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刚地弓形虫滑行相关蛋白的研究进展

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2016年第5期34卷 463-467页

作者：李润花殷国荣太原师范学院生物系太原030031 山西医科大学医学寄生虫学研究所太原030001

顶复门寄生虫入侵宿主细胞的能力是其生存和致病的关键。刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是顶复门的一种专性细胞内寄生虫,无论其滑行、入侵或逸出感染细胞,都必须依靠被称为肌-动球蛋白马达(actomyosin motor,AMM)的装置提供动力。AMM... 详细信息

顶复门寄生虫入侵宿主细胞的能力是其生存和致病的关键。刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是顶复门的一种专性细胞内寄生虫,无论其滑行、入侵或逸出感染细胞,都必须依靠被称为肌-动球蛋白马达(actomyosin motor,AMM)的装置提供动力。AMM主要由肌球蛋白A、1条肌球蛋白轻链(myosin light chain,MLC1)和2条必需轻链(essential light chain,ELC)1、2以及滑行相关蛋白(gliding-associated protein,GAP)组成。目前已经发现的GAP家族包括GAP45、GAP50、GAP80、GAP70和GAP40,它们是构成驱动寄生虫运动的滑行体的重要成分。滑行体是一个存在于寄生虫质膜与内膜复合物之间的以肌-动球蛋白为基础的动力装置。本文概述了目前对GAP构建与功能的理解以及弓形虫运动的分子基础,同时对GAP作为弓形虫病疫苗候选抗原分子作了展望。

关键词：刚地弓形虫滑行相关蛋白滑行运动肌-动球蛋白马达滑行体

青海省艾滋病抗病毒治疗效果及相关影响因素的研究

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青海省艾滋病抗病毒治疗效果及相关影响因素的研究

作者：李润花青海大学

学位级别：硕士

目的使用青海省2005-2019年首次接受抗病毒治疗(antiretroviral treatment,ART)艾滋病病毒(Human Immunodeficiency Virus,HIV)感染者/艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome,AIDS)患者的基线和随访资料,了解首次接受抗病毒治疗HIV/AIDS患者的基本流行特征,了解HIV/AIDS患者接受ART后的生存时间及病毒学治疗效果,并探索生存时间和病毒学治疗效果的相关影响因素,提出适合青海省艾滋病ART的措施,为今后改善HIV/AIDS患者的生存状态及生存质量和优化青海省艾滋病ART效果方面奠定科学的理论基础。方法本研究为回顾性队列研究。数据来源于中国疾病预防控制系统中青海省2005-2019年首次接受抗病毒治疗的HIV/AIDS患者的基线资料和随访资料,采用Excel2010进行整理、核对,然后通过SPSS20.0软件进行横向匹配合并,建立数据库;采用(均值±标准差)或M(P25,P75)对定量资料进行统计描述,用频数和百分比对分类资料进行统计描述;采用寿命表法估算研究对象的累积生存率并绘制生存曲线,用乘积极限法(Kaplan-Meier)绘制不同因素间生存函数曲线图,并用Log-rank法检验其差异有无统计学意义;生存时间的影响因素采用COX比例风险模型分析;采用多因素Logistic回归法对病毒学治疗效果的影响因素进行分析。结果1、共纳入首次接受ART的HIV/AIDS患者2118例,以中年男性、初中以下的未婚者为主;感染途径以性传播为主,且以异性性传播为主;治疗时近3个月无AIDS相关疾病、基线WHO临床分期为Ⅰ期、基线CD4T细胞计数大于等于200个/u L、初始治疗方案为EFV/NVP+3TC+TDF比例较高。2、研究结束时,2118例HIV/AIDS患者中有201例死亡,其中140例因AIDS相关疾病死亡,病死率为1.72/100人年,接受ART后的第1、3、5、10年的累计生存率为97.57%、94.64%、91.91%和85.73%,10年以上的累计生存率为85.73%。3、多因素COX结果显示,治疗时年龄大于等于50岁(a HR=1.728)、治疗时近3个月感染AIDS疾病数大于等于2种以上(a HR=2.007)、基线CD4T淋巴细胞计数不详(a HR=5.459)和其他初始治疗方案(a HR=2.280)是HIV/AIDS患者死亡的危险因素;婚姻状况为未婚(a HR=0.555)、文化程度为大专及以上(a HR=0.480)、基线CD4T淋巴细胞计数在200～349个/u L(a HR=0.443)和大于等于350个/u L(a HR=0.221)是HIV/AIDS患者死亡的保护性因素。4、在2118例HIV/AIDS研究对象中,有1829例患者至少有一次随访记录且有病毒载量的检测数值,1829例中有1715例HIV/AIDS患者的病毒载量被抑制,抑制率为93.77%,失败率为6.23%(114/1829)。5、多因素Logistic结果显示,基线WHO临床分期处于Ⅱ期(OR=4.120)、治疗方案为EFV/NVP+3TC+AZT(OR=2.010)、EFV/NVP+3TC+d4T(OR=2.460)发生病毒学治疗失败的风险较高;年龄大于等于50岁(OR=0.265)发生病毒学治疗失败的风险较低。结论青海省艾滋病抗病毒治疗效果显著,HIV/AIDS患者生存率和病毒学抑制率较高。应鼓励确诊的HIV/AIDS患者及时接受ART,并随时关注患者状态,尤其是接受ART的第一年。应督促患者检测基线CD4T淋巴细胞数值及定期监测接受ART后患者的CD4T淋巴细胞数值,以便制定更好的治疗方案及评价抗病毒学治疗的效果。

