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miR-124-5p通过cAMP/PKA/CREB通路调控脂多糖诱导小胶质细胞极化的研究

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miR-124-5p通过cAMP/PKA/CREB通路调控脂多糖诱导小胶质细胞极化...

作者：李昆芳锦州医科大学

学位级别：硕士

目的通过脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激小胶质细胞建立炎症模型,探究mi R-124-5p是否通过c AMP通路诱导小胶质细胞向M2表型极化,从而抑制炎症反应。方法1、体外培养小胶质细胞,采用LPS刺激小胶质细胞使其发生炎症反应,免疫荧光法... 详细信息

目的通过脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激小胶质细胞建立炎症模型,探究mi R-124-5p是否通过c AMP通路诱导小胶质细胞向M2表型极化,从而抑制炎症反应。方法1、体外培养小胶质细胞,采用LPS刺激小胶质细胞使其发生炎症反应,免疫荧光法检测Iba-1蛋白表达情况。2、使用转染技术,将miR-124-5p mimics和miR-124-5p inhibitor转染进小胶质细胞中。实验分为五组:Con组、mimics NC组、mimics组、inhibitor NC组、inhibitor组,采用RT-q PCR法检测mi R-124-5p过表达或抑制表达情况。3、将miR-124-5p mimics和miR-124-5p inhibitor转染进小胶质细胞中,收集细胞培养上清。实验分为六组:Con组、LPS组、mimics NC+LPS组、mimics+LPS组、inhibitor NC+LPS组、inhibitor+LPS组。使用ELISA法检测IL-1β(Interl eukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、IL-10(Interleukin-10,IL-10)以及IL-4(Interleukin-4,IL-4)的表达情况。采用免疫印迹和免疫荧光方法观察IL-1β、i NOS、ARG-1和CD206的蛋白表达情况。4、运用生物信息学技术筛选出mi R-124-5p可能调控的通路。5、将miR-124-5p mimics和miR-124-5p inhibitor转染进小胶质细胞中。实验分为六组:Con组、LPS组、H89+LPS组、H89+LPS+mimics组、DB-c AMP+LP S组、DB-c AMP+LPS组+mimics。免疫印迹法检测c AMP/p-PKA/p-CREB蛋白表达情况。结果1、免疫荧光鉴定结果显示:与Con组相比,经LPS作用过的小胶质细胞呈明亮的Iba-1红色荧光表达。2、实时荧光定量RT-qPCR结果显示:与Con组相比,mimics组中miR-124-5p表达水平增强;与Con组相比,inhibitor组的表达水平下降(P<0.05)。3、ELISA检测结果显示:与Con组相比,LPS组IL-1β、TNF-α的表达水平增高(P<0.05、P<0.01),IL-4、IL-10的表达水平下降(P<0.05、P<0.01);与mimics NC+LPS组相比,mimics+LPS组IL-1β、TNF-α表达水平下降(P<0.05、P<0.01),IL-4、IL-10的表达水平增高(P<0.05、P<0.01)。与inhibitor NC+LPS组相比,inhibitor+LPS组IL-1β、TNF-α的表达水平显著上升(P<0.05、P<0.01),inhibitor+LPS组IL-4、IL-10的表达水平显著下降(P<0.05,P<0.01)。4、免疫荧光结果显示:Con组i NOS和IL-1β红色荧光微弱表达,ARG-1和CD206红色荧光表达明显;经LPS作用后,i NOS和IL-1β呈明亮的红色荧光表达,ARG-1和CD206红色荧光表达较弱;mimics+LPS组i NOS和IL-1β红色荧光表达较弱,ARG-1和CD206呈较强的红色荧光表达;inhibitor+LPS组的i NOS和IL-1β呈明显的红色荧光表达,ARG-1和CD206红色荧光表达较弱。5、生物信息学分析结果显示:c AMP通路为mi R-124-5p该基因相关性最强的炎症通路。6、免疫印迹结果显示:(1)与Con组相比,LPS组iNOS和IL-1β蛋白表达显著增高,ARG-1和CD206的蛋白表达显著降低(P<0.01);与mimics NC+LPS组相比,mimics+LPS组i NOS和IL-1β蛋白表达显著降低,而ARG-1和CD206蛋白表达显著增高(P<0.01);与inhibitor NC+LPS组相比,inhibitor+LPS组i NOS和IL-1β蛋白表达显增高,ARG-1和CD206蛋白表达显著降低(P<0.01)。(2)与Con组相比,LPS组c AMP蛋白表达降低(P<0.05);加入H-89后,H-89+LPS组相对于LPS组c AMP蛋白表达水平有显著降低趋势(P<0.01);H-89+LPS+mimics组比H-89+LPS组c AMP蛋白表达水平有所增高(P<0.05);加入DB-c AMP后,DB-c AMP+LPS组相对于LPS组c AMP蛋白表达水平有所增高(P<0.05);DB-c AMP+LPS+mimics组比DB-c AMP+LPS组c AMP蛋白表达水平增强(P<0.05)。p-PKA、p-CREB也呈现同样的趋势。结论1、miR-124-5p过表达可促进L

