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薄荷醇通过mTOR活化促进人支气管上皮细胞气道炎症相关因子的表达

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南方医科大学学报 2019年第11期39卷 1344-1349页

作者：陈海博李敏超重庆医科大学附属第二医院呼吸内科

目的探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)活化对薄荷醇诱导的人支气管上皮细胞(BEAS-2B)气道炎症相关因子表达的影响及其机制。方法将细胞分为4组:正常对照组、薄荷醇组、雷帕霉素组、薄荷醇+雷帕霉素组。用CCK-8法检测细胞存活率,实时荧... 详细信息

目的探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)活化对薄荷醇诱导的人支气管上皮细胞(BEAS-2B)气道炎症相关因子表达的影响及其机制。方法将细胞分为4组:正常对照组、薄荷醇组、雷帕霉素组、薄荷醇+雷帕霉素组。用CCK-8法检测细胞存活率,实时荧光定量PCR检测瞬时受体电位蛋白-8(TRPM8)、肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1βmRNA的表达,Western blot检测BEAS-2B中磷酸化的mTOR(p-mTOR)、TRPM8、TNF-α和IL-1β的蛋白表达。用流式细胞术检测胞内Ca2+荧光强度。结果与正常对照组相比,薄荷醇组中细胞TNF-α和IL-1βmRNA及蛋白表达升高,p-mTOR蛋白表达升高,胞内Ca2+浓度升高(P0.05),p-mTOR蛋白表达降低(P0.05)。与薄荷醇组相比,薄荷醇+雷帕霉素组中细胞TNF-α和IL-1βmRNA及蛋白表达降低,p-mTOR蛋白表达降低,胞内Ca2+浓度降低(P<0.05)。结论薄荷醇可能通过活化mTOR诱导胞内Ca2+浓度升高,进而促进气道炎症相关因子IL-1β和TNF-α的表达。

关键词：人支气管上皮细胞薄荷醇瞬时受体电位蛋白-8 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白气道炎症

薄荷醇通过激活瞬时受体电位M8(TRPM8)促进BEAS-2B人支气管上皮细胞的细胞因子分泌

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细胞与分子免疫学杂志 2021年第7期37卷 577-584页

作者：胡艺馨李敏超重庆医科大学附属第二医院呼吸与危重症医学科重庆400010

目的探讨瞬时受体电位M8(TRPM8)在薄荷醇诱导BEAS-2B人支气管上皮细胞表达气道上皮源性细胞因子白细胞介素25(IL-25)、IL-33和胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)中的作用及其相关信号转导机制。方法用2 mmol/L薄荷醇处理BEAS-2B细胞1、2、3... 详细信息

目的探讨瞬时受体电位M8(TRPM8)在薄荷醇诱导BEAS-2B人支气管上皮细胞表达气道上皮源性细胞因子白细胞介素25(IL-25)、IL-33和胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)中的作用及其相关信号转导机制。方法用2 mmol/L薄荷醇处理BEAS-2B细胞1、2、3、4 h,选择IL-25、IL-33、TSLP或Ca^(2+)表达较高的时间组,通过小干涉RNA(siRNA)特异性敲低TRPM8(si-TRPM8),采用细胞内钙离子螯合剂1,2-二(2-氨基苯氧基)乙烷-N,N,N′,N′-四乙酸四乙酰氧甲基酯(BAPTA-AM)及核因子κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)处理。CCK-8法检测细胞活力;实时荧光定量PCR检测IL-25、IL-33和TSLP mRNA表达;ELISA检测培养上清液IL-25、IL-33和TSLP蛋白水平;Fluo-4 AM负载结合流式细胞术检测胞内Ca^(2+)荧光强度;Western blot法检测si-TRPM8对BEAS-2B细胞合成TRPM8蛋白的干扰效率及NF-κB p65蛋白表达的影响。结果与空白对照组比,薄荷醇组IL-25、IL-33、TSLP mRNA及蛋白、胞内Ca^(2+)水平和NF-κB p65蛋白表达均增加;敲低TRPM8后,抑制薄荷醇诱导的Ca^(2+)、IL-25、IL-33、TSLP和NF-κB p65表达增加,BAPTA-AM和PDTC均可抑制薄荷醇诱导的IL-25、IL-33和TSLP的高表达。结论薄荷醇通过激活TRPM8引起Ca^(2+)浓度升高、激活NF-κB通路诱导BEAS-2B支气管上皮细胞IL-25、IL-33和TSLP的分泌。

