检索结果-南通市图书馆

肺炎嗜衣原体主要外膜蛋白的克隆表达与抗原性研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

肺炎嗜衣原体主要外膜蛋白的克隆表达与抗原性研究

作者：李岩伟中国人民解放军军事医学科学院

学位级别：硕士

肺炎嗜衣原体(chlamydophila pneumoniae, Cpn)是严格的细胞内寄生菌,1965年首次从台湾一名儿童患者的眼结膜中分离得到,1989年被命名为肺炎衣原体,2004年更名为肺炎嗜衣原体。与其他衣原体一样,Cpn具有独特的发育周期,具有感染能力强... 详细信息

肺炎嗜衣原体(chlamydophila pneumoniae, Cpn)是严格的细胞内寄生菌,1965年首次从台湾一名儿童患者的眼结膜中分离得到,1989年被命名为肺炎衣原体,2004年更名为肺炎嗜衣原体。与其他衣原体一样,Cpn具有独特的发育周期,具有感染能力强、对外界环境耐受、电子致密的原体(elementary body, EB)形态,感染宿主细胞后,发育成代谢活跃的网状体(reticulate body, RB)形态,感染后几个小时,经过二分裂繁殖形成大量的EB,细胞破裂后释放出新的EB感染新的宿主细胞。Cpn是在世界范围内引起咽炎、窦炎、支气管炎和10%～15﹪社区获得性肺炎的呼吸道传染病原菌,大约50﹪的人在20岁之前感染过Cpn,再次感染也很普遍。近年来Cpn得到更多的关注是因为它与人类许多慢性疾病有关,如动脉硬化症、心血管疾病、脑膜炎、多重硬化症和哮喘等。主要外膜蛋白(major outer membrane protein, MOMP)是衣原体特征抗原之一,占衣原体外膜蛋白的60%以上,在EB和RB中都存在。编码Cpn MOMP的基因ompA开放读码框有1167个bp组成,与沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)L2型ompA基因和鹦鹉热嗜衣原体(Chlamydophila Psittaci,Cps)羊流产株ompA基因分别有68%和71%的同源性,编码的氨基酸序列分别有73%和80%的同源性。Cpn MOMP包含4个可变区(variable domain,VD)和5个保守区,在保守区含有7个保守的半胱氨酸残基,其形成的二硫键是维持MOMP高级结构的重要组成部分。通过Cpn不同菌株VDⅣ序列和MOMP全序列的比较,Cpn MOMP具有高度的保守性。Cpn MOMP是Cpn感染中的重要免疫原,能在Westen Blot试验中被Cpn感染的病人血清识别。由于Cpn培养困难,无法通过提取和纯化大量获得天然Cpn-MOMP,因此研究者试图通过基因工程的方法获得重组Cpn MOMP(rCpn-MOMP),用作Cpn感染诊断和疫苗研究。本课题根据NCBI网站公布的Cpn OmpA基因序列设计引物,用ATCC VR1360 Cpn菌株基因组作为模板,PCR扩增得到OmpA开放读码框除前导肽以外的序列。经1%琼脂糖凝胶电泳分析,扩增产物大小为1100bp,与预期值一致。扩增产物与pMD18T载体构建克隆质粒pMD18T-MOMP,化学转化感受态细胞JM109,对克隆菌株经过PCR筛选、限制性内切酶NcoⅠ和SalⅠ双酶切鉴定,结果表明获得的pMD18T-MOMP含有扩增得到的目的基因片段。pMD18T-MOMP双酶切获得MOMP片段与同样双酶切的pET32a片段构建表达质粒pET32a-MOMP,转化BL21(DE3)感受态细胞得到重组表达工程菌株。鉴定结果显示,插入目的片段正确,由于融合了硫氧还蛋白,得到的rCpn-MOMP分子量为56KDa,测得表达质粒序列全长1738bp,其中64-1644bp为开放读码框,编码527个氨基酸。此序列经NCBI BLAST与已知序列比对,一致率99%,其中第873位碱基突变,突变的碱基所在的密码子由TTT变为TTC,仍编码phe,开放读码框正确,保证了rCpn-MOMP一级序列的准确性。摸索了构建的工程菌株诱导表达rCpn-MOMP的最佳条件,发现温度对诱导表达的效果影响显著,当温度为28℃时,IPTG终浓度1mM诱导4.5h,可获得rCpn-MOMP以包涵体形式高效表达,表达量占菌体蛋白的53%。包涵体经洗涤后用8M尿素变性,梯度浓度透析复性,纯化的rCpn-MOMP纯度可达90%以上,每升LB培养基可获得纯蛋白350mg。在WB实验中,rCpn-MOMP能被鼠抗Cpn抗体识别,说明rCpn-MOMP具有较好的抗原性。尤其是rCpn-MOMP能与Cpn抗体阳性患者血清在56KDa处产生特异的沉淀线,这一结果为rCpn-MOMP用于Cpn感染诊断和疫苗研究奠定基础。