关键词： HIV/AIDS ART 生存分析病毒学效果影响因素

口服三苯双脒抗小鼠横纹肌中旋毛虫成囊期幼虫的疗效评价

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口服三苯双脒抗小鼠横纹肌中旋毛虫成囊期幼虫的疗效评价

作者：李润花山西医科大学

学位级别：硕士

目的评价口服不同剂量三苯双脒(TBD)和不同疗程口服TBD300mg/(kg-d)抗小鼠横纹肌中旋毛虫成囊期幼虫的疗效,比较口服TBD的三种不同溶液抗小鼠旋毛虫成囊期幼虫的效果。材料与方法实验1：88只小鼠随机均分为11组,每鼠口服感染成囊期幼... 详细信息

目的评价口服不同剂量三苯双脒(TBD)和不同疗程口服TBD300mg/(kg-d)抗小鼠横纹肌中旋毛虫成囊期幼虫的疗效,比较口服TBD的三种不同溶液抗小鼠旋毛虫成囊期幼虫的效果。材料与方法实验1：88只小鼠随机均分为11组,每鼠口服感染成囊期幼虫50条。感染后29d,分别口服TBD0-500mg/(kg-d),连服6d。观察小鼠的不良反应。治疗后7d,肌肉压片法计数膈肌、咬肌、胸肌和腓肠肌中成囊期幼虫,以每克肌肉平均幼虫数评价疗效。实验2：40只小鼠随机均分为5组,每鼠口饲感染成囊期幼虫50条。感染后29d,以不同疗程(2、4、6、8d)口服TBD300mg/(kg-d)治疗,对照组不治疗。停药后7d,肌肉压片法计数膈肌、咬肌、胸肌、腓肠肌中幼虫。另40只小鼠随机均分为5组,进行反证实验,分别用上述不同疗程治疗后的小鼠膈肌幼虫50条口饲感染,感染后29d,肌肉压片法计数膈肌中幼虫。实验3：40只小鼠随机均分为4组,每鼠口服感染成囊期幼虫50条。感染后29d,分别用不同溶剂的三苯双脒治疗,溶剂分别为：7%吐温-80和3%乙醇(吐温组),1%羧甲基纤维素和3%乙醇(羧纤组),7%羟丙基-p-环糊精和3%乙醇(羟环组)。剂量均为200mg/(kg-d),连续给药6天,对照组不治疗。治疗后14d,肌肉压片法计数膈肌和腓肠肌的活虫数和死虫数,以每克肌肉平均幼虫数评价疗效。结果实验1：50～300mg组小鼠无药物有不良反应;350和400mg组小鼠有重度不良反应,分别死亡25%和50%;450和500mg组小鼠在给药4～5d全部死亡。50mg组无疗效,随TDB剂量增高,4个部位肌肉的总虫数和活虫数下降,而死虫数升高,其中300mg组4个部位肌肉的活虫数显著少于对照组(P<0.01),而350和400mg组4个部位肌肉中幼虫全部死亡(P<0.01)。