关键词：瞬时受体电位M8(TRPM8) BEAS-2B细胞钙离子人支气管上皮细胞白细胞介素25(IL-25) IL-33 胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)

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冷刺激敏感哮喘患者的临床及炎症表型特点

南方医科大学学报 2019年第2期39卷 181-185页

作者：郭维丽李敏超重庆医科大学附属第二医院呼吸内科重庆400010

目的探讨对冷刺激敏感的哮喘患者的临床症状、肺功能及气道炎症表型特点。方法选取于我院呼吸内科就诊的初诊支气管哮喘或诊断为支气管哮喘但未正规治疗的急性发作(轻度至中度)患者80例,根据冷空气刺激能否诱发咳嗽、喘息等呼吸道症状... 详细信息

目的探讨对冷刺激敏感的哮喘患者的临床症状、肺功能及气道炎症表型特点。方法选取于我院呼吸内科就诊的初诊支气管哮喘或诊断为支气管哮喘但未正规治疗的急性发作(轻度至中度)患者80例,根据冷空气刺激能否诱发咳嗽、喘息等呼吸道症状将其分为冷刺激不敏感组(45例)和冷刺激敏感组(35例),均予以糖皮质激素(ICS)+长效β2受体激动剂(LABA)(沙美特罗替卡松粉吸入剂50μg/250μg,2次/d)及孟鲁斯特钠(10 mg口服,1次/d)治疗3月,必要时加用短效β2受体激动剂(SABA)或(和)全身用糖皮质激素(泼尼松10 mg 1次/d或甲强龙40 mg静脉推注),分别于治疗前及治疗3月后行哮喘控制问卷(ACT)了解咳嗽、喘息等临床症状控制情况,肺功能检查明确治疗前肺功能减损及治疗后肺功能恢复情况,血及诱导痰细胞计数以明确气道炎症特点,并进行统计学分析。结果两组患者治疗前年龄、性别、体质量指数、吸烟者所占比例、过敏性鼻炎情况无统计学差异。冷刺激敏感组在就诊前1年内急性发作次数较冷刺激不敏感组多(P0.05)。冷刺激敏感组ACT评分在治疗前后均低于冷刺激不敏感组(P<0.01),且其治疗前FEV1/FVC%、FEV1%pred减损较不敏感组明显(P<0.01),治疗后FEV1/FVC%、FEV1%pred恢复程度较不敏感组差(P<0.05)。冷刺激敏感组在治疗前后血及诱导痰嗜酸性粒细胞百分比与不敏感组无显著差异;但中性粒细胞百分比明显高于不敏感组(P<0.01)。根据治疗前诱导痰细胞分类结果,冷刺激不敏感组以嗜酸性粒细胞型为主,所占比例为60%,中性粒细胞型为20%,而冷刺激敏感组以中性粒细胞型为主,其所占比例为42.86%,显著高于冷刺激不敏感组(P=0.03),嗜酸性粒细胞型仅为31.43%,显著低于冷刺激不敏感组(P=0.01)。结论冷刺激敏感哮喘患者症状常反复发作和(或)加重,其肺功能受损明显,气道内炎症表型也不同于经典哮喘,以中性粒细胞型为主。

关键词：冷刺激支气管哮喘炎症表型

威灵仙水提物对环境毒素引起胰岛细胞（INS-1）凋亡的保护作用研究

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威灵仙水提物对环境毒素引起胰岛细胞（INS-1）凋亡的保护作用研究

