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差异表达基因的高通量筛选方法

细胞生物学杂志 2004年第4期26卷 339-343页

作者：李斐雪王雁玲中国科学院动物研究所计划生育生殖生物学国家重点实验室北京100080

cDNA阵列、基因芯片技术、iAFLP(introduced amplified fragment lengthpolymorphism)、SAGE(serial analysis of gene expression)技术、cDNA-AFLP、DDRT-PCR(differntialdisplay reverse-transcription PCR)、RC4D(RFLP-coupled differential display)以及抑制消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH)都是能高效鉴别两个不同细胞群差异表达基因的方法。现对各种方法的原理进行简要介绍,并对其优缺点进行对比,并结合作者实验室的研究工作,列举了cDNA阵列和抑制消减杂交技术在生殖生物学领域中的应用情况。

关键词：差异表达基因细胞群 cDNA阵列抑制消减杂交技术基因芯片技术

G0101C03-3和L0254H10-3基因在小鼠动情周期子宫中的差异表达

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动物学报 2004年第3期50卷 395-400页

作者：李斐雪谈寅飞王雁玲中国科学院动物研究所计划生育生殖生物学国家重点实验室北京100080

正常动情周期的维持是小鼠子宫多功能的必要条件 ,但对于其分子基础至今尚不十分明了。我们曾通过基因芯片技术分析了小鼠动情期与间情期子宫的基因表达谱 ,发现了许多差异表达的基因或表达序列标签(ESTs)。本实验选取了G0 1 0 1C0 3 3... 详细信息

正常动情周期的维持是小鼠子宫多功能的必要条件 ,但对于其分子基础至今尚不十分明了。我们曾通过基因芯片技术分析了小鼠动情期与间情期子宫的基因表达谱 ,发现了许多差异表达的基因或表达序列标签(ESTs)。本实验选取了G0 1 0 1C0 3 3及L0 2 5 4H1 0 3两个差异表达的EST ,通过Northern印迹与原位杂交方法分析了它们在小鼠动情周期子宫中的时空表达模式。结果表明 :这两个基因的表达水平都发生周期性变化 ,在动情期表达量较少 ,而在间情期表达量较高 ;G0 1 0 1C0 3 3在动情期的表达量是间情期的 2 7% ,L0 2 5 4H1 0 3在动情期检测不到有表达 ,提示它们的表达受卵巢类固醇激素的调控 ;G0 1 0 1C0 3 3基因主要在子宫的腔上皮与腺上皮中表达 ,可能与子宫细胞的程序性死亡有关 ;而L0 2 5 4H1 0

关键词：动情周期差异表达基因小鼠子宫表达细胞

恒河猴植入位点差异基因筛选及蛋白激酶H11的克隆

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自然科学进展 2005年第1期15卷 53-60页

作者：李斐雪孙晓阳王雁玲中国科学院动物研究所计划生育生殖生物学国家重点实验室北京100080

采用cap-finder全长cDNA扩增技术和抑制消减杂交(SSH)相结合的方法研究了恒河猴胚胎植入初始时期子宫内膜植入位点与非植入位点的基因表达差异情况.在准确获取妊娠9.5 d恒河猴植入位点和非植入位点子宫内膜后,用SSH建立了植入位点消减c... 详细信息

采用cap-finder全长cDNA扩增技术和抑制消减杂交(SSH)相结合的方法研究了恒河猴胚胎植入初始时期子宫内膜植入位点与非植入位点的基因表达差异情况.在准确获取妊娠9.5 d恒河猴植入位点和非植入位点子宫内膜后,用SSH建立了植入位点消减cDNA文库,从中随机挑选了1440个克隆,通过点杂交获得了179个在植入位点高表达的克隆,经测序和与基因库(Gen-Bank／EMBL)比对分析,证实其中102个克隆对应于人或恒河猴的52个同源基因,75个克隆对应于人的58个EST,另外2个克隆没有找到对应的同源基因,推测为新的基因.对其中最高频率出现的差异表达基因-蛋白激酶H11,通过cDNA末端快速扩增(RACE)法克隆得到了它的全长cDNA序列.与人的蛋白激酶H11相比,cDNA序列同源性达到94％,所编码的蛋白质序列同源性为83％.

