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热休克蛋白27对水泡性口炎病毒体外增殖的调控作用

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畜牧兽医学报 2024年第6期55卷 2540-2549页

作者：李殿玉莫荣纤赵旭高铭李洪珊白辉盛马瑞仙李向茸冯若飞西北民族大学生物医学研究中心生物工程与技术国家民委重点实验室兰州730030 西北民族大学生命科学与工程学院兰州730030 西北民族大学生物医学研究中心细胞基质疫苗关键技术与产业化教育部工程研究中心兰州730030

本研究旨在探究热休克蛋白27(heat shock protein 27, HSP27)对水泡性口炎病毒(vesicular stomatitis virus, VSV)体外增殖及VSV感染介导的维甲酸诱导基因I样受体家族(retinoid acid-inducible gene-I-like receptor, RLR)信号通路的作用及机制。利用实时荧光定量PCR、免疫印迹、免疫共沉淀、病毒滴度测定及免疫荧光等方法,首先检测VSV感染对HSP27 mRNA和蛋白表达的影响,进而验证过表达和干扰HSP27对VSV增殖的影响,进一步探究HSP27对VSV感染介导的RLR信号通路的影响,最后分析HSP27与RLR信号通路靶分子的相互作用及共定位情况。结果表明,VSV感染可促使HSP27基因转录和蛋白表达上调,稳定过表达和瞬时过表达HSP27均能显著抑制VSV的体外增殖;干扰宿主细胞中HSP27表达可促进VSV增殖。HSP27能够增强VSV及维甲酸诱导基因I蛋白(retinoic acid-inducible gene I protein, RIG-I)介导的IFN-β的产生及RIG-I的蛋白表达,而且HSP27与RIG-I相互作用并共定位于细胞质中。本研究揭示了HSP27靶向RIG-I上调其表达,增强RLR信号通路的转导,进而负调控VSV体外增殖,为深入揭示宿主因子HSP27在病毒感染中的作用机制奠定基础。

关键词：热休克蛋白27 水泡性口炎病毒 RLR信号通路维甲酸诱导基因I蛋白

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病毒类基因工程疫苗研究进展

西北民族大学学报（自然科学版） 2024年第1期45卷 40-53页

作者：李洪珊李殿玉李向茸冯若飞西北民族大学、生物医学研究中心生物工程与技术国家民委重点实验室甘肃兰州730030 西北民族大学生物医学研究中心、甘肃省动物细胞技术创新中心甘肃兰州730030 西北民族大学生命科学与工程学院甘肃兰州730030 西北民族大学、生物医学研究中心细胞基质疫苗关键技术与产业化教育部工程研究中心甘肃兰州730030

疫苗接种被认为是控制病原体和预防人类以及动物疾病最有效的方法之一.近年来由于病毒性疾病来势汹汹,传统疫苗如灭活或减毒活疫苗的局限性及潜在问题日益突显,而基因工程技术的进步使得疫苗设计和研发得以改进,由此衍生的病毒类基因工... 详细信息

疫苗接种被认为是控制病原体和预防人类以及动物疾病最有效的方法之一.近年来由于病毒性疾病来势汹汹,传统疫苗如灭活或减毒活疫苗的局限性及潜在问题日益突显,而基因工程技术的进步使得疫苗设计和研发得以改进,由此衍生的病毒类基因工程疫苗作为下一代疫苗越来越受到研究者的高度关注.通过病毒类基因工程疫苗的类型,重点介绍不同疫苗的开发原理、特点及用途,探讨其应用前景和发展趋势,旨在为新发病毒类疾病疫苗的研发提供参考.