作者：李敏超南京中医药大学

学位级别：硕士

目的:观察不同浓度威灵仙水提物(Clematis)对多氯联苯(PCB118)诱导的胰岛β细胞凋亡的保护作用。方法:将INS-1细胞株分为对照组(control)、PCB118组(25μMPCB118)、威灵仙低剂量组(25uM PCB118 +4mg.L Clematis)以及威灵仙高剂量组(25uM... 详细信息

目的:观察不同浓度威灵仙水提物(Clematis)对多氯联苯(PCB118)诱导的胰岛β细胞凋亡的保护作用。方法:将INS-1细胞株分为对照组(control)、PCB118组(25μMPCB118)、威灵仙低剂量组(25uM PCB118 +4mg.L Clematis)以及威灵仙高剂量组(25uMPCB118 + 40mg.L Clematis),分别于药物干预 9、24、48h后于倒置显微镜下观察INS-1细胞形态,通过采用CCK-8法检测各组INS-1细胞活性,并通过流式细胞术检测细胞的凋亡率,并用Western blot检测Cleaved Caspase-3、Caspase-3 蛋白的表达。结果:于倒置显微镜下观察结果显示:PCB118刺激9、24、48h后INS-1细胞凋亡,高浓度及低浓度组的Clematis干预下PCB118诱导的INS-1细胞凋亡减少;CCK-8结果显示PCB118处理后细胞活性显著下降(P<0.01),而Clematis高低浓度组均改善PCB118的抑制作用,其中高浓度组与PCB118组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);流式细胞术检测结果显示PCB118诱导INS-1细胞早期凋亡明显(P<0.05),而Clematis干预后细胞早期凋亡改善,高浓度组更为显著(P<0.05);同时,PCB118处理组凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3 表达上调,Clematis 可以逆转 Cleaved Caspase-3 过表达。结论:威灵仙水提物(Clematis)可以抑制PCB118诱导的INS-1细胞凋亡,增强PCB118毒性环境下的INS-1细胞活性。我们的结果为中药保护胰岛β细胞提供了实验依据。

关键词：威灵仙水提物胰岛β细胞 INS-1 凋亡保护

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哮喘患者气道上皮屏障功能受损的机制

临床医学进展 2022年第4期12卷 3257-3264页

作者：吴梦李敏超重庆医科大学重庆重庆医科大学附属第二医院重庆

支气管哮喘是一类异质性疾病,发病机制主要与气道免疫–炎症、气道高反应性、气道重塑等相关。其中气道上皮屏障是呼吸道抵御外界有害物质的首要防线,发挥着化学、物理及免疫屏障的功能,是病理改变的主要部位之一。近年来已有许多研究... 详细信息

支气管哮喘是一类异质性疾病,发病机制主要与气道免疫–炎症、气道高反应性、气道重塑等相关。其中气道上皮屏障是呼吸道抵御外界有害物质的首要防线,发挥着化学、物理及免疫屏障的功能,是病理改变的主要部位之一。近年来已有许多研究发现哮喘患者的气道上皮屏障均受到不同程度的损害。气道上皮屏障的损伤与变应原、呼吸道感染、环境污染等因素息息相关,其中各种细胞因子、模式受体、信号通路参与其中。本篇综述主要介绍了气道上皮屏障的结构和分子组成,探讨上皮屏障功能障碍在哮喘发病机制中的作用以及简单介绍目前改善气道上皮屏障的一些治疗方法。

关键词：哮喘气道上皮细胞屏障功能损伤机制

露天煤矿环境基于LiDAR/IMU的紧耦合SLAM算法

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煤炭科学技术 2023年

作者：马宝良崔丽珍李敏超张清宇内蒙古科技大学信息工程学院

随着人工智能和无人驾驶等相关学科的快速发展，煤矿装备的智能化和无人化成为了新的趋势。智能设备的应用将大大提高煤矿作业的生产力以及人员安全性。露天煤矿地形复杂，与城市环境相比无明显的几何特征，具有分段相似性，利用现有以... 详细信息

