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基于噬菌体展示技术的SH2超亲体开发与研究

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基于噬菌体展示技术的SH2超亲体开发与研究

作者：李树浩青岛大学

学位级别：硕士

生物体内的酪氨酸激酶家族和其催化底物形成的磷酸化修饰位点组成了酪氨酸激酶信号网络。系统分析酪氨酸信号网络能够帮助测量细胞的生理和病理状态、识别癌症生物标记物和发现药物靶点。研发的SH2超亲体富集磷酸化修饰酪氨酸(p Tyr)效... 详细信息

生物体内的酪氨酸激酶家族和其催化底物形成的磷酸化修饰位点组成了酪氨酸激酶信号网络。系统分析酪氨酸信号网络能够帮助测量细胞的生理和病理状态、识别癌症生物标记物和发现药物靶点。研发的SH2超亲体富集磷酸化修饰酪氨酸(p Tyr)效果优于商业化抗p Tyr抗体,且分子量小(约13 KDa),易于制备。基于SH2超亲体的富集实验,可以定量判断肿瘤细胞中的高活性激酶,将其作为药物靶点。因此SH2超亲体在肿瘤疾病诊断和治疗上有着广阔的应用前景。然而,最近研究表明SH2超亲体也能够结合硫酸化修饰酪氨酸(s Tyr)。而s Tyr和p Tyr具有相近的分子量,且理化性质相似,导致难以区分。因此,有必要开发新型针对p Tyr高特异性结合的SH2超亲体。本研究使用噬菌体展示技术构建Fyn-SH2噬菌体展示文库(包含了大于10个SH2突变体),用特定p Tyr肽段进行多轮的亲和淘选,发现了能够富集p Tyr的亲和突变体。研究包括使用phage-ELISA技术鉴定与p Tyr肽段结合的阳性克隆并测序确定其DNA序列;在蛋白质水平上测定突变体与不同p Tyr肽段和s Tyr肽段的结合强度和特异性。最终获得了对p Tyr高特异性的SH2超亲体,命名为突变体3(即V3)。论文主要包括三个部分。第一个部分是Fyn-SH2噬菌体展示文库构建和对文库高通量测序(NGS)质检。内容包括:构建Fyn-SH2野生型噬菌体展示载体,制备Fyn-SH2噬菌体后通过phage-ELISA检验展示系统,以Fyn-SH2野生型为模板随机突变8个氨基酸位点(K15、E37、T38、T39、A42、S44、K59、K62),构建噬菌体展示突变文库。通过NGS测定文库评估文库质量,结果表明构建文库与设计存在一定偏差,但突变分布无极端情况。第二部分是噬菌体展示突变文库的淘选与单克隆鉴定。使用肽段p Y(EPQp YEEIPIYL)作为靶标,采用固相淘选方法进行淘选。Phage pool ELISA数据表明经过四轮淘选,阳性克隆在三、四轮得到富集。从三、四轮中分离单克隆,使用phage-ELISA鉴定出25个独特的阳性克隆。第三部分是SH2超亲体的鉴定。首先使用EC实验初步区分阳性单克隆与p Y的相互作用大小,EC小于200 n M的V3、V10、V13、V17、V24突变体通过荧光偏振测定其与p Y的KD值,分别为38 n M、32 n M、12 n M、84 n M和23n M。为了确定以上5个突变体是否针对单个磷酸化酪氨酸位点(p Tyr)提高的亲和力,测定了5个突变体与肽段GGp YGG的KD。V3、V13、V24同GGp YGG分别拥有1.627μM、0.62μM和2.57μM的KD值,数据表明这些突变体针对p Tyr增强了亲和力。通过生物膜干涉(BLI)实验进一步研究这些突变体亲和力提高的动力学特征,数据表明,高亲和力的突变体普遍拥有较低的解离速率。最后,通过protein-ELISA实验测定V3、V13的特异性,结果表明V3对p Y有着高度的特异性,因此V3是新一代的SH2超亲体。

