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青霉MGC07产1,5-α-L-阿拉伯聚糖酶的调控研究

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食品科技 2022年第5期47卷 35-42页

作者：董昊陈洲李思霆贾英民马爱进北京工商大学食品与健康学院北京100048

阿拉伯聚糖的酶解产物L-阿拉伯糖、阿魏酰阿拉伯寡糖、阿拉伯寡糖功能独特,但目前对阿拉伯聚糖水解酶的研究较少,尚未开发出具有商业应用潜力的阿拉伯聚糖酶。该研究从土壤中筛选出一株产1,5-α-L-阿拉伯聚糖酶的真菌,结合产孢结构观察... 详细信息

阿拉伯聚糖的酶解产物L-阿拉伯糖、阿魏酰阿拉伯寡糖、阿拉伯寡糖功能独特,但目前对阿拉伯聚糖水解酶的研究较少,尚未开发出具有商业应用潜力的阿拉伯聚糖酶。该研究从土壤中筛选出一株产1,5-α-L-阿拉伯聚糖酶的真菌,结合产孢结构观察和分子生物学鉴定,确定为一株青霉(Penicillium sp.),命名为Penicillium *** 07。采用单因素法和响应面法优化该菌发酵产酶的条件,结果表明,该菌在甜菜粕39 g/L、磷酸氢二铵16 g/L、初始pH7、培养温度21℃调控条件下,发酵6 d时达到1,5-α-L-阿拉伯聚糖酶活力高峰,酶活为4.3 U/mL,是优化前的3倍。该菌株较优良的产酶能力可为该酶以酶法制备阿拉伯寡糖和阿魏酰阿拉伯寡糖提供理论支持。

关键词： 1,5-α-L-阿拉伯聚糖酶青霉菌发酵优化低聚阿拉伯糖

篮状菌发酵产1,5-α-L-阿拉伯聚糖酶条件的优化研究

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篮状菌发酵产1,5-α-L-阿拉伯聚糖酶条件的优化研究

中国食品科学技术学会第十八届年会

作者：董昊陈洲马爱进李思霆贾英民北京工商大学食品与健康学院

阿拉伯聚糖广泛存在于植物细胞壁中,因其酶解产物L-阿拉伯糖、阿魏酰阿拉伯寡糖（FAOs）与阿拉伯寡糖（AOS）的功能独特,故围绕阿拉伯聚糖水解酶的研究已成为生物领域研究的新热点。本研究分别采用单因素实验和响应面分析法优化了一株... 详细信息

阿拉伯聚糖广泛存在于植物细胞壁中,因其酶解产物L-阿拉伯糖、阿魏酰阿拉伯寡糖（FAOs）与阿拉伯寡糖（AOS）的功能独特,故围绕阿拉伯聚糖水解酶的研究已成为生物领域研究的新热点。本研究分别采用单因素实验和响应面分析法优化了一株篮状菌（Talaromyces sp.）摇瓶发酵产1,5-α-L-阿拉伯聚糖酶的条件,得到该菌株产酶的最佳条件为:甜菜粕41 g/L、磷酸氢二铵11 g/L、初始pH 7.0、发酵温度19℃、发酵时间6 d达到酶活力高峰,发酵液中1,5-α-L-阿拉伯聚糖酶的酶活力为4.3 U/mL,产酶活力是优化前的3倍。本研究为1,5-α-L-阿拉伯聚糖酶高活力菌株选育及其在阿拉伯寡糖制备中应用具有重要参考价值。

关键词： 1,5-α-L-阿拉伯聚糖酶篮状菌发酵优化响应面

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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核桃球蛋白的分离纯化、鉴定及抗氧化性分析

食品工业科技 2022年第18期43卷 105-113页

作者：徐倩陈洲王青华韩盼盼李思霆马爱进贾英民展远蓉北京工商大学食品与健康学院北京100048

为揭示核桃球蛋白主要组成及体外抗氧化活性,以脱脂核桃粕为原料,对其中的球蛋白进行分离纯化并通过2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS)阳离子自由基清除能力对其... 详细信息