关键词：病原体基因工程技术亚单位疫苗病毒载体疫苗核酸疫苗

重组人血清白蛋白在CHO细胞中的高效表达及其培养工艺优化

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中国生物制品学杂志 2023年第9期36卷 1054-1061,1071页

作者：牛宇辉李洪珊李殿玉吴贝李向茸冯若飞西北民族大学生物医学研究中心生物工程与技术国家民委重点实验室甘肃兰州730030 西北民族大学生命科学与工程学院甘肃兰州730030

目的在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中高效表达人血清白蛋白(human serum albumin,HSA),并优化其培养工艺,为HSA的规模化生产奠定基础。方法利用基因重组技术构建HSA的真核表达载体,并将其电转染至全悬浮CHO细胞中,利用G418及有限稀释法筛选... 详细信息

目的在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中高效表达人血清白蛋白(human serum albumin,HSA),并优化其培养工艺,为HSA的规模化生产奠定基础。方法利用基因重组技术构建HSA的真核表达载体,并将其电转染至全悬浮CHO细胞中,利用G418及有限稀释法筛选获得可稳定高表达HSA的单克隆细胞株,通过在基础培养基中添加葡萄糖、丁酸钠及补料培养基等方式进行细胞培养工艺优化,以提高HSA表达量;最终在5 L生物反应器上进行放大培养验证。结果成功构建了重组表达质粒pcDNA3.1-HSA,并在全悬浮CHO细胞中实现分泌表达后,又经过2次单克隆筛选,获得高表达HSA的2次单克隆细胞株CHO-rHSA-7H2A9和CHO-rHSA-7H2D12,表达量分别达到29.37和25.26 mg/L;通过培养工艺优化使HSA表达量达到100.00 mg/L左右;最终使5 L生物反应器上HSA表达量提升至166.16 mg/L,与第1次单克隆细胞上清中HSA表达量相比,提高了30倍左右。结论实现了HSA在CHO细胞中的高效表达,为进一步在生物制品领域规模化生产HSA及解决市场供应问题奠定了基础。

关键词：重组人血清白蛋白 CHO细胞高效表达

葡萄糖和丁酸钠对CHO-rHSA工程细胞株中rHSA产量的影响

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生物技术通报 2022年第7期38卷 278-286页

作者：牛宇辉李向茸吴贝李洪珊李殿玉陈磊魏锁成冯若飞西北民族大学生物医学研究中心生物工程与技术国家民委重点实验室兰州730030 西北民族大学生命科学与工程学院兰州730030

目前,悬浮CHO细胞作为外源蛋白的最有潜力的工程细胞株被广泛应用,探索其高密度生长和高表达外源蛋白的培养条件也成为研究的热点。葡萄糖和丁酸钠在促进CHO细胞生长和外源蛋白表达方面具有重要作用,所以研究葡萄糖和丁酸钠对CHO-rHSA... 详细信息

目前,悬浮CHO细胞作为外源蛋白的最有潜力的工程细胞株被广泛应用,探索其高密度生长和高表达外源蛋白的培养条件也成为研究的热点。葡萄糖和丁酸钠在促进CHO细胞生长和外源蛋白表达方面具有重要作用,所以研究葡萄糖和丁酸钠对CHO-rHSA工程细胞表达重组人血清白蛋白的影响有重要的应用价值。首先利用单因素试验确定了葡萄糖和丁酸钠对CHO-rHSA工程细胞表达重组人血清白蛋白的作用,并筛选出最优添加条件;然后利用双因素组合作用试验优选出可有效提高rHSA表达量的葡萄糖及丁酸钠的组合培养条件。细胞培养第3天开始,每48 h添加终浓度为7 g/L的葡萄糖,可使rHSA产量平均提高121.93%;细胞培养第2天添加终浓度为1.0 mmoL/L的丁酸钠,可使rHSA产量平均提高110.01%;丁酸钠和葡萄糖组合使用可使CHO-rHSA工程细胞株培养时间从7 d左右延长到14 d左右,使rHSA表达量达平均达到了85.642 mg/L,rHSA表达量与未处理组相比平均提高了212.49%,比单独使用葡萄糖平均提高了134.85%,比单独使用丁酸钠平均提高了88.35%。确定待细胞培养48 h 时添加1.0 mmol/L 丁酸钠和3.0→7.0 g/L葡萄糖为CHO工程细胞株高效表达的培养条件。丁酸钠和葡萄糖组合使用可更高效的表达外源蛋白,葡萄糖可以减弱丁酸钠对CHO细胞生长的抑制作用,为提高CHO工程细胞株外源蛋白表达提供新的理论依据。

