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全国首例虚开ETC通行费电子增值税发票案宣判

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全国首例虚开ETC通行费电子增值税发票案宣判

无核葡萄胚株败育过程差异表达基因和VPE家族的克隆与分析

法治日报

作者：阮占江帅标李树秀

近日，全国首例虚开ETC通行费电子增值税发票案在湖南省郴州市宜章县人民法院宣判，石某、肖某两名主要被告人分别被判处有期徒刑7年2个月和3年不等，其他8名团伙成员分别被判处有期徒刑缓期执行。据悉，该案涉案金额3.45亿元，涉嫌偷... 详细信息

近日，全国首例虚开ETC通行费电子增值税发票案在湖南省郴州市宜章县人民法院宣判，石某、肖某两名主要被告人分别被判处有期徒刑7年2个月和3年不等，其他8名团伙成员分别被判处有期徒刑缓期执行。据悉，该案涉案金额3.45亿元，涉嫌偷逃企业所得税8625万元，可抵扣增值税税额85......

关键词：增值税发票通行费全国首例 ETC

来源： cnki报纸评论

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无核葡萄胚株败育过程差异表达基因和VPE家族的克隆与分析

作者：李树秀西北农林科技大学

学位级别：硕士

本研究以杨格尔葡萄和黑比诺葡萄胚珠发育各时期的胚珠为材料，使用SRAP-cDNA技术分析在两种葡萄中差异表达的基因片段，并对其进行回收克隆，选取部分基因进行组织特异性表达分析和实时荧光定量PCR分析。进一步在无核白葡萄上克隆全长... 详细信息

本研究以杨格尔葡萄和黑比诺葡萄胚珠发育各时期的胚珠为材料，使用SRAP-cDNA技术分析在两种葡萄中差异表达的基因片段，并对其进行回收克隆，选取部分基因进行组织特异性表达分析和实时荧光定量PCR分析。进一步在无核白葡萄上克隆全长序列和表达分析。同时，在基因组水平和转录组水平上克隆和分析无核葡萄胚珠败育相关基因VPE。本研究共取得如下结果： 1、使用SRAP-cDNA技术扩增后，比对杨格尔葡萄和黑比诺葡萄中各条带在胚珠发育过程的表达，分析差异表达片段。从杨格尔葡萄中回收差异表达片段，克隆并获得25条EST序列，对这些序列进行Blastn分析。 2、对其中9个可能参与葡萄胚珠败育过程的基因，用半定量法在杨格尔葡萄中进行组织特异性分析，YG1891为花、花蕾、胚珠中表达，YG1921在根中不表达，YG2951在根、果皮、果肉中不表达。其他基因在各组织中均表达。用实时荧光定量PCR分析这9个基因在杨格尔葡萄和黑比诺葡萄胚珠发育过程中的表达量变化，对比分析发现YG1891、YG38122、YG5571、YG7931可能是胚珠败育相关基因。 3、根据YG7931的序列信息设计引物，从无核白中克隆到VvWRKY20的全长序列，用实时荧光定量PCR分析其在无核白葡萄和黑比诺葡萄胚珠发育过程中的表达，发现VvWRKY20在无核白葡萄胚珠发育过程中的表达差异显著，而在黑比诺的表达则比较稳定，且比无核白中表达量小很多。 4、根据YG1891的序列信息设计引物，从无核白中克隆到VvABCG2的全长序列，对VvABCG2进行生物信息学分析，发现与基因组预测序列比对发现无核白中缺少在1420bp处缺少78bp的序列，缺少的片段恰好是一个跨膜结构域。用实时荧光定量PCR分析其在无核白葡萄和黑比诺葡萄胚珠发育过程中的表达量变化，发现其在两种葡萄中的表达变化趋势不一致，且在无核白葡萄中的表达量远高于在黑比诺中的表达量。 5、从黑比诺中克隆出βVPE、γVPE、δVPE，从无核白葡萄中克隆出γVPE和δVPE，从杨格尔葡萄中克隆βVPE，并发现杨格尔葡萄中βVPE存在可变剪切现象,并克隆到其中7个。序列分析发现葡萄γVPE中结合底物的关键氨基酸Ser突变为Ala。组织特异表达分析发现βVPE在根、花、花蕾、胚珠中表达，γVPE在各组织中均表达，δVPE在花、花蕾、胚珠表达。实时荧光定量PCR分析VPE基因家族在无核白葡萄和黑比诺葡萄胚珠发育过程中的表达，发现βVPE在有核和无核葡萄胚珠发育后期差别很大，初步确认为无核葡萄胚珠败育相关基因，而γVPE、δVPE的表达差异不明显。克隆杨格尔葡萄和无核白葡萄βVPE的基因组序列，并与黑比诺葡萄的序列进行比对分析发现三者之间序列相差不大。克隆无核白葡萄βVPE启动子序列，并与黑比诺葡萄βVPE启动子比对分析发现，两者之间存在一定差异，尤其是Skn-1otif元件数量的差异及Skn-1otif元件群附件序列的缺失影响其在胚珠中的表达。

