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Windows XP快速入门 4

rhAAV/AFP感染DC分泌的Exosome诱导抗肝癌特异性T细胞的免疫效应研究

2008年

作者：李洁羽杨静

本书介绍了中文版WindowsXP操作系统的基本操作知识，主要内容包括：认识WindowsXP、WindowsXP的基本操作、WindowsXP的个性设置、管理电脑中的文件、使用附件、网上冲浪以及对电脑进行安全设置等。本书版式新颖，内容浅显易懂、详略得... 详细信息

ISBN: (纸本)9787115175656

本书介绍了中文版WindowsXP操作系统的基本操作知识，主要内容包括：认识WindowsXP、WindowsXP的基本操作、WindowsXP的个性设置、管理电脑中的文件、使用附件、网上冲浪以及对电脑进行安全设置等。本书版式新颖，内容浅显易懂、详略得当，为了突出“快速学”的特点，本书以“快速实战快马加鞭快问快答”的模式进行讲解，并配有小栏目“趁热打铁”穿插在相关知识点和实战步骤后，使读者能快速达到巩固知识、学以致用的目的。本书定位于需要在短期内快速掌握WindowsXP操作系统的初学者，同时也可用作职业技术学校、大专院校和各种电脑培训班的教材。

关键词：窗口软件,Windows XP

来源：畅想之星图书光盘版（南... 评论

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rhAAV/AFP感染DC分泌的Exosome诱导抗肝癌特异性T细胞的免疫效应...

作者：李洁羽福建医科大学

学位级别：硕士

【目的】树突状细胞（Dendritic cell,DC）会分泌一种膜性微囊结构——外泌体（Exosome）,它携带DC细胞的主要功能蛋白及抗原物质,可调节免疫及诱导相应的免疫应答。通过重组腺相关病毒rh AAV携带AFP基因（rh AAV/AFP）导入DC,并收获DC... 详细信息

【目的】树突状细胞（Dendritic cell,DC）会分泌一种膜性微囊结构——外泌体（Exosome）,它携带DC细胞的主要功能蛋白及抗原物质,可调节免疫及诱导相应的免疫应答。通过重组腺相关病毒rh AAV携带AFP基因（rh AAV/AFP）导入DC,并收获DC分泌的exosome（DEX）,研究DEX体外抗肝癌免疫效应及调节机制,为进一步研究新型非细胞型DC疫苗提供实验依据,为肝癌的免疫治疗提供一个新思路。【方法】1.分离健康献血者外周血单个核细胞（PBMCs）,经IL-4、GM-CSF及LPS联合诱导培养DC,实验分组:（A）DC-rh AAV/AFP、（B）DEXrh AAV/AFP、（C）DC-DEXrh AAV/AFP、（D）DC-Control,显微镜观察DC形态,流式细胞术检测DC表型。2.荧光显微镜及流式细胞术鉴定rh AAV/AFP感染DC的效率。3.超滤及蔗糖密度梯度超速离心法纯化DEX,透射电镜下观察DEX形态,Nano ZS90（Malvern）分析DEX粒径大小,Western blotting分析其功能蛋白及肝癌抗原分子的表达。4.分别用rh AAV/AFP、DEXrh AAV/AFP致敏DC前体细胞,制备抗原负载的DC。5.荧光显微镜及流式细胞术分析（A）DC-rh AAV/AFP、（B）DEXrh AAV/AFP、（C）DC-DEXrh AAV/AFP、（D）DC-Control剌激初始T细胞的增殖能力。比较DC（A）、DEX（B）及其二者联合应用（C）对效应细胞功能分子表达以及产生细胞因子的水平的影响,细胞毒实验7-AAD-PE/Annexin V-FITC双染法分析它们介导的抗原特异性杀伤效应。【结果】1.成熟DC（m DC）呈典型的树突状形态,表面分子CD83、CD1a、CD80、CD86的表达显著高于未成熟DC（im DC）(P0.05）。2.rhAAV/AFP感染DC细胞后,荧光显微镜下DC细胞呈现绿色荧光,流式细胞术检测感染效率达到86%。3.m DC分泌的DEX为直径约50nm00nm圆形或椭圆形小体,表达外泌体膜相关标志分子:CD63、CD9,DC功能相关分子:ICAM-1、HLA-DR、CD86、HSP70分子及抗原AFP分子。4.DC-rh AAV/AFP（A）、DEXrh AAV/AFP（B）以及DC-DEXrh AAV/AFP（C）刺激初始T淋巴细胞增殖能力显著高于与无抗原负载的DC对照组（D）(P0.05）。细胞因子检测结果显示DC-DEXrh AAV/AFP刺激CTL分泌IFN-γ水平显著高于对照组（P0.05）。【结论】1.以rh AAV为载体感染DC能高效介导AFP基因在DC的持续表达,促进DC有效递呈AFP并诱导有效的肝癌特异性CTL效应。2.超滤联合蔗糖密度梯度超速离心法分离的DEX,杂质少,结构清晰,是一种高效简便的外泌体制备方法。从m DC提取的DEX高表达DC的功能相关分子、外泌体标志分子及肿瘤抗原分子。3.DEX作为一种具有抗原提呈作用的非细胞疫苗,可刺激初始T淋巴细胞活化增殖发挥特异性抗肿瘤免疫应答,此作用在DC协同下显著增强。