实验2：所有小鼠未见药物不良反应。随疗程天数的增加,4部位肌肉中幼虫总虫荷和活虫数下降,而死虫数升高。与对照组相比,2d及2d以上疗程组膈肌、咬肌和腓肠肌中总虫数和活虫数显著减少(P<0.05、P<0.01),6d和8d疗程组胸肌总虫数显著减少(P<0.05、P<0.01)。随着疗程增加,4部位肌肉的幼虫死亡率升高,6d和8d疗程组分别达96.16%～99.13%和99.62%～100%(P<0.01)。疗效验证性感染表明,6d(37.5%)和8d(12.5%)的感染率显著低于对照组(100%)和2d(100%)疗程组(P<0.01)。实验3：所有小鼠无药物不良反应。与对照组相比,3个治疗组膈肌和腓肠肌中幼虫总虫数和存活虫数均显著减少(P<0.05,P<0.01),死虫数显著增加(P<0.05,P<0.01),羟环组的疗效最高。以吐温组TDB的相对药效率为1.0,按减虫率计算,羧纤组对膈肌和腓肠肌中幼虫相对药效率分别为1.61和2.46,羟环组相应为2.13和2.49：而以死虫率计算,羧纤组分别为1.55和1.79,羟环组分别为2.51和2.16(P<0.01)。结论口服TBD50mg/(kg-d),给药6天,对肌肉中虫荷无影响。300mg/(kg-d)可有效杀死肌肉中的成囊期幼虫,为适宜剂量。而350mg/(kg-d)或更高剂量TBD对小鼠有毒性作用或致死。口服TBD300mg/(kg-d),连续给药6d或8d,无不良药物反应,可有效杀死肌肉中的成囊期幼虫,连续给药6d为适宜疗程。 3%乙醇加1%羧甲基纤维素或7%羟丙基-β-环糊精配制TBD的相对生物药效率和抗成囊期幼虫效果显著提高,以3%乙醇加7%羟丙基-β-环糊精配制的TBD溶液的效果更佳。

关键词：旋毛虫病三苯双脒化学治疗成囊期幼虫相对生物药效率

刚地弓形虫滑行相关蛋白45的克隆、表达与免疫反应性检测

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2019年第5期37卷 563-567页

作者：李润花关丽殷国荣太原师范学院生物系晋中030619 临汾市第四人民医院微生物科临汾041000 山西医科大学医学寄生虫学研究所太原030001

目的克隆、原核表达刚地弓形虫滑行相关蛋白45(TgGAP45)基因,检测重组蛋白rTgGAP45的免疫反应性。方法提取刚地弓形虫RH株速殖子总RNA,逆转录合成cDNA。根据TgGAP45基因全长编码序列的开放阅读框设计引物,PCR扩增TgGAP45基因。扩增产物... 详细信息