为揭示核桃球蛋白主要组成及体外抗氧化活性,以脱脂核桃粕为原料,对其中的球蛋白进行分离纯化并通过2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS)阳离子自由基清除能力对其抗氧化能力进行评价,即经进一步脱脂后,根据Osborne分级法提取得到核桃球蛋白粗提物,再通过HiTrapCaptoQ阴离子交换柱和Sephacryl TM S 100HR凝胶过滤柱两步分离纯化,得到主要蛋白组分。结果表明,制备的球蛋白蛋白含量为51.53%,占核桃总蛋白的15.3%,等电点为3.8。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示,纯化得到主要蛋白组分分子量为10.1 kDa。经高效液相色谱-质谱联用分析表明,该主要蛋白组分在活性状态下由一种7S球蛋白vicilin Car i 2.0101和2S清蛋白组成。研究发现,球蛋白粗提物和纯化蛋白组分均对ABTS+自由基有较好的清除能力,其IC50值分别为0.302和0.075 mg/mL,表明纯化蛋白组分的清除能力提高了4倍以上。研究结果可为核桃球蛋白开发利用提供理论基础。

关键词：核桃球蛋白提取分离纯化鉴定抗氧化活性

外源氨基酸对侧孢短芽孢杆菌S62-9产Brevilaterin的影响

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食品科学技术学报 2021年第5期39卷 74-81页

作者：王星星陈洲韩盼盼刘杨柳李思霆贾英民北京工商大学食品与健康学院北京100048

为探究添加外源氨基酸对侧孢短芽孢杆菌S62-9(Brevibacillus laterosporus S62-9,BL)分泌抗菌肽Brevilaterin的影响,以BL发酵液的抗菌活性和Brevilaterin的组分变化为指标,分别采用琼脂扩散法和高效液相色谱法进行了分析。结果表明:添... 详细信息

为探究添加外源氨基酸对侧孢短芽孢杆菌S62-9(Brevibacillus laterosporus S62-9,BL)分泌抗菌肽Brevilaterin的影响,以BL发酵液的抗菌活性和Brevilaterin的组分变化为指标,分别采用琼脂扩散法和高效液相色谱法进行了分析。结果表明:添加L-缬氨酸、L-甲硫氨酸和2-氧代-3-甲基丁酸均能提高发酵液抗菌活性,抑菌直径最高可增加18.08%。添加外源氨基酸还能改变Brevilaterin的组分构成。添加L-甲硫氨酸后发酵液中只有抗菌肽组分Brevilaterin B和C,且二者间的相对比例发生反转;而添加L-缬氨酸或2-氧代-3-甲基丁酸还能促进BL分泌多种新组分。添加外源氨基酸能有效提高发酵液抗菌活性并改变抗菌肽的组分构成,研究结果旨在为人工调控微生物合成新型、高效的抗菌肽奠定一定的理论基础。

关键词：侧孢短芽孢杆菌抗菌肽外源氨基酸抗菌活性组分构成

黄曲霉产胞外β-1,3-1,4-葡聚糖酶的发酵条件优化

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食品科学技术学报 2019年第1期37卷 28-35页

作者：刘璐陈洲陈瑶瑶刘杨柳李思霆贾英民北京工商大学食品学院北京100048

研究发现一株高产β-1,3-1,4-葡聚糖酶的黄曲霉菌株,优化了其产酶条件并考察了粗酶潜在的工业应用价值。依次采用单因素法和响应面分析法优化该菌发酵产酶条件,得到其优化产酶条件:麸皮19 g/L、磷酸氢二铵30g/L、吐温-60 21 g/L、NaCl 5... 详细信息

研究发现一株高产β-1,3-1,4-葡聚糖酶的黄曲霉菌株,优化了其产酶条件并考察了粗酶潜在的工业应用价值。依次采用单因素法和响应面分析法优化该菌发酵产酶条件,得到其优化产酶条件:麸皮19 g/L、磷酸氢二铵30g/L、吐温-60 21 g/L、NaCl 5 g/L、MgSO_4·7H_2O 0. 5 g/L、KH_2PO_40. 75 g/L、培养基初始pH值8. 0、培养温度38℃、培养时间6d。在此条件下,黄曲霉能够分泌的最高胞外β-1, 3-1,4-葡聚糖酶酶活达155.9 U/mL。水解研究发现,该酶能高效降解大麦粉和燕麦粉中的β-葡聚糖,并直接生成葡萄糖。这些结果表明,黄曲霉能高效分泌β-1,3-1,4-葡聚糖酶,且该酶具有较强的工业应用前景。