关键词：无核葡萄胚珠败育 VPE WRKY ABC 转运子

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高清录播教室在小学课堂教学中的应用

安徽教育科研 2019年第6期 117-118,87页

作者：李树秀合肥市新城小学

随着时代的不断发展,在小学课堂教学中,高清录播教室得到广泛的使用,但是在具体操作中,还有诸多需要注意的地方。因此,希望通过本文的分析,让教师们对其有更深入的了解。

关键词：小学课堂教学高清录播教室

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城市轨道交通运行风险演化网络动态仿真研究

安全与环境学报 2023年第2期23卷 372-382页

作者：许慧邓宁辉李杨李树秀杜磊重庆邮电大学经济管理学院重庆400065 重庆工业大数据创新中心有限公司工业大数据应用技术国家工程实验室重庆400707 大连理工大学建设工程学部辽宁大连116024 中关村科学城城市大脑股份有限公司北京100080 北京理工大学管理与经济学院北京100081

为探究轨道交通事故中的重要风险类别,从风险演化角度出发,根据172起轨道交通运行事故,梳理出354条风险演化链,总结出35个风险因子,在此基础上基于复杂网络分析方法构建城市轨道交通运行静态风险演化网络。根据网络拓扑特征识别网络中... 详细信息

为探究轨道交通事故中的重要风险类别,从风险演化角度出发,根据172起轨道交通运行事故,梳理出354条风险演化链,总结出35个风险因子,在此基础上基于复杂网络分析方法构建城市轨道交通运行静态风险演化网络。根据网络拓扑特征识别网络中高影响力的风险节点,并利用蓄意攻击失效的原理从单个节点失效与节点连续失效角度进行动态仿真,以探究风险对整个网络的影响程度。结果表明:静态风险演化网络属于复杂网络;列车脱轨、列车停运/延误、列车其他设施故障、暴力恐怖袭击事件、滞留、火灾和人员伤亡在网络中具备较高地位,属于轨道交通运行静态风险网络的中心节点;列车停运/延误、制动故障、列车其他设施故障和火灾节点的失效对轨道交通运行具有突出影响,当制动故障、列车其他设施故障均失效后,即连续失效节点数为2时,风险网络的网络连通度出现拐点。研究确定了影响轨道交通运行的关键风险,分析结果可为城市轨道交通运行安全管理及事故演化控制提供参考依据。

关键词：安全工程轨道交通动态仿真复杂网络

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提高曲轴疲劳强度的热处理新工艺研究

兵器材料科学与工程 1993年第3期16卷 44-48页

作者：李树秀肖冈永李函■ 张存信李振华山西柴油机厂中国兵器工业第五二研究所工程师包头四号信箱014034

探索出一种使18Cr2Ni4WA钢曲轴的疲劳强度满足σ_(-1)≥490.3MPa技术要求的热处理新工艺。同时,通过金相组织,晶粒度和夹杂物的分析研究,讨论了新工艺使疲劳强度提高的主要原因。

