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双酶偶联催化分光光度法测定血清次黄嘌呤

光谱学与光谱分析 2008年第9期28卷 2169-2172页

作者：李忠琴许小平王武江南大学工业生物技术教育部重点实验室

依据黄嘌呤氧化酶和辣根过氧化物酶催化反应的特征,研究了以黄嘌呤氧化酶-辣根过氧化物酶-苯酚-4-氨基安替比林为反应显色体系,建立了检测血清和组织中次黄嘌呤浓度的新方法。通过对该测定体系影响因素的考察,确定最佳反应条件为：黄嘌... 详细信息

依据黄嘌呤氧化酶和辣根过氧化物酶催化反应的特征,研究了以黄嘌呤氧化酶-辣根过氧化物酶-苯酚-4-氨基安替比林为反应显色体系,建立了检测血清和组织中次黄嘌呤浓度的新方法。通过对该测定体系影响因素的考察,确定最佳反应条件为：黄嘌呤氧化酶（XO,EC1.***.3.22）0.32U·mL^-1,辣根过氧化物酶（HRP）7.0U·mL^-1,4-氨基安替比林（AAP）1mmol·L^-1,苯酚（PA）6mmol·L^-1溶于100mmol·L^-1 Tris-HCL缓冲液（pH8.3）;反应温度为37℃,保温时间为8min;检测波长为508nm。测定次黄嘌呤浓度的线性范围为0.2～3.0mmol·L^-1,线性关系良好（r=0.9979）,检测限为0.05mmol·L^-1。方法操作简单易行,测定结果准确可靠。可有效应用于普通实验室和常规临床血液生化检测。

关键词：黄嘌呤氧化酶辣根过氧化物酶次黄嘌呤检测分光光度

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卡那霉素A、B组分分离纯化新技术研究

卡那霉素A、B组分分离纯化新技术研究

作者：李忠琴福州大学

学位级别：硕士

目前国内卡那霉素生产过程大多采用732强酸性阳离子交换树脂静态吸附、动态洗脱工艺。针对该工艺存在的缺陷，本工作进行卡那霉素A、B组分分离纯化新技术研究。卡那霉素A、B属于多元弱碱水溶性化合物。本工作分别采用基于缓冲体系... 详细信息

目前国内卡那霉素生产过程大多采用732强酸性阳离子交换树脂静态吸附、动态洗脱工艺。针对该工艺存在的缺陷，本工作进行卡那霉素A、B组分分离纯化新技术研究。卡那霉素A、B属于多元弱碱水溶性化合物。本工作分别采用基于缓冲体系原理的分段线性回归分析、联立方程的算法和基于酸碱滴定通式的Rosenbrock算法，处理卡那霉素A、B电位滴定数据。估算得到的卡那霉素A多元离解常数与文献报道的数值吻合。本论文首次全面报道了卡那霉素B的离解常数：根据卡那霉素A、B的电离度模拟不同pH条件下各价态的分布系数曲线(pH-分布系数曲线)。以发酵液为原料，筛选了八种不同类型强酸性和弱酸性阳离子交换树脂。弱酸性大孔型D-186树脂具有卡那霉素吸附总量高、杂质吸附量少和卡B组分富集率高的特点。运用正交试验设计法优化了上柱吸附富集条件(pH7.0，流速2.0V／V／h)和杂质洗脱条件(硫酸铵溶液浓度1.0％(v／v)，pH7.5，流速1.25V／V／h)。采用D-186树脂和732树脂四柱串联动态吸附洗脱工艺流程，可以有效富集发酵液中的卡那霉素B组分。在发酵不正常时，能够保证卡碱产品的质量。采用D-186树脂从结晶母液中分离卡那霉素A、B组分。运用正交试验设计法优化上柱吸附富集条件(母液稀释浓度1.26万u／ml,pH7.0,流速1.5VN／h)和杂质洗脱条件(硫酸铵溶液浓度1.5％(V／V)，pH7.5，流速1.75V／V／h)。采用三柱串联动态吸附洗脱工艺路线，使卡那霉素A、B组分的总回收率分别达到80％和93％以上，杂质去除串达到99％。将从发酵液和结晶母液中富集的卡那霉素B组分枓液浓缩后按比例混合(浓度30～35万u／ml，卡B组分含量约占35％)，采用阴离子交换树脂H401进行柱层析分离。优化了层析分离操作条件：①粒径80目(0.20mm)，交联度2.5的H401阴离子交换树脂：②上柱量为1.05ug/ml：③洗脱剂NH4OH浓度0.6％(V／V)：④洗脱流速0.5ml／min。卡A产品纯度达到99.5％，卡B产品纯度达到90％以上。