关键词：肺炎嗜衣原体重组主要外膜蛋白抗原性

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

基于数据挖掘的学科评价方法研究

基于数据挖掘的学科评价方法研究

作者：李岩伟吉林大学

学位级别：硕士

数据挖掘技术是在海量数据中进行有用信息提取的重要有效手段。通过数据挖掘，人们可以从大量数据中获取感兴趣和有用的信息。目前，数据挖掘技术已经在商业等领域进行了广泛的应用。然而，其应用范围不仅仅局限于此。通过了解我们可以... 详细信息

数据挖掘技术是在海量数据中进行有用信息提取的重要有效手段。通过数据挖掘，人们可以从大量数据中获取感兴趣和有用的信息。目前，数据挖掘技术已经在商业等领域进行了广泛的应用。然而，其应用范围不仅仅局限于此。通过了解我们可以发现，数据挖掘技术在教育领域的应用相对较少，尤其在学科质量评价体系中的应用更为稀缺。所以，本文通过对学科相关数据的搜集整理和挖掘，给出了一套行之有效的科学评估手段，从而为学科之间横向和纵向的评比提供了参考依据，并对学科的建设和发展提供了相关的指导意见。为了实现建立一套科学可行的学科评价体系的目的，我们尝试利用数据挖掘的相关知识进行研究，其中主要应用到了经典的决策树分类算法：ID3算法，以及关联规则中的Apriori算法。本文中我们对Apriori算法进行了使用，并给出了一套基于这两种算法的学科评价体系方法。第一章主要介绍数据挖掘的国内外研究背景及现状，提出学科评价的理论意义以及实现学科评价系统的实用价值。第二章从学科评价的相关知识入手，对本文要研究的问题进行简要的阐述。第三章中首先详细介绍了数据挖掘中的相关概念以及应用到的技术。对数据挖掘的任务、过程、基本的分类聚类方法，常用的挖掘技术等方面进行了简要阐述和说明;然后以ID3决策树算法和Apriori关联规则算法为切入点，详细探讨了数据挖掘的具体算法，分析如何在属性选择度量采取信息论中熵的概念，以及如何对决策树进行剪枝;最后以购物车问题为例，对关联规则进行了相关阐述，介绍了支持度和置信度的概念，并就Apriori算法进行了相关描述。第四章对数据挖掘在学科质量评价体系中的应用设计和实现过程进行介绍，其中本文重点完成了对相关数据的预处理过程，设计了两个数据挖掘模型，实现了数分类处理的工作。第五章中主要总结和讨论了在学科评价领域中应用数据挖掘相关知识的可行性，并对在实现学科评价系统过程中产生的不足之处加以分析且提出了后续意见，希望对今后的研究工作起到指导作用。

关键词：数据挖掘 ID3决策树算法 Apriori算法学科评价

副溶血弧菌耐热直接溶血素DAS-ELISA检测方法的建立

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国人兽共患病学报 2022年第8期38卷 666-672页

作者：白雪欣胡宸艺金志颖万伟李月王菁李岩伟高姗王景林安徽医科大学基础医学院合肥230032 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的建立副溶血弧菌耐热直接溶血素的双抗体夹心ELISA(double antibody sandwich ELISA,DAS-ELISA)检测方法。方法本研究通过PCR技术扩增副溶血弧菌耐热直接溶血素基因序列,并将其克隆至pET-28a载体后进行原核表达,对表达蛋白进行纯化... 详细信息