关键词：曲轴钢疲劳强度热处理

中国野生华东葡萄抗白粉病转录因子VpRFP1基因原核表达、纯化及多克隆抗体制备

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农业生物技术学报 2011年第1期19卷 85-92页

作者：余义和徐伟荣李树秀黎涛王跃进西北农林科技大学园艺学院农业部西北园艺植物种质资源利用重点开放实验室陕西省农业分子生物学重点实验室

为揭示中国野生华东葡萄抗病转录因子基因在与葡萄白粉病互作过程中的作用机制,本研究以中国野生华东葡萄(Vitis pseudoreticulata ***)高抗葡萄白粉病株系白河35-1为材料,接种葡萄白粉病菌(Unicinula necator(Schw.)Burr.)病原菌诱导后... 详细信息

为揭示中国野生华东葡萄抗病转录因子基因在与葡萄白粉病互作过程中的作用机制,本研究以中国野生华东葡萄(Vitis pseudoreticulata ***)高抗葡萄白粉病株系白河35-1为材料,接种葡萄白粉病菌(Unicinula necator(Schw.)Burr.)病原菌诱导后7个不同时期的反转录产物为模板,用RT-PCR扩增得到*** RING-finger protein1基因(VpRFP1)的开放阅读框1053bp;将其克隆到pMD19-T载体经测序后,亚克隆到pGEX-4T-1原核表达载体并转化大肠杆菌(***)BL21;经IPTG诱导表达出64kD的融合蛋白GST-VpRFP1,主要以包涵体表达形式存在;采用电透析法纯化融合蛋白,并以纯化产物免疫新西兰大白兔获得抗血清,Western blot检测免疫-抗原反应良好。本研究结果表明,在27℃、0.1mmol/L的IPTG诱导4h融合蛋白GST-VpRFP1的表达量最大,免疫大白兔获得的抗血清能够用于VpRFP1基因的功能分析。

关键词：华东葡萄融合表达转录因子 VpRFP1 多克隆抗体

葡萄β型液泡加工酶基因(VvβVPE)的原核表达、纯化与多克隆抗体制备

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农业生物技术学报 2013年第6期21卷 659-667页

作者：巩培杰张朝红魏蓉李树秀王跃进西北农林科技大学园艺学院农业部西北地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室旱区作物逆境生物学国家重点实验室(西北农林科技大学)

液泡加工酶(VPE)基因是植物内启动和执行细胞程序性死亡的关键基因,β型VPE是种子特异表达并且为种子蛋白成熟所必须的基因。本研究以黑比诺葡萄(Vitis vinifera *** Noir)花后8个不同时期胚珠的cDNA混合样为模板,通过RT-PCR扩增得到葡... 详细信息

液泡加工酶(VPE)基因是植物内启动和执行细胞程序性死亡的关键基因,β型VPE是种子特异表达并且为种子蛋白成熟所必须的基因。本研究以黑比诺葡萄(Vitis vinifera *** Noir)花后8个不同时期胚珠的cDNA混合样为模板,通过RT-PCR扩增得到葡萄β型液泡加工酶基因(暂命名VvβVPE,GenBank登录号:KC136352),开放阅读框1 485 bp。进一步将VvβVPE克隆到pGEX-6P-1原核表达载体并转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21中,经IPTG诱导,获得约81.3 kD的包涵体融合蛋白GST-VvβVPE。将诱导条件优化后,在37℃、0.05 mmol/L IPTG诱导5 h后融合蛋白GST-VvβVPE的表达量最大,采用电透析与盐酸胍处理后透析复性两种方法获得纯化包涵体蛋白,电透析纯化法获得纯化包涵体蛋白的浓度可达到免疫要求。使用纯化蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗血清,经Western blot检测,该抗血清(稀释到1∶10 000)与GST-VvβVPE融合蛋白识别反应良好,获得的抗血清可用于以后的VvβVPE的酶活性分析、免疫亚细胞定位分析以及转基因植株蛋白水平的鉴定等,为进一步明确VvβVPE在葡萄胚珠发育中的作用提供基础数据。