随着人工智能和无人驾驶等相关学科的快速发展，煤矿装备的智能化和无人化成为了新的趋势。智能设备的应用将大大提高煤矿作业的生产力以及人员安全性。露天煤矿地形复杂，与城市环境相比无明显的几何特征，具有分段相似性，利用现有以激光雷达为主的同时定位与建图（Simultaneous localization and mapping，SLAM）方案在该环境下易出现定位漂移和建图误差较大等现象。针对上述问题，提出了一种基于激光雷达（Light Detection and Ranging，LiDAR）和惯导（Inertial Measurement Unit，IMU）紧耦合的SLAM算法，该算法使用LiDAR和IMU两种传感器作为数据输入，对数据进行预处理，前端利用迭代扩展卡尔曼滤波器将预处理后的LiDAR特征点与IMU数据相融合，并使用后向传播来矫正雷达运动畸变，后端利用雷达相对位姿因子将LiDAR帧间配准结果作为约束因子与回环因子共同完成全局因子图优化。利用开源数据集和露天煤矿实地数据集验证了算法的鲁棒性和精确性。实验结果表明在城市结构化环境中本文所提算法与当前激光SLAM算法精度保持一致，而针对长达两千多米的露天煤矿实地环境，所提算法较FAST-LIO2、LIO-SAM紧耦合算法在定位精度上分别提高了46.00%和23.15%，且具有更高的鲁棒性。

关键词：露天煤矿同时定位与地图构建激光雷达惯性导航因子图

鼻–鼻窦合并症对慢性阻塞性肺疾病患者的影响

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临床医学进展 2022年第5期12卷 4235-4239页

作者：吴雷昊李敏超重庆医科大学附属第二医院重庆

慢性阻塞性肺疾病(Chronic Obstructive Pulmonary Disease, COPD)常与多种慢性疾病共同存在。近年来已有较多研究证实上气道鼻–鼻窦合并症可通过多种泛气道的病理生理机制对COPD患者的下气道施加影响。这提示治疗患者的鼻–鼻窦合并... 详细信息

慢性阻塞性肺疾病(Chronic Obstructive Pulmonary Disease, COPD)常与多种慢性疾病共同存在。近年来已有较多研究证实上气道鼻–鼻窦合并症可通过多种泛气道的病理生理机制对COPD患者的下气道施加影响。这提示治疗患者的鼻–鼻窦合并症可能有助于COPD的病情控制。本文对鼻–鼻窦疾病参与COPD的证据进行了总结,并从合并症的角度分析了两者相互作用的机制。

关键词： COPD 泛气道疾病鼻–鼻窦疾病合并症

胞内代谢物同位素丰度的GC-MS选择离子监测模式分析方法及其在辅酶Q10发酵过程中的应用

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胞内代谢物同位素丰度的GC-MS选择离子监测模式分析方法及其在辅...

作者：李敏超华东理工大学

学位级别：硕士

在各种组学数据中,代谢通量组最能反映细胞代谢特性,而13C标记实验是准确获得代谢通量组的可靠方法。当前的13C代谢通量分析主要依赖于菌体蛋白水解氨基酸丰度的测定,只适用于与菌体生长密切关联的生物过程的研究。与蛋白水解氨基酸相比... 详细信息