关键词：卡那霉素多元离解常数离子交换树脂竞争吸附结晶母液分离纯化层析分离

大黄鱼(Pseudosciaena crocea)致病性维氏气单胞菌的分离鉴定与药敏特性研究

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海洋与湖沼 2017年第1期48卷 139-147页

作者：李忠琴张坤林茂赖晓健江兴龙集美大学水产学院厦门361021 鳗鲡现代产业技术教育部工程研究中心厦门361021 厦门市渔用药物工程技术研究中心厦门361021

本研究从自然发病的养殖大黄鱼(Pseudosciaena crocea)肝脏处分离得到1株优势菌9L2,经形态学观察和传统生理生化鉴定,显示该菌为发酵型革兰氏阴性短杆菌,有动力,氧化酶阳性,水解赖氨酸及色氨酸等。利用Biolog细菌鉴定方法进行种属鉴定,... 详细信息

本研究从自然发病的养殖大黄鱼(Pseudosciaena crocea)肝脏处分离得到1株优势菌9L2,经形态学观察和传统生理生化鉴定,显示该菌为发酵型革兰氏阴性短杆菌,有动力,氧化酶阳性,水解赖氨酸及色氨酸等。利用Biolog细菌鉴定方法进行种属鉴定,确定9L2为维氏气单胞菌(Aeromonas veronii),相似性达100%。同时对其16S rDNA基因进行PCR扩增、测序和系统发育分析,结果表明该菌与气单胞菌属的菌株亲缘关系最近,与维氏气单胞菌(登录号为LMG13695)的16S rRNA基因序列相似性达99.79%。经人工腹腔注射感染吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)的试验结果表明,9L2对罗非鱼的半数致死剂量LD_(50)为1.08×10~3CFU/g。24种抗生素药敏试验结果表明,该菌株对诺氟沙星、新生霉素、呋喃妥因、头孢曲松等13种药物高度敏感,对洛美沙星、卡那霉素等5种药物中度敏感,对利福平、青霉素等6种药物产生耐药性。20种中药体外抑菌试验结果表明,其中11种对致病菌体外抑菌效果较好,平均抑菌浓度范围为0.11—7.20mg/mL。

关键词：大黄鱼维氏气单胞菌药敏实验病原菌

辣根过氧化物酶分光光度法测定黄嘌呤氧化酶的活性

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分析化学 2006年第6期34卷 821-824页

作者：李忠琴许小平杨海麟王武江南大学工业生物技术教育部重点实验室福州大学化学化工学院

研究了以辣根过氧化物酶-苯酚-4-氨基安替比林反应显色新体系,检测黄嘌呤氧化酶(XOD)活力的新方法。确定该酶活性测定的最佳条件为:辣根过氧化物酶(HRP)7000 U/L,4-氨基安替比林(AAP)1 mmol/L,苯酚(PA)6 mmol/L,黄嘌呤(XAN)1 mmol/L溶于... 详细信息

研究了以辣根过氧化物酶-苯酚-4-氨基安替比林反应显色新体系,检测黄嘌呤氧化酶(XOD)活力的新方法。确定该酶活性测定的最佳条件为:辣根过氧化物酶(HRP)7000 U/L,4-氨基安替比林(AAP)1 mmol/L,苯酚(PA)6 mmol/L,黄嘌呤(XAN)1 mmol/L溶于50 mmol/L Tris-CL缓冲液(pH 8.4);反应温度为37℃,保温时间为20 m in;检测波长为508 nm。本方法测定XOD酶活的线性范围为5.0~100.0 U/L,线性关系良好(r=0.9992),检出限为1.3 U/L。该方法操作简单易行,测定结果准确可靠。可有效应用于普通实验室和临床常规生化检测。