关键词： miR-124-5p cAMP/PKA/CREB通路小胶质细胞极化

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工程造价控制中工程审计的应用分析

商业2.0 2023年第8期 22-24页

作者：李昆芳南宁学院

随着社会经济的发展，建筑行业工程质量与施工效率大幅提高，工程造价控制工作取得了巨大成效，工程项目造价控制中的工程审计技术及应用愈加受到重视。在建筑工程造价控制中运用工程审计技术，有助于建设单位把控施工成本，提高施工质... 详细信息

随着社会经济的发展，建筑行业工程质量与施工效率大幅提高，工程造价控制工作取得了巨大成效，工程项目造价控制中的工程审计技术及应用愈加受到重视。在建筑工程造价控制中运用工程审计技术，有助于建设单位把控施工成本，提高施工质量，增加建设项目经济效益，确保工程项目在合同期限内如期交付，在实践中对建筑行业稳定发展起到了有力的推动作用。本文阐述了工程造价控制中工程审计的应用，提出在工程造价控制过程中存在的工程审计相关问题，并为工程造价控制过程中如何更好地应用工程审计技术提出优化措施，以促进建筑行业高质量发展。

关键词：工程造价工程审计造价控制

人参皂苷Rg1通过过氧化物酶体增殖物激活受体γ调控脂多糖诱导的炎症反应中BV2小胶质细胞的极化

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解剖学报 2023年第3期54卷 269-275页

作者：李婷钰王兴航迟晓晨李昆芳包翠芬锦州医科大学组织学胚胎学教研室锦州医科大学基础医学实验教学中心辽宁锦州121001

目的通过脂多糖刺激BV2小胶质细胞建立炎症模型,探讨人参皂苷Rg1是否通过激活过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)受体蛋白对炎症的调控作用。方法BV2小胶质细胞随机分为对照组、模型组、人参皂苷Rg1组、罗格列酮组、GW9662组。对照... 详细信息

目的通过脂多糖刺激BV2小胶质细胞建立炎症模型,探讨人参皂苷Rg1是否通过激活过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)受体蛋白对炎症的调控作用。方法BV2小胶质细胞随机分为对照组、模型组、人参皂苷Rg1组、罗格列酮组、GW9662组。对照组不做任何处理,模型组加入1 mg/L脂多糖,其他组在加入脂多糖处理后,再分别加入0.4 mmol/L人参皂苷Rg1、10μmol/L罗格列酮或10μmol/L GW9662。CCK-8法检测各组BV2小胶质细胞增殖情况;采用免疫荧光和免疫印迹法检测PPARγ、磷酸化核因子κBp65(p-NF-κB p65)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和人精氨酸酶1(ARG-1)蛋白的表达。ELISA法检测炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量。结果与对照组相比,模型组细胞增殖率明显上升,IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α炎症因子含量明显增高,免疫荧光和免疫印迹结果显示,iNOS和p-NF-κB p65阳性表达明显增多,PPARγ和ARG-1阳性表达明显减少(均P<0.01);与模型组相比,人参皂苷Rg1组细胞增殖率降低,IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α表达水平降低,iNOS和p-NF-κB p65阳性表达明显减弱,PPARγ和ARG-1阳性表达明显增强(均P<0.01)。结论人参皂苷Rg1抑制脂多糖刺激后BV2小胶质细胞的炎症反应,其机制可能与调控PPARγ/NF-κB通路从而促进小胶质细胞M2型极化有关。