在各种组学数据中,代谢通量组最能反映细胞代谢特性,而13C标记实验是准确获得代谢通量组的可靠方法。当前的13C代谢通量分析主要依赖于菌体蛋白水解氨基酸丰度的测定,只适用于与菌体生长密切关联的生物过程的研究。与蛋白水解氨基酸相比,胞内代谢物对环境变化响应快速,与生物过程产品直接相关,因此,为扩展13C代谢通量分析的应用范围,使之适用于次级代谢物和重组蛋白等产品形成与细胞生长不直接关联的生物过程,有必要研究能实现胞内代谢物丰度检测的方法。胞内代谢物周转很快,要获得能真正反映胞内代谢状况的样品,必须在取样时快速中止胞内代谢反应,为此,本文开发了一种由柱塞泵、电动转盘、冷冻系统和控制系统组成的快速取样装置。在不同工况下进行了40组实验,每次要求取样10ml。实验结果显示取样时间为28.14±0.13s,与理论计算值偏差0.14s,表明该装置能够实现秒级水平的定时定量快速取样。 GC-MS全扫描模式是蛋白水解氨基酸丰度的主要测量方法。与蛋白水解氨基酸相比,胞内代谢物浓度要低得多,需要灵敏度更高的检测方法。在代谢物组学研究中,GC-MS选择离子监测模式常用于代谢物的定量,但其在同位素丰度测定方面的应用尚没有报道。本文将GC-MS选择离子监测模式引入到胞内游离氨基酸和有机酸的丰度测定中,建立了测定流程,优化了操作条件。对自然标记标准品的分析结果表明,与全扫描模式相比,选择离子监测模式的信噪比提高了10倍以上,丰度值更接近自然标记的理论值。在此基础上,建立了辅酶Q10发酵过程13C-MFA研究方法。同位素标记实验表明,在辅酶Q10生产菌株的中心代谢中,除了通用的HMP和EMP外,还存在着ED途径。利用该代谢模型,分析了钾离子对中心代谢的影响。结果表明,钾离子与Na-K泵活性相关,钾离子缺乏使葡萄糖吸收受到抑制,HMP途径和TCA循环通量减弱,合成代谢前体供应不足,从而使菌体比生长速率降低。本文所建立的胞内代谢物同位素丰度测定方法将有力促进13C代谢通量分析在次级代谢物和重组蛋白等工业生产过程中得到更广泛应用,具有重要的理论和应用价值。

关键词： 13C标记代谢流分析快速取样装置气质联用辅酶Q10发酵过程

瞬时受体电位通道C1在豚鼠哮喘气道重塑中的作用机制及布地奈德的干预作用

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南方医科大学学报 2015年第10期35卷 1374-1379页

作者：李娜何叶李敏超重庆医科大学附属第二医院呼吸内科重庆400010

目的通过干预瞬时受体电位通道C1(TRPC1)的表达,探讨TRPC1离子通道在气道重塑演变过程中的作用机制及布地奈德的干预作用。方法雄性普通级豚鼠50只,随机均分为5组:A组为空白对照组、B组为卵蛋白刺激组、C组为卵蛋白刺激+TRPC1 siRNA干... 详细信息

目的通过干预瞬时受体电位通道C1(TRPC1)的表达,探讨TRPC1离子通道在气道重塑演变过程中的作用机制及布地奈德的干预作用。方法雄性普通级豚鼠50只,随机均分为5组:A组为空白对照组、B组为卵蛋白刺激组、C组为卵蛋白刺激+TRPC1 siRNA干扰组、D组为卵蛋白刺激+荧光素酶siRNA干预组、E组为卵蛋白刺激+布地奈德干扰组。取肺泡灌洗液(BALF),比较嗜酸性粒细胞(Eos)占总细胞数的百分比;酶联免疫吸附法(ELISA)测定BALF中IL-5,IL-13表达水平。取支气管肺组织行苏木精-伊红染色(HE)、马松三色染色(Maason),Image-Pro图像处理软件定量分析支气管壁厚度、平滑肌增殖及胶原沉积情况。免疫组化法观察TRPC1蛋白在肺内相对表达水平。实时荧光定量PCR法测定TRPC1 m RNA的相对表达。结果Image-Pro图像软件分析结果示,B组显著表现出支气管壁增厚、平滑肌增殖、基底膜胶原沉积、气道周围炎症细胞浸润、炎症因子增加等病理变化,C组、E组的上述病理变化则不明显(P<0.05)。进一步行免疫组化法显示,TRPC1蛋白位于支气管上皮粘膜层,主要分布于支气管粘膜基底细胞、柱状上皮细胞的胞膜及胞核内。结论 TRPC1通道在哮喘个体的高水平表达与气道重塑、慢性气道炎症的发生、发展密切关联;而布地奈德可在一定程度上通过调节TRPC1的表达参与气道重塑的演变。

关键词：瞬时受体电位通道C1 Ca^2+ 气道重塑基因沉默技术