目的建立副溶血弧菌耐热直接溶血素的双抗体夹心ELISA(double antibody sandwich ELISA,DAS-ELISA)检测方法。方法本研究通过PCR技术扩增副溶血弧菌耐热直接溶血素基因序列,并将其克隆至pET-28a载体后进行原核表达,对表达蛋白进行纯化和鉴定,随后用高纯度的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,得到抗体后利用分子互作测定抗体的亲和力,并利用该抗体建立检测副溶血弧菌耐热直接溶血素的DAS-ELISA方法。通过棋盘法对该方法的反应条件进行优化,建立标准曲线,并对建立的DAS-ELISA方法进行性能评价及初步应用。结果本实验制备的多克隆抗体亲和力可达1×10^(-8),使用该高亲和力抗体建立的DAS-ELISA方法灵敏度为78 ng/mL,定量范围为78~312 ng/mL;与创伤弧菌溶细胞毒素(Vibrio vulnificus hemolysin,VVH)、产气荚膜梭菌α毒素(Clostridium perfringensαtoxin,CPA)以及产气荚膜梭菌ε毒素(epsilon toxin,ETX)均无交叉反应;利用扇贝、花蛤和魁蚶制备海鲜模拟样本,在上述3种模拟样本内添加重组蛋白构建标准曲线,评价本方法复杂基质中检出能力时发现灵敏度均并未发生改变;同时在上述3种模拟样本中添加菌液上清评价本方法检测天然毒素能力,检出率为100%。结论成功构建了一种用于副溶血弧菌耐热直接溶血素检测的DAS-ELISA方法,该方法特异性强、灵敏度高,适用于复杂基质检测,有望开发成副溶血弧菌耐热直接溶血素快速诊断试剂盒,具有良好的应用前景。

关键词：耐热直接溶血素多克隆抗体 DAS-ELISA

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

基于微针的经皮免疫的应用现状及研究进展

生物工程学报 2022年第9期38卷 3301-3315页

作者：李月王菁金志颖万伟白雪欣胡宸艺李岩伟辛文文康琳杨浩王景林高姗军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所北京100071

微针经皮免疫借助微针刺破皮肤的角质层,使疫苗高效地被抗原提呈细胞识别后引起特异性免疫应答,从而实现疫苗的经皮免疫。由于微针的经皮免疫所具有的高效诱导免疫应答、低痛感、易储存等优点,近年来被广泛应用于多种疫苗免疫接种。本... 详细信息

微针经皮免疫借助微针刺破皮肤的角质层,使疫苗高效地被抗原提呈细胞识别后引起特异性免疫应答,从而实现疫苗的经皮免疫。由于微针的经皮免疫所具有的高效诱导免疫应答、低痛感、易储存等优点,近年来被广泛应用于多种疫苗免疫接种。本综述对用于经皮免疫的各类微针(固体微针、空心微针、涂层微针和可溶性微针)的制备材料、在经皮免疫的应用、领域的研究热点与尚需要解决的问题进行探讨,以期为研究者的制备和应用提供参考和借鉴。

关键词：微针疫苗经皮免疫 citespace

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

两株炭疽芽胞杆菌MLST新序列型(ST)

微生物学报 2012年第1期52卷 120-123页

作者：左庭婷李岩伟韩雪莲何君端青军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

【目的】2株炭疽芽胞杆菌(Bacillus anthracis)17003-14和17003-32的多位点序列分型(Multilocussequence typing,MLST)研究。【方法】选取***基因组7个常见管家基因位点glpF、gmk、ilvD、pta、pur、pycA和tpi进行PCR扩增、测序,与MLST数据库中的等位基因序列进行比对,确定菌株的序列型(sequence type,ST)。【结果】*** 17003-14和17003-32的等位基因编号分别为113、31、1、43、1、53、7和113、31、1、43、1、53、37,比对结果显示这2株细菌的等位基因编号组合未见报道。【结论】17003-14和17003-32为新ST菌株,已被MLST数据库确认,注册号(pubMLST id)分别为id-1053和id-1054。

关键词：炭疽芽胞杆菌多位点序列分型序列型基因分型

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

肺炎嗜衣原体热休克蛋白60的研究进展

微生物学免疫学进展 2006年第4期34卷 67-70页

作者：李岩伟端青军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

肺炎嗜衣原体是严格的细胞内寄生菌,具有独特的发育周期,是重要的呼吸道疾病病原菌,与动脉硬化等慢性心血管疾病也有关系。在肺炎嗜衣原体感染中,热休克蛋白60(Cp-HSP60)是重要的致病因素,对树突状细胞、上皮细胞、平滑肌细胞、巨噬细... 详细信息