关键词：黄曲霉 β-1,3-1,4-葡聚糖酶发酵条件响应面分析水解

过表达微小RNA miR-125b抑制肝癌细胞上皮-间质转换及促进细胞凋亡

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中国生物化学与分子生物学报 2016年第6期32卷 656-664页

作者：张彪曾泉王海洋李思霆南雪何丽娟岳文周军年裴雪涛军事医学科学院野战输血研究所全军干细胞与再生医学重点实验室北京100850 军事医学科学院华南干细胞与再生医学研究中心广州510005

微小RNA 125b(miR-125b)在许多恶性肿瘤的增殖、分化和凋亡等过程中具有很重要的作用,但miR-125b是否涉及肝癌的上皮-间质转换过程(EMT)还有待进一步研究。本研究通过构建过表达miR-125b的肝癌稳转细胞株,初步检测miR-125b对于肝癌的EM... 详细信息

微小RNA 125b(miR-125b)在许多恶性肿瘤的增殖、分化和凋亡等过程中具有很重要的作用,但miR-125b是否涉及肝癌的上皮-间质转换过程(EMT)还有待进一步研究。本研究通过构建过表达miR-125b的肝癌稳转细胞株,初步检测miR-125b对于肝癌的EMT过程和相关的TGF-β信号通路的影响,以及对于肝癌细胞凋亡的影响。以慢病毒载体p HRS-1cla-EGFP构建过表达miR-125b的载体质粒(p HRS-1cla-miR125b-CMV-EGFP),并对上述载体进行NheⅠ、XbaⅠ双酶切和测序鉴定,鉴定正确后,在293T细胞中进行慢病毒包装,浓缩病毒后,对MHCC97-H进行慢病毒感染并采用流式分选GFP阳性的细胞。实时定量PCR检测表明肝癌细胞稳转株MHCC97-H-PHRSmiR-125b-EGFP的miR-125b表达量是空载体转染组的6倍。Western印迹检测发现,与空载体对照组相比,MHCC97-H-PHRS-miR-125b-EGFP细胞中间质细胞标志α-SMA表达显著下调,上皮细胞标志E-cadherin表达显著上调,同样的,用Western印迹检测也发现MHCC97-H-PHRS-miR-125b-EGFP细胞中TGF-β信号通路关键下游分子Smad2和Smad4的表达显著下调,细胞凋亡检测结果表明,与对照组相比,过表达miR-125b的稳转株凋亡率增加到19.66%,加入TGF-β1后,过表达miR-125b的稳转株凋亡率进一步增加到74.7%。同样的,在体内治疗实验中,我们采用商品化的体内核酸转染试剂,在皮下肿瘤组织中过表达miR-125b mimics,结果表明miR-125b的过表达与肿瘤组织的凋亡成正相关性(r=0.83463,P<0.01),且免疫组化结果也表明,miR-125b过表达后,E-cadherin表达显著上调,α-SMA及Smad2和Smad4的表达显著下调。上述结果表明,我们成功构建了过表达miR-125b的肝癌细胞稳转株,并成功建立了肿瘤组织中过表达miR-125b mimics的动物模型,在体内外均观察到过表达miR-125b后对肝癌细胞EMT过程的抑制作用和对细胞凋亡的促进作用。相关研究结果加深了我们对miR-125b在肝癌中抑制肝癌发展作用机制的理解,及其作为潜在的治疗肝癌的新靶点的重要性。

关键词：肝细胞癌 miR-125b 过表达细胞凋亡

肝癌细胞上皮-间质转换模型的建立与差异性表达微小RNA分子的高通量筛选

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军事医学 2016年第6期40卷 456-459,478页

作者：王海洋曾泉张彪李思霆南雪何丽娟岳文周军年裴雪涛军事医学科学院野战输血研究所干细胞与再生医学研究室北京100850 军事医学科学院华南干细胞与再生医学研究中心广州510005

目的拟利用转化生长因子β1（TGF-β1）诱导人肝癌细胞发生上皮-间质转换（epithelial-mesenchymal transition,EMT）,建立EMT模型。方法在低血清培养条件下,用TGF-β1处理肝癌细胞2～6 d,观察细胞形态变化,采用Western印迹检测EMT典型... 详细信息