关键词：重组人血清白蛋白丁酸钠葡萄糖 CHO-rHSA工程细胞株

HSP27在脑心肌炎病毒体外增殖中的多重调控作用

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微生物学报 2023年第1期63卷 333-345页

作者：李向茸吴贝高铭李殿玉李洪珊牛宇辉马瑞仙张梦月赵旭谢晶莹冯若飞西北民族大学生物医学研究中心、生物工程与技术国家民委重点实验室甘肃兰州730030 西北民族大学生物医学研究中心、甘肃省动物细胞技术创新中心甘肃兰州730030 西北民族大学生命科学与工程学院甘肃兰州730030

【目的】探究热休克蛋白27(heat shock protein 27,HSP27)在脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)体外增殖过程中对多种信号通路的调控作用,为明确其他宿主因子体外调控EMCV增殖的机制研究奠定基础,并为进一步揭示EMCV致病的... 详细信息

【目的】探究热休克蛋白27(heat shock protein 27,HSP27)在脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)体外增殖过程中对多种信号通路的调控作用,为明确其他宿主因子体外调控EMCV增殖的机制研究奠定基础,并为进一步揭示EMCV致病的分子机制提供有力证据。【方法】利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)、免疫印迹、间接免疫荧光和核质分离等方法检测干扰或过表达HSP27对EMCV感染引起的细胞自噬、翻译起始因子2α(eukaryotic translation initiation factor 2αsubunit 1,EIF2S1)-应激特异性转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)信号通路及髓样分化因子(myeloid differentiation factor 88,MyD88)/核转录因子κB(nuclear transcription factor kappa B,NF-κB)信号通路的影响。【结果】干扰宿主细胞中HSP27的表达可促进自噬及EIF2S1-ATF4信号通路,抑制EMCV诱导的MyD88/NF-κB信号通路的活化。相反,过表达HSP27不仅能有效降低EMCV诱导的自噬及EIF2S1-ATF4信号通路,还能促进MyD88/NF-κB信号通路分子的表达、p65的核移位和炎症相关因子的转录表达。【结论】HSP27既可以通过抑制EIF2S1-ATF4信号通路来负调控EMCV诱导的自噬,还可以正向调控EMCV触发的MyD88/NF-κB信号通路,表明HSP27在EMCV感染中具有多重调控作用。

关键词：热休克蛋白27 脑心肌炎病毒细胞自噬内质网应激反应 NF-κB信号通路

一株深海反硝化菌的分离鉴定及反硝化特性研究

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环境污染与防治 2016年第12期38卷 27-30页

作者：冯雅丽李洪珊李浩然北京科技大学土木与环境工程学院北京100083 中国科学院过程工程研究所生化国家重点实验室北京100080

从深海沉积物中分离获得一株具有较高脱氮效率的反硝化菌YL-1,通过形态观察、生理生化特性及16SrDNA同源性分析,确定该菌株为蒙氏假单胞菌（Pseudomonas monteilii）。考察了C、N质量比（C/N）、碳源、初始pH、温度及盐度对其反硝化作... 详细信息

从深海沉积物中分离获得一株具有较高脱氮效率的反硝化菌YL-1,通过形态观察、生理生化特性及16SrDNA同源性分析,确定该菌株为蒙氏假单胞菌（Pseudomonas monteilii）。考察了C、N质量比（C/N）、碳源、初始pH、温度及盐度对其反硝化作用的影响。结果表明：菌株YL-1反硝化最佳条件为最适碳源为乙酸钠、C/N不低于6∶1、初始pH为7.0-9.0、温度为25-35℃;该菌株具有较强的反硝化性能,盐度在100g/L以内时对其反硝化特性影响不大。

关键词：反硝化菌蒙氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii) 16S rDNA 硝酸盐氮

大洋多金属结核高压低质量分数碱浸过程中SiO_2溶出行为

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中南大学学报（自然科学版） 2016年第7期47卷 2196-2204页