关键词：人参皂苷Rg1 过氧化物酶体增殖物激活受体γ BV2细胞极化免疫印迹法

EB病毒BZLF1基因表位疫苗的预测及构建

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中国病原生物学杂志 2023年第1期18卷 12-18页

作者：丁一李昆芳薛庆节屈艳琳济宁医学院基础医学院山东济宁272067 济宁医学院形态学实验室

目的采用生物信息学方法预测EB病毒BZLF1基因编码蛋白的结构、抗原表位及疫苗的初步构建,为EB病毒相关疾病的疫苗的研制提供依据。方法通过NCBI获得EB病毒BZLF1蛋白的核苷酸序列和氨基酸序列,采用ORF Finder、Protparam、SOPMA、DTU H... 详细信息

目的采用生物信息学方法预测EB病毒BZLF1基因编码蛋白的结构、抗原表位及疫苗的初步构建,为EB病毒相关疾病的疫苗的研制提供依据。方法通过NCBI获得EB病毒BZLF1蛋白的核苷酸序列和氨基酸序列,采用ORF Finder、Protparam、SOPMA、DTU Health Tech、TMHMM-2.0、Cell-PLoc 2.0、NetPhos 3.1 Servera、NetNGlyc、SWISS MODE、Immunomedicine Group、IEDB、BLAST、Uniprot等生物信息学软件对EB病毒BZLF1蛋白的理化性质、亲疏水性、结构域、信号肽、跨膜区、亚细胞定位、磷酸化及糖基化位点、二级结构、三级结构、抗原决定簇、B细胞与T细胞抗原表位、蛋白同源性及相互作用蛋白进行预测分析。在T4DNA连接酶作用下连接BZLF1基因与穿梭表达载体pMV261,对连接产物进行PCR及双酶切鉴定。结果 BZLF1蛋白是由245个氨基酸组成的亲水蛋白,分子式为C_(1185)H_(1850)N_(332)O_(366)S_(8),相对分子质量为26.860×10^(3),理论等电点为5.25,脂肪族氨基酸指数为71.35,平均亲水系数为-0.529;该蛋白二级结构以无规则卷曲居多,占51.84%,无信号肽和跨膜区,存在18个磷酸化位点,2个糖基化位点,含有1个碱性亮氨酸拉链结构。预测该蛋白有9个抗原决定簇,8个B细胞优势抗原表位,9个CTL细胞优势表位,8个Th细胞表位,与人类环状amp反应元件结合蛋白相似度为6.12%,同源性较低。PCR及双酶切鉴定含BZLF1基因的pMV261载体构建正确。结论生物信息学预测BZLF1属于亲水蛋白,热稳定性较好。该蛋白含有多个磷酸化位点可参与相关信号通路,对疾病的发展起到重要作用。BZLF1含有多个B、T细胞抗原表位,且与人体蛋白同源性低,不易发生免疫交叉反应,可作为EB病毒候选疫苗表位。

关键词： EB病毒 BZLF1 生物信息学抗原表位

EB病毒潜伏膜蛋白LMP1疫苗的预测及验证

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中国病原生物学杂志 2023年第7期18卷 750-758页

作者：李昆芳张隽宁丁一公博傲王然屈艳琳济宁医学院基础医学院山东济宁272067 济宁医学院形态学实验室

目的采用生物信息学方法分析EB病毒潜伏膜蛋白LMP1,为疫苗的研发提供理论依据。方法在NCBI数据库中获取LMP1蛋白的基因组序列和氨基酸序列,采用生物信息学分析工具ProtParam、SOPMA、SWISS MODEL、SignalP、TMHMM、Cell-PLoc 2.0、NetN... 详细信息