关键词：植入克隆蛋白激酶恒河猴差异基因同源基因 SSH 全长cDNA 蛋白质序列位点

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RH-2485对棉铃虫的室内药效试验

植物保护学报 2002年第1期29卷 78-82页

作者：李照民赵小凡李斐雪王金星山东大学生命科学学院生物系济南250100

利用Rohm and Haas公司1996年推出的一种非甾醇类蜕皮激素竞争物RH-2485,用点滴法和喷雾法对棉铃虫防治效果进行了室内研究。结果表明,RH-2485可以引起棉铃虫非正常蜕皮。用25、50、100和150mg/L的RH-2485异丙醇溶液对2龄幼虫进行喷雾,... 详细信息

利用Rohm and Haas公司1996年推出的一种非甾醇类蜕皮激素竞争物RH-2485,用点滴法和喷雾法对棉铃虫防治效果进行了室内研究。结果表明,RH-2485可以引起棉铃虫非正常蜕皮。用25、50、100和150mg/L的RH-2485异丙醇溶液对2龄幼虫进行喷雾,阳性反应率为43.6％～94.9％。用RH-2485异丙醇溶液对6龄初蜕皮幼虫(进入6龄不超过1h)进行点滴,剂量为1、30、60、100和200ng/头,24h后阳性反应率为0～83.33％,而15d后的最终反应率为15.38％～96.67％。研究结果显示RH-2485对棉铃虫有显著引起非正常蜕皮的作用,可用于棉铃虫田间防治试验。

关键词：棉铃虫 RH-2485 蜕皮激素竞争物异常蜕皮防效室内药效试验

SWAP-70在小鼠正常动情周期和围植入期子宫中的表达及其调节

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自然科学进展 2006年第12期16卷 1568-1574页

作者：刘璟李斐雪李玉侠王雁玲中国科学院动物研究所计划生育生殖生物学国家重点实验室北京100080

SWAP-70是鸟苷酸交换因子家族成员之一,是PI3K介导的酪氨酸磷酸化受体下游通路的信号分子之一．以往的研究及我们的前期工作初步表明它在小鼠子宫和恒河猴胚胎植入位点有高表达,提示此分子可能参与了胚胎植入的调节．为此,本研究在小鼠... 详细信息

SWAP-70是鸟苷酸交换因子家族成员之一,是PI3K介导的酪氨酸磷酸化受体下游通路的信号分子之一．以往的研究及我们的前期工作初步表明它在小鼠子宫和恒河猴胚胎植入位点有高表达,提示此分子可能参与了胚胎植入的调节．为此,本研究在小鼠模型中,采用原位杂交、免疫组化和半定量RT-PCR方法,系统地研究了SWAP-70在妊娠初始期胚胎植入位点、妊娠期子宫和动情周期子宫中的表达及其受雌、孕激素的调节．结果表明SWAP-70在植入位点有非常显著的高表达,其mRNA和蛋白分布于胚泡以及对系膜侧的腔上皮细胞和临近胚泡的子宫基质细胞,而在非植入位点表达强度很弱；在妊娠第7天和第9天的母胎界面上,滋养层巨细胞、迷走滋养层和海绵滋养层都维持较强的SWAP-70表达；正常动情周期中,SWAP-70在动情期子宫中表达明显上调；卵巢切除模型显示雌激素显著上调SWAP-70的表达,孕激素能够阻断雌激素的作用．以上结果提示,SWAP-70可能参与胚胎植入过程中多种细胞行为的调节,如胚泡黏附、基质细胞的增殖与蜕膜化以及滋养层细胞的浸润和分化过程,同时在动情周期子宫内膜细胞功能调控中发挥一定作用。