作者：冯雅丽刘鹏伟李浩然郭成林吴梦妮李洪珊袁飞北京科技大学土木与环境工程学院北京100083 中国科学院过程工程研究所生化国家重点实验室北京100080

为提高综合利用率,对大洋多金属结核碱浸进行预处理研究,考察大洋多金属结核高压低质量分数碱浸过程中Na OH初始质量分数、反应温度、液固比、浸出时间等因素对SiO_2溶出影响,并对高压碱浸脱硅动力学进行研究。研究结果表明:在浸出温度... 详细信息

为提高综合利用率,对大洋多金属结核碱浸进行预处理研究,考察大洋多金属结核高压低质量分数碱浸过程中Na OH初始质量分数、反应温度、液固比、浸出时间等因素对SiO_2溶出影响,并对高压碱浸脱硅动力学进行研究。研究结果表明:在浸出温度为180℃、质量分数为10%Na OH溶液、液固比为3.0:1.0条件下反应70 min,可制得118.51 g/L的Na2Si O3溶液,其余Na2Si O3以方沸石(Na(Si2Al)O6?H2O)形式析出,SiO_2高压浸出反应的表观活化能为50.08 k J/mol,遵循化学反应控制的收缩核模型。通过高压低质量分数碱浸可选择性浸出其中的SiO_2,并生成有良好吸附性能的方沸石,而不破坏有用金属元素晶格结构,所得浸渣锰质量分数为30.72%以上。

关键词：大洋多金属结核 SiO_2 低质量分数碱浸高压浸出

从低锰镁质量比溶液中结晶分离锰、镁试验研究

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湿法冶金 2015年第3期34卷 225-228页

作者：袁飞冯雅丽李浩然易爱飞李洪珊吴梦妮郭成林北京科技大学土木与环境工程学院北京100083 中国科学院中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室北京100190

针对两矿法浸出软锰矿获得的富镁硫酸锰浸出液(锰镁质量比为2.55∶1),研究了采用蒸发结晶法分离锰、镁。通过正交试验和单因素试验,考察了温度、保温时间、搅拌速度对锰结晶行为的影响。试验结果表明:结晶温度、保温时间对硫酸锰晶体纯... 详细信息

针对两矿法浸出软锰矿获得的富镁硫酸锰浸出液(锰镁质量比为2.55∶1),研究了采用蒸发结晶法分离锰、镁。通过正交试验和单因素试验,考察了温度、保温时间、搅拌速度对锰结晶行为的影响。试验结果表明:结晶温度、保温时间对硫酸锰晶体纯度影响较大,而搅拌速度对晶体纯度影响较小;低锰镁质量比溶液比高锰镁质量比溶液的结晶分离更为困难。

关键词：蒸发结晶分离低锰镁质量比锰镁

促性腺激素释放激素在牦牛睾丸中的免疫组化定位

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甘肃畜牧兽医 2020年第7期50卷 54-56页

作者：叶桐桐龙琴琴李洪珊柳佳佳姚一凡龚赛赛杨琨西北民族大学生命科学与工程学院甘肃兰州730100

牦牛属于季节性繁殖牛科动物,且生长在海拔较高的寒冷地带。促性腺激素释放激素(GnRH)可通过下丘脑-垂体-性腺轴作用于性腺,调节性腺发育及生殖功能。为探讨GnRH在牦牛睾丸中的作用机理,本文对牦牛睾丸进行免疫组化SP法染色,研究GnRH在... 详细信息

牦牛属于季节性繁殖牛科动物,且生长在海拔较高的寒冷地带。促性腺激素释放激素(GnRH)可通过下丘脑-垂体-性腺轴作用于性腺,调节性腺发育及生殖功能。为探讨GnRH在牦牛睾丸中的作用机理,本文对牦牛睾丸进行免疫组化SP法染色,研究GnRH在牦牛睾丸不同细胞中的表达特征。结果显示GnRH主要分布于睾丸组织的间质细胞与生精细胞的胞质中,且在生精细胞中呈强表达,间质细胞次之。说明GnRH对睾丸的生殖功能紧密相连,一方面通过性腺轴促进睾酮和精子的生成,另一方面通过旁分泌或自分泌的方式调节生殖激素。

关键词：牦牛睾丸促性腺激素释放激素免疫组化染色 HE染色