关键词：噬菌体展示 SH2超亲体定向进化酪氨酸磷酸化修饰富集

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阳和大桥悬臂浇筑施工技术

阳和大桥悬臂浇筑施工技术

作者：李树浩天津大学

学位级别：硕士

本文结合柳州市阳和大桥实际工程,对其采用的悬臂浇筑施工技术和方法进行了研究和探讨。(1)介绍了桥梁悬臂浇筑施工方法、特点及常用的挂篮形式。(2)针对阳和大桥工程的具体特点,确定了其施工流程—0#梁段施工、挂篮承载试验、悬臂段施... 详细信息

本文结合柳州市阳和大桥实际工程,对其采用的悬臂浇筑施工技术和方法进行了研究和探讨。(1)介绍了桥梁悬臂浇筑施工方法、特点及常用的挂篮形式。(2)针对阳和大桥工程的具体特点,确定了其施工流程—0#梁段施工、挂篮承载试验、悬臂段施工、挂篮拆除、合龙段施工,制订了0#梁段施工托架和墩梁固结、挂篮制作及拼装、梁段挂篮悬臂浇筑施工、合拢段施工的方法以及施工中应注意的问题。(3)根据弹性理论对菱形挂篮各组成部分进行内力和变形计算,并对挂篮行走和悬臂浇筑时的稳定进行验算,以保证菱形挂篮施工阶段的安全性。(4)针对阳和大桥工程的具体特点,确定了其合拢段的施工方法。(5)给出了阳和大桥施工控制的主要原则。研究成果对类似桥梁的施工具有一定的参考价值。

关键词：阳和大桥悬臂浇筑菱形挂篮合拢段施工控制

深圳市建筑遗产防灾风险管理系统初探——以大鹏所城为例

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深圳市建筑遗产防灾风险管理系统初探——以大鹏所城为例

作者：李树浩深圳大学

学位级别：硕士

本文针对深圳市建筑遗产保护管理当中存在的问题,通过对国内外相关理论和方法的文献综述,对国内外相关文物保护法、行业内相关保护规范等的对比与研究,构建出建筑遗产的风险评估体系的理论与方法,并制定出防灾风险管理系统的方法与措施... 详细信息

本文针对深圳市建筑遗产保护管理当中存在的问题,通过对国内外相关理论和方法的文献综述,对国内外相关文物保护法、行业内相关保护规范等的对比与研究,构建出建筑遗产的风险评估体系的理论与方法,并制定出防灾风险管理系统的方法与措施。本文主要得出以下结论:1)本文通过对国内外相关理论和方法的文献综述,对国内外相关文物保护法、行业内相关保护规范等的对比与研究,针对深圳市建筑遗产的基本状况与风险管理的需求,构建出建筑遗产的风险评估体系的理论与方法,并确立了深圳市建筑遗产风险评估的四个因子:自然灾害、自身结构老损、人为破坏以及产权问题。2)根据以上风险评估系统的风险因子分析,本文构建出防灾风险管理系统,包括防灾监控系统以及相应的风险管理办法了两方面。3)通过选取国家级文物保护单位——大鹏所城作为具体应用的案例,来验证深圳市建筑遗产防灾风险管理系统的有效性。针对大鹏所城的自然灾害的风险评估,制定相应的应急预案与措施;针对大鹏所城的自身结构损毁情况和室内微环境的风险评估,制定了相应的日常管理办法;针对大鹏所城的人为间接破坏的情况和产权不明晰等问题,制定产权管理和居民的遗产保护教育的管理办法。本文的研究意义在于,1)由于我国地方在执行文物保护法和相关法规方面存在认识上的偏颇,相关行业规范制度不健全,因此建立一套完善的防灾风险管理系统是对国家文物保护法的补充与延伸;2)目前国内遗产保护理论研究对于建筑的防灾监控尚未形成具体的管理机制,因此制定防灾监控与风险管理机制对国内建筑遗产保护也是具有十分重要的学术价值;3)本文针对深圳市建筑遗产的基本状况与风险管理需求,制定科学有效的现实可行的风险管理系统与措施,是对深圳市建筑遗产的防灾保护具有现实的应用价值。