关键词： SWAP-70 子宫围植入期动情周期小鼠

激活素A和卵泡休止素对人滋养层细胞增殖和激素分泌的调节作用

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生殖与避孕 2004年第5期24卷 265-269页

作者：赵亮尚涛王雁玲李斐雪仇魏李辉中国医科大学附属第二临床学院妇产科沈阳110001 中国科学院动物研究所计划生育生殖生物学国家重点实验室北京100080

目的: 探讨激活素A和卵泡休止素对人早孕绒毛滋养层细胞的增殖和人绒毛膜促性腺激素及孕酮分泌的调节作用。方法: 早孕绒毛用胰蛋白酶与胶原酶联合消化后,再用小牛血清白蛋白密度梯度离心,分离纯化后所得的滋养层细胞进行体外原代培养... 详细信息

目的: 探讨激活素A和卵泡休止素对人早孕绒毛滋养层细胞的增殖和人绒毛膜促性腺激素及孕酮分泌的调节作用。方法: 早孕绒毛用胰蛋白酶与胶原酶联合消化后,再用小牛血清白蛋白密度梯度离心,分离纯化后所得的滋养层细胞进行体外原代培养。将不同浓度激活素A加入细胞培养液中作用48 h,观察其对滋养细胞生长和人绒毛膜促性腺激素及孕酮分泌的影响。向滋养层细胞培养液中加入激活素A和不同浓度的卵泡休止素,培养24 h,观察相互作用。结果: 激活素A和卵泡休止素都不影响滋养层细胞的增殖。激活素A以剂量依赖的方式促进滋养层细胞绒毛膜促性腺激素的分泌和孕酮的分泌,滋养细胞分别经30 ng/mL,100 ng/mL激活素A处理后,培液中绒毛膜促性腺激素和孕酮水平达到高峰(P均<0.01)。激活素A对滋养层细胞激素分泌的影响,可以被其特异结合蛋白卵泡休止素以剂量依赖方式阻断。结论: 激活素A和卵泡休止素以自分泌方式调节滋养层细胞绒毛膜促性腺激素和孕酮分泌,但并不影响细胞增殖,激活素A与卵泡休止素在人早期妊娠中起重要的生理作用。

关键词：激活素A 卵泡休止素滋养层细胞孕酮增殖激素分泌绒毛膜促性腺激素密度梯度离心细胞培养液结合蛋白

S100A10基因在小鼠子宫中的表达及性激素对其表达的调节

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自然科学进展 2005年第7期15卷 811-817页

作者：陈志强刘璟李斐雪孙晓阳章怀云王雁玲中国科学院动物研究所计划生育生殖生物学国家重点实验室北京100080 湖南农业大学动物科学技术学院长沙410128

S100A10是S100钙结合蛋白家族成员之一,是一种钙依赖性的信号通路的介导分子,近年来有研究表明,它在胚胎植入位点有明显的高表达.文中采用半定量RT-PCR和原位杂交方法, 研究了S100A10基因在小鼠中的组织特异性表达,在妊娠初始期胚胎植... 详细信息

