,低、中、高剂量组,每组15只。与雄鼠交配后,各组所得受孕鼠分别为14、10... 详细信息

目的观察不同剂量T-2毒素对BALB/c母鼠及子代小鼠脏器和骨骼的影响。方法选择清洁级6周龄BALB/c小鼠雌性60只、雄性30只,雌鼠按体质量采用随机数字表法分为对照组,低、中、高剂量组,每组15只。与雄鼠交配后,各组所得受孕鼠分别为14、10、9、15只,自孕期第0天起饮食干预(饲以含T-2毒素0、600、1200、2400ng/g的饲料)直至子代小鼠成年(6周龄)。观察两代小鼠生长状况、脏器系数(包括心、肝、肾、胸腺、脾、脑),拍摄骨骼x线片并光镜下观察脏器组织(包括肝、胸腺、脾、骺板软骨)病理学改变。结果4组母鼠脏器系数组间比较差异无统计学意义(P均>0.05);骨骼X线片未见异常。雌性子代小鼠心、肝、肾脏器系数组间比较差异元统计学意义(F=0.233、2.196、0.430,P均>0.05),胸腺、脾、脑脏器系数组间比较差异有统计学意义(F=3.683、3.148、4.498,P均0.05),心、肝、肾、脾脏器系数组间比较差异有统计学意义(F=5.339、2.738、11.435、2.872,P均<0.05),且高剂量组心脏系数低于对照组和低剂量组,中、高剂量组肝、肾脏器系数低于对照组和低剂量组,染毒各组脾脏系数均高于对照组(P均<0.05)。染毒组子代小鼠的肝、胸腺、脾、骺板软骨组织均观察到不同程度的病理改变;中、高剂量组子代小鼠的骨骼X线片可见骨骺增生。结论T-2毒素对母鼠未见明显影响,但可造成子代小鼠脏器与骺板软骨损伤,且脏器损伤部位与性别有关。

关键词：大骨节病 T-2毒素 BALB/c小鼠孕鼠子代小鼠