关键词：建筑遗产风险评估防灾监控风险管理大鹏所城

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银基蒙脱土/壳聚糖的制备及性能

复合材料学报 2013年第4期30卷 88-92页

作者：李田张媛媛宋智勇吴宏涛李树浩广东药学院医药化工学院中山528458 广东轻工业职业技术学院食品系广州510300 广东药学院药科学院广州510006

为了在改善壳聚糖(CS)抑菌性能的同时提高其强度,将银基蒙脱土(Ag-MMT)在CS的醋酸溶液中通过溶液插层法制备了银基蒙脱土/壳聚糖(Ag-MMT/CS)。在模拟体液环境中测得的银离子释放性能显示Ag-MMT/CS中的银离子可以达到平稳缓慢释放;通过... 详细信息

为了在改善壳聚糖(CS)抑菌性能的同时提高其强度,将银基蒙脱土(Ag-MMT)在CS的醋酸溶液中通过溶液插层法制备了银基蒙脱土/壳聚糖(Ag-MMT/CS)。在模拟体液环境中测得的银离子释放性能显示Ag-MMT/CS中的银离子可以达到平稳缓慢释放;通过最小抑菌圈法对Ag-MMT/CS进行抑菌性能测试,结果表明,Ag-MMT/CS对金黄色葡萄球菌有良好的抑菌效果,抑菌圈直径可达9.2mm,比CS增大50.6%,抑菌率测试结果显示蒙脱土的加入有助于吸附并杀死更多的细菌;动态热机械分析(DMA)测试结果显示,Ag-MMT/CS的储能模量最高可达3261MPa,比CS提高195%,显示出良好的动态力学性能。

关键词：壳聚糖银基蒙脱土抑菌动态力学性能复合材料

魏源《诗经·国风》次第研究与今文经学理论的建构

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学术界 2024年第1期 175-181页

作者：李树军辽宁大学文学院辽宁沈阳110036

魏源《诗古微》有两种版本,一种是道光初年刻二卷本,另一种是道光二十年二刻二十卷本。《诗古微》初刻本与二刻本关于《诗经·国风》次第的认识有很大的不同,其初刻二卷本《国风》次第不同于《毛诗》《左传》和《诗谱》,是一种全新的顺... 详细信息

魏源《诗古微》有两种版本,一种是道光初年刻二卷本,另一种是道光二十年二刻二十卷本。《诗古微》初刻本与二刻本关于《诗经·国风》次第的认识有很大的不同,其初刻二卷本《国风》次第不同于《毛诗》《左传》和《诗谱》,是一种全新的顺序,在二刻二十卷本中,魏源放弃了这一次第,而借鉴了郑玄《诗谱》的次第,并对其义例进行了较为全面的阐释。魏源《国风》次第研究前后的差异与其今文经学理论的探索密切相关。魏源《诗古微》关于《国风》次第的研究对于现代的《诗经》学研究仍然很有意义。

关键词：《诗古微》初刻本二刻本《诗经·国风》次第今文经学

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提高多群截面蒙特卡洛计算效率的方法研究

计算物理 2024年

作者：王旸李树北京应用物理与计算数学研究所中国工程物理研究院研究生院

确定论方法求解中子输运方程时，需要用精确的中子通量谱估算多群截面，该通量谱可通过蒙卡中子输运过程获知。已有的使用蒙卡方法计算多群截面与散射矩阵的程序MCNPNG（蒙特卡罗多群截面统计分析软件），在计算材料种类多、几何结构复... 详细信息

确定论方法求解中子输运方程时，需要用精确的中子通量谱估算多群截面，该通量谱可通过蒙卡中子输运过程获知。已有的使用蒙卡方法计算多群截面与散射矩阵的程序MCNPNG（蒙特卡罗多群截面统计分析软件），在计算材料种类多、几何结构复杂的模型时时间开销非常大，不利于工程应用。本文首先分析了其原因，并针对性地开展了优化，有效提升了计算效率；然后开展了多群截面与散射矩阵计算的并行方法研究，研制了相应的程序模块，显著降低了运行时间，且在调用数百CPU的情况下仍能保持85%以上的并行效率。最后，通过对OKTAVIAN基准题的计算分析，验证了多群截面与散射矩阵并行计算方法的正确性和高效性。