S100A10是S100钙结合蛋白家族成员之一,是一种钙依赖性的信号通路的介导分子,近年来有研究表明,它在胚胎植入位点有明显的高表达.文中采用半定量RT-PCR和原位杂交方法, 研究了S100A10基因在小鼠中的组织特异性表达,在妊娠初始期胚胎植入位点、妊娠期子宫和正常动情周期子宫中的表达及其受性类固醇激素的调节.观察发现:S100A10基因在小鼠多种组织中都有表达,在卵巢、子宫、睾丸及附睾等一些生殖器官中表达水平尤为高;在妊娠第4天,子宫中S100A10基因表达明显上调,且在子宫内膜植入位点处有非常显著的高表达,其mRNA分布于对系膜侧的腔上皮细胞和功能层的基质细胞,且基质细胞中的信号强于腔上皮细胞,而非植入位点呈现极其微弱的表达;从妊娠第5天直到分娩第1天子宫内都维持恒定的S100A10表达;正常动情周期中,S100A10基因在动情前期和动情期子宫中表达明显上调;卵巢切除模型显示雌激素显著上调S100A10基因的表达,孕激素下调其表达.以上结果提示S100A10可能具有抑制胚胎植入位点腔上皮细胞的过度凋亡和促进基质细胞的增殖与蜕膜化的作用以及参与子宫应激反应过程.

关键词： S100A10基因小鼠子宫基因表达性激素妊娠期

蛋白激酶H11基因在小鼠子宫中的表达及其性激素调节

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动物学报 2005年第3期51卷 462-468页

作者：陈志强李斐雪刘璟章怀云王雁玲湖南农业大学动物科学技术学院长沙410128 中国科学院动物研究所计划生育生殖生物学国家重点实验室北京100080

为研究蛋白激酶H11基因在生殖系统中的作用,我们采用半定量RT-PCR和原位杂交方法,研究了蛋白激酶H11基因在小鼠中的组织特异性表达,在妊娠初始期胚胎植入位点、妊娠期子宫和胎盘以及正常动情周期子宫中的表达及其受性激素的调节。结果发... 详细信息

为研究蛋白激酶H11基因在生殖系统中的作用,我们采用半定量RT-PCR和原位杂交方法,研究了蛋白激酶H11基因在小鼠中的组织特异性表达,在妊娠初始期胚胎植入位点、妊娠期子宫和胎盘以及正常动情周期子宫中的表达及其受性激素的调节。结果发现:蛋白激酶H11基因在小鼠多种组织中都有表达,在卵巢及子宫等一些生殖相关的组织中表达水平较高;妊娠初始期,蛋白激酶H11基因在小鼠子宫内膜植入位点处有明显的高表达,其mRNA定位于腔上皮细胞和基质细胞中。在动情周期中,蛋白激酶H11基因在动情前期子宫中表达水平较低;卵巢切除模型显示雌激素和孕激素均可显著上调蛋白激酶H11基因的表达。以上结果提示蛋白激酶H11可能参与了胚胎植入过程中腔上皮细胞凋亡和基质细胞增殖与蜕膜化以及动情周期小鼠子宫内膜细胞的功能调节[动物学报51(3):462-468,2005]。

关键词：蛋白激酶 H11基因小鼠子宫性激素调节功能组织特异性表达动情周期

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舌的发育及其调控机制

中国细胞生物学学报 2018年第8期40卷 1424-1429页

作者：李艳俞姣姣李浩然李斐雪杭州师范大学生命与环境科学学院杭州310036

舌是参与咀嚼、吸允、吞咽、发音等功能的重要器官。舌发育异常会导致无舌、小舌、舌裂、结舌、巨舌症、腭裂等严重的先天舌发育缺陷疾病。发育完全的舌由肌肉组织、结缔组织、黏膜组织及血管组成。调控舌发育的基因有Pax3/Pax7、Dlx基... 详细信息

舌是参与咀嚼、吸允、吞咽、发音等功能的重要器官。舌发育异常会导致无舌、小舌、舌裂、结舌、巨舌症、腭裂等严重的先天舌发育缺陷疾病。发育完全的舌由肌肉组织、结缔组织、黏膜组织及血管组成。调控舌发育的基因有Pax3/Pax7、Dlx基因家族、TGF-β家族和FGF等,同时还受Shh与Wnt等信号通路调控。舌发育分子调控机制的研究对相关舌发育畸形疾病的诊断与治疗有重要意义。

关键词：舌颅面神经嵴细胞鳃弓肌原祖细胞调控机制