肺炎嗜衣原体是严格的细胞内寄生菌,具有独特的发育周期,是重要的呼吸道疾病病原菌,与动脉硬化等慢性心血管疾病也有关系。在肺炎嗜衣原体感染中,热休克蛋白60(Cp-HSP60)是重要的致病因素,对树突状细胞、上皮细胞、平滑肌细胞、巨噬细胞的正常功能都有影响,能够促进T细胞向Th1型分化。经过基因序列分析及氨基酸序列比对,Cp-HSP60与其他衣原体HSP60具有很高的同源性。由于HSP60高度保守,Cp-HSP60与人的HSP60在慢性疾病病理过程中是否存在交叉反应仍存在争议。疫苗是控制传染的有效措施,应用重组Cp-HSP60和表达Cp-HSP60的DNA疫苗在小鼠实验中对肺炎嗜衣原体的感染有一定的保护作用,在肺部能产生免疫记忆。

关键词：肺炎嗜衣原体 Cp—HSP60 致病机理疫苗

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

提高高职教师素质的必要性

科教导刊 2018年第27期 76-77页

作者：李岩伟长春大学旅游学院吉林长春130600

依据高职教育的职业特征,高职教师不仅要有教师的职业素质,还要有与职业教育相适应的综合素质。本文将根据高职教育发展的需要,讨论提高高职教师素质的必要性。

关键词：高职教师职业素质双师型应用型人才

利用BioNumerics软件读取API50CH试验条方法的建立

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

军事医学 2011年第11期35卷 874-876页

作者：左庭婷李岩伟韩雪莲何君端青军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的建立一种利用BioNumerics生物软件分析API细菌鉴定系统50CH试验条发酵反应结果的方法。方法将70株芽孢杆菌属(Bacillus)细菌API 50CH试验条发酵反应结果储存为数码图像,用BioNumerics软件将图像中的红黄颜色转换为数值,再运用百分... 详细信息

目的建立一种利用BioNumerics生物软件分析API细菌鉴定系统50CH试验条发酵反应结果的方法。方法将70株芽孢杆菌属(Bacillus)细菌API 50CH试验条发酵反应结果储存为数码图像,用BioNumerics软件将图像中的红黄颜色转换为数值,再运用百分位数统计方法分析上述数值并计算出每个反应的阈值,定义大于或等于阈值的反应结果为"+",小于阈值的反应结果为"-"。将"+/-"输入apiweb-API 50CHB V3.0细菌鉴定数据库获取鉴定结果。结果与结论该方法对Bacillus的鉴定结果与API经典方法鉴定结果一致。应用上述方法可帮助初级实验人员客观地获得生化反应结果,有利于实验室检测的标准化建设。

关键词：芽孢杆菌属细菌鉴定 API50CH系统 BioNumerics软件

免疫胶体金试剂检测布鲁菌苗接种牛血清结果分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

军事医学 2013年第11期37卷 873-874页

作者：李岩伟程君生左庭婷韩雪莲何君朱虹毛开荣端青军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国兽医药品监察所北京100081

目的评价实验室研制的布鲁菌病抗体快速检测试剂(胶体金法)能否鉴别布鲁菌自然感染和免疫接种所产生的抗体。方法用胶体金试剂对272份接种S2和A19布鲁菌苗的牛血清进行检测,并以虎红平板凝集试验作为对照。结果与结论结果显示,两种方法... 详细信息

目的评价实验室研制的布鲁菌病抗体快速检测试剂(胶体金法)能否鉴别布鲁菌自然感染和免疫接种所产生的抗体。方法用胶体金试剂对272份接种S2和A19布鲁菌苗的牛血清进行检测,并以虎红平板凝集试验作为对照。结果与结论结果显示,两种方法一致率100%。布鲁菌病抗体快速检测试剂(胶体金法)不被疫苗免疫抗体干扰,可用于布鲁菌感染诊断。

关键词：布鲁菌病胶体金快速检测虎红平板凝集试验