目的拟利用转化生长因子β1（TGF-β1）诱导人肝癌细胞发生上皮-间质转换（epithelial-mesenchymal transition,EMT）,建立EMT模型。方法在低血清培养条件下,用TGF-β1处理肝癌细胞2～6 d,观察细胞形态变化,采用Western印迹检测EMT典型标志物的表达变化,流式细胞术检测肝癌肿瘤干细胞标志物CD13和Ep CAM的表达变化,并利用微小RNA芯片技术（miRNA chip）筛选和分析TGF-β1处理前后差异表达的miRNA。结果经10 ng/ml TGF-β1诱导2～6 d后,多数细胞形态由上皮样转变为成纤维样,细胞间隙明显增大;Western印迹定量分析结果显示,10 ng/ml TGF-β1处理后,肝癌细胞E-钙黏蛋白（cadherin）表达水平显著性下调;流式细胞术结果显示,CD13和Ep CAM显著性上调;对miRNA芯片结果分析得到35种差异表达比较显著的miRNA,经过生物信息学分析,这些差异表达的miRNA在转录调控中发挥了重要作用。结论在低血清培养条件下,用10 ng/ml TGF-β1处理肝癌细胞2～6 d,细胞发生明显的EMT过程,利用该法可成功建立肝细胞癌的体外EMT细胞模型,在此模型中,可对差异表达的miRNA进行筛选分析和进一步的功能研究。

关键词：癌,肝细胞上皮-间质转换转化生长因子β1 微小RNA

主动脉-性腺-中肾区、卵黄囊和循环血来源的CD41^＋细胞分化潜能比较

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中华血液学杂志 2013年第10期34卷 887-892页

作者：李思霆周军年陈海旭谢一帆贺文艳南雪岳文刘兵裴雪涛军事医学科学院野战输血研究所全军干细胞与再生医学重点实验室北京100850 军事医学科学院附属医院肿瘤学研究室

目的比较小鼠胚胎不同造血组织来源的CD41^＋细胞向造血、间质、内皮细胞分化的潜能。方法取小鼠胚胎孕11d主动脉-性腺-中肾（AGM）区、卵黄囊（YS）和循环血（CB）来源的造血细胞经流式细胞术分选获得CD41^＋细胞，并检测CD41^＋细胞中... 详细信息

目的比较小鼠胚胎不同造血组织来源的CD41^＋细胞向造血、间质、内皮细胞分化的潜能。方法取小鼠胚胎孕11d主动脉-性腺-中肾（AGM）区、卵黄囊（YS）和循环血（CB）来源的造血细胞经流式细胞术分选获得CD41^＋细胞，并检测CD41^＋细胞中CD45和***的表达；采用IL-3、骨形态发生蛋白4（BMP-4）预处理半固体培养法评估CD41^＋细胞造血分化潜能的差异；采用荧光免疫法检测CD41^＋细胞α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA，间质细胞标志）的表达；采用向内皮细胞分化诱导的培养条件观察其内皮分化潜能。结果在AGM区、YS、CB来源的CD4l^＋细胞中，CD45^＋细胞比例分别为51．9％、45．8％、22．2％，c-kit^＋细胞比例分别为40．0％、39．6％、36．2％。在IL-3刺激后，与未刺激组相比AGM、YS、CB来源的CD41’细胞总的造血细胞集落形成数量均显著增加[（14．1=k1．9）对（1．2＋0．2）；（32．4士1．1）对（18．4士2．2）；（41．84-0．9）对（10．44-1．8）]（P〈0．01）。BMP-4刺激后，与未刺激组相比：AGM、YS来源的CD41’细胞生成CFU-Mix的数量下降[（0．54-0．6）对（3．2士0．8）；（1．3＋0．7）对（7．4土1．7）]（P〈0．01）；但CB来源的CD41^＋细胞生成***的数量无明显变化[（2．54-0．5）对（3．94-1．5）]（P〉0．01）。AGM、YS来源的CD41^＋细胞高表达α-SMA，但CB来源的CD41^＋细胞低表达d-SMA。结论小鼠胚胎不同造血组织来源的CD41^＋细胞在免疫表型、造血细胞集落形成及细胞因子刺激应答方面存在明显差异。

关键词：造血胚胎发育白细胞介素3 骨形态发生蛋白质4 抗原 CD41

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侧孢短芽孢杆菌抗菌肽的中试发酵工艺研究

侧孢短芽孢杆菌抗菌肽的中试发酵工艺研究