目的采用生物信息学方法分析EB病毒潜伏膜蛋白LMP1,为疫苗的研发提供理论依据。方法在NCBI数据库中获取LMP1蛋白的基因组序列和氨基酸序列,采用生物信息学分析工具ProtParam、SOPMA、SWISS MODEL、SignalP、TMHMM、Cell-PLoc 2.0、NetNGly、NetPhos-3.1、Conserved domains、IEDB、BLAST、Immunomedicine Group、UniProt预测LMP1蛋白的理化性质,二、三级结构,信号肽和跨膜区域,亚细胞定位,糖基化位点和磷酸化位点,保守结构域,B、T细胞表位,同源性,抗原决定簇以及相互作用蛋白。构建重组质粒LMP1-pMV261以及重组卡介苗,并通过检测LMP1分子及蛋白表达水平探究构建疫苗的基本条件。结果LMP1蛋白分子式为C1901H2877N493O562S11,氨基酸数为386,相对分子质量为41.98238×10^(3),原子总数为5844。LMP1蛋白为稳定亲水蛋白,二级结构主要为无规则卷曲(Cc),占49.48%,易与抗体嵌合。该蛋白无信号肽,具有6个跨膜区,亚细胞定位在宿主细胞膜,无糖基化位点,有27个磷酸化位点,7个相互作用蛋白。实时荧光定量PCR及Western blot检测该蛋白基因及蛋白表达均稳定。结论生物信息学分析LMP1蛋白为稳定亲水蛋白,含有丰富的B、T细胞表位,构建的重组卡介苗蛋白表达稳定,可作为EB病毒的候选疫苗。

关键词： LMP1 EB病毒生物信息学分析

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中国民生银行小微企业信贷风险管理研究

中国民生银行小微企业信贷风险管理研究

作者：李昆芳广西大学

学位级别：硕士

小微企业有力地促进了我国经济增长与技术创新,为国家创造了大量的财税收入和就业岗位,是我国经济成长的生力军,更是我国经济的基本细胞和命脉所在,然而小微企业“融资难”却是长期无法破解的问题。而今,国内商业银行在外部竞争压力和... 详细信息

小微企业有力地促进了我国经济增长与技术创新,为国家创造了大量的财税收入和就业岗位,是我国经济成长的生力军,更是我国经济的基本细胞和命脉所在,然而小微企业“融资难”却是长期无法破解的问题。而今,国内商业银行在外部竞争压力和内部利润考核的双重驱使之下,纷纷将大力发展小微信贷业务视为业务发展与转型的契机,不断加大人力、物力、财力的投入,计划在小微业务上开拓出一片广阔新天地。但是,小微企业的信贷风险问题阻碍了商业银行前进的脚步。小微企业信贷风险管不好,直接制约小微信贷业务的健康快速发展。因此,对小微企业信贷风险进行科学、有效的管理成为我国商业银行拓展小微信贷业务的当务之急。本文以全面风险管理理论做为分析框架,结合国内商业银行管理传统信贷风险的经验,提出应用于小微企业信贷业务的风险管理模式。实践中许多商业银行也尝试按这一模式进行运作,并取得了一定的成效。但由于国内小微金融仍处于起步阶段,商业银行对小微企业信贷风险管理的实践中仍存在不少问题,如风险管理组织结构不尽合理、内部信用评级体系针对性不强等,本文分析认为,这些问题是由政策环境、小微企业和商业银行三方共同造成。为了更好地总结现阶段国内商业银行小微信贷业务的开展经验并着力研究小微企业信贷风险管理的问题,本文以民生银行为例,重点分析了民生银行小微信贷业务的开展情况及其在小微信贷风险管理上积累的先进经验,并指出当前民生银行小微信贷风险管理上仍存在风险管理制度不够健全、内部信用评价体系针对性不强、贷款定价机制不科学、风险预警和信息反馈机制不够完善、小微金融产品与服务创新不足这五个问题,然后对这些问题的来源进行了综合剖析。最后,文章基于上述的五个问题,逐一提出了民生银行小微企业信贷风险管理的五大对策建议：完善风险管理制度、建设信用评级体系、建立风险定价模型、健全风险预警机制、加快产品与服务的创新。

关键词：民生银行小微企业信贷风险管理

鼻咽癌组织中高表达的GSDME对TME免疫浸润和患者预后的影响

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中国肿瘤生物治疗杂志 2023年第6期30卷 489-496页

作者：丁一李昆芳王然张隽宁苑珀涢毕馨曼余继霜屈艳琳济宁医学院基础医学院山东济宁272067 济宁医学院形态学实验室山东济宁272067

目的:探究细胞焦亡相关基因GSDME在鼻咽癌组织中的表达及其对肿瘤微环境(TME)和患者预后的影响。方法:从TCGA数据库获得548例鼻咽癌患者的基因表达数据及临床资料,运用R语言对GSDME进行差异表达分析、GO-KEGG富集分析;从人类蛋白质图谱(... 详细信息