关键词：黄嘌呤氧化酶辣根过氧化物酶酶的活力测定分光光度法

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卡那霉素A、B多元弱碱离解常数的测定

高校化学工程学报 2004年第2期18卷 185-190页

作者：李忠琴许小平孟春石贤爱郭养浩福州大学药物生物技术与工程研究所福建福州350002

采用电位滴定法和实验数据分段线性回归分析方法测定并估算了卡那霉素A、B的多元弱碱离解常数,报导了卡那霉素B的五级离解常数 (pKa1=9.11,pKa2=8.22,pKa3=7.43,pKa4=6.56,pKa5=5.61)。并用计算机拟合了在不同pH值条件下卡那霉素A、B各... 详细信息

采用电位滴定法和实验数据分段线性回归分析方法测定并估算了卡那霉素A、B的多元弱碱离解常数,报导了卡那霉素B的五级离解常数 (pKa1=9.11,pKa2=8.22,pKa3=7.43,pKa4=6.56,pKa5=5.61)。并用计算机拟合了在不同pH值条件下卡那霉素A、B各价态离子的分布曲线,为卡那霉素A、B的分离纯化提供了重要的理论依据。

关键词：卡那霉素B 多元离解常数分离纯化价态分布曲线

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胆固醇氧化酶高产菌株的复合诱变选育

食品工业科技 2006年第6期27卷 87-89页

作者：桑吉王龙刚李忠琴王武江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214036

为进一步提高产酶水平,本实验采用超声波联合亚硝基胍的复合诱变方法处理胆固醇氧化酶产生菌(甾短杆菌),通过1mg/mL亚硝基胍和超声(200W,50kHz,35min)同时处理细胞悬液,获得一株红色突变株,其产酶活力从0.5U/mL提高到1.21U/mL,酶活提高... 详细信息

为进一步提高产酶水平,本实验采用超声波联合亚硝基胍的复合诱变方法处理胆固醇氧化酶产生菌(甾短杆菌),通过1mg/mL亚硝基胍和超声(200W,50kHz,35min)同时处理细胞悬液,获得一株红色突变株,其产酶活力从0.5U/mL提高到1.21U/mL,酶活提高了140%。证明该联合诱变手段对甾短杆菌产胆固醇氧化酶具有良好的诱变效果。

关键词：胆固醇氧化酶甾短杆菌复合诱变亚硝基胍超声波

太平洋双色鳗鲡(Anguilla bicolor pacifica)致病性类志贺邻单胞菌的鉴定和中药敏感性研究

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海洋与湖沼 2016年第6期47卷 1185-1192页

作者：赖晓健杨方园李忠琴集美大学水产学院厦门361021 鳗鲡现代产业技术教育部工程研究中心厦门361021

从发病死亡的养殖太平洋双色鳗鲡(Anguilla bicolor pacifica)肝脏中分离到一株优势菌AMSH1,为研究其种属、毒力及中药敏感性,结合BIOLOG微生物鉴定系统和16S r DNA序列分析对该菌株进行鉴定,并通过人工回归感染试验确定其致病性。此外... 详细信息

从发病死亡的养殖太平洋双色鳗鲡(Anguilla bicolor pacifica)肝脏中分离到一株优势菌AMSH1,为研究其种属、毒力及中药敏感性,结合BIOLOG微生物鉴定系统和16S r DNA序列分析对该菌株进行鉴定,并通过人工回归感染试验确定其致病性。此外,还研究了10味中药单用、10种双联用和4种三联用对该菌株的体外抑菌作用。结果显示该菌株为类志贺邻单胞菌(Plesiomonas shigelloides)。经人工腹腔注射感染健康太平洋双色鳗鲡,证实该菌具有致病性,半致死量LD50为3.2×105CFU/g。药敏试验结果表明,10味中药均有较好的抑菌效果,其中五倍子(Galla chinensis)、丁香(Eugenia caryophllata)和生地榆(Sanguisorba officinalis)的效果最好,7种双联用复方和1种三联用复方均具有协同抑菌作用。本次引起太平洋双色鳗鲡发病的病原为类志贺邻单胞菌,该菌对太平洋双色鳗鲡的致病性及其中药药敏的研究属首次报道。建议选用含五倍子的中药双联用复方或三联用复方进行防治,皆绿色环保。