关键词：葡萄液泡加工酶原核表达多克隆抗体

葡萄SVP类MADS-box基因的克隆及表达分析

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西北林学院学报 2012年第4期27卷 117-123页

作者：杨堃张朝红李树秀张旭彤王跃进西北农林科技大学园艺学院农业部西北地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室旱区作物逆境生物学国家重点实验室陕西杨陵712100

从无核白葡萄(Vitis vinifera *** seedless)中克隆获得一个胚珠发育相关MADS-box基因。该基因cDNA全长1 248bp,ORF为729bp,编码一个含有243个氨基酸的蛋白。氨基酸多序列比对和系统发育分析显示,该基因属于SVP类MADS-box基因。采用半... 详细信息

从无核白葡萄(Vitis vinifera *** seedless)中克隆获得一个胚珠发育相关MADS-box基因。该基因cDNA全长1 248bp,ORF为729bp,编码一个含有243个氨基酸的蛋白。氨基酸多序列比对和系统发育分析显示,该基因属于SVP类MADS-box基因。采用半定量技术进行表达分析表明,该基因在葡萄的根、茎、叶、花蕾、盛花和胚珠中均有表达,但是有强弱差异。实时定量PCR技术分析表明在无核葡萄品种无核白胚珠发育过程中基因表达量先升后降,而在有核葡萄品种黑比诺胚珠发育过程中表达量一直呈下降趋势。

关键词：葡萄 SVP类MADS—Box基因表达分析

葡萄类TIAR基因的克隆及其在胚珠发育过程中的表达分析

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果树学报 2014年第4期31卷 551-557页

作者：魏蓉巩培杰李树秀王跃进张朝红西北农林科技大学园艺学院.旱区作物逆境生物学国家重点实验室.农业部西北地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室陕西杨凌712100

【目的】研究葡萄类TIAR蛋白与无核葡萄胚珠败育的关系,探索无核葡萄胚珠败育分子机理。【方法】以‘无核白’葡萄(Vitis vinifera‘Thompson Seedless’)浆果发育过程中差异表达的EST序列为基础,克隆目的基因全长序列,并通过实时荧光定... 详细信息

【目的】研究葡萄类TIAR蛋白与无核葡萄胚珠败育的关系,探索无核葡萄胚珠败育分子机理。【方法】以‘无核白’葡萄(Vitis vinifera‘Thompson Seedless’)浆果发育过程中差异表达的EST序列为基础,克隆目的基因全长序列,并通过实时荧光定量PCR技术分析了该基因在无核葡萄品种‘无核白’和有核葡萄品种‘黑比诺’胚珠发育过程中的表达变化。【结果】获得一条1 593 bp的同源序列,命名为VvTIAR-like(GenBank登录号:KF523863),其ORF长1 269 bp,编码422个氨基酸,蛋白理论分子质量为45.8 kD。生物信息学分析显示所得基因具有典型的TIAR蛋白质特征,与其他植物来源的类TIAR蛋白也具有较高同源性,认为该序列为编码葡萄类TIAR蛋白的基因。实时荧光定量PCR技术分析结果显示,VvTIAR-like在‘无核白’与‘黑比诺’胚珠发育过程中表现出不同的表达模式。在‘无核白’胚珠开始败育的前期和关键时期,该基因表现出明显的表达高峰,而在‘黑比诺’中则表达量低且无明显变化。【结论】获得了‘无核白’葡萄中类TIAR基因VvTIAR-like的cDNA全长,对该基因在无核葡萄品种‘无核白’和有核葡萄品种‘黑比诺’胚珠发育过程中的表达分析显示,VvTIAR-like可能与‘无核白’葡萄胚珠败育相关。

关键词：葡萄类TIAR 基因克隆表达分析