目的:探究细胞焦亡相关基因GSDME在鼻咽癌组织中的表达及其对肿瘤微环境(TME)和患者预后的影响。方法:从TCGA数据库获得548例鼻咽癌患者的基因表达数据及临床资料,运用R语言对GSDME进行差异表达分析、GO-KEGG富集分析;从人类蛋白质图谱(HPA)数据库中获取GSDME蛋白在鼻咽癌组织和相应癌旁组织中的表达数据,通过STRING数据库探究与GSDME相互作用的蛋白质网络;应用ss GSEA算法分析GSDME在鼻咽癌组织中的表达及其与24种免疫细胞浸润的相关性,运用Spearman法分析GSDME与免疫检查点分子的相关性,通过TISIDB数据库分析GSDME表达与细胞因子基因表达的相关性。单因素和多因素COX回归分析筛选预后风险因素,基于风险因素GSDME绘制预后预测列线图和校准图,根据GSDME的表达水平对鼻咽癌患者进行生存分析和风险分析。qPCR法验证中国人鼻咽癌组织中GSDME及4种趋化因子mRNA的表达。结果:数据库数据分析显示,与癌旁组织相比,鼻咽癌组织中GSDME呈高表达(P<0.01),GO-KEGG富集分析显示GSDME参与免疫反应、细胞焦亡相关信号通路,GSDME表达与免疫细胞浸润、细胞因子及免疫检查点分子表达等相关,q PCR检查结果验证了中国人鼻咽癌组织中GSDME呈高表达。GSDME表达量、N分期和M分期是鼻咽癌患者预后的风险因素,基于风险因素建立的列线图和校正图能较好地预测鼻咽癌患者OS,鼻咽癌组织中GSDME高表达的患者预后差。结论:GSDME在鼻咽癌癌组织中呈高表达且是患者预后风险因素,基于GSDME建立的列线图预测预后效能良好;GSDME高表达与TME免疫浸润有关,其可能是免疫治疗的潜在靶点。

关键词：鼻咽癌细胞焦亡 GSDME 预后免疫细胞浸润

JAK抑制剂治疗中重度COVID-19患者临床疗效及安全性的Meta分析

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中国医院药学杂志 2023年第5期43卷 536-544页

作者：丁一李昆芳彭翱翔刘乃婕路嘉慧薛庆节屈艳琳济宁医学院基础医学院山东济宁272067 济宁医学院病原生物学教研室山东济宁272067 济宁医学院形态学实验室山东济宁272067

目的:采用Meta分析方法评估JAK抑制剂治疗中重度COVID-19患者的临床疗效及安全性。方法:从PubMed、Web of Science,Cochrane Library数据库检索了2020年1月1日至2022年4月的685篇相关文章,最终纳入13篇文献到RevMan 5.4.1软件中进行主... 详细信息

目的:采用Meta分析方法评估JAK抑制剂治疗中重度COVID-19患者的临床疗效及安全性。方法:从PubMed、Web of Science,Cochrane Library数据库检索了2020年1月1日至2022年4月的685篇相关文章,最终纳入13篇文献到RevMan 5.4.1软件中进行主要临床结局的研究。Cochrane风险评估工具和Newcastle-Ottawa Scale(NOS)量表分别评估随机对照实验和队列研究的文献质量。亚组分析研究了用药剂量、种类、合并用药对临床死亡率的影响。结果:最终纳入13项研究,包括4402名患者,大多为感染SARS-CoV-2的中重度或重度老年患者。研究全因死亡率时,实验组与对照组相比有更低的临床死亡风险(RR=0.55,95%CI:0.47~0.65),且实验组总体严重不良反应风险和机械通气的需求率均低于对照组(总体严重不良反应:RR=0.78,95%CI:0.67~0.91;机械通气:RR=0.63,95%CI:0.46~0.85)。按照系统分析了实验组和对照组发生严重不良反应的差异。实验组发生继发性感染、泌尿系统和呼吸系统严重不良事件的风险更低,心血管系统严重不良事件的发生风险差异无统计学意义。此外对用药种类、剂量、合并用药进行了亚组分析,希望对临床治疗提供更多思路。结论:JAK抑制剂治疗中重度或重度COVID-19患者的临床疗效及安全性较好,且临床严重不良事件的发生风险更低,尚无试验证明相关不良反应发生与JAK抑制剂的直接相关性。

关键词： JAK抑制剂 COVID-19 临床疗效 Meta分析

北湖区首个实行“公推直选”社区党支部换届选举完成 B02

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