关键词：肝细胞肝癌树突状细胞腺相关病毒 exosome 免疫治疗

2011年法网冠军李娜与外国优秀女子选手的比赛技术统计分析

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2011年法网冠军李娜与外国优秀女子选手的比赛技术统计分析

作者：李洁羽华中师范大学

学位级别：硕士

本文以我国女子网球运动员李娜获得2011年法国网球公开赛的冠军为契机,以本届比赛中的四强选手为研究对象,采用文献资料法、数理统计法、录像观察法、逻辑分析法对她们的身高、体重、克莱托指数、发球以及接发球等技术统计进行对比分析... 详细信息

本文以我国女子网球运动员李娜获得2011年法国网球公开赛的冠军为契机,以本届比赛中的四强选手为研究对象,采用文献资料法、数理统计法、录像观察法、逻辑分析法对她们的身高、体重、克莱托指数、发球以及接发球等技术统计进行对比分析研究。通过对李娜比赛数据的着重分析研究,笔者得出以下结论：一、李娜的发球时速并不占有优势,身高这一身体条件成为李娜提高发球速度的障碍之一,但发球时速这一指标并不是红土场地的制胜要素;二、通过对接发得分率及破发成功率的数据分析发现,四位运动员都能较好的把握接发球及关键分;三、李娜具备很强的得分能力,能够积极主动采取进攻得分,有较为有效的得分手段,这是取胜的关键因素;四、李娜能够准确把握上网时机,具备网前得分能力,但是上网技术的频繁使用并不是红土比赛中的最佳得分手段,底线相持阶段的得分对比赛的贡献最大。建议我国教练员及运动员充分地认识红土场地的特点,采取有针对性的训练,尤其是对红土场地有效得分手段的技战术的组合训练要安排足够的时间;提高技术的稳定性是比赛中减少非受迫性失误的必要手段;在此基础上还应重视心理素质的训练,这对相持阶段的技术稳定性和战术的实施都有着深远影响。

关键词：法网李娜技术统计分析

纳米微粒偶联抗OX40/抗AFP抗体在细胞毒性T细胞抗肝癌中的作用

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作者：李洁羽

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细胞与分子免疫学杂志 2014年第4期30卷 337-341页

作者：陈明水欧阳海超周山勇李洁羽叶韵斌福建医科大学教学医院福建省肿瘤医院肿瘤免疫学研究室福建福州350014 福建省肿瘤转化医学重点实验室福建福州350014 中国科学院福建物质结构研究所

目的探讨乳酸-羧基乙酸共聚物(PLGA)制备的纳米微粒偶联抗OX40及抗AFP抗体(抗OX40/抗AFP-NP)对甲胎蛋白AFP158-166抗原肽特异性细胞毒性T细胞(CTL/AFP158-166)体外杀伤肝癌细胞的影响。方法用溶剂蒸发法制备纳米微粒(NP),并与抗OX40和抗... 详细信息

目的探讨乳酸-羧基乙酸共聚物(PLGA)制备的纳米微粒偶联抗OX40及抗AFP抗体(抗OX40/抗AFP-NP)对甲胎蛋白AFP158-166抗原肽特异性细胞毒性T细胞(CTL/AFP158-166)体外杀伤肝癌细胞的影响。方法用溶剂蒸发法制备纳米微粒(NP),并与抗OX40和抗AFP共价偶联。用扫描电镜观察所制得PLGA-NP纳米颗粒的形态;ZetaPlusTM粒度测定仪检测纳米微粒的粒径及电荷;用BCA蛋白定量方法检测纳米微粒偶联抗体的效率;用人外周血单核细胞诱导形成树突状细胞(DC),用AFP158-166抗原肽负载DC诱导AFP特异性的CTL/AFP158-166;分别用2-(4-碘苯)-3-(4硝基苯)-5-(2,4-磺苯基四氮唑)-2H-四唑单钠盐-1法(WST-1)法、ELISA及乳酸脱氢酶(LDH)法分别检测抗OX40/抗AFP-NP对CTL/AFP158-166细胞增殖能力、分泌IL-2和IFN-γ及杀瘤活性的影响。结果所制得的PLGA-NP为圆形,大小较均一,粒径约为(300±42)nm,带负电荷,约为-(25.12±5.34)mV。蛋白定量显示每mg的PLGA-NP偶联约100μg抗体,偶联效率为25%;增殖和活化实验显示偶联有抗OX40的纳米微粒能显著刺激CTL的增殖、IL-2和IFN-γ的分泌;杀伤实验显示,抗OX40/抗AFP-NP能显著增强AFP特异性CTL/AFP158-166细胞对HepG2细胞特异性杀伤作用,而对SMMC-7721杀伤作用无明显效果。结论抗OX40/抗AFP-NP能刺激CTL/AFP158-166细胞的增殖、细胞因子的分泌并增强CTL/AFP158-166细胞对AFP阳性肝癌细胞的特异性杀伤作用。