关键词：多群截面散射矩阵蒙特卡罗方法并行方法

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船用三通调节阀流-固耦合噪声数值模拟

应用声学 2024年第1期43卷 142-150页

作者：施红旗周旭周爱民张博浩李树勋武汉第二船舶设计研究所武汉430205 兰州理工大学石油化工学院兰州730050

针对船用PN10DN32三通调节阀噪声声压频谱、声指向性等声学特性规律不明确,噪声声压级是否满足使用要求的问题,基于流-固耦合理论,同时考虑流-固耦合面及流体域内的脉动声学激励源,开展阀门噪声数值模拟研究。分别对三通调节阀在80%及60... 详细信息

针对船用PN10DN32三通调节阀噪声声压频谱、声指向性等声学特性规律不明确,噪声声压级是否满足使用要求的问题,基于流-固耦合理论,同时考虑流-固耦合面及流体域内的脉动声学激励源,开展阀门噪声数值模拟研究。分别对三通调节阀在80%及60%开度阀外1 m处的噪声进行数值模拟,分析研究噪声声压频谱特性及声指向性规律。结果表明:80%及60%开度下的噪声声压级分别为49.14 dB(A)、50.79 dB(A),均小于60 dB(A)的噪声限制,满足使用要求。该文为船用三通调节阀噪声数值模拟提供了理论及方法参考。

关键词：三通调节阀流-固耦合声指向性声压频谱特性噪声数值模拟

O-糖基化对Enterococcus faecium AS8糖肽结构和抗氧化活性的影响

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食品与发酵工业 2024年

作者：李树勋白英内蒙古农业大学食品科学与工程学院

糖基化对蛋白/肽的活性和构象具有重要的作用。该文以屎肠球菌（Enterococcus faecium）AS8的乳发酵液为原料提取糖肽，以粗糖肽提取率为指标，采用单因素及响应面试验对其提取工艺进行了优化，再经凝胶柱层析纯化后得到糖肽(AS8 glycop... 详细信息

糖基化对蛋白/肽的活性和构象具有重要的作用。该文以屎肠球菌（Enterococcus faecium）AS8的乳发酵液为原料提取糖肽，以粗糖肽提取率为指标，采用单因素及响应面试验对其提取工艺进行了优化，再经凝胶柱层析纯化后得到糖肽(AS8 glycopeptide，AGP)，采用SDS-PAGE和HPGPC对其纯度进行鉴定，使用β-消除法切除AGP中O-糖链得到去糖基化产物（deglycosylated AS8 glycopeptide，dAGP），并对AGP和dAGP进行红外光谱、荧光光谱、扫描电镜、热稳定性及抗氧化活性测定来初步探究O-糖基化对AGP结构和抗氧化活性的影响。结果显示，去糖基化后，AGP部分红外吸收峰强度显著降低，主要二级结构β-折叠减少，内源荧光强度增加，最大发射波长红移，外源最大荧光强度降低，表面疏水性降低，热稳定性降低，微观结构由光滑紧密变得粗糙多孔，ABTS阳离子自由基清除能力增强，DPPH自由基和羟自由基清除能力降低。该研究结果表明O-糖链的去除改变了AGP的抗氧化活性并使其结构稳定性降低。

关键词：糖肽去糖基化结构抗氧化活性

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中职数学新课导入艺术初探

教育界（高等教育） 2011年第3期 99-100页

作者：李树浩广西合浦师范学校

高超的新课导入艺术，能引起学生的认知冲突，激发学生的学习兴趣，这对目前中职的数学课堂教学尤显重要。新课导入时要根据教材具体内容，遵循新课导入基本原则，精心设计灵活多样的导入新课方式，把学生的注意力吸引到特定的教学任务... 详细信息

高超的新课导入艺术，能引起学生的认知冲突，激发学生的学习兴趣，这对目前中职的数学课堂教学尤显重要。新课导入时要根据教材具体内容，遵循新课导入基本原则，精心设计灵活多样的导入新课方式，把学生的注意力吸引到特定的教学任务和程序中。

关键词：导入艺术基本原则导入方法