目的克隆、原核表达刚地弓形虫滑行相关蛋白45(TgGAP45)基因,检测重组蛋白rTgGAP45的免疫反应性。方法提取刚地弓形虫RH株速殖子总RNA,逆转录合成cDNA。根据TgGAP45基因全长编码序列的开放阅读框设计引物,PCR扩增TgGAP45基因。扩增产物经双酶切后连接入pET30a(+)载体,重组质粒转化至大肠埃希菌(***)DH5α,阳性菌落经PCR、双酶切和测序鉴定。将重组质粒pET-30a(+)-TgGAP45转化至*** BL21(DE3)感受态细胞,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物,分别以抗His标签抗体、人抗弓形虫血清或小鼠抗弓形虫可溶性速殖子抗原(STAg)血清为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)鉴定重组蛋白免疫反应性。结果刚地弓形虫GAP45基因的cDNA开放式阅读框全长为738 bp,PCR扩增结果显示,在750 bp处有一条特异性扩增条带(带His标签),与预期大小相符。菌落PCR、双酶切以及测序结果均表明重组质粒pET-30a(+)-TgGAP45构建成功。SDS-PAGE结果表明,经IPTG诱导获得相对分子质量(Mr)约35000的可溶性重组蛋白。Western blotting分析结果显示,诱导表达的蛋白为带His标签的重组蛋白,可分别被His标签抗体、人抗弓形虫血清和小鼠抗弓形虫STAg血清识别。结论刚地弓形虫RH株TgGAP45基因片段可在原核表达系统中高效可溶性表达,该重组蛋白rTgGAP45具有免疫反应性。

关键词：刚地弓形虫滑行相关蛋白45 基因克隆原核表达免疫反应性

刚地弓形虫棒状体蛋白2家族作为疫苗候选分子的研究进展

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2015年第3期33卷 222-227页

作者：李润花张铁娥殷国荣太原师范学院生物系太原030031 中铁十二局总医院检验科太原030053 山西医科大学医学寄生虫学研究所太原030001

刚地弓形虫棒状体蛋白2家族(ROP2 family)是由弓形虫棒状体分泌的一类蛋白质,对弓形虫侵入宿主细胞及发挥细胞毒力起重要作用。ROP2家族成员包括ROP2、ROP4、ROP5、ROP8、ROP13、ROP16、ROP17和ROP18。近年来的研究发现,ROP2家族成员作... 详细信息

刚地弓形虫棒状体蛋白2家族(ROP2 family)是由弓形虫棒状体分泌的一类蛋白质,对弓形虫侵入宿主细胞及发挥细胞毒力起重要作用。ROP2家族成员包括ROP2、ROP4、ROP5、ROP8、ROP13、ROP16、ROP17和ROP18。近年来的研究发现,ROP2家族成员作为疫苗候选分子,可诱导宿主产生保护性免疫。本文综述了ROP2家族主要成员作为DNA疫苗或蛋白疫苗的研究进展。

关键词：刚地弓形虫棒状体蛋白2家族 DNA疫苗蛋白疫苗

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霍乱毒素作为黏膜佐剂的研究进展

中国病原生物学杂志 2012年第1期7卷 70-74,13页

作者：郝海霞李润花殷国荣山西医科大学寄生虫学教研室山西太原030001 太原师范学院生物系山西太原030031

霍乱毒素(cholera toxin,CT)是霍乱弧菌分泌的一种不耐热肠毒素,既是强黏膜免疫原,又具有很强的黏膜佐剂活性,是当今研究最多且最深入的黏膜免疫佐剂之一。然而,由于CT其毒性,限制了在人体的使用。很多研究致力于使CT的佐剂性与毒性分离... 详细信息

霍乱毒素(cholera toxin,CT)是霍乱弧菌分泌的一种不耐热肠毒素,既是强黏膜免疫原,又具有很强的黏膜佐剂活性,是当今研究最多且最深入的黏膜免疫佐剂之一。然而,由于CT其毒性,限制了在人体的使用。很多研究致力于使CT的佐剂性与毒性分离,CT亚基的佐剂性的研究就是方向之一。困扰黏膜疫苗的一个重要问题是很多抗原的黏膜免疫原性较弱,不能刺激有效的免疫反应,这也与黏膜免疫耐受有关,以CT为佐剂能消除机体对这些共免疫原的耐受。

关键词：霍乱毒素黏膜免疫黏膜佐剂免疫原性综述

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脊椎动物和寄生虫尿苷磷酸化酶的研究进展

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2014年第6期32卷 465-468页

作者：李润花祝建疆殷国荣太原师范学院生物系太原030031 北京市海淀区妇幼保健院生殖遗传中心北京100080 山西医科大学医学寄生虫学研究所太原030001

尿苷磷酸化酶(uridine phosphorylase,UPP)是嘧啶补救合成途径的一种关键性调节酶,可逆地催化尿嘧啶核苷、脱氧尿嘧啶核苷转变为尿嘧啶和核糖-1-磷酸,对维持和调控组织中尿嘧啶核苷的浓度起着至关重要的作用。不同物种的尿苷磷酸化酶虽... 详细信息