关键词：太平洋双色鳗鲡类志贺邻单胞菌病原菌药敏试验

从结晶母液中提取分离卡那霉素A、B的工艺优化研究

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中国抗生素杂志 2002年第2期27卷 111-115页

作者：李忠琴林海英孟春石贤爱郭养浩福州大学药物生物技术与工程研究所福州350002

以卡那霉素提取工艺产生的结晶母液为原料 ,通过比较不同类型阳离子交换树脂的吸附性能 ,筛选出卡那霉素 B富集率高和杂质吸附率较低的 D4 阳离子交换树脂。采用多因素多水平的正交试验设计 ,确定了较佳的吸附富集条件为 :上柱结晶母液 ... 详细信息

以卡那霉素提取工艺产生的结晶母液为原料 ,通过比较不同类型阳离子交换树脂的吸附性能 ,筛选出卡那霉素 B富集率高和杂质吸附率较低的 D4 阳离子交换树脂。采用多因素多水平的正交试验设计 ,确定了较佳的吸附富集条件为 :上柱结晶母液 p H7.0 ,上柱母液浓度 1.2 6万 u/ ml,吸附流速 1.5 V/ (v· h) ;进一步确定了较佳的除杂质洗脱条件为 :硫酸铵溶液浓度 1.5 % (v/ v) ,p H7.5 ,流速 1.75 V/ (v·h)。通过在阳离子交换树脂上的吸附富集和除杂质处理后 ,再用 4 %氨水将卡那霉素洗脱下来 ,将洗脱液浓缩 ,再经过 A4阴离子交换树脂层析分离 ,可获得高纯度的卡那霉素 A。

关键词：结晶母液卡那霉素阳离子交换树脂D4 竞争吸附性能杂质去除

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从发酵液中分离提取卡那霉素的新工艺研究

中国抗生素杂志 2002年第6期27卷 328-331,356页

作者：李忠琴郭养浩林海英孟春石贤爱福州大学化学化工学院福州350002 福州大学生物工程系福州350002

以卡那霉素发酵液为原料 ,通过比较不同类型阳离子交换树脂的吸附特性 ,筛选出卡那霉素B的吸附率高、杂质吸附量较低和卡那霉素吸附总量较高的D4阳离子交换树脂。确定了较佳的吸附富集条件为 :上柱发酵液的pH7.0 ,吸附流速 1.5v/(v·h) ... 详细信息

以卡那霉素发酵液为原料 ,通过比较不同类型阳离子交换树脂的吸附特性 ,筛选出卡那霉素B的吸附率高、杂质吸附量较低和卡那霉素吸附总量较高的D4阳离子交换树脂。确定了较佳的吸附富集条件为 :上柱发酵液的pH7.0 ,吸附流速 1.5v/(v·h) ;进一步确定较佳的除杂洗脱条件为 :硫酸铵溶液浓度 1.0 %(v/v) ,pH7.5 ,流速 1.2 5v/(v·h)除杂质。最后用 4%(v/v)氨水洗脱。经过在阳离子交换树脂上的吸附富集和除杂质后 ,可以将发酵液卡那霉素中约含 2 .5 %的卡那霉素B组分提高到 6%以上。通过采用多柱串联工艺流程 ,达到分离富集卡那霉素B组分 ,提高卡那霉素碱成品 (卡那霉素A碱 )

关键词：发酵液分离提取卡那霉素组分分离杂质去除阳离子交换树脂D4 多柱串联工艺