关键词：纳米微粒肝癌细胞毒性T细胞 HepG2 OX40

IL-12诱导肝癌微环境中NK细胞活化发挥抗肿瘤作用

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中国肿瘤生物治疗杂志 2013年第1期20卷 93-98页

作者：周智锋江金华李洁羽陈强叶韵斌福建省肿瘤转化医学重点实验室福建福州3500014 福建医科大学福建省肿瘤医院肿瘤免疫学研究室福建福州3500014 龙岩市第二医院肿瘤内科福建龙岩364000 福建医科大学附属协和医院肿瘤内科福建福州3500014

目的:探讨IL-12通过诱导肝癌微环境中NK细胞活化诱导抗肿瘤的效果。方法:NOD/SCID小鼠皮下注射肝癌HepG2细胞,成瘤后腹腔注射人外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocyte,PBL),建立HCC-huPBL荷瘤小鼠模型。将荷瘤小鼠随机分为IL-12组... 详细信息

目的:探讨IL-12通过诱导肝癌微环境中NK细胞活化诱导抗肿瘤的效果。方法:NOD/SCID小鼠皮下注射肝癌HepG2细胞,成瘤后腹腔注射人外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocyte,PBL),建立HCC-huPBL荷瘤小鼠模型。将荷瘤小鼠随机分为IL-12组和PBS对照组,瘤内注射IL-12后,观测荷瘤小鼠瘤体积、体重、一般状况的变化,IL-12瘤内注射后第30天ELISA法检测荷瘤小鼠肝癌组织微环境中IL-12、INF-γ含量以及小鼠外周血中天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate amin-otransferase,AST)及谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)的含量,免疫组化法检测IL-12治疗后肝癌微环境中NK细胞活化性受体NKG2D、NKp44、NKp30、NKp46,以及抑制性受体KIR2DL3/CD158b、NKG2A/CD159a的表达。结果:第12、18、24、30天IL-12组荷瘤小鼠瘤体积均小于PBS组[(594.47±205.51)vs(832.10±187.49)mm3,(963.61±427.95)vs(1 350.87±468.23)mm3,(1 285.02±368.56)vs(1 975.49±655.54)mm3,(1 903.64±471.34)vs(2 568.77±784.68)mm3,均P<0.05]。IL-12组小鼠肝癌组织中IL-12与INF-γ的表达水平均明显高于PBS组[(2.96±1.02)vs(1.35±0.75)pg/ml,(12.26±4.11)vs(7.81±3.46)pg/ml,均P<0.05]。IL-12组与PBS组相比,血清ALT水平第7天显著升高[(73.85±10.71)vs(41.73±13.13)U/L;P<0.05],第14天达到高峰。IL-12组治疗后肝癌组织中NK细胞活化性受体NKG2D、NKp44、NKp30的表达较PBS组高(P<0.05),NKp46的表达未见明显升高;而NK细胞抑制性受体CD158b和CD159a表达较PBS组低(P<0.05)。结论:肝癌模型小鼠瘤体内IL-12注射可上调瘤组织内NK细胞活化性受体、IL-12、IFN-γ的表达,下调抑制性受体的表达,从而抑制小鼠模型中肿瘤的生长。

关键词： NK细胞活化性受体抑制性受体 IL-12 IFN-γ 移植性肝癌

慢病毒介导的CARMA1稳定沉默抑制K562细胞的侵袭和转移能力

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细胞与分子免疫学杂志 2014年第7期30卷 691-695页

作者：刘枋王凌燕李洁羽陈淑萍叶韵斌福建医科大学教学医院福建省肿瘤医院肿瘤免疫学研究室福建省肿瘤转化医学重点实验室福建福州350014

目的研究RNAi技术稳定沉默caspase募集结构域膜相关鸟苷酸激酶蛋白1(CARMA1)基因后对K562细胞增殖、克隆形成和侵袭转移的影响。方法应用慢病毒介导的RNAi技术构建稳定沉默CARMA1基因的K562细胞,反转录PCR和Western blot法分别检测CARMA... 详细信息