尿苷磷酸化酶(uridine phosphorylase,UPP)是嘧啶补救合成途径的一种关键性调节酶,可逆地催化尿嘧啶核苷、脱氧尿嘧啶核苷转变为尿嘧啶和核糖-1-磷酸,对维持和调控组织中尿嘧啶核苷的浓度起着至关重要的作用。不同物种的尿苷磷酸化酶虽然在功能上有很多相似之处,但是在理化性质、结构特点、活化位点、与底物结合位点等诸多方面存在差异,因此将尿苷磷酸化酶作为靶点,设计和开发抗菌、抗寄生虫感染药物有着广阔的前景。本文综述不同生物来源的尿苷磷酸化酶蛋白的理化性质及研究进展,为研究刚地弓形虫UPP基因表达蛋白作为抗弓形虫疫苗靶点的可行性提供理论依据。

关键词：尿苷磷酸化酶嘧啶补救途径刚地弓形虫疫苗靶点

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西藏部分地区豆科植物根瘤菌资源的初步调查

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2002年第1期30卷 33-37页

作者：王素英李润花刘新成李新锁天津商学院食品与生物工程系天津300400 山西教育学院生物系山西太原030000 天津师范大学化学与生命科学学院天津300074

对采自西藏拉萨、林芝和日喀则地区的 10属 18种豆科植物的 2 82份根瘤样品进行根瘤菌的分离纯化、菌株的回接和固氮酶活性的测定 ,结果表明 ,这些地区的豆科植物均可自然结瘤 ,其形态比较单一 ,主要为较规则的球形、柱状和掌状 ,颜色... 详细信息

对采自西藏拉萨、林芝和日喀则地区的 10属 18种豆科植物的 2 82份根瘤样品进行根瘤菌的分离纯化、菌株的回接和固氮酶活性的测定 ,结果表明 ,这些地区的豆科植物均可自然结瘤 ,其形态比较单一 ,主要为较规则的球形、柱状和掌状 ,颜色为褐红色、红色、粉红色和白色 ,球形根瘤的大小为 Φ0 .1～ 6 .0 m m,柱状根瘤的大小为 1～ 10 mm,92 .5 %的自然根瘤可测到固氮酶活性 ,其活性值为 0 .0 93～ 12 .40 3nmol/ (mg· h) ,可以看出 ,豆科植物根瘤的大小、颜色和固氮酶的活性与采集地点的生态环境相关。

关键词：西藏豆科植物根瘤菌固氮状况分离纯化固氮酶活性

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磷酸甘油酸变位酶研究进展

中国血吸虫病防治杂志 2012年第3期24卷 353-357页

作者：王芬李润花殷国荣山西医科大学寄生虫学教研室太原030001 太原师范学院生物系

磷酸甘油酸变位酶(PGAM)是一种糖酵解酶,与碳水化合物转运、新陈代谢、催化活性及生长发育有关。PGAM首先在酵母中发现,随着其氨基酸序列和晶体结构的发现,在人、大肠埃希菌、日本血吸虫和刚地弓形虫等多种生物体中发现该蛋白。本文综... 详细信息

磷酸甘油酸变位酶(PGAM)是一种糖酵解酶,与碳水化合物转运、新陈代谢、催化活性及生长发育有关。PGAM首先在酵母中发现,随着其氨基酸序列和晶体结构的发现,在人、大肠埃希菌、日本血吸虫和刚地弓形虫等多种生物体中发现该蛋白。本文综述了来源于脊椎动物、无脊椎动物、原生动物等的PGAM蛋白的理化性质及其研究进展。

关键词：磷酸甘油酸变位酶糖酵解酶刚地弓形虫