目的研究RNAi技术稳定沉默caspase募集结构域膜相关鸟苷酸激酶蛋白1(CARMA1)基因后对K562细胞增殖、克隆形成和侵袭转移的影响。方法应用慢病毒介导的RNAi技术构建稳定沉默CARMA1基因的K562细胞,反转录PCR和Western blot法分别检测CARMA1 mRNA和蛋白的抑制情况。应用台盼蓝拒染法分析细胞增殖情况,克隆形成实验观察细胞克隆形成,TranswellTM实验(含Matrigel或不含Matrigel)检测体外迁移与侵袭能力的改变。反转录PCR和Western blot技术分析相关信号通路分子的改变,并探讨可能机制。结果成功构建6株细胞株:其中1株为阴性对照(K562/sh-eGFP),另5株为CARMA1基因沉默的细胞株。K562/shCARMA 1-93对CARMA1的抑制效果最好,利用该模型进行后续研究。台盼蓝拒染法和克隆形成实验表明,K562/shCARMA 1-93的生长和克隆形成能力受到明显抑制(P<0.01)。与空白对照K562和阴性对照K562/sh-eGFP相比,细胞生长抑制率分别为29.3%和28.6%;克隆形成抑制率分别为37.6%和34.1%。体外迁移和侵袭转移实验证实,与对照组相比,K562/shCARMA1-93穿膜细胞数明显减少,有统计学差异(P<0.01)。CARMA1受抑制后,信号通路分子核转录因子-κB(NF-κB)及早期生长反应基因1(EGR1)的表达也随之下降。结论 CARMA1的稳定沉默会抑制K562细胞的增殖、克隆形成和侵袭转移,这可能与NF-κB、JNK/EGR-1信号通路受抑制有关。

关键词： caspase募集结构域膜相关鸟苷酸激酶蛋白1(CARMA1) 慢性粒细胞性白血病慢病毒迁移侵袭

体外扩增对食管癌患者NK细胞表面受体表达及其抑瘤活性的影响

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中国肿瘤生物治疗杂志 2013年第3期20卷 330-335页

作者：周智锋柳硕岩郑庆丰李洁羽王枫叶韵斌福建省肿瘤转化医学重点实验室福建福州3500014 福建医科大学教学医院&福建省肿瘤医院肿瘤免疫学研究室福建福州3500014 福建省肿瘤医院胸外科福建福州3500014

目的:探讨食管癌患者NK细胞扩增前后的受体表达及其对肿瘤细胞的杀伤。方法:收集福建省肿瘤医院食管癌患者外周血20例,健康供者(对照组)外周血10例。NK细胞培养采用细胞因子(IL-2+IL-12+IL-15+IL-18)组合,流式细胞术检测NK细胞免疫表型... 详细信息

目的:探讨食管癌患者NK细胞扩增前后的受体表达及其对肿瘤细胞的杀伤。方法:收集福建省肿瘤医院食管癌患者外周血20例,健康供者(对照组)外周血10例。NK细胞培养采用细胞因子(IL-2+IL-12+IL-15+IL-18)组合,流式细胞术检测NK细胞免疫表型及其受体(CD56+、CD69+、NKG2D、NKp30、NKp44、NKp46、CD158b、CD159a)的表达,LDH法检测不同效靶比时NK细胞对多种肿瘤细胞株(K562、Raji、Eca-109、TE-1)的杀伤作用。结果:与对照组相比,食管癌患者外周血CD3+、CD4+细胞比例以及CD4+/CD8+T细胞比值明显降低(P0.05)。经细胞因子体外培养20 d后,NK细胞表面CD69及活化性受体(NKG2D、NKp30、NKp44、NKp46)均明显上调,而抑制性受体(CD158b、CD159a)均明显下调(P<0.05)。培养20 d后,食管癌患者NK细胞对肿瘤细胞K562、Raji、Eca-109、TE-1的杀伤能力均显著高于培养前[(69.2±5.1)%vs(42.3±3.0)%,(44.6±3.2)%vs(21.1±2.0)%,(69.7±3.9)%vs(50.3±3.5)%,(67.1±4.5)%vs(41.2±3.3)%;均P<0.01]。结论:细胞因子IL-2+IL-12+IL-15+IL-18组合能有效扩增外周血NK细胞并上调其活并性受体的表达、下调抑制性受体的表达,其数量及功能均能满足临床治疗需要。

关键词： NK细胞活化性受体抑制性受体白细胞介素肿瘤细胞